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XVIII Meeting of the Portuguese Society of Animal Pathology - International Meeting of Leporidae Pathology
Editorial
The Portuguese Society of Animal Pathology (SPPA) is a small non-profit organization and a “daughter” So-ciety of the Portuguese Society of Veterinary Science (SPCV), which normally holds an annual meeting in the institutions from which its members belong (e.g. universities or government laboratories with activities in the field of Pathology).
In an effort to decentralize their meetings, a tradition already started before, and both to aim at involving the community of teachers and students of the research in-stitutions that host the annual meeting and also to di-versify the main subject of its meetings, SPPA targeted new, younger and broader audiences, as well as new sectors and knowledge fields, trying to cover the pa-thology of a wide animal species range. Hence, to the present meeting we have chosen leporideae pathology as the main subject and a necropsy workshop, open to students and technicians - XVIII Meeting of the Por-tuguese Society of Animal Pathology. International Meeting of Leporidae Pathology, 9 and 10th of May 2013.
Also, continuing the journey, already begun, of aiming evermore towards internationalization, this meeting will have reputable national and internation-al speakers, to whom above all I acknowledge their presence and immediate acceptance. Moreover, the scientific committee with national and international members, the three official languages, and the wid-est dissemination among technicians and students, will certainly make this meeting more open, more in-volved and more attractive. So we hope, so we wish, so we worked for!
Our special guests will include an international ex-pert, who will share with us his scientific knowledge, Prof. Dr. Daniel Fernandez de Luco Martinez, profes-sor at the University of Zaragoza in the Department of Animal Pathology, Faculty of Veterinary Science. Graduated in Veterinary Medicine by the University of Zaragoza in 1985 and obtained a PhD by the same institution in 1991. He has developed his research in pathology of wildlife and wildlife hunting health con-trol in the region of Aragon in Spain. He has dozens of publications in international peer-review journals and was a guest speaker at dozens of conferences. He is responsible for several research projects, having juried several doctoral theses.
Also, not forgetting nationals with high value and enriching practical experience in the field, an Europe-an expert, Dr. José Manuel Monteiro Azevedo. He has earned his degree in Veterinary Medicine in the Uni-versity of Tras-os-Montes and Alto Douro in 1999, and is currently a Veterinarian for Coren, Spain, being the Head of Industrial Rabbit Farming and the responsible for the Industrial Cuniculture in the Iberian Peninsula. His professional activity, since graduation, has been dedicated to rabbits having taken several positions at national and international companies. He collaborated in teaching several courses at the University of Trás-os-Montes and Alto Douro.
We will have the opportunity to share and exchange experiences on animal pathology, results of research projects, discuss pathological diagnosis of difficult or rare cases, as well as the recent scientific advances in this field in Europe, which is undoubtedly the largest professional enrichment we could obtain. For the 18th time this small scale but dynamic meeting, constitutes an enrichment both scientifically, technically and pro-fessionally, and will allow us to grow a bit more pro-fessionally. Moreover, this will be also an excellent op-portunity to meet again our colleagues and friends and to discover Evora, one of the most interesting, beauti-ful and pleasant cities to visit in Portugal.
The success of this meeting is already notorious by the number of members who decided to join us. Thank you for believing in this project, thank you for being here!
In the name of SPPA and the Organizing Commit-tee, I want to acknowledge all those who contributed to make this event possible, namely the University of Évora, in the person of its Rector Ex º Sr. Prof. Dr. Carlos Alberto dos Santos Braumann and of its Vice-Rector, Prof. Dr. Marta Silvério, for immediately wel-coming this endeavor, namely for all the logistical sup-port provided and specially the generous availability in providing their facilities. I would like to acknowledge the Portuguese Society of Veterinary Sciences who provided an important assistance in the financial man-agement, and all those who helped us, teachers, stu-dents, staff and sponsors.
The President of SPPA
Helena Maria Vala Correia
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Common gross lesions in farmed rabbits
Fernández de Luco D. *
Departamento de Patología Animal. Facultad de Vete-rinaria. Universidad de Zaragoza. C/ Miguel Servet 177. 50013 Zaragoza. Spain.
Introduction: The identification of rabbit gross le-sions by systems and organs in association with a dis-ease, syndrome, aetiology or unknown cause is very important for veterinary practitioners.
Material and methods: Necropsy has been made in several farmed rabbits with mainly respiratory or di-gestive problems, as well as delayed growth.
Results: Dermatitis associated to myxomatosis, ringworm, mange or staphylococci are common.
The respiratory system problems are localized in the nasal cavity and lungs mainly associated to Pasteurella multocida and Bordetella bronchiseptica. Young rab-bits are especially sensitive to acute and chronic pneu-monia. Haemorrhages can be seen in cases of rabbit calicivirus disease.
Probably, digestive processes are the most important problems in growing rabbits. Epizootic rabbit enterop-athy, with still unknown aetiology, is a relatively recent process that has become the main cause of mortality in farmed rabbit. Other enteritis processes are princi-pally associated to coccidia, E. coli, Clostridium spp., C. spiroforme, C. piliforme (Tyzzer’s disease), Salmo-nella spp., as well as nematodes (Passalurus spp.). In-flammation and necrosis of the liver can be observed as small white spots associated to Eimeria stiedae (hepatic coccidiosis), Salmonella spp., C. piliforme, Cysticercus pisiformis, etc. Necrosis with karyorrhexis of the hepatocytes is a common finding in rabbit cali-civirus disease.
Testis, uterus and mammary gland are the main or-gans affected in the reproductive system, as well as dystocia in pregnant rabbits. Processes and agents mainly involved are mixomatosis, syphilis (Treponema cuniculi), P. multocida, Staphylococcus spp., etc
Finally, encephalitozoonosis by Encephalitozoon cuniculi is present in many rabbitries. Nervous signs, granulomatous encephalitis and interstitial nephritis are present in the affected animals.
Situações de urgência em cunicultura industrial
Monteiro J.M.1*, Alegria N.2, Coelho A.C.2
1 Sumicor Portugal Lda; Coren S. C. G.2 Dept. de Ciências Veterinárias, CECAV, Universidade
de Trás-os-Montes e Alto Douro (UTAD)
* josé[email protected]
Introdução: O médico veterinário durante a sua atividade contribui para a redução das perdas associa-das à morbilidade e mortalidade em cunicultura, para a melhoria dos resultados produtivos, atuando como consultor e orientando o produtor nos investimentos.
O presente trabalho teve como objetivo reportar a atuação do médico veterinário na sua vertente clínica, dando ênfase às principais situações de emergência em cunicultura.
Material e métodos: Procedeu-se à realização de um estudo observacional retrospetivo da actividade clínica na Península Ibérica, durante os anos de 2009 a 2012.
Foi efectuado o exame clínico dos animais prove-nientes de 76 explorações, tendo-se procedido à rea-lização de necrópsias, com recurso a exames laborato-riais e elaboração dos respetivos registos que serviram de base ao presente estudo.
Resultados: Determinou-se que a maioria das cha-madas de urgência, se deveram às condições clínicas de enteropatia mucóide, colibacilose, pasteurelose, po-dodermatite, mixomatose e enterotoxemia cujas lesões anatomopatológicas foram documentadas.
As explorações com maternidade e engorda no mes-mo pavilhão, mau maneio, sem controlo ambiental e sujeitas a variações climáticas, situações potencialmen-te geradoras de maior stresse e consequente redução da imunidade, apresentaram aumento da morbilidade e menor produtividade, enquanto as explorações com ambiente controlado e bom maneio, revelaram menos situações de emergência clínica e boa produtividade.
Conclusão: Foi possível verificar que as explorações onde as medidas de bem-estar animal e de controlo am-biental rigoroso já se encontravam implementadas, apre-sentaram melhores resultados produtivos e menor mor-bilidade em todas as fases de produção. Os resultados sugerem que a actuação do médico veterinário deverá in-cidir também nas vertentes atrás referidas, pois só assim se conseguirá aumentar a rentabilidade das explorações.
Emergency Situations in Industrial Rabbit Farming
Introduction: The veterinary doctor in the course of his activities contributes to the reduction of losses as-
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sociated with morbidity and mortality, by improving the results of production, acting as a consultant, and orienting the producer in his investments.
The present paper has as its objective to report on the performance of the veterinary doctor in the clini-cal aspect of his work, giving emphasis to the princi-pal emergency situations in rabbit farming.
Material and methods: A retrospective observa-tional study was carried out of the clinical activity in the Iberian Peninsula during the years 2009 to 2012.
The clinical examination of animals from 76 inves-tigations was carried out, subsequent to the realization of autopsies, with the use of laboratory tests whenever necessary and the elaboration of the respective regis-ters which served as a base for the present study.
Results: It was found that the majority of emergency calls, resulted from the clinical conditions of mucoid enteropathy, colibacillosis, pasteurellosis, foot pad der-matitis, myxomatosis and enterotoxaemia, of which the
anatomopathological injuries were documented.Farms with maternity and fattening stages in the same
building, poor handling, without environmental control and subjected to climatic variations, all of which were potential generators of major stress and consequently reduction in immunity, showed an increase in morbidity and lower productivity, while the farms with environ-mental control and good handling revealed less clinical emergency situations and good productivity.
Conclusion: It was possible to verify that the farms where the animal welfare measures being and rigor-ous environmental control had already been imple-mented showed better results in production and less morbidity in all the phases of production. The re-sults suggest that the activity of the veterinary doctor should also occur in the aspects previously referred; as it is only in this way that it will be possible to in-crease the profitability of the farms.
Controlo de pragas em parques Zoológicos: repercussões parasitárias, patológicas e de Saúde Pública
Crespo, A.P.1,2*, Lapão, N.1, Correia, J. 2, Gomes, L. 2, Vaz, Y.2 Madeira de Carvalho, L.M.2
1 Jardim Zoológico de Lisboa, Estrada de Benfica, 158-160, 1549-004 Lisboa;
2 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Universi-dade Técnica de Lisboa, Av. da Universidade Técnica de Lisboa, 1300-477 Lisboa, Portugal ([email protected]);
Introdução: A ligação próxima entre animais, Homem e pragas em zoos ou parques zoológicos, constitui um risco na transmissão de muitos agentes de doença, alguns dos quais ocasionando doenças zoonóticas, podendo afectar não só os animais da colecção zoológica, como também trabalhadores do zoo e visitantes.
Material e métodos: Integrado num estudo so-bre controlo de pragas no Jardim Zoológico de Lis-boa, efectuou-se um rastreio parasitológico em 100 roedores (50 Mus musculus e 50 Rattus norvegicus). Os endoparasitas adultos foram coligidos após de-cantações dos conteúdos gastrintestinais e esfregaços por aposição do fígado (coloração pelo Giemsa) e de fezes (coloração pelo Ziehl-Neelsen), efectuando-se análises coprológicas por flutuação (método de Wil-lis) e de sedimentação espontânea. Os fígados foram submetidos a análise histológica, fragmentos do fí-
gado foram fixados durante 24 horas, procedeu-se ao corte dos blocos de parafina e as amostras foram fixadas e coradas pela coloração da Hematoxilina e Eritrosina.
Resultados: Dos roedores observados, 82 apresen-taram formas de endoparasitas, com prevalências de 84,0% para R. norvegicus e de 80,0% para M. muscu-lus. Das espécies de roedores, Rattus norvegicus rep-resentou maior importância na transmissão dos para-sitas assinalados. Identificaram-se um total de cinco espécies de endoparasitas com potencial zoonótico: Hymenolepis diminuta (16,0%), Cysticercus fasciola-ris (12,0%), Syphacia obvelata (37,0%), Calodium hepaticum (32,0%) e Cryptosporidium sp. (5,0%).
Conclusão Deste conjunto de parasitas, C. hepati-cum, que já foi detectado após a morte de primatas não humanos com consequências patológicas no fí-gado daqueles hospedeiros. Além da perda de ani-mais, o risco zoonótico de transmissão de parasitas, bactérias e vírus aos trabalhadores e visitantes do Jardim Zoológico de Lisboa, deve ser sempre con-siderado como um problema de grande importância e impacto em Saúde Pública.
Pest control in Zoos: parasitic, pathologi-cal and Public Health repercussions
Introduction: The close connection between ani-mals, humans and pests, poses a risk for the transmis-sion of many agents, some of them causing zoonotic diseases, affecting not only the animals in the zoo-logical collection, as well as, zoo workers and visitors themselves.
Oral communications
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Material and methods: Following a pest control study at the Lisbon Zoo, a survey on endo and ectopar-asites was performed on 100 commensal rodents (50 Mus musculus and 50 Rattus norvegicus). Endopara-sites were collected from the gastrointestinal contents by a decanting process (adult specimens). Smears by liver apposition (Giemsa staining) and by extension feces (Ziehl-Neelsen staining), together with copro-logical exams by Willis flotation and spontaneous sedi-mentation techniques, were performed. The livers sub-jected to histological analysis of liver fragments were fixed for 24 hours, proceeded to cut the paraffin blocks and the samples were fixed and stained by Hematoxy-lin staining and Erythrosine.
