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Exotic and Emerging Avian Viral Diseases Research Unit
Southeast Poultry Research Lab
USDA-ARS Athens, GA
El efecto de la diversidad genética del
virus de la enfermedad de Newcastle en
las medidas de control
Cepa Perú,
4dpi conjuntivitis
Cepa Long Bien, bazo con multiples focos de
necrosis
Cepa Long Bien, necrosis y hemorragias in the
intestino
Parálisis
Tortícolis
Incapacidad para levantarse
Infeccion de otras especies
La Situación Mundial
El Problema de ENC
Severo (Sub Sahara)
Serio (Pakistan-Mexico-Israel)
Menor (Estados Unidos)
El Virus y las Bases de su Virulencia
Sitio de
Ruptura Patotipo
NDV
ICPI
Aminoácidos Ruptura de la Proteína de Fusión
113 117 Definición
OIE
Lentógeno <0.7 R Q G R L
Mesógeno 1.2 R Q K R F
vv NDV 1.8 R Q K R F
nv NDV 1.7 R Q K R F
114 115 116
Virulento
Virulento
Virulento
No virulento
1974
“It is evident that the practice of vaccination which
keeps the poultryman in business
does not necessarily put the virus out of business”
“Es evidente que la practica de vacunación que
permite que el productor mantenga su negocio, no
necesariamente hace que el virus pierda su
negocio”
Robert P Hanson
in Advances of Veterinary Science
33286089
4135072841350706
41350710
41350732
41350698
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49473636
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4947
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4135
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1804
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1416
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1870
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1870
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21539366
21539378
21539360
21539384
21539382
21539410
2153939621539394
21539388
21539390
21539404
2822205
21539416
32365432
13877322
32365418
21539356
32365414
32365412
21539414
32365402
32365416
34391726
12246927
21539324
1224692512246943
21539408
32365422
21539334
12246937
21539336
34391728
12246935
12246933
32395014
32365404
32395060
282220332365406
37574568
32365408
282220121539344
2203718622037192215393482153932021539326215393402153933034391724
653966012246929
37574562
38326810
2911505
6539684
14161651
14161655
14161653
6539661
18700384
18700386
52426572
653967128192785
28192787
2819278322653346
6539662
22653348
653966322653342
22758946
6539664
22037178
22037196
22037184
5305095
5531309
9798986
12246923
32365420
12246931
12246947
12246949
12246939
13877316
13877320
12246945
332369
22037214
33384238
53636432293937
32344831
60656
32365398
32365430
13877318
19848935
332320
437886
32365426
12958145
32365396
32365400
32365424
4220561
5305089
553130522037164
2203719853050915531303
37574580
22037172
22037176220371623239505022037168323950562203717422037220
32344825
186990303772764232395064375745643239526218699028
186990263234482732344829
293935332318
187003203687892
41350726201529662015296818042240333488515360199413520242
01
52
94
115282079
3378191
293933332322
377276483
77
27
64
637727650
323448335
05
11
82
7349328634
93
30
8
22758926
22858906
22758924323951662275892822653356
2939217229463
32
39
51
52
323951623
23
95
02
6
60
65
8
32
39
50
00
32395002
293919
379936003239520032395202
32395186
3239514818700326
41350740
32395198
323950043239515032394998
32395170
37574574
31415376
32395196
5214538152145383
32394996
3239515832395156
32395212
32395266
45511246
222174293923
32395260
3239502832395030
32395032
32395164
3239517237574590
323951803239517632395178
37574588
37574592
2203716622037194
2203717022037180220371601356962132395084
1870032222037158
3239515432395160323950963239509437727644
293931
323950883377247737574584
18700324
29393929392960933
293925293927 4730994
32395102226533601532053532395138
28192777
2882486541350738
22758938
3239512822536151323951223687896323950983239505428192773323951143239513022758934925586622758936323950903687894
32395124323952363239510832395120
32395034
32395142
32395126
5578883
28192769
52145385
32395174
57282824
32395182
37574554
32395136
18700392
56799463
32395106
32395110
32395140
22653352
32395146
32395112
28569639
32395118
15150313
33865043239510432395144141900623239511633772483
57282826 57282830 572828285728283222758930 281927752265336628192771
32395132
3430458511527326
11545722
Análisis de secuencias de VENC virulento
Disponibles en Genbank.
Diversidad Genética : 50 años de vacunación
Cuan distintos son los genotipos de VENC?
Ejemplo: Genotipos XI, XII, XIV difieren en un 22% respecto de las
cepas vacunales a nivel del gen de fusión. Nigeria/06 (genotipo XVII)
difiere en un 23%.
