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PRACTICA N° 9
DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS
I. INTRODUCCION
Los triglicéridos son el principal tipo de grasa transportado por el organismo.
Recibe el nombre de su estructura química. Luego de comer, el organismo digiere
las grasas de los alimentos y libera triglicéridos a la sangre. Estos son
transportados a todo el organismo para dar energía o para ser almacenados como
grasa.
El hígado también produce triglicéridos y cambia algunos a colesterol. El hígado
puede cambiar cualquier fuente de exceso de calorías en triglicéridos.
Cuando la persona come, los triglicéridos se combinan con una proteína en su
sangre para formar lo que se llama lipoproteínas de alta y baja densidad. Estas
partículas de lipoproteínas contienen colesterol. ara formar triglicéridos en el
hígado el proceso es similar! el hígado toma los carbohidratos y proteínas
sobrantes de la comida y los cambia a grasa. Esta grasa entonces se combina con
proteína y colesterol para formar lipoproteínas de muy baja densidad, que son
liberadas al torrente circulatorio.
Los ni"eles altos de triglicéridos pueden deberse a cualquiera de las siguientes
causas#
Cirrosis
$aja proteína en la dieta y alta en carbohidratos
%ipotiroidismo
ancreatitis &iabetes mal controlada
'ientras tanto, los ni"eles bajos de triglicéridos pueden deberse a lo siguiente#
&ieta baja en grasas
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%ipertiroidismo
(índrome de malabsorci)n
&esnutrici)n
II. OBJETIVOS:
oder determinar la cantidad de triglicéridos en sangre.
(aber dar un diagn)stico acertado leyendo los ni"eles de triglicéridos en la
sangre y poder hallar el ni"el de *L&L.
III. FUNDAMENTO DEL METODO ENZIMATICO
Los triglicéridos presentes en la muestra son hidroli+ados por una lipasamicrobiana, a glicerol y acidos grasos libres. EL glicerol resultante en presencia
de -, 'agnesio y de licerol quinasa es fosforilado a glicerol / fosfato, el cual
es oxidado posteriormente por la glicerol fosfato oxidasa gener0ndose per)xido de
hidrogeno.
osteriormente el per)xido de hidrogeno es determinado cuantitati"amente por la
reacci)n de la 12amino antipirina, para producir por medio de la peroxidasa un
compuesto coloreado de color rojo de inoneimina que se cuantifica a 343 nm.
IV. PROCEDIMIENTO
1. Blanco
$lanco (tandard &esconocidoSuero 2 2 /4uL
Sta!ar! 2 /4 uL 2Rea"t#$o
e%#&'t#"o/ mL /mL /mL
Me%"(ar) #"u*ar a +,°C -or &#uto/A0ua !e/t#(a!a 5 mL 5 mL 5 mL
Leer a 1 &
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En un tubo de ensayo colocamos /ml de reacti"o en+im0tico, lle"amos a
incubaci)n por 3 minutos a 678C. 9inalmente agregamos 5ml de agua destilada y
lle"amos a espectrofot)metro para calibraci)n. Leer a
354nm.
2. Standard
En un tubo de ensayo colocamos /4 uL de suero est0ndar, luego agregamos /mldel reacti"o en+im0tico. :ncubamos por 3 minutos a 678C, y finalmente agregamos
5 ml de agua destilada. Leer a 354 nm.
A*/or*a"#a !e( Sta!ar!3 1.456
+. Desconocido
En un tubo de ensayo colocamos /4 uL de suero desconocido, luego agregamos
/ml del reacti"o en+im0tico. :ncubamos durante 3 minutos a 678C, y finalmente
agregamos 5 ml de agua destilada. Leer a 354 nm.
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A*/or*a"#a !e( De/"oo"#!o3 1.166
IV. CALCULOS PARA DETERMINAR TRIGLICERIDOS
Formula: | D||S|
x200
Valores de referencia: ; /34 mg<dL
Reemplazando:
f= 4.411<4./>1 x 544
TG &07!L 3 +.5
V. CONCLUSION
(eg?n los resultados obtenidos, se concluye que los ni"eles de triglicéridos en el
paciente est0n dentro del rango normal establecido.