Results: From the total number of studied rodents, 82 were positive for endoparasites, with prevalence rates of 84.0% for R. norvegicus and 80.0% for M.
musculus. Concerning the role of rodent species in parasite transmission, Rattus norvegicus represented the greater importance. Five species of endoparasites with zoonotic potential were identified: Hymenolepis diminuta (16.0%), Cysticercus fasciolaris (12.0%), Syphacia obvelata (37.0%), Calodium hepaticum (32.0%) and Cryptosporidium sp. (5.0%).
Conclusion: Of this set of parasites, C. hepaticum constitutes an extreme example, since its presence was already detected after death in non-human primates, with severe consequences for these hosts liver. Beside the loss of animals, the risk of transmission of zoonotic parasites, bacteria and viruses to workers and visitors of the Lisbon Zoo should always be considered as a problem of great importance and impact on Public Health.
Um caso de intoxicção por cebola (Allium cepa) em bovinos
Monteiro M. 1*, Mendonça P. 1, Carvalho P.1, Maria-no I.2
1 Laboratório de Patologia/INIAV;2 Laboratório Veterinário de Montemor-o-Novo
Introdução: A anemia hemolítica resultante do consumo prolongado de cebolas, Allium cepa, tem sido descrita em várias espécies animais nomeada-mente em cães, bovinos e caprinos; o princípio tóxico presente na cebola é o n-propil-dissulfito responsável por alterações da hemoglobina.
Os Autores descrevem vários casos de mortes em bovinos adultos que eram alimentados com pastagem natural e recebiam um suplemento de silagem de des-perdício de tomate misturada com cebolas e alhos.
Caso clínico: Os animais apresentavam anemia, hemoglobinúria e em alguns casos, icterícia.
Foram realizadas as necrópsias de dois animais; a abertura do cadáver revelou um intenso cheiro a ce-bolas; observaram-se alterações hepáticas e renais.
Discussão: Microscopicamente havia extensas zo-nas de necrose hepática centrolobular e necrose dos tubos renais simultaneamente com acumulação dum material compatível com hemoglobina.
Os exames efectuados em animais coabitantes, para diagnóstico diferencial com doenças que podem apre-sentar sinais clínicos idênticos, resultaram negativos para leptospirose sendo detectada, em apenas um ani-mal, uma pequena infecção de Theileria annulata.
Conclusão: As lesões microscópicas são sugestivas de uma anemia hemolítica tendo a sua associação ao suplemento alimentar em causa, permitido concluir
que se trata dum caso de intoxicação por cebolas; acresce-se ainda que, após ter sido retirado o referido suplemento e administrada uma terapêutica de supor-te, os animais que estavam doentes recuperaram e não houve mais mortalidade.
A case of onion (Allium cepa) intoxication in cattle
Introduction: In domestic animals the prolonged ingestion of onion (Allium cepa) has long been asso-ciated with the emergence of hemolytic anemia. This toxicity is due to the presence of n-propil- disulphide.
In this presentation the authors describe the occur-rence of several cases of toxicity in a grazing bovine herd due to ingestion of silage containing tomato, on-ion and garlic by-products.
Clinical case: The affected animals showed ane-mia, haemoglobinuria and, occasionally, jaundice leading to death in some severe cases.
Three animals were submitted to necropsy and the most prominent feature was a marked onion odor. The kidneys were dark brown and the liver slightly orange. Microscopically extensive areas of centrolobular liver necrosis as well as renal tubular necrosis with accu-mulation of hemoglobin-like material were seen.
Differential diagnostic testing excluded leptopiro-sis and revealed one Theileria annulata infected ani-mal.
Conclusion: The symptoms and the lesions ob-served were strongly suggestive of a haemolytic ane-mia. Taken together with the feed supplementation these facts enabled us to conclude for onion toxicity. Furthermore, after the discontinuation of the referred silage supplement and upon implementation of sup-portive care, the affected animals began to recover and no further deaths occurred.
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Um caso raro de neoplasia retrobulbar
Vala H1,2*, Mega A1,2, Santos C1,2, Cruz R1,2, Nóbrega C1,2, Mesquita JR1,2, Esteves F1,2, Vieira F3, Ferraz A4
1Escola Superior Agrária de Viseu, Instituto Politécni-co de Viseu, Portugal;2Centro de Estudos em Educação, Tecnologias e Saúde, Instituto Politécnico de Viseu, Portugal;3Histocit, Portugal;4Clínica Veterinária Planeta Animal, Aveiro, Portugal.
Introdução: Neoplasias envolvendo o nervo ótico são raras. O meningioma intraorbitário, a neoplasia mais comum sediada no nervo ótico, constitui apenas 3% de todos os meningiomas em cães, razão pela qual existem poucos estudos para permitir prever os seus sintomas e comportamento biológico.
Objetivos: Os autores descrevem e submetem à dis-cussão, um caso raro de meningioma retrobulbar, em particular para apreciação da graduação histológica e o prognóstico.
História Clínica: Um Labrador Retriever de 10 anos de idade, foi apresentado com queixas de edema e descarga purulenta do olho direito. Apresentava exof-talmia, protusão da terceira pálpebra, quemose, úlcera profunda da córnea e ausência de reflexo pupilar à luz, no mesmo olho. O exame físico, oftálmico e ecográ-fico permitiu diagnosticar exoftalmia devido a massa retrobulbar.
Material e Métodos: A amostra foi fixada em for-mol tamponado a 10 %, processada de acordo com o protocolo de rotina, tendo igualmente sido realizados estudos imunohistoquímicos, usando o método do Complexo Estreptavidina-biotina-peroxidase.
Resultados: O exame macroscopico revelou uma massa cónica, localizada na porção retrobulbar do ner-vo ótico, adjacente à porção posterior do globo ocular, apresentando coloração esbranquiçada, aspeto homo-géneo, lobulado e consistência firme.
O exame microscopico revelou células fusiformes, com núcleo redondo a oval, cromatina em padrão pon-tilhado, citoplasma eosinofílico, moderado, organizadas em ninhos, em torno de capilares, separados por feixes interlaçados, com estroma muito vascularizado e escasso.
Conclusão: Os autores sugerem o diagnóstico de meningiomado tipo transicional, tendo em conta as ca-raterísticas histopatológicas e os resultados do estudo de imunohistoquímica.
Agradecimentos: FCT e CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016/2011)
A rare case of retrobulbar neoplasia
Introduction: Neoplasms involving the optic nerve are rare. Intraorbital meningiomas, the most common tumour of the optic nerve, represent only 3% of all meningiomas in dogs, so few data exists to predict its symptoms and biologic behaviour.
Objectives: The authors describe and submit for discussion, a rare case of retrobulbar meningioma, in particular for assessment of histological grade and prognosis.
Medical History: A 10 year old Labrador Retriever male dog was presented for complaints of swelling and purulent discharge of the right eye. The animal had ex-ophthalmos, protrusion of the third eyelid, chemosis, deep corneal ulceration and no pupillary light reflex. Exophthalmos due to a retrobulbar mass was diagnosed after physical, ophthalmic and ultrasound examination.
Material and Methods: The sample was fixed in 10 % buffered formalin solution, processed for routine histopathological diagnosis and a standard Streptavi-din-Biotin Complex technique for immunohistochemi-cal evaluation was also performed.
Results: Macroscopic examination revealed a conic mass, located in the retrobulbar portion of the optic nerve, adjacent to the posterior aspect of the globe with homogeneous, lobulated and whitish appearance and firm consistency.
Microscopic examination revealed spindled cells, with round-to-oval, finely stippled nuclei, small or indistinct nucleoli, moderate amount of eosinophilic cytoplasm, arranged in concentric whorls around cap-illaries, separated by interlacing fascicles, with small amount of well vascularized, collagenous stroma.
Conclusion: The authors suggested the diagnosis of transitional meningioma, based on the histopathologi-cal diagnosis and immunohistochemistry results.
Acknowledgments: FCT and CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016/2011)
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Ocorrência de parasitismo externo em coelhos de companhia
Almeida, C.1*, Henriques C. 1, Bernardino, M. 1,2, Ma-deira de Carvalho, L.M. 2
1 Exoclinic, R. Dom António Ribeiro nº1 loja B, 1495-145 Algés, Portugal
2 CIISA, Fac Med Vet, Univ Tecn Lisboa, Av. da Univer-sidade Técnica de Lisboa, 1300-477 Lisboa, Portugal
Introdução: Em Portugal, tal como sucedeu ante-riormente noutros países como Inglaterra, Estados Unidos e Alemanha, o coelho doméstico tem revelado crescente popularidade como animal de companhia, devido à sua grande inteligência e interessante intera-ção com a família.
Durante o período de doze meses (Jan-Dez 2012) foram consultados 98 coelhos na “Exoclinic” sobre-tudo por problemas de sobrecrescimento dentário, problemas gastrointestinais e manifestações derma-tológicas.
Material e métodos: Dos 25 casos de manifestações cutâneas, para além do exame físico foram submeti-dos a raspagem cutânea e citologia direta das lesões. Foram identificados 16 coelhos positivos a parasitismo externo: Psoroptes cuniculi (69%) e Scarcoptes sca-biei (31%). Dos animais afetados, 81% apresentavam menos de seis meses de idade, verificando-se casos po-sitivos em machos e fêmeas e nas raças Fuzzy-Lop, Lion Head e Mini Holandês.
O tratamento sugerido foi de injeções subcutâneas de ivermetina (200µg/kg) repetindo ao fim de 14 dias, 28 dias, sugerindo uma quarta injeção e quinta injeção até desaparecimento total de sinais clínicos. Em alter-nativa, utilizou-se em metade dos casos, selametina so-lução tópica cutânea 15mg, repetindo-se ao fim de 28 dias, sugerindo uma terceira aplicação se necessário.
Resultados: Em termos de desaparecimento das le-sões cutâneas e crescimento do pêlo nas zonas de alo-pécia os resultados obtidos foram bem sucedidos ao fim de 28 dias de tratamento e com eficácia equivalente com ambos os protocolos.
Em simultâneo foram aplicadas medidas de melhor maneio e higienização das instalações do animal, bem como o alerta do potencial zoonótico de alguns tipos de sarna. Ainda assim, verificou-se a presença de dois episódios de manifestações cutâneas de sarna no pro-prietário, já instaladas aquando do início tratamento do animal.
Conclusão: De acordo com a nossa experiência, o clínico deve estar apto para a correta identificação dos agentes causais de problemas dermatológicos em coelhos. O aumento da casuística destes pacientes re-presenta também novas perspetivas de diagnóstico e
novos desafios terapêuticos. É na nossa opinião uma oportunidade para instituir boas práticas veterinárias de prevenção e profilaxia destas doenças, pois o bom estado geral de saúde está condicionado pela correta informação e educação do proprietário.
Occurrence of external parasitism in pet rabbits
Introduction: In Portugal, as happened previously in other countries like England, Germany and the United States, the domestic rabbit has shown increas-ing popularity as a pet, due to its great intelligence and interesting interaction with the family.
During a twelve month period (Jan-Dec 2012) 98 rabbits were consulted in “Exoclinic”, mainly due to dental problems, gastrointestinal diseases and derma-tological manifestations.
Material and methods: Of 25 cases of cutaneous manifestations, in addition to the physical examina-tion, they were subjected to scrape and direct cytol-ogy of cutaneous lesions. We identified 16 rabbits positive for external parasitism: Psoroptes cuniculi (69%) and Scarcoptes scabiei (31%). Of the affected animals, 81% were less than six months old, with pos-itive cases in both males and females and in Fuzzy-Lop, Lion Head and Mini Dutch breeds.
The suggested treatment was subcutaneous injec-tions of ivermectin (200µg/kg) repeating after 14 days and 28 days, suggesting a fourth and a fifth injection until total disappearance of clinical signs. Alterna-tively, in half the cases was used a topicalolution of selamectin 15mg, repeating the treatment 28 days af-ter the first one, suggesting a third application if nec-essary.
Results: In terms of disappearance of skin lesions and hair growth in areas of alopecia, results were suc-cessful after 28 days of treatment, with equivalent ef-ficacy for both protocols.
Simultaneously were applied measures for a better handling and hygiene of the animal facilities, as well as the alert for the zoonotic potential of some types of mange. Still, there was the presence of two episodes of cutaneous manifestations of scabies in the owners, already onset before initiating the animal treatment.
Conclusion: According to our experience the clini-cian must be able to correctly identify the causative agents of skin problems in rabbits. The increase of these patients casuistic as pets also opens new pros-pects for diagnosis and new therapeutic challenges. It is in our opinion, an opportunity to establish good veterinary practice prevention and prophylaxis of these diseases, since the good general health is con-ditioned by proper education and information of the owner.
