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UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE KINESIOLOGÍA
COMPARACIÓN DE LA EFICACIA HIPOLIPEMIANTE DE Commiphora mukul
Y Monascus purpureus EN RATAS
Jacqueline Vanessa Biere Chales
Camila Paz Tohá González
2007
COMPARACIÓN DE LA EFICACIA HIPOLIPEMIANTE DE Commiphora mukul
Y Monascus purpureus EN RATAS
Tesis Entregada a la
UNIVERSIDAD DE CHILE En cumplimiento parcial de los requisitos
para optar al grado de LICENCIADO EN KINESIOLOGIA
FACULTAD DE MEDICINA
por
JACQUELINE VANESSA BIERE CHALES
CAMILA PAZ TOHÁ GONZÁLEZ
2007
PROF. SANDRO EDGARDO BUSTAMANTE DELGADO, M.Sc.
PATROCINANTE DE TESIS SYLVIA ORTIZ ZUÑIGA
FACULTAD DE MEDICINA
UNIVERSIDAD DE CHILE
INFORME DE APROBACION
TESIS DE LICENCIATURA
Se informa a la Escuela de Kinesiología de la Facultad de Medicina que la Tesis de Licenciatura presentada por los candidatos:
JACQUELINE VANESSA BIERE CHALES CAMILA PAZ TOHÁ GONZÁLEZ
Ha sido aprobada por la Comisión Informante de Tesis como requisito para
optar al grado de Licenciado en Kinesiología, en el examen de defensa de Tesis rendido el
....................................................................................................... DIRECTOR DE TESIS Prof. Sandro Bustamante Delgado ......................................... COMISION INFORMANTE DE TESIS. NOMBRE FIRMA Sylvia Ortiz ............................................................................................................................................. .............................................................................................................................................
A nuestras familias por su amor, paciencia y comprensión.
AGRADECIMIENTOS
A Don Juan por brindarnos su ayuda durante el periodo experimental, por su
disposición y amabilidad, y a nuestro tutor por guiarnos constantemente.
A nuestros amigos (as) por su colaboración, tiempo y preocupación.
INDICE
RESUMEN ......................................................................................................................... i
ABSTRACT ...................................................................................................................... ii
ABREVIATURAS ........................................................................................................... iii
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................. 1
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .......................................................................... 2
1. Pregunta de investigación .................................................................................. 2
2. Justificación .......................................................................................................... 2
MARCO TEÓRICO ......................................................................................................... 4
1. Dislipidemias ........................................................................................................ 4
1.1. Colesterol y sus roles fisiológicos ............................................................. 4
1.2. Trastornos en el perfil lipídico ................................................................... 6
1.3. Tipos de dislipidemias ................................................................................ 6
2. TERAPIA HIPOLIPEMIANTE ............................................................................ 7
2.1. Manejo Dietario ............................................................................................ 7
2.2. Farmacoterapia alopática ........................................................................... 8
2.3. Farmacoterapia con Fitofármacos .......................................................... 11
OBJETIVOS ................................................................................................................... 14
1. Objetivo general ................................................................................................. 14
2. Objetivos Específicos ....................................................................................... 14
HIPÓTESIS .................................................................................................................... 14
MATERIALES Y MÉTODOS ....................................................................................... 15
1. Método ................................................................................................................ 15
1.1. Diseño de Investigación ........................................................................... 15
1.2. Población de estudio. ............................................................................... 15
1.3. Diseño Experimental ................................................................................. 15
1.4. Variables ..................................................................................................... 16
2. Materiales ........................................................................................................... 17
2.1. Infraestructura física ................................................................................. 17
2.2. Animales ..................................................................................................... 17
2.3. Reactivos y Soluciones ............................................................................ 18
2.4. Equipos e Instrumentos ............................................................................ 18
3. Procedimiento .................................................................................................... 19
3.1. Determinación de parámetros básicos .................................................. 19
3.2. Determinación de niveles plasmáticos de CT y TG. ............................ 19
3.3. Administración de Fitofármacos y Vehículo .......................................... 19
3.4. Descripción del procedimiento ................................................................ 19
RESULTADOS ............................................................................................................... 21
DISCUSIÓN ................................................................................................................... 25
CONCLUSIÓN ............................................................................................................... 29
PROYECCIONES ......................................................................................................... 30
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................... 31
ANEXOS ......................................................................................................................... 34
i
RESUMEN
Las enfermedades cardiovasculares son un problema a nivel mundial y
nacional debido al aumento de factores de riesgo como obesidad,
sedentarismo, diabetes, dislipidemia y malos hábitos alimenticios. El gran
aumento de los niveles de colesterol en la población chilena ha motivado la
busqueda de nuevas terapias farmacológicas para el control y tratamiento de
dislipidemias cuando el control dietario no ha sido eficaz. Los fitofármacos como
Monascus purpureus y Commiphora mukul ya han sido utilizados
tradicionalmente en China y en la India, para disminuir los niveles plasmáticos
de colesterol.