I II IX V VI VII VIII X XI XII XIII XIV XV
I
II 0.13
IX 0.11 0.13
V 0.19 0.21 0.18
VI 0.18 0.20 0.17 0.16
VII 0.18 0.21 0.17 0.16 0.13
VIII 0.15 0.17 0.13 0.14 0.12 0.13
X 0.11 0.12 0.13 0.21 0.20 0.20 0.17
XI 0.20 0.23 0.18 0.23 0.23 0.24 0.20 0.22
XII 0.19 0.22 0.18 0.17 0.13 0.12 0.13 0.20 0.25
XIII 0.18 0.22 0.17 0.17 0.13 0.11 0.13 0.20 0.23 0.11
XIV 0.19 0.23 0.18 0.17 0.14 0.13 0.14 0.21 0.24 0.12 0.12
XV 0.15 0.14 0.11 0.17 0.14 0.10 0.13 0.16 0.22 0.15 0.14 0.15
Problemas : Se Desconoce la Diversidad Genética
y Se Desconocen los Reservorios:
Caso: Genotipo XIV Republica Dominicana
Dominican Republic
Problemas:
Como se mantienen los viruses?
Hay intercambio de viruses entre animales de
producción y aves silvestres?
Amazona auropalliata
(Loro de nuca amarilla)
Turdus grayi
(Cenzontle de agua, Mirlo)
Buteo brachyurus (Gavilán
rabicorto o busardo de cola corta)
Melanerpes sp.
(Pájaro carpintero) Zacua sp. (Zacua mayor,
oropéndola mayor)
Ardea alba
(Garza blanca o garceta grande)
Especies de Aves No Vacunadas que
Estaban Infectadas con Vacunas del tipo B1-LaSota
Especies de Aves No Vacunadas que
Estaban Infectadas con Vacunas del tipo
CEVA Vitapest L (PHY-LMV42)
Ara macao (Guacamaya
roja o lapa roja) Amazona autumnalis
(Loro mejilla amarilla,
frente roja o chojín)
Ortalis vetula (Chachalaca
del golfo o chachalaca de
vientre blanco)
Ara macao
(Guacamaya roja o lapa roja)
Dendrocygna autumnalis
( Pato pijiji)
Especies de Aves No Vacunadas que
Estaban Infectadas con virus virulentos Gen.V Tuxtla-Gutiérrez, Chiapas (Dr. Roberto Navarro López)
Esos estudios sugieren que en Mexico hay
Desborde de virus entre aves silvestres y
domesticas
Problema:
Deriva genética y
Evolución Separada
Caso Genotipo V
en México y América Central
Arbol filogenético del gen de fusión, México genotipo 5,
sequencia de nucleótidos.
2004-2010
Aislamientos mexicanos
1988-2000
Aislamientos
mexicanos
Alrededor del 2002
México inició
campañas masivas de
vacunación
Avian Disease. 2008
Sep;52(3):472-479.
93US09ANH
2008-P.TY.Belize.4338-4.607
P/CK/Belize/4224-3/08
P/CK/Belize/4224-12/08
gamefowl/US(CA)/212676/2002
2002-U.S.(CA).211472.02.Game
00MX23CKN
2000-Mexico.Torreon.chicken.453
00MX24UNK
Mexico(Mexico)/459/2000
88MX05CKN
1988-Mexico.Moreloschicken.458
CK/Mex/37281-550-1-545
96MX053CKN
chicken/Mexico/37821/96
04MX36DVE
2004-Mexico.DF.Dove.462
06MX50CKN
2006.Mexico.Estado.Chicken.466
2005-Mexico.Puebla.P05
2005-chicken.Mexico.Estado.465
05MX42CKN
2006-Mexico.Estado.Game.617
2008-Mexico.Estado.Quail.616
Mex-2006-618
2008-Mexico-DF.Game.619
2009-Mex-2009.612
2010-Mexico.Puebla.634
2010-Mexico.Aguascalientes.635
100
99
91
92
100
48
47
72
99
96
82
100
100
98
80
19
90
65
100
47
90
36
94
48
90
85
0.01
Pero el primer
grupo no
ha desaparecido
Problema : Gran Mobilidad
Caso Genotipo VII
China, Venezuela, Italia, Bélgica, Serbia, Paquistan, India,
Mozambique, Indonesia, Turquía, Bulgaria, Togo
VII b VII d
VII d VII d
VII d VII d
VII d VII d
VII d VII d
VII d VII d
VII d VII d/1087/sc03/chicken/2006/China VII d/1088/sc03/fowl/2006/China VII d/1086/sc05/chicken/2006/China VII d/1181/Chicken/China/Tianjin/01/2007/chicken/2007/China
VII d/1097/NDV04011/chicken/2004/China VII d/1120/chicken/Guangxi13/2004/chicken/2004/China
