Trichomoniasis'de
Parazitolojik Tanı
Giresun bölge toplantısı- 18 Mayıs 2018
Trichomonas vaginalis
(Donne 1836)
• armut şeklinde
• aktif hareketli
• 10X7 µm
• Dört serbest kamçı
• Dalgalanan zar
• Fagositoz
oC de 5 gün 40 oC’de ölür
17-30 oC değişik saatler
24 saat idrarda
Isı pH
Fe Sistein Proteazlar
TVV
Adezin proteinleri
Diğer mikroorganizmalar
DSÖ 276 milyon yeni olgu/yıl
Servikal kanser, prostat kanseri oluşumunda predispozan
HPV ve HIV geçiş riskini
Hamilelikte erken doğum, erken membran rüptürü, post natal
enfeksiyon
Direkt Mikroskopi
Kültür Boyama (Gram, Akridin
Oranj vs)
Hızlı testler
Hücre kültürü
İmmunositokimyasal (ICC) yöntem
ELISA, IFA, Lateks aglutinasyon
PAP smear
TANI
Moleküler testler
MALDI-TOF
hızlı ucuz
kolay Duyarlılığı
(%38-82)
Direkt
mikroskopi
1000 parazit /ml
Giemsa,
May Grünwald
Akridin oranj
leishman Periodic asid schiff (PAS)
Fontana
Papanicolaou
Boya yöntemleri
Hızlı
Kolay uygulanır
İncelemesi kısa sürer
Özel ekipman gerektirir
Bekledikçe solar ve kalıcı kayıt kalmaz
boya duyarlılık Özgüllük
giemsa 80 98,3
Akridin oranj 100 98
TYM(Diamond by)
CPLM (sistein-pepton-karaciğer-maltoz)
Trichosel besiyeri (BBL)
InPou c h ™ T V
Kültür
100 parazit/ml
%75-96
Uygun örnek
Ekim işlemi
TYM besiyeri (Tripticase-Yeast Extract-Maltose)
Gerekli malzemeler:
Hazırlanışı
• L-Cysteine HCL :1 gr
• L-Ascorbik asit :0.2 gr
• K2HPO4 :0.8 gr
• KH2PO4 :0.8 gr
• Tripticase veya
• Triptik soy buyyon :20 gr
• Yeast Extract :10 gr
• Maltose :5 gr
• Agar :0.5 gr
• Distile su :900 ml
• Maddeler tartılır ve eritilir.
• Karışımın pH’ı 6’ya ayarlanır.
• 121 0C de 20 dakika otoklavlanır.
• Otoklavdan çıktıktan sonra soğur
• Kristalize penisillin (1000 000 Ü/2ml): 1ml eklenir
• Streptomycin 2 gr/2ml : 0.5 mg/ml 1000 ml ye 500 mg (0.5 ml)
• Flucan, Lümen: 0.1 cc/ml 1000 ml ye 100 cc
• İnaktive edilmiş, varsa at serumu yada FCS : %10 oranında kullanılmadan hemen önce eklenir.
Buzdolabında 2-3 ay - 20 C de 6 ay- 1 yıl
Besiyeri tüpü 37 oC ye ısıtılır
Tuşe yapılmadan, spekulum takılır
Arka fornix’den steril eküvyon çubuğu ile akıntı materyali alınır
Menstrüasyon döneminde örnek
alınmaz
Besiyeri tüpüne aktarılır ağzı kapatılır
Etüv 37 oC
Trichomonas vaginalis için örnek alımı
Parazit sayısı az ise
Defektli parazitler varsa
Parazit kültürde çoğalmıyorsa
Cansız parazitler
Ekipman
Zaman (2-7 gün)
Deneyim
Hızlı testler
10 dakika gibi kısa sürede sonuç
Duyarlılık
Canlı parazit olmasa da yanıt alınabiliyor
Moleküler testlere göre daha ucuz
Ekipman gerektirmez
Hasta muayenesi esnasında uygulanabilir
PZR
Klasik PZR
Real-Time
Multipleks
PZR
Nested PZR
Kadın
Erkek
Vajinal yıkama sıvısı
İdrar (sabah ilk)
Arka forniksden pamuklu eküvyonla alınan örnek
Prostat masajı sonrası alınan sekresyon
İdrar (sabah ilk)
Üretral yayma
(pamuklu eküvyonla alınan)
PAP smear örneği (eski ve yeni)
PZR çalışılabilecek örnekler
PRİMERLER
18 S Ribozomal gen bölgesi Tv1 5’ TAA TGG CAG AAT CTT TGG AG 3’ Tv2 5’ GAA CTT TAA CCG AAG GAC TTC 3’
TV spesifik 261- bp tekrarlayan bölümünü çoğaltır TVK3 (5’AT TGT CGA ACA TTG GTC TTACCC TC-3’) TVK7 (5’-TCT GTG CCG TCT TCA AGT ATG C-3’)
T. vaginalis spesifik genomun 98-bp fragmanı çoğaltır TVA5-1 (AT GTTCTA TCT TTT CAT TGT) TVA6 (GAT CAC CAC CTT AGT TTA CA)
β-tubulin geni
BTUB 9, 5’ CAT TGA TAA CGA AGC TCT TTA CGA T 3’
BTUB 2, 5’ GCA TGT TGT GCC GGA CAT AAC CAT 3’
AP65-1VE 2 Adesin geni AP65 A, 5’ GAT TCC TCT TCA CAC ACC CAC CAG 3’ AP65 B, 5’ AAT ACG GCC AGC ATC TGT AAC GAC 3’
330 bp
862/ 16 (%1,9) 862 /8 ( % 0,9) DM 862/14 ( %1,6) Kültür 14 izolat metronidazole duyarlı Genotiplendirme ( A, I, E)
• Primer: AP 65
• Bu çalışmada ilk kez T. vaginalis tanısında kullanılmak amacı ile test edilmiş ve başarılı olduğu bildirilmiştir.
615 örnekte Prestoplus testi ile MOLBIOL LightMix Kit Trichomonas vaginalis tanısında karşılaştırılmış
Uyumsuz örnekler Qiagen® Microbial DNA qPCR TV
Her iki test benzer sonuçlar vermiş
(McNemar p > 0.05).
ICC
• 1 parazit/ml
• HIV pozitif hamilelerde özellikle tercih edilebilir
• Asemptomatikleri saptamada daha etkili
• Ucuz, pratik ?
Pozitif kontrol Negatif kontrol
HIV + vajinal sekresyon
CDC
Yüksek riskli gruplarda LAB
testleri uygulansın
Çok eşliler Para karşılığı seks
yapanlar Uyuşturucu kullananlar
CYBH öyküsü olanlar
Mikroskobi Negatif
Vajinal, üretral Sekresyon
İdrar sedimenti
Kültür NAAT
Boyama Giemsa,
leishman vs.
Her bölgede en azından Üniversite Hastanelerinde
referans merkezleri oluşturulup bu merkezlerde
referans testler çalışılabilir.
Beni dinlediğiniz için Teşekkür Ederim…