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CriptococosisMPSS JULIO CESAR SANCHEZ MERITO
COORDINADOR: DRA. LAURA R. CASTAÑON
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA
LABORATORIO DE MICOLOGIA
Criptococosis
La criptococosis es una micosis sistémica aguda, subaguda o
crónica, inicialmente pulmonar causada principalmente por
Cryptococcus neoformans (vars. neoformans y grubii) y Cryptococcus gattii.
Agentes etiológicos de la
Criptococosis
Cryptococcus neoformans vars. grubii y neoformans
Cryptococcus gattii
Cryptococcus albidus
Cryptococcus laurentii
Cryptococcus uniguttulatus
Epidemiología.
En cuanto a frecuencia, la criptococosis se consideraba
esporádica, pero el número de casos aumentó exponencialmente
con la aparición del SIDA. Aunque puede presentarse en pacientes aparentemente inmunocompetentes, la afección está íntimamente
ligada a personas con deficiencias en el sistema inmunitario.
Se ha apreciado una estrecha relación entre C. neoformans en
pacientes con SIDA y C. gattii en pacientes inmunocompetentes.
Morfología.
Estado anamorfo o mitospórico
La reproducción asexual representa el estado anamórfico, el cual
está caracterizado por la producción de células levaduriformesgemantes (propágulos asexuales), que típicamente desarrollan una
gran cápsula compuesta por polisacáridos. El arreglo de los
componentes capsulares determina alguno de los cuatro serotipos
de la levadura: A, B, C ó D.
Morfología
Estado Teleomorfo.
El estado sexual del hongo está caracterizado por la producción
de basidiosporas (propágulos sexuales).Filobasidiella neoformans es el teleomorfo de C. neoformans y F. bacillispora, lo es de C. gattii.
Morfología
C. neoformans/C. gattii presentan cápsula
de glucoronoxylomanana (serotipos principales: A, B, C y D,
serotipos híbridos: AD, AB y BD).
Hábitat Natural
. C. neoformans var. grubii y var. neoformans se han aislado a partir
de varias fuentes naturales (vegetales, frutas, jugos de frutas,
madera, productos lácteos y suelo), pero es notoria su asociación con deshechos aviarios (pericos, loros, canarios) y especialmente
con excrementos de palomas.
Diagnostico
Diagnostico
Aislamiento de Cryptococcus
gattii VGII en el polvo en interiores
típicas Casas de madera en las
profundidades del Amazonas
la cuenca del Río Negro
Introducción.
La criptococosis es una micosis sistémica potencialmente mortal
que afecta a los seres humanos y los animales en todo el mundo.
Su manifestación clínica más frecuente es la meningoencefalitis.
Estudios epidemiológicos moleculares han identificado ocho
principales tipos moleculares.
Intruducción
Para estandarizar globalmente el genotipado de C. neoformans /
C. gattii, un esquema de MLST fue establecido basado en regiones
variables de siete locus genéticos independientes: CAP59, GPD1, LAC1, PLB1, SOD1, URA5 y la región IGS1, aprovechando el alto
poder discriminatorio y buena reproducibilidad entre diferentes
laboratorios.
La criptococosis por C. gattii es endémica en Brasil y muestra un
patrón regional, siendo más común en el Norte y Noreste del país.
134 casos. Aparición de la criptococosis en inmunocompetentes(VIH-negativo)
Métodos
El estudio se realizó en la ciudad de Santa Isabel do Rio Negro, estado de Amazonas, situada 620 kilometros rectas o 772 kilometrospor el canal de distancia de Manaus, la capital del estado de Amazonas, y cerca de 1.000 km de la costa del Océano Atlántico de la región Norte de Brasil.
El municipio de esta ciudad tiene las siguientes características: superficie de 63.127 km², tropical clima de selva, lluvioso y húmedo; temperatura máxima de 32.6 ° C, mínima de 21,5 ° C; altitud: 21m sobre el nivel del mar.
La mayoría de la población viven en casas de madera.
Métodos
MétodosMuestreo y aislamiento criptocócico
Las muestras de polvo fueron recogidos de 51 casas elegidas al
azar en diferentes barrios de la ciudad de Santa Isabel do Rio
Negro, para investigar la presencia de los agentes de la criptococosis, C. neoformans y C. gattii.