VII d/1065/HN-6-07-Ch/chicken/2007/China VII d/1112/JS/1/05/Go/goose/2005/China VII d/1115/JS-1/06/wd/wild duck/2006/China VII d/1114/JS-2/06/wd/wild duck/2006/China VII d/1116/JS-3/06/wd/wild duck/2006/China
VII d/1073/WN/Tianin/03/chicken/2003/China VII d/1208/chicken/Colombia/5728-17/2009/chicken/2009/Colombia
VII d/1174/Ven-611/chicken/2008/Venezuela VII d/1207/chicken/Colombia/2420-06/2010/chicken/2010/Colombia
VII d/1048/Layer/Tianjin/TJ05/05/chicken/2005/China VII d/1049/Layer/Shandong/SF/02/chicken/2002/China VII d/1050/Goose/Jiangsu/JS06/03/goose/2006/China
VII d/1209/chicken/Colombia/14402-17/2008/chicken/2008/Colombia VII d/1170/Chicken/Colombia/440620/06 /chicken/2006/Colombia
VII d/1201/chicken/Colombia/1326-13207/2009/chicken/2009/Colombia VII d/1206/fighting rooster/Colombia/2077-26/2009/fighting rooster/2009/Colombia VII d/1216/chicken/Colombia/12129-14/2009/chicken/2009/Colombia VII d/1204/chicken/Colombia/1326-14301/2009/chicken/2009/Colombia VII d/1202/chicken/Colombia/1326-13563/2009/chicken/2009/Colombia VII d/1203/chicken/Colombia/1326-13919/2009/chicken/2009/Colombia VII d/1205/chicken/Colombia/1326-14322/2009/chicken/2009/Colombia
VII d VII d
VII e VII e VII e
VII f VII f
0.005
Viruses del 2009 de Colombia
y de Venezuela de 2008
están conectados epidemiológicamente a
los de China 2007
• Perú Junio/Julio 2008
• ENC aparece en Arequipa and Cusco
• Morbilidad & Mortalidad de hasta 75.6%
• Ultimo brote había ocurrido en 1995
Problema: Ejemplo de Falta de bases de
datos para todos los virus existentes
NDV-Peru/08 45511204 296396399
296396406 110225441
109290360 290889341
109290353 109290367 94429033
161110504 259563650
259221332 22657972 28933797
227460816 268043733
45511225 237687704
217323230 217323219
87298942 296396414
237687697 45511232
258547246 258547239
295003978 295003964
269838478 269838473
237687683 237687690 237687718 237687711
262217133 262217140
298363316 45511218
45511239 295983461 45511211
295983455 295983462
295983460 295983456
295983459 295983457 295983458
312285288- HQ266602.1-MG 725 08 312285295-HQ266603.1-MG 1992 complete...
162945890 53636432
270311573 290750585
218136409 218136437
218136423 218136430 218136416 124014023 213556925 213556932
3386504 61621428
11527326 199588909 14190062 167427508 167427515
301333029 295683904
255709963 67552898 224460736
224500856 224460731 224460724
224460742 157674520
295003957 295003971
298239409 45511246
290782565 73476668
28824865 61393468 62901506
61393384 61393396
61393373 61393416 61393427 61393407 61393351
61393438 61393362
61393448
100
100
100
100
81 98
91
100
100
82
100
81
89
77
97
95 93
100 96
100 100
75
94
100
100
100
100
100
100
100
100 100
100
95 100
100
100
100
100
100
73
73
100
100
100
100
97
94 100
100
100
95
100
85 100
94
100
100 70
100
100
100 100
100
100
100
94 100
100
100
100 100
100
100
100 100
93
98
100
98
91 84 93
VII
VI
V XI
III/IV IX
II
I
? ????
Revisión de bancos de datos Chinos
Perú fue muy similar a 3 aislamientos
recientes de China
El problema del origen se clarificó,
aún así el modo de trasmisión
permanece desconocido
¿Aves silvestres responsables?
Nuevo Genotipo XII: Perú y China
Los virus de genotipo XII no se quedaron en Peru.
Un virus similar afectó a Colombia en 2009
Nueva panzootica (2010-2014)?
Virus de Israel, Paquistan e Indonesia son casi identicos y
Están Difundiéndose en el Mundo
Ha empezado una panzootica nueva?
