Sequenciamento do DNA

Tutor Presencial Bruno Ribeiro

São Gonçalo 2016

Definição

Processo que determina a sequência (ordem) de bases da molécula de DNA, utilizando nucleotídeos artificialmente alterados (SADAVA et al., 2009).

ClustalX, 2016

Reação de sequenciamento

• Colocar em um tubo de PCR:

DNA

Fonte:frr.wikipedia.org/wiki/DNA

Primers DNA polimerase

Fonte:www.labbulletin.com

dNTP

ddNTP

Desoxirribonucleosídeos trifosfato

Didesoxirribonucleosídeos trifosfato

Procedimento

• DNA desnaturado (tubo teste)

http://docplayer.com.br/6745095-Estrutura-e-funcao-de-acidos-nucleicos.html

Procedimento

• DNA-polimerase síntese da fita complementar

Procedimento

• Inserir os dNTP (dATP, dGTP, dCTP e dTTP)• Pequenas quantidades de ddNTP (Marcado

com uma fluorescente)

Ivone et al., 2014

Importância do ddNTP

Eletroforese capilar

• Desnaturação das fitas de DNA

Fonte: www.genomic.com.br/index.jsp?conteudo=17

Referência

Ivone U. S. Leong, Jonathan R. Skinner and Donald R. Love. Application of Massively Parallel Sequencing in the Clinical Diagnostic Testing of Inherited Cardiac Conditions. Revista Medical Sciencs, v. 2, n.2, p. 98-126, 2014.

SADAVA, David; HELLER, H. Craig; ORIANS, Gordon H., PURVES, William K. & HILLIS, David M. Vida: a ciência da Biologia. Volume I, 8ª Edição, 2009.