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PRACTICA N° 41
DETERMINACION DE LDL COLESTEROL
I. INTRODUCCION.
El colesterol es una sustancia grasa natural presente en todas las células del
cuerpo humano necesaria para el normal funcionamiento del organismo. La mayor
parte del colesterol se produce en el hígado, aunque también se obtiene a tra"és
de algunos alimentos.
-ambién el colesterol se considera @bueno@ y alguno se considera @malo@. (e
necesitan ex0menes de sangre diferentes para medir cada tipo de colesterol
indi"idualmente.
Las partículas de L&L transportan el colesterol a las células. El colesterol L&L amenudo se denomina Acolesterol maloB porque se cree que los ni"eles ele"ados
de esta sustancia contribuyen a la enfermedad cardio"ascular. n exceso de L&L
en la sangre da lugar a una acumulaci)n de grasa Ddenominada AplacaB en las
paredes de las arterias, la cual inicia el proceso de la enfermedad ateroscler)tica.
Cuando se acumula placa en las arterias coronarias que riegan el cora+)n,
aumenta el riesgo de sufrir un ataque cardíaco. Los ni"eles de L&L pueden ser
ele"ados en personas cuya alimentaci)n tiene un alto contenido de grasa
saturada, colesterol o ambas cosas. "eces una gl0ndula tiroides hipoacti"a Dlo
que se denomina AhipotiroidismoB también puede ele"ar los ni"eles de L&L.
(i sus ni"eles en sangre se ele"an producen hipercolesterolemia. Est0
demostrado que las personas con ni"eles de colesterol en sangre de 514 tienen el
doble de riesgo de sufrir un infarto de miocardio que aquellas con cifras de 544.
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II. OBJETIVOS
Conocer la técnica para hallar los ni"eles de colesterol total en la sangre. &eterminar la concentraci)n de colesterol total y L&L en sangre.
III. MATERIALES 8 EUIPOS
• 'uestra# (uero• / -ubo de ensaye de /6 F/44mm.• / 'icropipeta de /4uL• -ics para micro pipeta.• radilla.• guja nG 5/• Ligadura• lcohol y algod)n• gua destilada• Reacti"o de trabajo
• Espectrofot)metro• Centrifuga
IV. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA
Las proteínas de baja densidad o L&L se separan del suero a tra"és de la
precipitaci)n de los polímeros de bajo peso molecular. Luego de centrifugar queda
en el sobrenadante las dem0s lipoproteínas como la *L&L y %&L. El colesterol
ligado a ellos se determina mediante los reacti"os en+im0ticos.
V. PROCEDIMIENTO
O*te"#; !e( /o*rea!ate
rimero agregar 544 uL de suero. Luego agregar 54 uL de Reacti"o precipitante.
'e+clar agitando por 54 segundos. Reposar /4 minutos. Centrifugar /3 minutos a
1444 rpm. (e puede utili+ar hasta /4 minutos después.
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Co(or#&etr<a
$lanco (tandard &esconocidoL&L
&esconocidoColesterol total
So*rea!ate 2 2 /4uL 2Sta!ar! 2 /4 uL 2 2
Suero 2 2 2 /4uLRea"t#$o
e%#&'t#"o/ mL /mL /mL /mL
Me%"(ar) #"u*ar a +,°C -or 41 &#uto/A0ua !e/t#(a!a 5 mL 5 mL 5 mL 5 mL
VI. RESULTADOS
For&u(a/:
ColesterolSobrenadante(mg /dL)=| D| LDL
|S| x62.4
LDL" &07!L 3 CT = CS
Va(ore/ !e re>ere"#a:
$R# ; /14 mg<dL
(ostenidos# /142/H4 mg<dL
Ele"ados# I /H4 mg<dL
C'("u(o/:
Colesterol Total:
Absorbancia de Colesterol total = 0.047
Absorbancia del Standard = 0.093
Colesterol Total mg/dL 1!1
Colesterol So"renadante:
Absorbancia del standard = 0.096
Absorbancia Desconocido LDL = 0.029
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Colesterol So"renadante mg/dL 1#.#
LDL Colesterol:
Colesterol Total – Colesterol Sobrenadante = 101 – 18.8
LDL" 3 ?2.2 &07!L
VII. CONCLUSION
&e acuerdo a los resultados obtenidos, obser"amos que el CJLE(-ERJL
-J-L hallado est0 dentro de los "alores referenciales normales.