• Octubre 2011-Mayo 2013. Pakistan (n= 26); 20 regiones
distantas dento del Punjab de Pakistan han sido afectados.
Todo tipo de formas de produccion de pollos y aves
silvestres.
• Israel (n = 33); Muestras en 2011-2012 de animales de
produccion, zoologicos y animales domesticos [Kimron
Veterinary Institute] 2011-2012
• Indonesia (n =14); Muestras de animales de los mercados
de aves y de facilidades de produccion de distintos niveles.
desde 2010. [Vet. Med. Department, Bogor Ag. Univ.].
Islands of Sumatra, Kalimantan, Java, Bali, and Nusa
Tenggara represented.
• ICPI (~14) & MDT (~32): casi todos velogenicos.”
Diversidad Genética y Retos en Diagnostico:
La prueba de Matriz RT-PCR Tiempo Real
• Se requiere una región conservada – Gen Matriz
• Permite detección rápida a partir de una sola preparación de ARN
• Pero…no detecta Virus Clase I (aproximadamente el 70% de los virus en aves silvestres)
J Clin Microbiol. 2007 Apr;45(4):1310-4.
0
10
20
30
40
87
LA
CA
4B
WT
87
OH
CA
7C
GS
87
LA
CA
3G
WT
87
LA
CA
1G
WT
95
NY
26
3C
HK
04
OH
14
1W
D
02
MD
14
8M
LD
02
MD
15
1M
LD
05
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35
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HK
05
HK
36
3C
HK
98
AK
5G
WT
05
NJ3
29
EN
V
99
MN
CA
8M
LD
04
MD
11
3M
LD
04
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11
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LD
98
AK
6N
OP
05
MA
33
0E
NV
05
NY
33
1E
NV
05
NJ3
32
EN
V
05
NJ3
33
EN
V
05
NY
33
4C
HK
05
UN
33
6E
NV
05
RI3
37
EN
V
05
NJ3
38
CH
K
05
NY
34
0C
HK
05
NJ3
41
EN
V
05
NJ3
44
UN
K
05
NJ3
45
UN
K
05
NJ3
46
EN
V
05
NY
34
7U
NK
05
NJ3
48
EN
V
05
NJ3
39
EN
V
05
NY
34
2C
HK
00
DE
39
DL
N
98
AK
9N
OP
00
DE
29
RD
T
00
DE
36
RD
T
01
DE
47
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N
00
DE
38
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N
00
DE
41
DL
N
00
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SP
87
LA
CA
2G
WT
04
MD
72
ML
D
04
MD
73
ML
D
02
NJ6
0R
DT
02
DE
54
RD
T
01
NJ5
0R
DT
02
DE
58
RD
T
87
OH
16
4N
OP
99
MN
16
3M
LD
Ct
valu
e
Class I Class II
genotype
1 2 *3 4 5 6 7 8 9 I Ia IIa
0
10
20
30
40
87
LA
CA
4B
WT
87
OH
CA
7C
GS
87
LA
CA
3G
WT
87
LA
CA
1G
WT
95
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26
3C
HK
04
OH
14
1W
D
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14
8M
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02
MD
15
1M
LD
05
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35
9C
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05
HK
36
3C
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98
AK
5G
WT
05
NJ3
29
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V
99
MN
CA
8M
LD
04
MD
11
3M
LD
04
MD
11
4M
LD
98
AK
6N
OP
Ct
valu
eWF LBM
Class I Class II
genotype
1 2 3 4 5 6 7 8 9 Ia Ib
Resultados de RT-PCR Tiempo Real
T G G A G G A A G G A G A C A G A A A C G C T T
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
G . . . . . . . . . . . . . . . . G . . . T . .
A . . . . T . . . . . . G A . . . . . . . . . .
. . . . . . G . . . . . . . . . . . . . . A . .
. . . . . . G G . . . . . . . . G G G . . . C .
. . . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . .
C . . . . . . . . . . . . . . . . G . . . . . .
. . . . . . G G . . . . . . . . G G G . . . C .
. . . . . . G . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . G . . . A . . . . G G . . . . C .
C . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
C . . . . . . . . . . . . . . . . G . . . . . .
A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
A . . . . . . . . . . . . . G . . . . . . . . .
A . . . . . . . . . . . G . . . . . . . . . . .
G T . G . C . T C A G C . . T . G . T G . G C G
A A . G . C . T C . G C . . T . G . C G . G C G
Por qué las Pruebas Actuales no Detectan Clase I?
Primer caso de falla de la prueba del gen matriz en virus virulentos
• La prueba Fusión detecta velogénicos
y otros virulentos
• Diferencia usando el sitio de ruptura de
la proteína de Fusión.