El presente estudio tiene como objetivo comparar la eficacia de los
fitofármacos Monascus purpureus y Commiphora mukul en la disminución de
los niveles de colesterol total (CT) y de triglicéridos (TG) en ratas normales.
Para esto se realizó un estudio in vivo en ratas, a las que se les administraron
los fitofármacos Monascus purpureus (150 mg/Kg) y Commiphora mukul
(75 mg/Kg) durante 21 días, realizando determinaciones periódicas de niveles
de colesterol total y triglicéridos mediante bioamperometría. Para analizar los
valores obtenidos en las distintas determinaciones de cada grupo experimental,
se utilizó la mediana, el valor máximo, mínimo y las pruebas no paramétricas de
Kruskal-Willis, Friedman y Wilcoxon.
Según nuestros resultados experimentales, tanto en el grupo control como
en los tratados con fitofármacos se apreció una disminución de los niveles de
CT y TG, sin poder establecer si entre los tres grupos hubo una diferencia
estadísticamente significativa del efecto hipolipemiante.
ii
ABSTRACT
Cardiovascular diseases are a subject of concern both national and
worldwide, because of the raising on risk factors such as obesity, sedentary
lifestyle, diabetes, dyslipidemia and bad eating habits. The great increase on
cholesterol levels within chilean population has motivated scientist to look for
new farmacological therapies for control and treatment of dyslipidemia when diet
control has failed. Phytodrugs such as Monascus purpureus and Commiphora
mukul have already been used by diverse cultures like Chinese and
Ayuverdican, to reduce plasmatic cholesterol levels.
The present work aims to determinate which phytodrug, Monascus
purpureus or, are more effective reducing total cholesterol levels and tryglicerids
on normal lab rats. For that purpose was performed an in vivo lab rat study,
administrating both, Monascus purpureus (150mg/Kg/2,5 ml) and Commiphora
mukul (75mg/Kg/2,5ml), for a 21 days period, carrying out periodical total
cholesterol and triglicerids determination by means of a bioamperometric
system. To analyze the values obtained in the various determinations of each
experimental group, was used the median, the maximum, minimum and the non-
parametric tests Kruskal-Willis, Friedman and Wilcoxon.
According to our experimental results, both in the control group as in those
treated with phytodrugs appreciated a decrease in the levels of TC and TG,
unable to establish whether the three groups, there was a statistically significant
difference of lipid lowering effects.
iii
ABREVIATURAS
CT: Colesterol Total
TG: Triglicéridos
HDL: Lipoproteínas de alta densidad
LDL: Lipoproteínas de baja densidad
VLDL: Lipoproteínas de muy baja densidad
SREBP: Proteína de unión a elementos reguladores de esteroles
SRE: Elemento regulador de esteroles
HMG-CoA-reductasa: Hidroxi-metil-glutaril Coenzima A-reductasa
HMG-CoA: 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A
Cl- : ión Cloro
FXR: Receptor nuclear farnesoide
CM: Commiphora mukul
MP: Monascus purpureus
1
INTRODUCCIÓN
El colesterol es un componente importante en la estructura y
funcionamiento de las células del organismo y además participa en la formación
de ciertos tipos de hormonas, sin embargo se convierte en un problema de
salud cuando se encuentra en exceso y, sus diversas alteraciones, dan cuenta
de la mayor parte de la morbilidad y mortalidad por enfermedades cerebro-
cardiovasculares entre adultos de edad media y avanzada.
La hipercolesterolemia es una importante causa de aumento de riesgo de
aterosclerosis, enfermedad cerebro vascular de origen isquémico, cardiopatía
coronaria y vasculopatía periférica. Dietas con alto contenido en grasas
saturadas y colesterol y, en menor medida, algunas alteraciones genéticas, son
el origen de las altas concentraciones plasmáticas de lípidos observadas en la
población chilena como también en otros países. Se estima que un 60% de la
población mundial y un 55% de la población chilena, presenta riesgo
cardiovascular elevado o muy elevado, producto de la obesidad, altos niveles
de colesterol y un estilo de vida sedentaria (Valenzuela y cols., 2002). La
Organización Mundial de la Salud y la Organización de Naciones Unidas para la
Agricultura y la Alimentación, proyectan para el año 2020 que las enfermedades
crónicas no transmisibles representarán casi el 75% del total de defunciones, de
las cuales un 71% de las defunciones serán atribuidas por cardiopatía
isquémica y un 75% por accidentes cerebrovasculares.