Se obtuvo una muestra por cada casa. Salas de barrido con una
escoba diferente por casa para evitar la contaminación cruzada
entre las casas, y el material se almacena en bolsas de plástico
estériles.
Métodos
1 g de cada muestra de polvo se suspendió en 50 ml NaCl 0,9% con
0,2 g de cloranfenicol, seguido por agitación manual durante 5
minutos. Después descansando 30 minutos, 1 ml del sobrenadante se extendió sobre agar (NSA) placas de 10 Niger Seed.
Los aislamientos fueron preservados en leche descremada a -20 ° C
y en glicerol a -70 ° C y depositado en la Colección Cultural de
Patogenicidad de Hongos (PPC) del Laboratorio de Micología, IPEC
/ FIOCRUZ. El límite para la detección de colonias oxidasa-positivo
fenol fue 50 CFU por gramo de muestra.
Métodosidentificación fenotípica
Colonias de color marrón se purificaron y se ensayaron para la
producción de ureasa en agar urea Christensen, y para la
asimilación de carbono y nitrógeno compuesto usando VITEK 2-BioMerieux Sistema. La especie C. neoformans y C. gattii se
diferenciaban en azul canavanina-glicina-bromotimol.
Después de la extracción de ADN [27], los principales tipos
moleculares de todos los aislamientos estudiados fueron
identificados por análisis URA5-RFLP.
Métodos
Patrones URA5-RFLP fueron asignados visualmente por
comparación con los patrones obtenidos a partir de las cepas
estándar
WM 148 (VNI / AFLP1), WM 626 (VNII /AFLP1A), WM 628 (VNIII /
AFLP2), WM 629 (VNIV / AFLP3), WM 179 (VGI / AFLP4), WM 178 (VgII
/ AFLP6), WM 175 (VGIII / AFLP5), y WM 779 (VGIV / AFLP7).
Métodos
El tipo de apareamiento fue identificado por PCR utilizando
cebadores específicos para los genes de feromonas: MFalfaU,
MFalfaL, para el tipo de apareamiento alfa (MATalfa) y JOHE9787. JOHE9788 para un tipo de apareamiento (MATa).
Métodos
MLST
Sub-tipificación y análisis del polimorfismo molecular se realizaron
de acuerdo al consenso de ISHAM multi-locus secuencia de
mecanografía, con un esquema para C. neoformans y C. gattii, incluyendo siete locus genéticos disociados, los genes: CAP59,
GPD1, LAC1, PLB1, SOD1, URA5 y la IGS1región.
Resultados
Cincuenta y un muestras de polvo se obtuvieron de casas elegidas
aleatoriamente en 9 barrios de la ciudad de Santa Isabel do Rio
Negro, de los cuales tres fueron positivos para C. gattii.
La muestra de SI-443 representó 2.500 CFU / g de colonias de color
marrón oscuro, SI-444 de 50 CFU / g y DW-650 exhibió incontable
número de colonias, con una concentración estimada de > 50.000
UFC / g. Un total de 144 colonias de color marrón oscuro de las 3
casas positivas crecido en alpiste agar fueron aislados e
identificados como C. gattii tipo VgII molecular.
Resultados
De esos, 45 aislamientos fueron seleccionados al azar para una
mayor caracterización del tipo de apareamiento y análisis MLST,
incluyendo la única colonia de la muestra SI-444, 14 colonias de la muestra de la IS-443, y 30 colonias de la muestra DW-650. Análisis
del tipo de apareamiento demostró 44 aislamientos fueron MATalfa,
y una cepa de muestra de SI-443 fue identificado como Mata.
Discusión
Los resultados descritos en esta memoria proporcionan evidencia
de la perspectiva más tarde y mostró claramente la presencia de
dos formas diferentes de propagación, clonal y la recombinación, que puede conducir a la creación de poblaciones ambientales
presentes en el polvo al interior de casas urbanas dentro de los
asentamientos remotos en la selva amazónica.
Estas poblaciones de levadura son muy probablemente
relacionado con las fuentes originales de los materiales de
construcción obtenidos de los alrededores bosques. El estudio
estableció las bases para futuros estudios que investigan el impacto
de principios y la exposición continua a la aparición de infecciones y la prevalencia de infecciones subclínicas y clínicas entre los habitantes de las casas colonizados por C. gattii VGII.
Gracias.