• Prueba ha sido validada y muy usada
durante el brote del 2002 en California
Retos en Diagnóstico:
La prueba de Fusión RT-PCR Tiempo Real
Sin embargo:
Aislamientos Recientes en E.U.A no son detectados
por el RT-PCR tiempo real para el gen Fusión
Accession Isolate description Matrix Fusion
EU477193 Eurasian Collared Dove/US/TX2334/2003 16.83 0
EU477194 Eurasian Collared Dove/US/TX3817/2004 18.03 0
EU477195 Eurasian Collared Dove/US/TX6295/2006 16.71 0
EU477196 Eurasian Collared Dove/US/TX6306/2007 15.36 0
EU477197 Eurasian Collared Dove/US/TX6338/2007 17.33 0
EU477188 Dove/US/TX-B2580/2004 16.53 0
EU477189 Pigeon/US/RI166/2000 18.32 0
EU477198 Pigeon/US/TX3377/2004 16.22 0
EU477190 Pigeon/US/TX3503/2004 19.24 0
EU477199 Eurasian Collared Dove/US/TX3908/2004 18.6 0
EU477191 Eurasian Collared Dove/US/TX3988/2004 17.79 0
EU477200 Mourning Dove/US/TX4048/2004 17.81 0
EU477201 Eurasian Collared Dove/US/TX4078/2004 17.07 0
EU477202 Pigeon/US/TX4142/2005 17.66 0
EU477192 Eurasian Collared Dove/US/TX4156/2005 17.23 0
Muchos Virus de paloma aislados al rededor del mundo
tienen la misma secuencia en el sitio usado para hacer
diagnóstico con PCR
Probe
5’ → 3’
T G G A G G A A G G A G A C A G A A A C G C T T
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
G . . . . . . . . . . . . . . . . G . . . T . .
A . . . . T . . . . . . G A . . . . . . . . . .
. . . . . . G . . . . . . . . . . . . . . A . .
Dove Italy
¿Por qué Dove/Italy es Diferente?
• Primers: diferencias insignificantes en detección
– Producto amplificado con primers
(resuelto en gel)
• Sonda: 4 diferencias identificadas
J Vet Diagn Invest. 2006 Nov;18(6):519-28.
Detección con Sondas Específicas para Paloma (SEPRL)
Usando Sondas para el RRT-PCR de la Proteína de Fusión
Accession Isolate description Matrix
Standard
Fusion
Fusión
Paloma
EU477193
Eurasian Collared
Dove/US/TX2334/2003 16.83 0 23.55
EU477194
Eurasian Collared
Dove/US/TX3817/2004 18.03 0 24.66
EU477195
Eurasian Collared
Dove/US/TX6295/2006 16.71 0 23.55
EU477196
Eurasian Collared
Dove/US/TX6306/2007 15.36 0 21.63
EU477197
Eurasian Collared
Dove/US/TX6338/2007 17.33 0 24.59
EU477188 Dove/US/TX-B2580/2004 16.53 0 22.3
EU477189 Pigeon/US/RI166/2000 18.32 0 19.97
EU477198 Pigeon/US/TX3377/2004 16.22 0 21.45
EU477190 Pigeon/US/TX3503/2004 19.24 0 25.77
Isolate Species Year Matrix Fusion Sequence
02US072GFL Game Fowl 2002 TGGAGGAAGGAGACAGAAACGCTT
CC 415-A-02 Cormorant 2002 23.12 30.78 .C...................T..
19529-04 Cormorant 2008 31.08 0 .A......A............T..
A00520447/448 (MN4) Cormorant 2008 23.17 0 .A......A............T..
A00554760/759 (PG1) Cormorant 2008 36.74 0 .A......A............T..
A00554748/747 (PG7) Cormorant 2008 21.93 0 .A......A............T..
A00520441/442 (MN1) Cormorant 2008 22.08 0 .A.....RA............T..
A partir del 2004 la prueba de virulencia (fusión)
empezó a fallar en virus procedentes de cormoranes
Resumen: Efecto de la Diversidad Genética Sobre
Epidemiología y Diagnóstico
• Las bases de datos están todavía incompletas especialmente
porque el virus cambia y se mueve facilmente desde lugares
remotos del mundo (eg. China-Peru)
• Falta mejorar los métodos de diagnostico rápidos para que
puedan detectar nuevas variantes de virus.
• Existe la necesidad de validar las pruebas que ya existen. No
existen normas internacionales así que uno nunca esta 100%
seguro de un resultado negativo basado en PCR.