Es por esto que el reconocimiento de la hipercolesterolemia como un
factor de riesgo ha conducido al desarrollo de fármacos que disminuyan los
niveles de colesterol, motivando a determinar la eficacia de la llamada
farmacología alternativa, como el uso de diversos fitofármacos que contienen
extractos estandarizados de Monascus purpureus o Commiphora mukul.
2
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1. Pregunta de investigación
¿La eficacia de Monascus purpureus es mayor que la de Commiphora mukul
en la disminución del colesterol total y triglicéridos en ratas normales?
2. Justificación
Los cambios en los estilos de vida y dietario de la población mundial
parecen ser responsables en el incremento observado de enfermedades
metabólicas como diabetes y dislipidemias, ambas con demostrada incidencia
en la generación de enfermedades cerebro y cardiovasculares (hipertensión,
infarto agudo al miocardio, accidente cerebrovascular, aterosclerosis, entre
otras). Por esta razón, la industria farmacéutica ha orientado el desarrollo de
fármacos que permitan prevenir el desarrollo de estos trastornos metabólicos,
de modo que sea posible revertir o enlentecer el progreso de ellos.
La actual farmacoterapia para el tratamiento de las dislipidemias cuenta con
gran variedad de fármacos alopáticos, tales como Estatinas, Ezetimibe y
Fibratos, muchos de ellos con reacciones adversas graves e potencialmente
letales como la rabdomiólisis, lo que ha llevado al retiro del mercado de algunos
fármacos como Cerivastatina (Charatan, 2001). A partir de la etnomedicina, la
industria farmacéutica mundial ha desarrollado fitofármacos con acción
hipolipemiante, los cuales han demostrado cierta eficacia en estudios animales
y clínicos. Dichos estudios clínicos revelan que Monascus purpureus y
Commiphora mukul producen una diferencia porcentual en el efecto sobre los
3
niveles de CT y TG (MP un 21, 5% en CT y 15, 8% en TG, según Lin y cols,
2005 y 13-26% para CT y 13-34% para TG según Journoud y cols, 2004. Por
otra parte, CM reporta una disminución CT en un 11% y de un 15% para TG
según Szapary y cols, 2003).
Además existen reportes de reacciones adversas de baja incidencia e
intensidad leve, asegurando un margen de seguridad mayor que en el caso de
los fármacos alopáticos.
Sin embargo, pese a existir estudios de fase III con estos fitofármacos, no
hay estudios comparativos respecto a sus eficacias, información útil para el
médico al momento de tener que tomar una decisión para la instauración de
una farmacoterapia.
4
MARCO TEÓRICO
1. Dislipidemias
1.1. Colesterol y sus roles fisiológicos El colesterol es un lípido que se encuentra en todos los tejidos y en el
plasma sanguíneo. Es un componente importante en la estructura y
funcionamiento de las células y participa en la formación de ciertos tipos de
hormonas y vitaminas (hormonas sexuales, aldosterona, cortisol y
Vitamina D). Sin embargo, se convierte en un problema cuando sus niveles
sobrepasan los límites considerados normales (Ganong, 2005).
1.1.1. Síntesis de colesterol.
Aproximadamente dos tercios de la síntesis endógena de colesterol
se realiza en el hígado a partir de acetil-coenzima A (Anexo 1), mientras
que un 30% se adquiere a través de la ingesta de alimentos que lo
contienen, como carnes, leche, huevos y otros alimentos.
1.1.2. Transporte del colesterol
Para circular en la sangre, el colesterol se combina con proteínas
llamadas lipoproteínas, cuya función es transportar el colesterol y los
triglicéridos en la sangre.
Las lipoproteínas son macromoléculas que se sintetizan en el
hígado y en el intestino. Están compuestas por un núcleo que consta de
triglicéridos y éster de colesterol y una superficie donde se encuentran
los fosfolípidos, el colesterol libre y las apoproteínas (Florez y cols.,
5
2003) (Anexo 2). Existen cuatro clases de lipoproteínas plasmáticas
(Anexo 3), que varían en densidad de acuerdo con la composición de
componentes lipídicos y proteicos. Estas lipoproteínas pueden
clasificarse en quilomicrones, lipoproteínas de muy baja densidad
(VLDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta
densidad (HDL). Las lipoproteínas de baja densidad (VLDL y LDL),
transportan lípidos desde el hígado a los tejidos extrahepáticos como el
tejido vascular, adiposo y muscular. Los quilomicrones, transportan los
lípidos ingeridos en la dieta desde el intestino hacia el hígado y tejidos
periféricos. En tanto, las lipoproteínas de alta densidad (HDL) remueven
y transportan colesterol desde los tejidos periféricos como los vasos
sanguíneos, de regreso al hígado (Ganong, 2005).