Con respecto a los ni"eles de L&L CJLE(-ERJL del paciente, concluimos
que se encuentran dentro del rango normal establecido. Esto significa que
la persona tiene un bajo riesgo de obtener una enfermedad cardiaca
coronaria.
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PRACTICA N° 44
DETERMINACION DE @DL COLESTEROL
I. INTRODUCCION
Las (#-o-rote<a/ !e a(ta !e/#!a! D@DL) son aquellas lipoproteínas que
transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado.
&ebido a que las %&L pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de
"uelta al hígado para su excreci)n, se les conoce como el colesterol o
lipoproteína "uena. Cuando se miden los ni"eles de colesterol, el contenido en las
partículas, no es una amena+a para la salud cardio"ascular del cuerpo Den
contraposici)n con el L&L o colesterol malo.
%&L son las lipoproteínas m0s pequeKas y m0s densas, est0n compuestas de una
alta proporci)n de proteínas. El hígado sinteti+a estas lipoproteínas como
proteínas "acías y, tras recoger el colesterol, incrementan su tamaKo al circular a
tra"és del torrente sanguíneo.
En cada lipoproteína hay "arias apolipoproteínas periféricas, en el caso de las
%&L las principales apolipoproteínas son 2lipoproteínas designadas con la letra .
Estudios epidemiol)gicos muestran que altas concentraciones de %&L Dsuperiores
a >4 mg<dL tienen una car0cter protector contra las enfermedades
cardio"asculares Dcomo la cardiopatía isquémica e infarto de miocardio. $ajas
concentraciones de %&L Dpor debajo de 63 mg<dL suponen un aumento del riesgo
de estas enfermedades, especialmente para las mujeres.
%ay 6 tipos de %&L# %&L/, %&L5 y %&L6.
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L#-o-rote<a D#'&etro & De/#!a! 07&( !e Prote<a/ !e L<-#!o/
@DL4 54253 /.4/H2/.4>6 65 >M
@DL2 /4254 /.4>62/./53 66 >7
@DL+ 32/4 /./532/.5/4 37 16
II. OBJETIVOS
&eterminar la concentraci)n de colesterol L&L en sangre.
III. MATERIALES 8 EUIPOS
• 'uestra# (uero• -ubos de ensayo.• / 'icropipeta de /4uL• -ics para micro pipeta.• radilla.• guja nG 5/• Ligadura• lcohol y algod)n• gua destilada•
Reacti"o de trabajo• Espectrofot)metro• Centrifuga
IV. FUNDAMENTO DE LA PRCTICA
La %&L colesterol en soluci)n se determina por acci)n de las en+imas Colesterol2
ester hidrolasa y Colesterol oxidasa. roduciéndose Colestocia y er)xido de
%idrogeno, bajo la acci)n de la eroxidasa y la 12aminofena+ona, produciendo$en+oquinona de color rojo, cuya intensidad de color es directamente proporcional
a la concentraci)n de colesterol %&L.
V. PROCEDIMIENTO
O*te"#; !e /o*rea!ate
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rimero agregar 544 uL de suero. Luego agregar 4.3 mL de Reacti"o precipitante.
%omogeni+ar por 54 segundos. Reposar /4 minutos. Centrifugar /3 minutos a
1444 rpm.
Co(or#&etr<a
$lanco (tandard &esconocidoSo*rea!ate 2 2 /44uL
Sta!ar! 2 /4uL 2Rea"t#$o e%#&'t#"o /mL /mL /mL
A0ua !e/t#(a!a 5mL 5mL 5mLMe%"(ar) #"u*ar 41 &#uto/ a +,°C. Leer a 1 &.