• Hace falta encontrar todos los reservorios (especialment si el
virus se oculta en especies silvestres).
• Hacen faltas ensayos de campo para detectar el virus virulento
temprano.
Relación Filogenética entre los Virus Vacunales
de ENC y los Virulentos
• La vacunas vivas e inactivadas que se usan universalmente en la industria avícola son filogenéticamente similares a las cepas aisladas en los 40s-50s (Clase II, genotype II) (Ejemplo, LaSota,VG).
• Otras vacunas mundialmente usadas (ej.V4) pertenecen a la Clase II Genotipo I.
• La mayoria de los virus que circulan actualmente son de genotipos V, VI y VII y estan muy distanciados de las vacunas.
0.05
IIa
II
I
Ia
IX
III/IV
VIII
V VI VII
Efecto de la Diversidad Sobre el Control:
Funcionan las vacunas con los nuevos viruses?
Vacunas inactivadas de base oleosa
Usando igual cantidad de antígenos de genotipos distintos
Fueron utilizadas para evaluar la protección contra la enfermedad y
Para medir la excresión de virus después del desafío con un virus virulento de genotipo V
Experimento
Virus AMPV-1
usados en el
Experimento de
Vacuna Inactivada
Antígenos provenientes
de virus de distintos
genotipos fueron
evaluados para
proteger contra un
virus velogénico
(California 02)
Esquema de vacunación
Emulsión oleosa inactivada
•Control
•Ulster(Genotipo I)
•B1(Genotipo II)
•AK196(Class I)
•Pigeon (GenotipoVI)
•CA02(Genotipo V)
3 semanas
EID 50 105.7
Desafío con CA02
Suero
•Inhibición de hemoaglutinación
•ELISA
•Orofaríngeo •Cloacal
•Days 2, 4, 7, & 9
•Sangrar y Sacrificar •Morbilidad & mortalidad
4 Semanas edad
WLH son
vacunados
Resultados: Protección Clínica 100 % sobrevivencia
Títulos Virales Obtenidos con los Hisopos Orales de 2
Días
•En excreción viral todas las
vacunas fueron
significativamente
mejores que el control.
•Sin embargo la vacuna
homóloga (CA02) fue
significativamente mejor
que el resto de los grupos
vacunales.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5
0
1 0
2 0
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4 0
5 0
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8 0
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1 1 0
S o b r e v iv e n c ia e n a v e s d e sa f ia d a s 7 d p v c o n V E N C -Z M 1 5
D ía s d e s p u é s d e l d e s a f ío
So
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ia (
%)
C o n tro l
L aS o ta 1 03
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L aS o ta 1 06
Como funciona la Vacuna Lasota viva contra los
viruses del Genotipo V de Mexico?
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5
0
1 0
2 0
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1 1 0
S o b r e v iv e n c ia e n a v e s d e sa f ia d a s 1 4 d p v c o n V E N C - Z M 1 5
D ía s d e s p u é s d e l d e s a f ío
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%)
C o n tro l
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L aS o ta 1 04
L aS o ta 1 05
L aS o ta 1 06
Como funciona la Vacuna Lasota viva contra los
viruses del Genotipo V de Mexico?
Vacunacion con LaSota
Desafio con viruses de
South Africa (Genotipo VIId)
e Israel (Genotipo Vii i )
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5
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S o b r e v iv e n c ia e n a v e s d e s a f ia d a s 7 d p v c o n S A
D ía s d e s p u é s d e l d e s a f ío
So
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%)
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Sobrevivencia Vacuna Lasota-
Viruses de Sud-Africa
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S o b r e v iv e n c ia e n a v e s d e sa f ia d a s 1 4 d p v c o n S A
D ía s d e s p u é s d e l d e s a f ío
So
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%)
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Sobrevivencia Vacuna Lasota-
Viruses de Sud-Africa
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5
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Sobrevivencia Vacuna Lasota-
Viruses de Israel
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S o b r e v iv e n c ia e n a v e s d e s a f ia d a s 1 4 d p v c o n I sr a e l 8 2 6
D ía s d e s p u é s d e l d e s a f ío
So
br
ev
ive
nc
ia (
%)
C o n tro l
L aS o ta 1 03
L aS o ta 1 04
L aS o ta 1 05
Sobrevivencia Vacuna Lasota-
Viruses de Israel
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LS
103 x