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Identificação de Parasitas de Peixes em Cortes Histológicos
Ramos, P.1*, Carvalho, R.1α, Rosa, F.2
1 Laboratório de Patologia dos Animais Aquáticos. Ins-tituto Português do Mar e da Atmosfera, IPMA, I.P. Avenida de Brasília, 1449-006 Lisboa, Portugal
2 Instituto de Investigação Científica Tropical, IICT. Rua da Junqueira nº 14, 1300-343 Lisboa, Portugal
1α Já não se encontra a trabalhar na Instituição* Autor correspondente. Tel.: + 00351 213027000 Fax: + 00351 962467682
Introdução: A identificação de parasitas de peixes em cortes histológicos poderá apresentar alguma difi-culdade, sobretudo quando as características morfoló-
gicas usadas na sua identificação não são observáveis. Material e Métodos: Apresentam-se três casos de
infecção parasitária: peritoneu de safio, Conger con-ger, com aspecto nodular; músculo de faneca, Trisop-terus luscus, com cor negra e coração de perca sol, Le-pomis gibbosus, envolvido por quistos de cor branca. Os tecidos foram fixados em formol salgado a 10% e processados histologicamente.
Resultados: A estrutura nodular de peritoneu cor-respondia a um aglomerado de larvas enquistadas. A ausência de proglótides indicou tratar-se de espécimes imaturos. Nuns cortes, o parênquima larvar apresen-tava aspecto de tecido laxo, sem estruturas morfoló-gicas e noutros, observou-se o escólex com botrídeas e quatro tentáculos retrácteis armados com ganchos, bem como corpúsculos calcáreos correspondendo a larvas plerocercóides de Trypanorhyncha. No mesmo tecido foram observadas larvas filiformes, com corpo
Um caso de localização exclusivamente gástrica de Spirocerca lupi numa raposa (Vulpes vulpes) em Portugal
Silva J.F.*, Madeira de Carvalho L., Moreira A.S.
CIISA - Faculdade de Medicina Veterinária (Universi-dade Técnica de Lisboa), Av. da Universidade Técnica (Polo Universitário Alto da Ajuda), 1300-477 Lisboa
Introdução: O Spirocerca lupi localiza-se caracte-risticamente na parede esofágica de Canídeos. Ferran-telli et al.(2010) e Diakou et al.(2012), assinalaram a presença deste Nemátode na parede gástrica de raposas.
Material e métodos: O cadáver de uma raposa adul-ta, sexo masculino, pesando 5,85 kg foi necropsiado e colhido material, que foi processado segundo a técnica histológica de rotina. A identificação dos Nemátodes em cortes histológicos foi feita de acordo com o artigo de Chitwood e Lichtenfels (1972) e tendo em conta as-pectos bioecológicos e epidemiológicos.
Resultados: Na parede do estômago observaram-se dois nódulos coalescentes, com diâmetros respectiva-mente de 1,2 cm e 1,8 cm. Estes apresentavam super-fície de corte branca, uma cavidade contendo material necrótico e um Nemátode enrolado sobre si próprio, de cor avermelhada, com cerca de 1 mm de espessura. O exame microscópico dos nódulos revelou uma cápsu-la de tecido conjuntivo fibroso envolvendo Nemátodes adultos. Estes apresentavam musculatura celomiária e polimiária, cordões laterais proeminentes, útero encer-rando ovos não operculados de casca fina, que conti-nham uma larva. O intestino apresentava um epitélio simples cúbico com microvilosidades alongadas.
Conclusão: As características histológicas, bioe-cológicas e epidemiológicas do Nemátode permitem
classificá-lo como Spirocerca lupi, pelo que este é um caso de localização gástrica deste Nemátode em raposa em Portugal.
A case of location exclusively in the gastric wall of Spirocerca lupi in a fox (Vulpes vulpes) in Portugal
Introduction: One of the Spirocerca lupi current lo-cations is the oesophagic wall in Canidae. Ferrantelli et al. (201) and Diakou et al. (2012) reported the gastric wall location of this Nematode in foxes.
Material and methods: An adult male fox weight-ing 5.85 kg was necropsied and samples were col-lected, which were processed according to the routine histological technique. The identification of Nematode specimens in histological sections was based in the pa-per by Chitwood and Lichtenfels (1972) and consider-ing bioecological and epidemiological aspects.
Results: In the gastric wall were observed two coa-lescent nodules, which diameters were, respectively; 1.2 cm and 1.8 cm. Their cut surface was white, with a cavity containing necrotic material and a red Nema-tode coiled over itself, with 1 mm thick. The micro-scopic exam of the nodules revealed a capsule of dense connective tissue surrounding adult Nematoda. These worms possessed muscle cells of the coelomyarian and polymyarian types, prominent lateral chords, and an uterus containing thin-shelled, non-operculated ova, with a larva inside. The intestinal wall consisted of a simple cuboidal epithelium with long microvilli.
Conclusion: The histological, bioecological, and epidemiological characteristics of this Nematode al-lowed us to classify it as Spirocerca lupi. The present case relates to an exclusively gastric location of this Nematode in a Portuguese fox.
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circular em corte transversal, esófago de aspecto simé-trico radial e lúmen triradial, correspondendo a larvas de nematodos.
No músculo de faneca identificaram-se ovos bioper-culados, morulados ou castanhos embrionados, bem como porções de larvas ou adultos com corpo cilín-drico localizados entre as fibras musculares e dentro delas, resultando numa infecção parasitária por nema-todos Trichosomoididae, Huffmanella spp.
No coração da perca sol, os quistos continham uma larva não segmentada, com dois cecos, uma ventosa oral e outra ventral, do trematode digenético, Postho-diplostomum minimum centrarchi.
Conclusão: Na identificação dos parasitas foi im-portante observar os caracteres morfológicos, mas o conhecimento do peixe parasitado, o seu habitat e os tecidos afectados, auxiliaram o diagnóstico.
Identification of Fish Parasites in Stained Tissue Samples
Introduction: In stained tissue sections prepared for light microscopy, taxonomic features may not be present, thus making parasite identification difficult. Three cases of parasite infection were described: Euro-pean conger, Conger conger peritoneum with nodular appearance; pouting, Trisopterus luscus with abnormal dark colour muscle and pumpkinseed sunfish, Lepomis gibbosus heart, surrounded by white colour cysts.
Material and Methods: Tissues were fixed in 10% buffered neutral formalin and processed using standard methods.
Results: The nodular peritoneum consists of multi-tude of encysted and clustered larvae. The absence of complete segmentation into proglottis identifies this specimen as immature. In sections, the body larvae vary from loosely parenchyma to prominent scolex features with bothridia and four tentacles armed with hooks. The larvae were identified as Trypanorhynchean plerocercoid. In this nodular peritoneum, filiform lar-vae were also present showing a round body surface in cross-section and the histological features of the oesophagus with its radial symmetry and triradiate lu-men which allowed classifying them as nematodes.
The histopathological findings of the pouting mus-cle, revealed bioperculated eggs, immature and embry-onated brown eggs. The eggs and portions of larvae or adult nematodes Trichosomoididae of the genus Huff-manella were observed in either intracellular or extra-cellular locations.
The heart of pumpkinseed sunfish was found infected by Posthodiplostomum minimum centrarchi larvae. The larvae were differentiated by the absence of the body segmentation and by an addition sucker, the ventral one.
Conclusion: The morphological characters are im-portant in parasites identification but the knowledge on infected fish species, their habitat and infected tissues also provide additional information to the parasite’s identification.
Caracterização de um surto da nova variante da Doença Hemorrágica Viral (DHV) em coelhos bravos (Oryctolagus cuniculus algi-rus), Barrancos, Sudeste de Portugal
Melo P.1*, Abrantes J.2,3, Ramada M. 1, Lopes A.M. 2,3,4, Alves P.C. 2,4, Esteves P.J. 2,5, Correia J.J. 6
1 VETNATURA, Lisboa, Portugal *[email protected] CIBIO/UP, Centro de Investigação em Biodiversidade e Recursos Genéticos/Universidade do Porto, InBio, Laboratório Associado, Campus Agrário de Vairão, Vairão, Portugal
3 INSERM, U892, Université de Nantes, Nantes, Fran-ce
4 Departamento de Zoologia e Antropologia, Faculdade de Ciências da Universidade do Porto, Porto, Portugal
5 CITS, Centro de Investigação em Tecnologias da Saú-de, IPSN, CESPU, Gandra, Portugal
6 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária - Universi-dade Técnica de Lisboa, Portugal
Introdução: A doença hemorrágica viral (DHV) do coelho tem como agente etiológico um calicivírus e causa elevada mortalidade em coelhos domésticos e
bravos. Na Península Ibérica, a DHV foi descrita em 1989 e todas as estirpes virais isoladas pertenciam ao genogrupo 1. Em 2011 detectou-se em Espanha uma nova variante deste vírus, descrita anteriormente em França, diferenciando-se por originar mortalidade em juvenis (<2 meses) e adultos vacinados.
Caso clínico: Entre Dezembro de 2012 e Janeiro de 2013, ocorreu um surto atípico de DHV em Barran-cos, afectando coelhos bravos jovens não vacinados e adultos vacinados, registando uma taxa de mortalidade de 42%.
Efectuou-se a necrópsia a sete cadáveres, com reco-lha de pulmão, fígado, timo, traqueia, rim e baço. A detecção de RNA viral foi efectuada por RT-PCR e os casos positivos foram sequenciados. Para a análise fi-logenética foram incluídas estirpes de cada genogrupo e estirpes da nova variante.
Resultados: As lesões macroscópicas foram maiori-tariamente epistaxis, hemorragia do pulmão e traqueia, congestão do rim, baço, timo. Os fígados apresentavam predominantemente coloração pálida e em alguns ca-sos congestão. Os animais vacinados apresentavam le-sões menos severas. As lesões histopatológicas foram hemorragias do pulmão e traqueia e a nível hepático, congestão e hepatite necrosante.
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Principais dificuldades encontradas na aplicação das técnicas de deteção de apoptose em tecidos animais
Garcia C1*, Cruz R1,2, Mega A1,2, Oliveira AL3, Teixeira de Lemos E1,2,5, Ferreira D4, Reis F5, Vala H1,2
1 Escola Superior Agrária de Viseu, Instituto Politécni-co de Viseu, Portugal;
2 Centro de Estudos em Educação, Tecnologias e Saú-de, Instituto Politécnico de Viseu, Portugal
3 Universidade de Léon, Léon, Espanha4 Laboratório de Farmacologia e Terapêutica Experi-mental, IBILI, Faculdade de Medicina da Universida-de de Coimbra, Coimbra, Portugal
5 CICV- Centro de Investigação em Ciências Veteriná-rias, Universidade Lusófona de Humanidades e Tec-nologia, Lisboa, Portugal
Introdução: A aplicação de metodologias capazes de identificar células apoptóticas constitui uma valiosa ferramenta em vários estudos biomédicos. Muito do conhecimento adquirido acerca dos mecanismos regu-ladores da apoptose deriva de observações em células isoladas. No entanto, as propriedades demonstradas por estes ensaios nem sempre se aplicam ao estudo de amostras tecidulares. Para deteção da apoptose em tecidos, muitos investigadores recomendam o método
TUNEL. Contudo, outros métodos estão disponíveis para avaliação da apoptose, devendo a sua escolha ser criteriosamente avaliada, tendo em conta as alterações morfológicas que se pretendem detetar. O presente tra-balho pretende, como principal objetivo, partilhar as dificuldades encontradas na implementação de dois diferentes métodos para deteção de células apoptóticas em tecidos animais.
Material e métodos: Foram utilizados tecidos de dife-rentes animais (rato, porco e cão), fixados em formalina a 10% e incluídos em parafina, os quais foram submetidos a técnicas imunohistoquímicas com recurso ao método TUNEL (Kit In situ cell death, Roche) e aos anticorpos policlonais Bax e Bcl-2 (Santa Cruz Biotechnology).
Resultados: Após um longo período de testes e de custos, em que se obtiveram reações inespecíficas, bem como vários artefactos - obstáculos que, para serem superados, requerem persistência, todos os métodos provaram ser eficazes na deteção de apoptose, tendo sido as diferenças de marcação observadas relaciona-das com o tipo de tecidos testados.
Conclusão: Os métodos imunohistoquímicos cons-tituem uma abordagem a considerar no que respeita à deteção da apoptose em tecidos animais, sendo que as dificuldades encontradas representam um desafio su-perável. Partilhar esta esperiência poderá, certamente, evitar testes e custos desnecessários à sua implementa-ção noutras unidades laboratoriais.
Agradecimentos: FCT e CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016)
A análise filogenética demonstrou que as estirpes isoladas agrupam com a nova variante com elevado suporte estatístico.
Conclusões: Este estudo confirma a presença da nova variante em Portugal e levanta questões quanto à conservação e sustentabilidade das populações natu-rais de coelho bravo. Recomendam-se medidas adicio-nais de gestão nas unidades de criação.
Characterization of an outbreak of the newly identified variant of rabbit haemor-rhagic disease virus (RHDV) in wild rabbits (Oryctolagus cuniculus algirus), Barrancos, Southeast of Portugal
Introduction: Rabbit haemorrhagic disease virus (RHDV) is a calicivirus that causes a highly fatal dis-ease in wild and domestic adult European rabbits. In Iberian Peninsula, the first description of RHDV dates from 1989 and all isolated strains clustered within ge-nogroup 1. In 2011 a new variant of RHDV was detect-ed in Spain, already described in France, that differs by causing mortalities in young rabbits (<2 months old) and in vaccinated adult rabbits.