VI. RESULTADOS
For&u(a:
HDLc(mg /dL)=| D||S|
x 76.24
Va(ore/ !e re>ere"#a:
E!a! @o&*re/ Muere/
&07!L
1=49 642>3 6427421=29 63274 63273+1=+9 642>3 632M461=69 642>3 142H31=9 642>3 632M3
:ntensidad del color rojodirectamente proporcional concentraci)n de %&L
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Ra0o 64274 642H3
C'("u(o/: bsorbancia del standard = 4.4>3
bsorbancia del &esconocido = 4.46H@DL" 3 6.1, &07!L
VII. CONCLUSION
&e acuerdo a los resultados obtenidos en la pr0ctica, concluimos que los
ni"eles de colesterol %&L en el paciente, est0n dentro del rango normal
establecido, de acuerdo a la edad y a su sexo.
PRACTICA N° 42
DETERMINACIN DE LA ACTIVIDADA ENZIMATICA DE LA GOT 8 LA GPT
I.= INTRODUCCIN
El hígado tiene di"ersas transaminasas para sinteti+ar y di"idir
los amino0cidos e intercon"ertirlos en moléculas de almacenaje de energía.
Las concentraciones de transaminasas en el suero Dla parte no celular de la
sangre son normalmente bajas. (in embargo, si el hígado est0 daKado, la
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membrana celular de los hepatocitos se hace m0s permeable, y
algunas en+imas se filtran en la corriente sanguínea.
Las dos transaminasas que se miden son la alanina transaminasa DL- y la
aspartato transaminasa D(-.
Las (- est0n presentes dentro de la célula, enla+adas a las mitocondrias,
mientras las L- se encuentran sobre todo libres en el citoplasma. Los ni"eles
ele"ados de estas en+imas son indicadores de daKo hep0tico! sin embargo,
también pueden ser ele"ados debido a otros trastornos. La L- no suele
encontrarse fuera del hígado. La (- est0 presente en el hígado, pero
también en cantidades significati"as en el m?sculo esquelético cardíaco. &e
hecho, solía usarse para diagnosticar ataques cardíacos, aunque actualmente
hay en+imas y proteínas que son m0s específicas para el daKo cardíaco.En general, cualquier daKo al hígado causar0 ele"aciones medias en estas
transaminasas Dllamadas @en+imas del hígado@, aunque por supuesto no son
las ?nicas en+imas en el hígado. El diagn)stico requiere la síntesis de
muchas informaciones, incluidas la historia del paciente, examen físico y,
posiblemente, im0genes u otros ex0menes de laboratorio.
Las ele"aciones muy altas de transaminasas sugieren daKo se"ero en el
hígado, como los pro"ocados por hepatitis "iral Dmononucleosis infecciosa,
falta de flujo sanguíneo al hígado o por la ingesta de medicamentos o toxinas
Dcomo el alcohol. La mayor parte de las enfermedades hacen que la L- se
ele"e m0s que la (-. Los ni"eles de (- dobles o triples a los de la L- son
consistentes con una enfermedad de hígado pro"ocada por el alcohol.
radualmente se "uel"e a los "alores normales de transaminasas en sangre
conforme se produce la curaci)n de estas enfermedades. ero es necesario
subrayar que cuando el daKo hep0tico se ha establecido de modo cr)nico o se
ha producido una rotura notable de células hep0ticas, con transformaci)n
cirr)tica, la bajada de las transaminasas no indica curaci)n sino que es seKal
de que ya no hay m0s células hep0ticas que "iertan estas en+imas en la
sangre Díndice de pron)stico negati"o.
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II.= OBJETIVOS:
Reali+ar la determinaci)n de J- y - séricos en una muestra biol)gica
con un método en+im0tico.
&estacar la importancia de las transaminasas DJ- y - en el
metabolismo humano y su relaci)n con di"ersas patologías.
III.= MATERIALES 8 EUIPO
Eu#-o/
• Espectrofot)metro o anali+ador para lecturas de 374 nm.• Centrifuga.