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15
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ZM
15
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15
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ZM
15
Sham
x Z
M15
LS
103 x
ZM
15
LS
104 x
ZM
15
LS
105 x
ZM
15
LS
106 x
ZM
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1
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E x c re c ió n v ira l o ra l p o s t -d e s a f ío
(A v e s d e s a fia d a s 7 d p v )
D o s is v a c u n a l p o r g ru p o
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l)
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a ,b
b b
a
a
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Excresion Día 7 post Lasota
Desafío Viruses de Mexico
Sham
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M15
LS
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Sham
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LS
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LS
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E x c re c ió n v ira l o ra l p o s t -d e s a f ío
(A v e s d e s a f ia d a s 1 4 d p v )
D o s is v a c u n a l p o r g ru p o
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l)2 d p d 4 d p d
a
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b ,c
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a
b
b
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Excresion-Día 14 post Lasota
Desafío Viruses de Mexico
E x c re c ió n v ira l o ra l p o s t -d e s a f ío
(A v e s d e s a fia d a s 7 d p v )
D o s is v a c u n a l p o r g ru p o
Tít
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2 d p d 4 d p d
N Sz e r o
a
b
c
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c
ca
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Excresion Día 7 post Lasota
Desafío Viruses de Sud Africa
E x c re c ió n v ira l o ra l p o s t -d e s a f ío
(A v e s d e s a f ia d a s 1 4 d p v )
D o s is v a c u n a l p o r g ru p o
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LS
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1
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42 d p d 4 d p d
a
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c
c
c
a
bb b
N S
Excresion-Día 14 post Lasota
Desafío viruses de Sud Africa
E x c re c ió n v ira l o ra l p o s t -d e s a f ío
(A v e s d e s a f ia d a s 1 4 d p v )
D o s is v a c u n a l p o r g ru p o
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Isra
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26
LS
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Isra
el8
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LS
105 x
Isra
el8
26
0
2
4
6
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a
a
a
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b
2 d p d 4 d p d
Excresion Día 14 post vacuna Lasota
Desafío Viruses de Israel
*
*
E x c r e c ió n v ir a l o r a l p o s t -d e sa f ío
(A v e s d e s a fia d a s 7 d p v )
D o s is v a c u n a l p o r g r u p o
Tít
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IS
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105 Z
M15
LS
105 x
SA
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ZM
15
LS
106 x
SA
LS
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9
1 0 2 d p c 4 d p c
*
*
*
*
*
*
*
Resumen:
Vacunación Corriente
Hacia el futuro: Soluciones para el problema
de las aves de transpatio
Producción de vacuna en pastillas
Vacuna se crece en huevos normalmente en huevos.
Formulación se prepara mezclando excipiente
concentrado 2X con igual volume de fluido allantoico
para obtener una formulacion de 1X.
Un titulo inicial de virus de 1.6×109 50 por ciento dosis
infectiva en huevos es lo que se require para obtener
pastillas de 100 dosis.
La hoja del Blister y sellado se hace con una maquina
B2FS de sellado que se compro de la empresa Applied
Engineering Corporation in New Jersey.
The formulaciones en blister se congelan rapidamente a
−45C y se mantienen por 3 horas seguido por secado
Títulos virales de las vacunas FDT vs. VENC después de su
almacenamiento bajo diferentes temperaturas.
Lal M et al. Veterinary Record 2014;174:504
Copyright © British Veterinary Association. All rights reserved.
Titulos de Hemagglutination inhibition (HI) a las dos semans post
vacunacion usando formulaciones NDV-19 and NDV-25.