Clinical case: Between December of 2012 and Janu-ary of 2013, an atypical RHDV outbreak was detected in Barrancos, where unvaccinated young and vacci-nated adult wild rabbits were fatally susceptible, with a mortality rate of 42%.
Necropsies of seven cadavers were performed and samples of lungs, liver, thymus, trachea, kidneys and spleen were collected. Detection of viral RNA was per-formed by RT-PCR and when positive, products were sequenced. For the phylogenetic analysis, strains from each genogroup and of the new variant were included.
Macroscopic lesions were mostly epistaxis, hemor-rhage in the lungs and trachea, congestion in the kid-ney, spleen and thymus. Livers were predominantly pale and in some congested. Vaccinated animals had less severe lesions. Histopathological lesions were he-morrhages in the lungs and trachea and congestion and necrotizing hepatitis in the liver.
Phylogenetic analysis clustered the isolates with the newly described variant with high bootstrap support.
Conclusions: This study confirms that the new vari-ant of RHDV is circulating in Portugal and raises con-cerns regarding the conservation of the natural popu-lations of European rabbit. Additional management measures are recommended in breeding facilities.
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Otimização da imunodeteção do recetor HER2 em tumores mamários de cadela
Beselga, A. 1, Soares, M. 1, Carvalho, S. 1, Matos, J. 2, Cabeçadas, J. 2, Correia, J. 1, Peleteiro, M. 1, Ferreira, F. 1*
1 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Univer-sidade Técnica de Lisboa. Alto da Ajuda, 1300-477 Lisboa, Portugal
2 IPOFG-EPE, Serviço de Anatomia Patológica, 1099-023 Lisboa, Portugal
Introdução: O recetor para o fator de crescimento epidérmico de tipo 2 (HER2) apresenta-se sobrex-presso em 15-30% dos tumores mamários na mulher, mostrando um elevado valor prognóstico e terapêuti-co. Na cadela, o papel oncogénico do HER2 perma-nece duvidoso devido, em parte, à falta de padroniza-ção da técnica de imunohistoquímica.
Material e métodos: Vinte e uma amostras de tumores mamários caninos (TMC) foram colhidas e fixadas de acordo com as indicações da American Society of Clinical Oncology (ASCO). Após classi-ficação histopatológica, as amostras foram sujeitas a diferentes protocolos imunohistoquímicos, tendo-se feito variar o método de recuperação antigénica e o anticorpo primário usado: TAB250, diluição 1:250 (Zymed); SP3, 1:100 (Zytomed); CB11, 1:60 (Invi-trogen); 4B5, pronto a usar (Ventana). A interpreta-ção dos resultados foi realizada de acordo com os critérios da ASCO.
Resultados: Os melhores resultados foram obtidos
com o anticorpo CB11 quando associado ao méto-do de recuperação antigénica por panela de pressão. Com este protocolo, 42,9% dos tumores analisados mostraram sobrexpressão do recetor HER2. Todos os anticorpos testados mostraram marcação membranar específica no tecido mamário de cadela, à exceção do clone TAB250.
Conclusão: A variabilidade dos resultados obtidos demonstra a necessidade de padronização da técni-ca de imunohistoquímica para deteção do HER2 em Medicina Veterinária. Neste estudo, 42,9% dos TMC analisados mostraram sobreexpressão do HER2, um percentagem superior à descrita na Mulher, reforçan-do a possível importância deste biomarcador em On-cologia Veterinária.
Optimization of HER2 receptor immuno-detection in canine mammary tumours
Introduction: The epidermal growth factor type-2 receptor (HER2) is overexpressed in 15-30% of breast tumors in women, presenting a prognostic and high therapeutic value. In the bitch, the role of the HER2 oncogene remains doubtful due to the lack of immunohistochemistry technique standardization.
Material and methods: Twenty-one canine mam-mary tumors (CMT) were collected and fixed in agreement to the American Society of Clinical On-cology (ASCO) guidelines. After histopathological classification, the samples were subjected to different immunohistochemical protocols, varying the recov-ery antigen method and the primary antibody used: TAB250, dilution 1:250 (Zymed); SP3, 1:100 (Zy-tomed); CB11, 1:60 (Invitrogen); 4B5, ready-to-use
Main difficulties encountered in implemen-tation of techniques for apoptosis detection in animal tissues
Introduction: The implementation of methodolo-gies capable of identifying apoptotic cells is a valu-able tool in many biomedical studies. Much of the knowledge acquired about the mechanisms regulat-ing apoptosis comes from observations in isolated cells; however, the properties shown by these assays do not always apply to the study of tissue samples. For detection of apoptosis in tissues, many investi-gators recommend the TUNEL method, nonetheless, other methodologies are available, and their choice must be carefully evaluated, taking into account the morphologic alterations which they intend to detect. The main goal of this work is to share difficulties encountered in the implementation of two different methods for the detection of apoptotic cells in animal tissue.
Material and methods: Tissues from different ani-mals (rat, pig and dog) tissues, fixed in 10% neutral-buffered formalin and paraffin embedded were sub-mitted to immunohistochemical techniques using the TUNEL method (In situ Cell Death Kit, Roche) and polyclonal Bax and Bcl-2 antibodies (Santa Cruz Bio-technology).
Results: After a long period of performed tests and expenses made, in which unspecific reactions, as well as several artifacts were obtained - obstacles that re-quired persistence to be overcome, all methods have proven to be effective in the detection of apoptosis, with differences probably related to the tissues tested.
Conclusion: Immunohistochemical methods are a good approach to consider in the detection of apoptosis in animal tissues. Sharing the challenging difficulties found in our work, might obviate many tests and expens-es in its implementation in other laboratory facilities.
Acknowledgments: FCT and CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016)
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(Ventana). Results interpretation was performed ac-cording to the ASCO criteria.
Results: The best results were obtained when the antibody CB11 was coupled with the pressure cooker as antigen retrieval method. With this protocol, 42.9% of the analyzed tumors showed HER2 overexpression. All antibodies tested show specific immunostaing of the cytoplasmic membrane, except the clone TAB250.
Conclusion: The variability of the results obtained demonstrates the need of immunohistochemistry standardization for HER2 evaluation in Veterinary Medicine. In this study, 42.9% of TMC analyzed showed HER2 overexpression, a higher percentage than the one described in women, reinforcing the possible importance of this biomarker in Veterinary Oncology.
Linfoma intestinal do tipo B com diferen-ciação em células de Mott num gato.
Pedro Faísca1,2*; Maria João Costa3, Rita Pontes3, Dul-ce Carujo3, Matilde Gonçalves4, Marli Anágua1, Inês Carvalho2
1 Faculdade de Medicina Veterinária da ULHT2 DNATech3 Clínica veterinária de Telheiras4 Serviço de Anatomia Patológica – Centro Hospitalar de Setúbal
Introdução: Gato, macho, 11 anos de idade, que se apresentou à consulta para vacinação anual. No exa-me físico detetou-se massa abdominal, não dolorosa e firme.
Materiais e métodos: Realizou-se ecografia abdo-minal que confirmou massa intestinal.
Posteriormente foi realizada a sua remoção por en-terectomia.
Resultados: Macroscopicamente, ao nível do jeju-no, identificou-se neoformação ulcerada, não esteno-sante, com 9x5x4,5 cm; em secção era branca amarela-da, brilhante, homogénea, envolvendo toda a espessura da parede intestinal.
Histologicamente observou-se proliferação difusa de células linfoides desde a mucosa até à serosa. As-sociado aos linfócitos identificam-se inúmeras células grandes e redondas, entre 20 a 30 µm, com núcleo em-purrado para a periferia e citoplasma preenchido por glóbulos eosinofílicos e hialinos, positivos com ácido periódico de Schiff, compatíveis com células de Mott. Os linfócitos apresentaram imunomarcação positiva para Pax5 (Leica NCL-L-PAX-5 1/80), CD79alphacy (Dako M7051, 1/50) e imunomarcação negativa para CD3 (Dako A0452, 1/50); as células de Mott demons-traram positividade para CD79alphacy, cadeias leves lambda (Ventana 760-2515) e negatividade para Pax5, CD3 e cadeias leves kappa (Ventana 760-2514). De-monstrou-se índice mitótico baixo (0-2 mitoses por campo com objetiva de 40x) e índice de proliferação
celular superior a 30% com o anticorpo Ki-67 (Dako M7240 1/50).
Conclusão: Com base nos achados morfológicos, histoquímicos e imunohistoquímicos, o diagnóstico histológico é compatível com linfoma intestinal de tipo B, com diferenciação em células de Mott.
Feline intestinal B-cell lymphoma with Mott cell differentiation.
Introduction: An 11–year-old, male cat, was present for the annual vaccination booster without any abnor-mal clinical signs. On clinical examination, a firm, non-painful abdominal mass was palpated.
Materials and methods: An abdominal ecography confirmed the presence of an intestinal mass, which was posteriorly extirpated by enterectomy.
Results: The jejunum presented a 9x5x4,5 cm, ho-mogenous, bright whitish-yellow mass surrounding the intestinal lumen and invading all intestinal layers.
Histologically, there was a diffuse non-capsulated proliferation of round cells, disposed in dense sheets through all intestinal layers. The neoplastic cells were of lymphoid type associated with large (20-30um) round cells with cytoplasmatic eosinophilic, periodic acid–Schiff positive, globules compatible with Mott cells.
The lymphoid cells presented positive immunostain-ing for CD79alphacy (Dako M7051, 1/50), and Pax5 (Leica NCL-L-PAX-5 1/80), and negative immunos-taining for CD3 (Dako A0452, 1/50); the Mott cells presented positive immunostaining for CD79alphacy and lambda light-chain (Ventana 760-2515 ready to use), and were negative for Pax5, CD3 and kappa light-chain (Ventana 760-2514 ready to use). The mitotic figures were rare (0–2 per 40x field of view), and the Ki 67 proliferation index was higher than 30% (Dako M7240 1/50).
Conclusion: On the basis of histopathology, histo-chemistry and immunohistochemistry, a B-cell lym-phoma with Mott cell differentiation was diagnosed.
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Adenocarcinoma do endométrio em gatas com menos de um ano de idade: descrição de quatro casos
Pires M.A.1*, Saraiva A.L. 1,2, Santos T.3, Vilhena H.4, Sousa A.5, Santos C.1, Payan-Carreira R.1
1 CECAV, University of Trás-os-Montes and Alto Dou-ro, P.O. Box 1013, 5001-801 Vila Real, Portugal.
2 EUVG – Escola Universitária Vasco da Gama, 3040-714 Castelo Viegas, Coimbra, Portugal.
3 Veterinary Teaching Hospital (HVUTAD), University of Trás-os-Montes and Alto Douro, P.O. Box 1013, 5001-801 Vila Real, Portugal.
4 Hospital Veterinário do Baixo Vouga, 3750-742 Águeda, Portugal
5 Policlínica Veterinária de Aveiro - Vetsanus, 3800-118 Aveiro, Portugal.
Introdução: As neoplasias uterinas de origem epi-telial são raras em todas as espécies animais, exceto em vacas e coelhas. Nas gatas, o adenocarcinoma do endométrio (AEG) é, geralmente descrito em fêmeas com idade superior a 8 anos, ainda que, esporadica-mente, possa ser observado em idades compreendidas entre os 2 e os 4 anos.
Material e métodos: foram enviados ao Laboratório de Histologia e Anatomia Patológica da UTAD 4 peças de ovariohisterectomia (OVH) de gata, provenientes de diferentes Hospitais Veterinários. Os órgãos, fixa-dos em formol tamponado a 10% foram processados por rotina para parafina e corados com hematoxilina e eosina.
Resultados: A sintomatologia observada foi variá-vel, desde a ausência até à presença de corrimento he-morrágico acastanhado,, facilmente confundidos com piómetra ou aborto.
Macroscopicamente os úteros apresentavam-se dis-tendidos, firmes, com parede espessada, dilatações e irregularidade dos cornos uterinos em diferentes graus. Microscopicamente observou-se proliferação papilar do endométrio, com invasão do miométrio em dois dos casos. O diagnóstico foi de AEG de tipo papilar seroso.
Conclusão: Embora as neoplasias de origem epi-telial do útero sejam raras nos animais domésticos, o nosso grupo nos últimos anos tem registado mais AEG
do que o documentado. Embora esta neoplasia seja mais frequente em animais velhos, nos últimos 2 anos tivemos 4 casos de AEG em gatas de idade inferior a um ano no momento da cirurgia.
Esta situação clínica pode ser confundida com abor-to ou piómetra, pelo que se recomenda a análise siste-mática de todas as peças de OVH, seja qual for a idade ou diagnóstico clínico.
Feline Endometrial Adenocarcinoma in fe-males under one year-old: A description of four cases
Introduction: Uterine neoplasms of epithelial origin are rare in all domestic animals, except for cows and rabbits. In female cats, endometrial adenocarcinoma (FEA) is usually described in females over 8 years-old. Yet, sporadically it may be found in younger females of age of 2-4 years.