Rea"t#$o/
• -ransaminasas J-#• Reacti"o # soluci)n con /44 m' de l2aspartato y 5 m' de cetoglutarato
en buffer fosfatos /44 m', p% 7,1.• -ransaminasas -#• Reacti"o # soluci)n con 544 m' de dl2alanina y 5 m' de 2cetoglutarato
en buffer fosfatos /44 m', p% 7,1.• Reacti"o $# soluci)n conteniendo / mmol de 5,12dinitrofenilhidracina D5,12
&N9% en 0cido clorhídrico / mol<l.• Reacti"o C# soluci)n de hidr)xido de sodio 1 mol<l.
Mater#a(
• /-ubo de ensayo de /6 F/44mm.
• / 'icropipeta de /4uL.
• untas para micropipeta.
• radilla.
• guja nG 5/
•
Ligadura• lcohol y algod)n
IV.= FUNDAMENTO TERICO
$%T&D& D' R('T$)* + FR)*,'L.
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La determinaci)n de la reacci)n transaminasa se basa en la siguiente reacci)n#
La J- catali+a la siguiente reacci)n#
aspartato O 2cetoglutarato 222222222I oxalacetato O glutamato
La - catali+a la siguiente reacci)n#
alanina O 2cetoglutarato 222222222222I piru"ato O glutamato
El oxalacetato o piru"ato formado reacciona con la dinitrofenilhidracina
generando en medio alcalino, una hidra+ona coloreado que se absorbe a 343
nm.
LCT!"A #D$A%T C!"&A' se desarrolla mediante la comparaci)n de
absorbancias con equi"alencias.
PROCEDIMIENTO
Mto!o ut#(#%a!o
B=GOT D=GOT B=GPT D=GPTSu/trato GOT 4,3ml 4,3ml 2 2
Su/trato GPT 2 2 4,3ml 4,3mlI"u*ar a +,H" -or + &#uto/
A0ua !e/t#(a!a 4,/ml 4,/ml 4,/ml 4,/ml
Suero 2 /44 ul 2 /44 ul
I"u*ar a +, H" -or +1 &#uto/Rea"t#$o "o(or 4,3ml 4,3ml 4,3ml 4,3ml
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I"u*ar a te&-eratura a&*#ete -or 21 &#uto/NAO@ 1.6N 3ml 3ml 3ml 3ml
Leer a 1 &.
Va(ore/ !e Re>ere"#a: J-# 3 P 14 <dl -# 3 P 13 <dl
4. (e extrae la muestra de sangre se deja reposar por unos 6 o 1 minutos, se
rompe el coagulo y luego se lle"a a centrifugar para obtener el suero.
2. (e preparan los tubos blanco y est0ndar, bas0ndonos de la tabla.
+. (e extrae el suero del tubo centrifugado, con una micropipeta, y se traspasa a
otro tubo para reali+ar el respecti"o an0lisis siguiendo la técnica indicada.
• l nue"o tubo se le agrega 53 ul del suero a anali+ar y / ml de reacti"o.• (e lo lle"a a incubar a temperatura ambiente por 3 minutos.
• l término de los 3 minutos, se le agrega 5 ml de agua destilada
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6. (e calibra el espectrofot)metro con el blanco! después se procede leer la
soluci)n est0ndar y por ?ltimo se reali+a la lectura de las soluciones desconocidas.
V.= RESULTADOS
Con los datos obtenidos en el espectrofot)metro la lectura se reali+a con la cur"a.
)"sor"ancia del desconocido -&T: !.!
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0 22 55 95 150 215
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
AA*/or*a"#a !e( !e/"oo"#!o GPT: 1.19,
0 25 50 83 126 135
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.099
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VI.= CONCLUSIONES
(e lle") a cabo correctamente el procedimiento para la pr0ctica obteniendo
"alores que se anali+aron con ayuda de la cur"a. (e determin) que la concentraci)n de c. Qrico en la muestra de suero es
de
dl
mg /¿5,2¿
.
-omando en cuenta los "alores de referencia podemos deducir que el "alor obtenido est0 dentro de los par0metros de referencia de normalidad.
0.099