Lal M et al. Veterinary Record 2014;174:504
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Virulencia de la vacuna viva (daño al hospedero)
Resp
ues
ta I
nm
un
e
Hacia el Futuro:
Mejorar “racionalmente” las vacunas vs. VENC
Límite de
Protección
Límite de
Daño
Intolerable Vacunas
Actuales
Nuestra Meta
Vacunas Vivas Homólogas
(Quimeras)
Desarrollo de vacunas que se parezcan
antigénicamente a los virus de campo
NP P M F L HN
NP P M F L HN
NP P M F L HN
Pakistan (Pak)
South Africa
(SA)
V a c c in e G r o u p
We
igh
t in
cr
em
en
t (%
)
Sh
am
rLS
LS
-wt
rLS
-PK
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
1 2 0
1 4 0
a a
a
a
Resultados… aumento de peso
D a y p o st-c h a lle n g e
Su
rv
iva
l (%
)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
S h a m x P K 8
S h a m x S A 6 0
r L S -P K x P K 8
r L S -S A x S A 6 0
L S -w t x P K 8
L S -w t x S A 6 0
Resultados… sobrevivencia al
desafio en condiciones optimas
Resultados… IH pre-desafío
Suero /
grupo
Antígeno HI
LaSota PK8
LaSota 24 ± 5.6
6.2 ± 1.2
rLS-PK 9 ± 1.4
17.0 ± 2.9
SA60
LaSota 17.7 ± 4.8
1.7 1.3
rLS-SA 4 ± 1.4 5.7 ± 1.3
Resultados: Excreción Viral
65 NS – No sobrevivientes
Pollitos de un día de edad excretando virus
Group 2Dpv 4Dpv 2 Dpc 4 Dpc
OP OP OP CL OP CL
Sham x PK8 0/12 0/12 12/12 12/12 NS NS
rLS-PK x PK8 12/12 12/12 2/12 0/12 2/12 0/12
LaSota x PK8 12/12 12/12 8/12 2/12 7/12 1/12
Sham x SA60 0/12 0/12 12/12 12/12 NS NS
rLS-SA x SA60 12/12 12/12 0/12 0/12 0/12 0/12
LaSota x SA60 12/12 12/12 4/12 0/12 3/12 2/12
E x c re c ió n v ira l
(P re - a n d p o s t-d e s a fío )
V a c c in e -c h a l le n g e g r o u p
Tít
ulo
(L
og
10
DIE
50/m
l)
LS
rLS
-PK
LS
rLS
-SA
LS
rLS
-PK
LS
rLS
-SA
LS
x P
K
rLS
-PK
X P
K
LS
x S
A6
0
rLS
-SA
x S
A6
0L
S x
PK
rLS
-PK
X P
K
LS
x S
A6
0
rLS
-SA
x S
A6
0
0
1
2
3
4
5
6
2
D pv4 D p v 2 D p c 4 D p c
aa
a
b
a
c
aa
b
c
d
d
d
d d
d
d
Así mismo las condiciones de
campo nunca son óptimas
• White Leghorn de 4 semanas de edad.
• Vacunas:
– LaSota 103, 104, 105 or 106
– rLS-PK 103, 104, 105 or 106
– Desafío:
– PK8 108.5 7 dpv o 14 dpv
– Observación por 14 días después del desafío.
Resultados… IH pre-desafío
V a c c in e G r o u p
HI
Tit
er (
Log
2)
S h a m
LS -w
t 104
r LS -P K
104
LS -w
t 105
r LS -P K
105
LS -w
t 106
r LS -P K
106
0
2
4
6
8
1 0
1 2
1 4
1 6
1 8
2 0
a
a ,b
b ,cc
cc
c
V a c c in e G r o u p
HI
Tit
er (
Log
2)
S h a m
LS -w
t 103
r LS -P K
103
LS -w
t 104
r LS -P K
104
LS -w
t 105
r LS -P K
105
LS -w
t 106
r LS -P K
106
0
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
7 0
8 0
9 0 a
a ,b
b
bb
bb
b
b
A
B
Sobrevivencia después del desafío a
los 7 días
D e s a f ío 7 d ía s d e p u é s d e la v a c u n a c ió n
D ía s d e s p u é s d e l d e s a fío
So
bre
viv
en
cia
(%
)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
S h a m
L a S o ta 1 0 ^4
L a S o ta 1 0 ^5
L a S o ta 1 0 ^6
rL S -P K 1 0 ^3
rL S -P K 1 0 ^4
rL S -P K 1 0 ^5
rL S -P K 1 0 ^6
Sobrevivencia después del desafío
D e s a f ío 1 4 d ía s d e p u é s d e la v a c u n a c ió n
D ía s d e s p u é s d e l d e s a fío
So
bre
viv
en
cia
(%
)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
L a S o ta 1 0 ^ 3
L a S o ta 1 0 ^ 4
L a S o ta 1 0 ^ 5
L a S o ta 1 0 ^ 6
rL S -P K 1 0 ^ 3
rL S -P K 1 0 ^ 4
rL S -P K 1 0 ^ 5
rL S -P K 1 0 ^ 6
Conclusiones
• Las vacunas heterólogas (Lasota):
• Protegen adecuadamente contral la enfermedad.
• Sin embargo…solo reducen la replicación viral
cuando se usan a dósis altas…
• Las vacunas homólogas:
• 1. Producen una respuesta mas específica contra
el virus
• 2. Son mas efectivas en reducir la excreción viral.
• 3. En algunos casos funcionan mejor en
condiciones sub-optimas (7 y 14 dias).
Soluciones basadas en tecnología para:
1. Aumentar productividad (eliminar signos
clínicos) y
2. Sean sostenibles (eliminación de virus)
Hacia el futuro:
Vacunación Para Erradicar
Muchas Gracias
Preguntas?