Material and methods: 4 ovariohysterectomy surgi-cal specimens from queens aged under one year old, at the time of surgery, were submitted from different practices to the Laboratory of Histology and Anatomi-cal Pathology, at UTAD. The organs were fixed in 10% buffered formalin, processed to paraffin embed tissue, and stained with haematoxylin and eosin.
Results: Different clinical symptoms were observed in these animals, ranged from absent to a haemorrhagic or brownish discharge, easily confused with pyometra or abortion.
Macroscopic outcomes revealed a distended and firm uterus, with wall thickness, dilatations and irregularity along both uterine horns, at different grades. Micro-scopic findings revealed a papillary proliferation of the endometrium with myometrium invasion in two cases. The final diagnosis was FEA of the papillary type.
Conclusion: Although uterine neoplasms of epithe-lial origin are rare in domestic animals, in the last years our group has recorded more FEA than documented in the literature. Despite this neoplasia to be related with older animals, in less than two years, we untypically diagnosed 4 FEA in queens aged under one year-old at time of surgery that could be clinically mistaken for pyometra or abortion. For this reason, we strongly rec-ommend histopathological analysis of all ovariohys-terectomy surgical specimens, despite animal’s age or clinical diagnose.
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Abate de Lagomorfos nos Matadouros Portugueses: Estudo Descritivo (2011-2012)
Jesus J.1, Santos S.1*, Lamela M.2
1 Centro de Investigação em Ciências Veterinárias
(CICV) - FMV- ULHT, Lisboa, Portugal2 Chefe de Divisão na Direcção de Serviços de Segu-rança Alimentar da Direcção Geral de Alimentação e Veterinária (DGAV)
Introdução: Este trabalho dá a conhecer os volumes de abate actuais de lagomorfos e as principais causas de reprovação sanitária nos matadouros portugueses.
Material e métodos: Analisou-se a totalidade de abates de lagomorfos entre 1 de Janeiro de 2011 e 31 de Dezembro de 2012, registados no Sistema de Infor-mação do Plano de Aprovação e Controlo dos Estabe-lecimentos (SIPACE), plataforma informática da Dire-ção Geral de Alimentação e Veterinária, utilizada por todos os inspetores sanitários desde Outubro de 2010.
Resultados: Foram apresentados para abate regular 10 901 526 lagomorfos. Desses, 321 (≈0,03‰) foram rejeitados ante-mortem e 93 665 (≈8,6‰) post-mortem. De entre os principais tipos de processos patológicos observaram-se lesões fibrino-purulentas, abcessos e caquexia. Registaram-se 20 497 mortes no transporte.
Conclusão: No período em análise, o volume de abate manteve-se estável e não apresentou sazonali-dade, sugerindo assim um consumo regular desta car-ne ao longo do ano. As lesões fibrino-purulentas e os abcessos foram as principais causas de reprovação. A identificação das causas de reprovação é fundamental
para possibilitar a implementação de medidas preven-tivas.
Slaughtering of Lagomorphs in the Portu-guese Slaughterhouses: Descriptive Study (2011-2012)
Introduction: The present study was conducted to evaluate lagomorphs´s slaughtering data such as the current number of slaughtered animals and the major causes to condemnation in Portugal.
Material and methods: This study includes the total number of lagomorphs slaughtered between 1st January 2011 and 31st December 2012. The data were obtained from Informatiom System of Establishments Approval and Control Plan (SIPACE) software, be-longing to Directorate General of Food and Veterinary (DGAV), where all veterinary inspectors insert the records since October 2010.
Results: Out of 10 901 526 slaughtered lagomorphs, 321 (≈0,03‰) were rejected ante-mortem and 93 665 (≈8,6‰) were rejected post-mortem. The majority of injuries were fibrinopurulent lesions, abscesses and cachexia. Deaths in the transport accounted 20 497 animals.
Conclusion: In the past two years the number of slaughtered lagomorphs remained stable and no sea-sonality in the number of slaughtered animals was noted, meaning that this type of meat is consumed regularly over the year. Fibrinopurulent lesions and abscesses were the most frequent causes of condemna-tion. Preventive actions can only be taken after identi-fication of the prevalent injuries, proving that studies like this are useful.
Caracterização da população linfocitária em lesões granulomatosas de javali (Sus scrofa) com diagnóstico presuntivo de tu-berculose
Matos A.C1., Andrade S.2, Pires M.A.2*, Coelho A.C.2, Pinto M.L.2
1 Instituto Politécnico de Castelo Branco, Castelo Branco, Portugal
2 CECAV - Centro de Ciência Animal e Veterinária; ECAV- Escola de Ciências Agrárias e Veterinárias, Vila Real, Portugal
Introdução: A tuberculose é doença infeciosa que ameaça a vida de milhões de pessoas, quer em países
em desenvolvimento, quer em países desenvolvidos, sendo também responsável por elevadas perdas econó-micas em animais de espécies pecuárias. A patogénese da tuberculose bovina, causada por Mycobacterium bo-vis e da tuberculose humana, cujo agente principal é o microrganismo da espécie Mycobacterium tuberculo-sis, são as que se encontram melhor caracterizadas. No entanto, a tuberculose também afeta outras espécies de animais, sendo estes muitas vezes os responsáveis pelo contágio às espécies pecuárias e ao Homem. Em par-ticular, o estudo da tuberculose nas espécies selvagens pode elucidar a forma como esta doença se mantém e se transmite.
Material e métodos: Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a resposta inflamatória crónica em animais selvagens com diagnóstico presuntivo de tuberculose, em que se procurou investigar a expres-são dos anticorpos anti-CD3 e anti-CD79α em lesões
Poster presentations
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Estudo Preliminar sobre a Descalcificação de Tecido Ósseo em Micro-ondas
Anágua M.*, Faísca P.
Centro de Investigação em Ciências Veterinárias- Fa-culdade de Medicina Veterinária - Universidade Lusó-fona de Humanidades e Tecnologias
Introdução: A análise histopatológica de tecido ós-seo exige uma etapa de descalcificação, que possibilite a microtomia. O método mais comum consiste na imersão das amostras em soluções ácidas, mas para além de pro-vocarem danos tecidulares, o processo é muito prolon-gado, o que atrasa significativamente o diagnóstico. A utilização de micro-ondas acelera a descalcificação, mas não deve comprometer a imagem microscópica.
O objetivo deste trabalho consistiu na diminuição da duração da descalcificação, mantendo a qualidade da imagem microscópica.
Material e métodos: Foram testadas amostras de osso compacto e esponjoso, provenientes de caprinos, com dimensões que pretenderam simular casos de bi-ópsias e casos de peças cirúrgicas ou necrópsias. Re-alizou-se a descalcificação pelo método convencional
e pelo método em micro-ondas, através da adaptação de um protocolo conhecido. Utilizou-se ácido nítrico a 5% e 10%.
Resultados: Nos fragmentos de maiores dimensões, o protocolo foi interrompido após 4 horas com ácido nítrico a 10% em micro-ondas, por não se conseguir uma descalcificação completa e estar a ocorrer destrui-ção do osso compacto. Nos fragmentos de osso espon-joso, verificou-se uma redução de cerca de 25 horas relativamente ao método convencional. Nas biópsias, houve uma redução de aproximadamente 10 horas, uti-lizando ácido nítrico a 5%. Com ácido nítrico a 10% houve destruição tecidular. Nos casos em que se obteve uma descalcificação completa, a imagem microscópica apresenta fraca qualidade.
Conclusão: A utilização de micro-ondas na descal-cificação com ácido nítrico a 5% ou 10%, aplicando o protocolo deste estudo em amostras de caprinos, reduz a duração do processo, mas compromete significativa-mente a imagem microscópica, o que se torna inviável para diagnóstico.
Preliminary Study about Microwave De-calcification of Bone Tissue
Introduction: Histological analysis of bone tissue
granulomatosas dos gânglios mesentéricos de javalis (n=30), pela técnica de imuno-histoquímica.
Resultados: Pela análise imuno-histoquímica ob-servou-se marcação citoplasmática das células lin-focitárias em 11 gânglios mesentéricos (36,6%) para o anticorpo anti-CD79α, e em 15 gânglios mesenté-ricos (50%) para o anticorpo anti-CD3. A quantifica-ção dessas mesmas células permitiu agrupar as lesões consoante a percentagem de células linfocitárias que exibiam.
Conclusão: As lesões em estudo apresentam percen-tagens relativamente semelhantes de linfócitos T e B, sugerindo assim uma resposta celular e humoral com igual participação na resposta imunitária, desencadea-da pelo organismo face à entrada do agente patogénico.
Lymphocyte population in the granuloma-tous lesions of wild-boars (Sus scrofa) sus-pected of tuberculosis.
Introduction: Tuberculosis is an infectious disease that threatens the lives of millions of people both in developing and developed countries and is responsible for important economical losses in farm animals. The pathogenesis of bovine tuberculosis due to Mycobac-terium bovis and human tuberculosis mainly caused by the microorganism of the species Mycobacterium
tuberculosis are more extensively characterized. How-ever, tuberculosis also affects other animal species and these are often responsible for the contamination of cattle and humans. In particular, an overview of the wildlife hosts will provide insight into how these reser-voirs maintain and spread the disease.
Material and methods: This study was conducted to evaluate the chronic inflammatory response in wild animals with a presumptive diagnosis of tuberculosis. In order to better understand the pathogenesis of the disease and further characterize its lesions, it was our aim to investigate the expression of antibodies anti-CD3 and anti-CD79α in the granulomatous lesions of wild boars’ mesenteric lymph nodes (n=30) through the immunohistochemistry technique.
Results: Immunohistochemical analysis allowed us to observe the lymphocyte cells population in 11 me-senteric nodes (36.6%) for the anti-CD79α antibody, and in 15 mesenteric nodes (50%) for the anti-CD3 an-tibody. The quantification of these same cells allowed grouping of lesions depending on the percentage of lymphocyte cells that they exhibit.
Conclusion: The lesions of this study showed rela-tively similar percentages of B and T lymphocytes, thus suggesting a cellular and humoral response and a similar immune response triggered by the organism against the entry of the pathogen.
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Necrópsia em equinos. Descrição de um caso de doença granulomatosa disseminada
Miranda I.*, Tilley P., Pomba C., Pissarra H., Correia J.J., Peleteiro M.C.
Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal, Faculdade de Medicina Veterinária, Univer-sidade Técnica de Lisboa. Alto da Ajuda, 1300-477 Lisboa, Portugal
Introdução: Tendo em conta a importância de ava-liar a prevalência das situações ocorridas e a capacida-de de emissão de diagnósticos definitivos, procedeu-se à identificação das causas de morte dos casos de ne-crópsia de cavalos registados no Laboratório de Anato-mia Patológica da Faculdade de Medicina Veterinária, da Universidade Técnica de Lisboa. De entre os casos identificados foi dado particular relevo a um de doença granulomatosa disseminada (DGD), atendendo à rari-dade do processo, à complexidade da evolução clínica e aos diagnósticos diferenciais envolvidos.
Material e métodos: Foram analisados os registos compreendidos entre Janeiro de 2009 e Janeiro de 2013, num total de 38 necrópsias. No caso da DGD, o diagnóstico baseou-se na análise histopatológica de ór-gãos fixados em formol e submetidos a processamento histológico de rotina. As colorações efetuadas foram H&E e Ziehl Neelsen. Foi ainda realizada análise bac-teriológica.
Resultados: Dos 39 casos de necrópsia analisados, apenas um foi inconclusivo. Os restantes foram divi-didos em seis grupos: Doença Infeciosa Sistémica (5), Doença Cardiorrespiratória (5), Doença Renal (1), Do-ença Gastrointestinal (21), Doença Neurológica (3), Doença Ortopédica/Trauma (3). Os exames comple-mentares realizados foram análise histopatológica (24) e análise bacteriológica (10).
O diagnóstico de doença granulomatosa dissemina-da compatível com sarcoidose equina baseou-se nas le-sões identificadas na necrópsia e na análise histopato-lógica de lesões granulomatosas presentes em diversos órgãos, ricas em células gigantes de Langhans e negati-vas para a presença de bacilos álcool-ácido resistentes.
Conclusão: Como conclusão, pode referir-se que re-alização de necrópsia permite, na grande maioria dos casos, identificar a causa da morte em equinos, pre-ferencialmente com recurso a outros exames comple-mentares de diagnóstico.
Necropsy in horses. A case of disseminated granulomatous disease
Introduction: With the objective of estimating the prevalence of the occurrences and the capability to is-sue definitive diagnosis, an evaluation of the various causes of death in horses was performed based on the necropsy cases registered in the Laboratory of Pathol-ogy, Faculty of Veterinary Medicine, Technical Univer-sity of Lisbon. Among the cases identified, particular emphasis was given to a case of disseminated granu-lomatous disease (DGD), due to the rarity of the pa-thology, complexity of the clinical evolution and the differential diagnosis involved.
Material and methods: The reports from January 2009 to January 2013 were analyzed, and a total of 39 necropsies recovered. In the case of DGD the conclu-sion was based on the histopathology of the organs fixed in 10% formalin and subject to regular histologi-cal processing. H&E and Ziehl Neelsen stains were performed. Bacteriology was also performed.
Results: Out of 39 cases of necropsy analyzed, only one was inconclusive. The remainders were divided into six groups: Systemic Infectious Disease (5), Car-diopulmonary Disease (5), Kidney Disease (1), Gas-trointestinal Disease (21), Neurological Disease (3) and Trauma/Orthopedic Disease (3). Complementary
requires a decalcification process. The most common method consists on sample’s immersion in acidic so-lutions. However, it causes tissue damage and is time consuming, delaying the diagnosis. The use of mi-crowaves accelerates the decalcification process, but shouldn’t compromise the histological image.
The aim of this work was to reduce the decalcification time, maintaining the quality of the histological image.
Material and methods: Goat compact and spongy bone, with dimensions that intended to simulate bi-opsies and surgical or necropsies specimens, were used. Decalcification was performed by conventional method and microwave method with an adaptation on a known protocol, using 5% and 10% nitric acid.
Results: For larger fragments, the protocol was dis-
continued after 4 hours of microwave cycles** with 10% nitric acid, because the decalcification was in-complete, in spite of evident compact bone destruc-tion. In the fragments of spongy bone, there was a reduction of approximately 25 hours, comparing with conventional method. In biopsies, there was a reduc-tion of approximately 10 hours using 5% nitric acid. With 10% nitric acid, there was tissue destruction. The cases with complete decalcification had a poor quality of the histological image.
Conclusion: The use of microwave decalcification with 5% or 10% nitric acid, applying the protocol of this study on goats samples, reduces the process time but compromises the histological image, which is im-practical for diagnosis purpose.
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Processos patológicos prevalentes em carnívoros silváticos mortos em acidentes rodoviários
Matos A.C1., Figueira L1., Martins M.1, Matos M.2, Ál-vares S.1, Mendes A.1, Pires M.A.3, Coelho A.C.3, Pinto M.L.3*
1 Instituto Politécnico de Castelo Branco, Castelo Branco, Portugal
2 Centro de Genética e Biotecnologia, Instituto de Bio-tecnologia e Bioengenharia, Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Vila Real, Portugal
3 CECAV - Centro de Ciência Animal e Veterinária; ECAV- Escola de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Vila Real, Portugal
Introdução: As doenças que afetam os animais selvagens têm sido alvo de um interesse crescente,
uma vez que se demonstrou que, para além das impli-cações relacionadas com a conservação das espécies, podem ter um impacto significativo na saúde animal e humana. Devido ao seu comportamento furtivo, os carnívoros selvagens constituem uma população difícil de monitorizar e a investigação de doença nestas es-pécies resulta geralmente do exame de animais que são encontrados mortos.
Material e métodos: Este estudo foi realizado em carnívoros selvagens vítimas de acidentes de viação, em Portugal, entre 2009 e 2012, e inclui 3 famílias e 6 espécies diferentes (n=72). Os animais foram submeti-dos a exame post-mortem e foram efetuadas colheitas, sendo os tecidos fixados em formol tamponado a 10%, processados para inclusão em parafina e corados com hematoxilina-eosina.
Resultados: As lesões pulmonares foram as mais prevalentes, (15/72; 20,8%), especialmente em ra-posas (Vulpes vulpes, 8/49; 16,3%) e saca-rabos (Herpestes ichneumon, 7/15; 46,6%). As pneumonias parasitárias, sugestivas de infestação por Crenosoma vulpis ou Angiostrongylus vasorum foram observadas
Fibromatosis in Iberian hare Lepus granat-ensis. Preliminary data.
Arnal MC, Martínez-Durán D, Revilla M, Fernández de Luco D *
Departamento de Patología Animal. Facultad de Vet-erinaria. Universidad de Zaragoza. C/ Miguel Servet 177. 50013 Zaragoza. Spain.
Introduction: Hare fibromatosis is a rare and trans-missible viral disease, caused by a Leporipoxvirus, antigenically more related to the Shope fibroma virus than myxoma virus. The disease is characterized by single or multiple skin tumours on ears, head and legs. The affected animals appear in late summer and au-tumn with high morbidity and low mortality. Fibroma-tosis has been described in wild and farmed brown hare Lepus europaeus in Europe (France, Germany, Italy, U.K.). African hare fibromatosis is a very similar disease caused by an unclassified Poxvirus affecting Cape hare Lepus capensis in Kenya. Recently, another
similar disease has been reported in mountain hare Le-pus timidus in Finland, where gross and microscopic lesions resembled to be associated to a Poxvirus infec-tion.
Material and methods: We describe here two natu-ral cases in wild Iberian hares Lepus granatensis in Aragon region (Spain). Both hares were adults female and male hunted in the autumn period in 1998 and 2006, respectively.
Results: Noticeable swelling eyelids were observed in both animals and the male also showed small nodu-lar lesions in nose and lips, swelling prepuce and an irregular swelling of scrotum skin. The dermis histopa-thology of skin gross findings consisted in fibroblast cells proliferation and oedema, whereas the epidermis showed swelling and vacuolated cells with intracyto-plasmic eosinophilic inclusion bodies. Infiltration of plasma cells and lymphocytes were observed in the dermis. Neutrophils were present in the dermis and epidermis, probably by secondary bacterial infections.
Conclusion: The observed lesions could be associat-ed to “hare fibromatosis” in Iberian hare Lepus granat-ensis, in Spain.
exams were histopathological examination (24) and bacteriological analysis (10).
The diagnosis of disseminated granulomatous dis-ease consistent with equine sarcoidosis was based on the gross morphology at necropsy and histopathology of granulomatous lesions with Langhans giant cells
present in different organs that were negative for the presence of acid-fast bacilli.
Conclusion: It can be concluded that, in most cases, necropsy allows for the identification of the cause of death in horses, preferentially using other complemen-tary exams to achieve a correct and complete diagnosis.
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Doença vírica hemorrágica (DVH) – uma nova variante?
Vala H1,2*, Coelho C1,2, Nóbrega C1,2, Mesquita JR1,2, Oliveira J1,2
1 Escola Superior Agrária de Viseu, Instituto Politécni-co de Viseu, Portugal;2 Centro de Estudos em Educação, Tecnologias e Saú-de, Instituto Politécnico de Viseu, Portugal
Introdução: A doença vírica hemorrágica (DVH), causada por um RNA vírus (género Lagovírus, família Caliciviridae), é uma doença fatal que afeta coelhos do-mésticos e selvagens. Estudos anteriores a 1984, demons-traram a existência de anticorpos específicos para DVH em coelhos saudáveis de várias regiões europeias e ainda a possibilidade de estes animais apresentarem alguma re-sistência contra a DVH conferida por uma imunidade cru-zada com calicivírus benignos, fazendo com que a doença exibisse um quadro clínico menos severo. A doença foi controlada em cuniculturas graças à vacinação, mas é ain-da uma ameaça nas populações selvagens não vacinadas.
Uma nova variante desta doença, descrita em 2010 na Península Ibérica, afeta principalmente animais jo-vens, que exibem hemorragias no coração, traqueia, timo, pulmões, fígado, rins, intestino, assim como
CID, icterícia, esplenomegália e enterite catarral.Objetivos: Descrever um surto de elevada morta-
lidade numa cunicultura, principalmente em animais jovens, com lesões típicas de DVH.
Material e métodos: Foram colhidas amostras de co-elhos vacinados e não vacinados, alvo de morte súbita. As amostras foram fixadas em formalina a 10% (48 ho-ras), embebidas em parafina e processadas seguindo os procedimentos de rotina para avaliação histopatológica
Resultados: Principais lesões observadas: opistó-tonus; congestão e edema pulmonar; icterícia severa; esplenomegália; úlceras gástricas punctiformes; con-gestão renal bilateral, petéquias (timo).
Conclusão: Embora esta infeção seja mais comum em animais adultos, as lesões observadas são consis-tentes com DVH. A presença concomitante de lesões associadas à nova variante de DVH (CID, icterícia, esplenomegália, enterite catarral) leva-nos a suspeitar da sua presença em Portugal, ressalvando o facto da necessidade de estudos mais aprofundados.
Agradecimentos: FCT e CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016/2011)
Rabbit haemorrhagic disease (RHD) – a new variant?
Introduction: Rabbit haemorrhagic disease (RHD) is an acute fatal disease of domestic and wild Euro-
em 6 raposas. A adiaspiromicose, provocada por Em-monsia crescens, foi a lesão pulmonar mais comum em saca-rabos (4/15, 26,6%). A nefrite intersticial crónica e a linfadenite macrofágica afetaram, respetivamente, 10/72 (13,8%) e 6/72 (8,3%) animais das famílias Ca-nidae e Mustelidae.
Conclusão: De acordo com este estudo, as pneu-monias parasitárias e micóticas encontram-se entre as lesões mais prevalentes em carnívoros selvagens e podem ter um impacto significativo na saúde destas es-pécies, quer devido à magnitude das lesões observadas, quer devido ao aumento da susceptibilidade a outros agentes infeciosos.
Disease processes identified in road killed wild carnivores
Introduction: Wildlife diseases have been considered increasingly important due to their potential effect upon human health, veterinary medicine, wildlife, and con-servation biology. Since wild carnivores are elusive ani-mals, the occurrence of disease in these species has been typically investigated by identification of pathological processes in carcasses that are found incidentally.
Material and methods: This study was conducted in wild carnivores found death on the roads in Portu-
gal, from 2009 to 2012 (n=72), representing 3 families and 6 different species. Post mortem examination was performed and multiple tissues were fixed in 10% neu-tral buffered formalin, processed for routine paraffin embedding and stained with hematoxylin and eosin for histopathological examination.
Results: Lung lesions were the most prevalent find-ing (15/72, 20.8%), particularly in fox (Vulpes vulpes, 8/49, 16.3%) and Egyptian mongooses (Herpestes ichneumon, 7/15, 46.6%). Six foxes showed lesions of parasitic pneumonia suggestive of Crenosoma vul-pis or Angiostrongylus vasorum infestation. In Egyp-tian mongooses adiaspiromycosis due to Emmonsia crescens were the most common lung lesions (4/15, 26.6%). Chronic interstitial nephritis was registered in 10/72 (13.8%) animals, while in 6/72 (8.3%) macro-phage lymphadenitis was observed, both conditions af-fecting members of the Canidae and Mustelidae.
Conclusion: According to our study, parasitic and mycotic lung pneumonias are amongst the most preva-lent lesions in wild carnivores. Although parasites and fungus may often be regarded as a burden that has little or no impact on the animals, our findings suggest that they can severely affect animal health by the magni-tude of their lesions and by making turning the host more susceptible to other infectious agents.
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Timo de Coelho – um potencial marcador para técnicas de deteção de apoptose
Vala H1,2*, Santos C1,2, Cruz R1,2, Nóbrega C1,2, Ortiz AL3, Mesquita JR1,2, Esteves F1,2, Mega A1,2,
1 Escola Superior Agrária de Viseu, Instituto Politéc-nico de Viseu, Portugal;
2 Centro de Estudos em Educação, Tecnologias e Saúde, Instituto Politécnico de Viseu, Portugal
3 León University, León, Spain
Introdução: As técnicas de determinação de apop-tose têm sido preconizadas para fins de diagnóstico, designadamente para determinação das caraterísticas biológicas das neoplasias e, indiretamente, determi-nação do prognóstico.
A implementação de uma nova técnica num labo-ratório pressupõe o uso de um controlo positivo efi-caz para aferição da mesma. Muitas das publicações da especialidade sobre o tema não indicam, de modo claro, os controlos positivos usados e não divulgam os resultados dos mesmos.
O objetivo deste trabalho consistiu na implemen-tação de três métodos de deteção de apoptose, utilizan-do três amostras de tecidos de cão: neoplasia mamária - carcinoma in situ, timo e plasmocitoma; e uma amos-tra de tecidos de coelho – timo.
Material e métodos: Os métodos de imunohis-toquímica incluíram a deteção de proteínas pro- e anti-apoptóticas, respetivamente, Bax e Bcl-2 (1:100; Santa Cruz, Biotechnology) e o método de TUNEL, com o kit de deteção de apoptose in situ (1:2,5; Roche).
Resultados: O plasmacitoma revelou reação posi-tiva moderada com todos os métodos testados. O car-
cinoma in situ revelou reação positiva moderada com os anticorpos pro-apoptóticos e mais intensa com o anticorpo anti-apoptótico. O timo de cão revelou reação positiva moderada nos timócitos do córtex com os anticorpos pró-apoptóticos e débil nos da medular. Com o anticorpo anti-apoptótico revelou reação débil na medular e negativa no córtex. Idênticos resultados foram obtidos no timo de coelho, tendo sido, contudo, mais forte a intensidade das respetivas reações.
Conclusão: O timo de coelho revelou a reação mais específica dos tecidos estudados, sendo assim reco-mendado como um bom controlo positivo para estudos de apoptose.
Agradecimentos: FCT e CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016/2011)
Rabbit thymic tissue – a potential marker for apoptosis techniques
Introduction: Apoptosis methods have been pro-posed for diagnostic purposes, in particular for deter-mining the biological characteristics of tumours and, indirectly, their prognosis.
Implementation of a new technique requires the use of an effective positive for correct assessment.
Most specialty publications on the subject, do not indicate the positive controls used and do not disclose the obtained results therein.
Objective: The aim of this work was to implement three different methods for the detection of apoptosis, using three canine tissue samples, consisting of breast cancer - carcinoma in situ, thymus and plasmacytoma; and a sample of rabbit tissues - thymus.
Material and methods: Immunohistochemistry was performed, using pro- and antiapoptotic proteins, respectively, Bax and Bcl2 (1: 100; Santa Cruz, Bio-
pean rabbits caused by a RNA virus (genus Lagovirus, family Caliciviridae). Prior to 1984, healthy rabbits in European regions had RHDV-specific antibodies and their infection with benign rabbit caliciviruses con-ferred them a low degree of cross-protective immunity against RHD, determining less severe clinical courses. Vaccination allowed to control the disease in the rab-bit industry, but RHD still threatens non-vaccinated wild populations. A new variant of this disease is be-ing described since 2010 in Iberian Peninsula. It af-fects mainly young rabbits that exhibit haemorrhages in heart, trachea, thymus, lungs, liver, kidneys and gut, as well as DIC, jaundice, splenomegaly and catarrhal enteritis.
Objectives: To describe a case of high mortality rate on a rabbitry, mostly in young rabbits, with typical le-sions of RHD.
Material and methods: Samples from domestic
vaccinated and non vaccinated rabbits which died sud-denly were taken and fixed in 10% neutral-buffered formalin for 48 hours and embedded in paraffin. 3µm sections were stained for routine histopathological di-agnosis (H&E) and examined by light microscopy.
Results: Main macroscopic lesions observed: opisthotonos, oedema and pulmonary congestion, se-vere jaundice, splenomegaly, gastric punctiform ul-cers, bilateral renal congestion and thymic petechiae,
Conclusion: Macroscopic lesions in infected young’s, consistent with RHD infection usually ob-served only in adult rabbits, and the presence of le-sions mostly associated to the new variant of RHD (DIC, jaundice, splenomegaly, catarrhal enteritis), led us to consider the presence of the new variant of RHD in Portugal, although further studies are needed.
Acknowledgments: FCT and CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016/2011)
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Um caso de hemangiosarcoma cardíaco em cão
Pires M.A.1,2*, Pinheiro D. 1, Silva N.3, Montenegro L.3
1 CECAV, University of Trás-os-Montes and Alto Dou-ro, P.O. Box 1013, 5001-801 Vila Real, Portugal.
2 ECAV, University of Trás-os-Montes and Alto Douro, P.O. Box 1013, 5001-801 Vila Real, Portugal.
3 Veterinary Montenegro Hospital (HVM), 4200 - 447 Porto, Portugal.
Introdução: Segundo a literatura, o hemangiossar-coma cardíaco é uma situação comum nos cães Pastor Alemão, comumente associado a lesão esplénica.
Os autores descrevem um caso de hemangiossarco-ma cardíaco sem envolvimento esplénico, com parâ-metros clínicos e imagens macroscópicas, associado a metástases pulmonares.
Material e métodos: Foram remetidos ao Laborató-rio de Histologia e Anatomia Patológica da UTAD, o coração e pulmão de um Pastor Alemão, macho, de 11 anos de idade. Os órgãos fixados em formol tampona-do a 10%, foram processados por rotina e corados com hematoxilina e eosina.
Resultados: O historial do animal indicava ausência de vacinação e desparasitação, fraqueza extrema, disp-neia e choque. Ao RX a silhueta cardíaca apresentava-se arredondada e com imagens de efusão torácica e pericárdica, confirmada por ecografia.
Foi solicitada a eutanásia, tendo a necrópsia revelado hemotórax e hemopericárdio, lesão papilar exofitica na aurícula direita, vilosa, de 3 cm de diâmetro que inva-dia o miocárdio, até ao pericárdio com 6x3x4,5cm. O pulmão apresentava múltiplas pequenas lesões redondas e negras, a maior com 0,9 cm de diâmetro. Não se ob-servaram outras lesões macroscópicas dignas de registo.
O coração apresentava proliferação de células fuso-celulares, com elevado pleomorfismo e células atípicas, com 4 a 5 mitoses/40x, com disposição estoriforme e fendas com eritrócitos. O pulmão apresentava múlti-plas metástases com células e disposição semelhantes ao observado no coração, algumas intimamente ade-
rentes aos vasos sanguíneos. Todo o tecido adiposo ad-jacente ao coração apresentava proliferação de células neoplásicas.
Conclusão: O diagnóstico foi de hamangiossarcoma da aurícula direita com metástases pulmonares, sem envolvimento esplénico.
A case of heart hemangiosarcoma in a dog
Introduction: The consulted literature, referred that hear hemangiosarcoma, a common condition in Ger-man Shepherd dog, generally associated with spleen hemangiosarcoma.
The authors report a case of heart hemangiosarcoma without spleen implication, with clinical parameters and macroscopic images, associated with lung metastasis.
Material and methods: an heart and lung from an eleven years old male German Shepherd dog was to the Laboratory of Histology and Anatomical Pathology, at UTAD. The organs were fixed in 10% buffered formalin, and processed and stained with haematoxylin and eosin.
Results: The clinical history indicated absence of vaccination or dewormed medication, generalized weakness, dyspnoea and shock. At x-ray the cardiac silhouette is rounded with pleural and pericardial effu-sion confirmed by ultrasonography.
Euthanasia was requested and at necropsy an abun-dant hemothorax, and hemopericardium was recorded. The right auricle presents a papillary villous exofitic proliferation with 3cm of diameter, that invaded the myocardium until the pericardial wall with overall dimensions 6x3x4.5cm. The lung presented multiple black round nodules, the larger with 0.9 cm diameter. There were no other gross lesions noteworthy.
The histology of the heart lesion revealed fusocel-lular proliferation with high pleomorphic and atipic cells, with 4-5 mitosis for HPF. The neoplasia had a storiform pattern with clefts with erythrocytes. The lung had multiple metastases with similar cells, some of them within vascular structures. All adipose tissue around the heart had neoplasic cells.
Conclusion: The final diagnosis was hemangiosar-coma of the right auricle with lung metastasis, without spleen implication.
technology) and the TUNEL technique (1: 2,5; Roche), using the in situ cell death detection kit.
Results: Canine plasmacytoma revealed moderate positive reaction with all methods. Canine carcinoma in situ showed moderate positive reaction with pro-ap-optotic antibodies and more intense with anti-apoptotic antibody. Dog’s thymus showed moderate positive re-action in cortical thymocytes with pro-apoptotic anti-bodies and weak in the medullary thymocytes. With the anti-apoptotic antibody, medullary thymocytes
showed weak reaction and negativity in the cortex. Identical results were obtained in rabbit’s thymus, but with stronger intensity.
Conclusion: The rabbit thymus showed the most specific reaction of the tissues studied, by which the authors recommended it as a viable positive control for apoptosis studies.
Acknowledgments: FCT and CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016)
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Hérnia de Bexiga associada a Angioleio-miossarcoma Cutâneo em Coelho
Santos S.1*, Patrício. R.1,2
1 CICV - FMV- ULHT, Lisboa, Portugal2 AlcabidecheVet – Clínica Veterinária, Cascais, Por-tugal
Introdução: Em Agosto de 2012 um coelho de es-timação com 6 anos de idade, macho esterilizado foi submetido a cirurgia para extirpação de uma massa subcutânea ulcerada, localizada na região inguinal e associada a uma hérnia de bexiga.
Material e métodos: Após a cirurgia a massa foi enviada para análise histopatológica, fixando-se o te-cido em formol tamponado a 10% para coloração com hematoxilina & eosina (H&E). Realizou-se imunohis-toquímica com α-actina (clone, 1A4 DAKO; 1\180)
e desmina (clone DE-R-11, DAKO; 1\50) utilizando intestino e estômago de cão como controlo positivo.
Resultados: A H&E revelou uma neoplasia subcutâ-nea, não capsulada e infiltrativa constituída por células fusiformes anaplásicas organizadas em feixes compac-tos e ninhos. As células neoplásicas apresentavam-se intimamente relacionadas com as estruturas vasculares parcendo proliferar da camada média dos vasos san-guíneos dérmicos os quais apresentavam a camada mé-dia esclorosada. Foi observado pleomorfismo intenso, índice mitótico elevado (0-4 mitoses por campo 40x) e focos de necrose.
Os anticorpos foram fortemente positivos em aproxi-madamente 90% das células neoplásicas.
Discussão: Trata-se de uma neoplasia maligna, rara em coelhos, sobre a qual existe pouca informação re-ferente aos estudos imunohistoquímicos e comporta-mento biológico esperado. Enfatiza-se a eficácia dos anticorpos utilizados e a não reincidência.
Conclusão: Angioleiomiossarcoma cutâneo.
Prolapso da cloaca associado a um adeno-carcinoma intestinal em cobra-falsa-coral (Lampropeltis triangulum)
Martinho F.1, Faísca P.1, Santos S.1, Carvalho I.2, Aná-gua M.1
1 CICV- Faculdade de Medicina Veterinária - ULHT, Lisboa, Portugal7
2 DNATech
Caso clínico: Uma cobra-falsa-coral fêmea, com 4 anos de idade, apresentou-se com anorexia e prolapso da cloaca recorrente. Com ecografia celómica visuali-zou-se massa na parede do terço final do cólon, à qual se seguiu uma enterectomia da zona afetada.
Macroscopia: Parede intestinal com 2 x 1 x 1 cm, que apresenta nódulo ulcerado, branco homogéneo, com limites bem definidos.
Microscopia: Histologicamente, corresponde a um fragmento de intestino grosso, ulcerado que apresenta uma proliferação celular não capsulada com origem na mucosa e que invade as restantes camadas intestinais até à serosa. As células são colunares altas intercala-das por células caliciformes dispostas em quistos, áci-nos e lóbulos num estroma desmoplásico. As células apresentam citoplasma acidófilo e um núcleo no polo basal redondo com a cromatina finamente ponteada e um nucléolo evidente. No lúmen das estruturas epite-liais e no estroma envolvente observa-se a deposição de mucinas. O índice mitótico é baixo.
As células epiteliais apresentaram imunomarcação positiva para CK AE1/AE3 (Dako M3515).
Conclusão: Com base nos achados histológicos, o
diagnóstico é de um adenocarcinoma intestinal muci-noso. Os autores consideram que se deveria incluir nas etiologias de prolapsos da cloaca em cobras, os adeno-carcinomas intestinais.
Cloacal prolapse associated with an intestinal adenocarcinoma in a milk snake (Lampro-peltis triangulum)
Clinical case: A 4 years old, female, milk snake, was presented with anorexia and recurrent rectal prolapse. By ultrasound, an intestinal mass in the final third of the colon was identified, and an enterectomy was per-formed.
Macroscopically: Intestinal wall with 2 x 1 x 1 cm, presenting an ulcerated, well demarcated, white, ho-mogenous nodule.
Microscopically: A section of colon, focally ulcerat-ed, presented epithelial cell proliferation originating in the mucosa and invading the adjacent intestinal layers. The neoplastic cells were tall, columnar, interspersed with goblet cells, and were disposed in cysts, acini and lobules in a desmoplastic stroma. The cells presented acidophilic cytoplasm, and a round, basally located, nuclei with stippled chromatin and distinct nucleoli. The lumen of the epithelial structures was filled with mucin. Mitotic index was low.
Epithelial cells presented positive immunostaining for CK AE1/AE3 (Dako M3515).
Conclusion: In the basis of the histological findings, the diagnosis is mucinous adenocarcinoma of the co-lon. In the author’s opinion, colon adenocarcinomas should be included in the differential diagnosis of cloa-cal prolapses in snakes.
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Bladder Hernia associated to a Cutaneous Angioleiomyosarcoma in a Rabbit
Introduction: A 6 year-old neutered male pet rabbit presented on August 2012 with a bladder hernia asso-ciated to an ulcerated subcutaneous neoplasm in the inguinal area.
Material and methods: After the surgery the mass was submitted for histopathology. Tissue samples were fixed in 10% neutral buffered formalin and stained with hematoxylin and eosin (H&E). We used antibod-ies against α-smooth-muscle actin (clone, 1A4 DAKO; 1\180) and desmin (clone DE-R-11, DAKO; 1\50) for immunohistochemical studies. Dog´s intestine and stomach samples were used as a positive control.
Results: The H&E revealed an unencapsulated and infiltrative neoplasm in the subcutaneous tissue, com-
posed of anaplastic spindle cells arranged in compact bundles and whorls. The neoplasm cells were closely connected with vascular structures and seemed to proliferate from the tunica media of the subcutane-ous blood vessels which presented sclerosis of tunica adventitia. It was observed an intense pleomorphism, higher mitotic index (0-4 mitotic figures by fields at 40x) and foci of necrosis.
Around 90% of the neoplastic cells were strongly positive for antibodies.
Discussion: This case presents a rare malignant neo-plasm in rabbits and there is little information about immunohistochemical studies and neoplastic behav-iour. It is important to share the effectiveness of the used antibodies and the not recurrence of this neo-plasm.
Conclusion: Cutaneous angioleiomyosarcoma.
Caracterização do índice apoptótico em mastocitomas caninos
Paiva D1*, Cruz R1,2, Mega A1,2, Vala H1,2
1 Escola Superior Agrária de Viseu, Instituto Politéc-nico de Viseu, Portugal;2 Centro de Estudos em Educação, Tecnologias e Saú-de, Instituto Politécnico de Viseu, Portugal
Introdução: Encontram-se descritos estudos de apoptose em várias neoplasias. A apoptose é um pro-cesso biológico de morte celular programada que, de-vido ao seu importante papel na oncogénese, poderá elucidar alguns aspetos.
Objetivo: Deteção da apoptose em mastocitoma canino, procurando determinar a sua relação com a classificação histológica, índice apoptótico, e prog-nóstico.
Material e métodos: 12 casos de mastocitoma ca-nino, do ficheiro de análises do Laboratório de Ana-tomia Patológica da ESAV. Os métodos de imunohis-toquímica foram implementados, utilizando proteínas pro- e anti-apoptóticas Bax e Bcl (Santa Cruz, Biote-chnology).
Resultados: Todos os mastocitomas incluídos no estudo revelaram reação positiva aos anticorpos tes-tados, verificando-se uma reação mais intensa com o anticorpo pró-apoptótico Bax em relação ao anticor-po anti-apoptótico Bcl-2. Enquanto a expressão de Bax foi mais intensa nos mastocitomas de grau I, o Bcl-2 evidenciou maior expressão nos mastocitomas de grau III, apresentando ambos uma reação mais fra-ca no grau II.
Conclusão: A diminuição de Bax e aumento de Bcl-2, segundo o grau histológico, sugere um prolon-
gamento da vida e do número das células tumorais e, consequentemente, progressão tumoral.
Os mastocitomas caninos revelam sensibilidade com os marcadores Bax e Bcl-2, podendo estes ser aplicáveis em estudos de apoptose nestas neoplasias de modo a consolidar o prognóstico em relação à sua graduação histológica.
Agradecimentos: FCT e CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016/2011)
Characterization of the apoptotic index in canine mastocytomas
Introdution: Studies on apoptosis have been de-scribed in several neoplasias. Apoptosis is a biologi-cal process of programmed cell death that, due to its important role in oncogenesis, may elucidate some aspects.
Objective: Detection of apoptosis in canine masto-cytoma to determine its relationship with histologic grading, apoptotic index and prognosis.
Material and methods: 12 cases of canine masto-cytoma, from the analytic files of the Laboratory of Anatomical Pathology of ESAV. Immunohistochemi-cal methods were implemented, targeting pro- and anti-apoptotic proteins, Bax and Bcl (Santa Cruz, Bio-technology).
Results: All mastocytomas included in this study revealed a positive reaction to the tested antibodies, a more intense reaction was found to pro-apoptotic an-tibody Bax in comparison to the anti-apoptotic anti-body Bcl-2. While Bax expression was more intense in grade I mastocytomas, Bcl-2 had a higher expression in grade III mastocytomas, and both, had a weaker ex-pression in grade II.
Conclusion: The decrease of Bax and increase of Bcl-2 expression in accordance with increasing histo-
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Fibrosarcoma Cutâneo em Robalo, Dicen-trarchus labrax de Tanque de Terra
Ramos, P.1*, Grade, A.1, Branco, S.2
1Laboratório de Patologia dos Animais Aquáticos. Ins-tituto Português do Mar e da Atmosfera, IPMA, I.P. Avenida de Brasília, 1449-006 Lisboa, Portugal2Instituto de Ciências Agrárias e Ambientais Mediter-rânicas, Universidade de Évora. Apartado 94, 7002-554 Évora, Portugal
Introdução: Os tumores espontâneos em peixes são morfologicamente semelhantes e em muitos casos, idênticos aos que ocorrem em várias espécies animais, incluindo o homem. Assim, o seu estudo é importante não só do ponto de vista da patologia comparada mas também pela escassez de registos.
Material e métodos: Num robalo proveniente de um tanque de terra foi observada a presença de duas for-mações nodulares localizadas na face lateral esquerda.
Amostras do nódulo maior foram fixadas em formol salgado a 10%. Obtiveram-se cortes com 3µ que foram corados com hematoxilina & eosina e Van Gieson.
Resultados: O nódulo maior encontrava-se na face lateral esquerda, próximo da base da barbatana dorsal e tinha aproximadamente 2,7 cm de diâmetro. Este nó-dulo, de cor amarela, apresentava superfície ulcerada e ligeira congestão. Ao corte, tinha consistência branda. O segundo nódulo com cerca de 1 cm de diâmetro foi observado abaixo da linha média. A imagem histológi-ca do nódulo permitiu observar a presença de células com morfologia fibroblástica, fusiformes, com disposi-ção em feixes, num estroma bem vascularizado e rico em colagénio, entrecruzando-se com feixes de células com núcleo redondo em áreas com aspecto mixoma-toso. A neoplasia invadia o tecido muscular adjacente. Na derme, observou-se reacção inflamatória com infil-tração de macrófagos e formação de granulomas. Fo-ram identificados melanócitos ao longo da membrana basal, dispersos na derme ou em centros melanoma-crofágicos. O estroma abundante em colagénio corou positivamente com o Van Gieson.
Conclusão: Com base nas imagens histológicas e na
reacção positiva ao Van Gieson, diagnosticou-se um fibrosarcoma.
Cutaneous Fibrosarcoma in Earth Pond Reared European Seabass, Dicentrarchus labrax
Introduction: The spontaneous neoplasms in fishes are morphologically similar and, in many cases identi-cal, to those found in several animal species, includ-ing man. Thus their study is valuable not only from the standpoint of comparative pathology but also by the scarcity of the records.
Material and methods: A european bass in a earth pond culture was discarded because of the presence of two nodules on the left side of the body surface. Por-tion of the largest tumour was collected, fixed in 10% neutral buffered formalin and sections 3µ thick were stained with both haematoxilyn & eosin and Van Gie-son.
Results: The largest nodule was located on the left flank, near the dorsal fin and measures approximately 2,7 cm in diameter. In appearance, its surface was yel-lowish, with superficial congested ulcerations and soft consistency. The second one was a little round nodule with 1,2 cm diameter, ventral and bellow the medial line. The histological appearance of the tumour was a well vascularized, no encapsulate dermal mass of spindle-shaped cells, forming dense whorls in a col-lagen rich stroma. Adjacent less cellular areas contain-ing stellate cells with criss-crossed fibrils and loosely organized, suggested a myxomatous area. These spin-dle-shaped cells were seen infiltrating the subcutane-ous tissue and invading the adjacent muscle tissue. In-filtration of inflammatory cells and granulomas could be observed within the dermis. Melanophores were scattered along the basement membrane and dermis or forming melanomacrophage centres. The histochemi-cal reactions of the stroma were positive with the spe-cific coloration of Van Gieson.
Conclusion: The diagnosis of fibrosarcoma was based on the examination of elongated fibroblasts and dense collagenous fibres that stains positively with Van Gieson.
logic grade, suggests an extension in the life of tumor cells, an increase their number and, consequently, tu-moral progression.
Canine mastocytomas revealed sensitivity with Bax and Bcl-2 markers and may be applied to apoptotic
studies in such tumors to consolidate prognosis in rela-tionship to histologic grading.
Acknowledgments: FCT and CI&DETS (PEst-OE/CED/UI4016/2011)
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Imortalização de linhas celulares caninas primárias de tumores mamários: optimi-zação de protocolo
Luís R Raposo1,2, Susana Santos1,2,3,4, Joaquim Henri-ques5, Pedro Faisca5, Margarida Alves5, André Besel-ga6, Jorge Correia6, Alexandra R Fernandes1,2, 4*
1 Centro de Química Estrutural, Complexo I, Instituto Superior Técnico, Universidade Técnica de Lisboa, Lisbon, Portugal,
2 Escola de Engenharia, Universidade Lusófona de Hu-manidades e Tecnologias, Lisbon, Portugal,
3 Department of Biochemistry and Human Biology, Faculty of Pharmacy, University of Lisbon, Lisbon, Portugal,
4 Departamento de Ciências da Vida, Faculdade de Ci-ências e Tecnologias, Universidade Nova de Lisboa, Caparica, Portugal,
5 Centro de Investigação em Ciências Veterinárias, Fa-culdade de Medicina Veterinária - Faculdade de Me-dicina Veterinária- Universidade Lusófona de Huma-nidades e Tecnologias, Lisbon, Portugal,
6 Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Lisbon, Portugal * [email protected]
Introdução: Os tumores mamários caninos (CMTs) são o tipo de tumor mais frequente nas cadelas, corres-pondendo a 52% de todas as suas neoplasias. Para as va-riantes malignas de CMT, a cirurgia é a única opção de sucesso, uma vez que a quimioterapia, não aumenta sig-nificativamente o tempo de sobrevivência. Por esta ra-zão, é crucial desenvolver modelos celulares por forma a testar novos compostos com actividade anti-tumoral para os CMTs. As linhas celulares imortalizadas deriva-das de CMTs poderão, ainda, constituir uma ferramenta importante na investigação dos mecanismos celulares e moleculares subjacentes à tumorigénese dos CMTs.
Material e métodos: Para a imortalização das linhas celulares derivadas de CMT, as amostras das biópsias são lavadas, maceradas e incubadas com tripsina durante uma hora a 37ºC em vez da incubação em gelo descrita na bi-bliografia. As células individuais são recolhidas e semea-das em meio DMEM suplementado. As células crescem até atingir uma monocamada confluente sendo, de segui-da, tripsinizadas e colocadas em frascos maiores (5x105 células são colocadas a crescer em frascos de 75cm2).
Resultados: A nossa metodologia permitiu-nos obter monocamadas de células confluentes para todas as amos-tras das biópsias. Microscopicamente, a morfologia das células é compatível com uma origem epitelial. Actual-mente, temos três linhas celulares que foram tratadas com tripsina 10 vezes, sugerindo uma possível capacidade para originarem linhas derivadas de CMT imortalizadas. Uma das linhas celulares é derivada de um carcinoma ma-mário simples (tipo mucinoso) de grau II e as restantes de carcinomas mamários complexos de grau II.
Conclusão: O presente trabalho descreve um proto-colo optimizado para a imortalização de linhas celula-res desenvolvido pela nossa equipa. Foi possível obter consistentemente monocamadas confluentes de células para todas as amostras processadas até à data. Estas monocamadas de células são compostas por células com morfologias diferentes (algumas mais fusiformes, outras mais cuboidais) e tamanhos diferentes indepen-dentemente do grau de malignidade e do tipo de tumor que lhe deu origem. Com as tripsinizações, as células tendem a tornar-se mais homogéneas, com uma forma mais cuboidal e mais pequenas.
Immortalization of primary canine cell lines from mammary tumors: a protocol optimization
Introduction: Canine mammary tumors (CMTs) are the most common tumor type in female dogs, compris-ing 52% of all neoplasms. For malignant CMT vari-ants, surgery is the only successful treatment option since chemotherapy has not radically increased overall survival time. In this regard it is a key issue to develop cellular models to validate new therapeutic compounds for CMT treatment. Immortalized CMT cell lines may also be a valuable tool that will allow achieving a better knowledge on the cellular and molecular mechanisms underlying CMT tumorigenesis.
Material and methods: For CMT cell line immor-talization, intra operative tumour samples were ob-tained, washed, minced and incubated with trypsin for one hour at 37ºC instead of cooling as described in the bibliography. Individual cells were then collected and seeded in supplemented DMEM medium. The cells are allowed to grow until a confluent primary cell monol-ayer is formed followed by trypsinization and seeded in larger flasks (5x105 cells are grown in 75cm2 flasks) than in the previous protocol.
Results: Our changes in the original methodology allowed us to growth primary cell monolayers from all biopsy samples. Microscopically, the cell morphology is compatible with their epithelial origin. Currently we achieved three CMT cell lines that have been trypsinised for 10 times, suggesting a potential capacity to originate immortalized primary CMT cell lines. One of the cells lines was established from a grade II mammary simple carcinoma (mucinous type) and the remaining from grade II mammary complex carcinomas.
Conclusion: An optimized protocol for cell lines immortalization was developed by our team. Until now, we were able to establish a primary cell monolay-er for all processed samples. These cell monolayers are composed of cells with different morphologies (some more fusiform other more cuboidal) and different sizes regardless the tumour type or grade that originated the monolayer. With trypsinizations the cell populations tend to become more homogenous, with a more cuboi-dal shape and smaller size.