La lipoproteína HDL generalmente conocida como “colesterol
bueno”, arrastra el colesterol de las arterias al hígado para ser eliminado,
transformándose así en un factor protector del organismo para evitar la
acumulación de colesterol en células y arterias. La lipoproteína LDL, por
el contrario, corresponde al denominado “colesterol malo”, por cuanto es
responsable de su depósito en las arterias cuando los niveles
plasmáticos de colesterol están sobre los valores normales (Anexo 4)
(Goodman y cols., 2003).
1.1.3. Regulación del colesterol
La producción del colesterol es regulada directamente por la
concentración del colesterol presente en las células. Una alta ingesta de
colesterol por los alimentos conduce a una disminución neta de la
producción endógena y viceversa.
6
Existen proteínas como el factor de transcripción SREBP, que
detectan el colesterol intracelular. Estas proteínas son reguladoras,
debido a que se asocian con factores de trascripción genética (SRE) que
controlan los genes responsables de la síntesis de LDL y de la enzima
3-hidroximetilglutaril coenzima A reductasa (HMG-CoA-reductasa),
enzima responsable de la etapa limitante de la vía biosintética del
colesterol.
A pesar que el colesterol es un componente importante en el cuerpo
humano, cuando se encuentra sobre los niveles considerados
fisiológicos, puede acumularse en las arterias lo que aumenta el riesgo
de infartos, isquemias cerebrales y otras enfermedades cardiovasculares
(Florez y cols., 2003).
1.2. Trastornos en el perfil lipídico
Un perfil lipídico anormal constituye una condición patológica, que se
caracteriza por una alteración del metabolismo lipídico que determina una
concentración fuera del rango de normalidad de lípidos y proteínas en la
sangre. La dislipidemia es uno de estos trastornos, en el cual se observa un
aumento en las concentraciones de triglicéridos y/o colesterol plasmático, o
bien un bajo nivel de HDL, los que contribuyen al desarrollo de
enfermedades cardiovasculares como aterosclerosis (Beers y cols., 1999).
1.3. Tipos de dislipidemias
Las dislipidemias pueden ser secundarias a una vida sedentaria, dietas
con alto consumo de grasas o, a enfermedades como diabetes mellitus,
insuficiencia renal crónica, cirrosis y alcoholismo. Se han descrito también
7
algunas dislipidemias de origen genético y de transmisión familiar, las que
constituyen una menor incidencia dentro del cuadro de las dislipidemias.
Las dislipidemias clásicamente se clasifican según el perfil lipídico de la
hipercolesterolemia (Anexo 5), pero una clasificación más sencilla y práctica
las agrupa en las siguientes categorías (Florez y cols., 2003):
a) Aumento de colesterol LDL
b) Aumento de triglicéridos (VLDL)
c) Aumento de colesterol y triglicéridos, por alza de LDL y VLDL
2. TERAPIA HIPOLIPEMIANTE
Consiste en identificar las posibles causas de la dislipidemia secundaria.
Éstas pueden ser atribuidas a enfermedades como hipotiroidismo, anorexia
nerviosa, enfermedad biliar, mieloma, lupus eritematoso, porfiria, diabetes
mellitus tipo 2, alcoholismo y algunas lipodistrofias. Es necesario identificar
fármacos como corticoides, diuréticos tiazídicos, ciclosporina o β-bloqueadores,
los cuales tienen entre sus efectos adversos la alteración sérica de
lipoproteínas. Una vez corregida las causas de dislipidemia secundarias, se
inicia el manejo a través de la dieta.
2.1. Manejo Dietario
Consiste en reducir la ingestión de colesterol a menos de 300 mg/día,
excepto en hipertrigliceridemia pura. Se plantea una reducción de la ingesta
de grasas saturadas a menos del 7% del total de calorías y elevar por
encima de uno la relación entre ácidos grasos no saturados y saturados.
8
The National Cholesterol Education Program recomienda un consumo de
55%-60% de proteínas de ingesta diaria, mientras que la grasa total y
grasas saturadas no deben sobrepasar el 30% y 7% respectivamente (Yuan
y cols., 2007).
2.2. Farmacoterapia alopática
2.2.1. Inhibidores de la enzima HMG-CoA-reductasa (Estatinas) Tienen una estructura similar al compuesto 3-metilglutaril-
coenzima A, precursor inmediato del ácido mevalónico y éste, a su vez,
precursor del colesterol. La lovastatina demostró ser un profármaco que
en hígado se transforma por hidrólisis en un hidroxiácido activo. De la
modificación estructural de la lovastatina se obtuvieron la simbastatina,
pravastatina, fluvastatina, atorvastatina y la rosuvastatina. La lovastatina
y sus derivados son inhibidores competitivos y reversibles de la HMG-
CoA Reductasa, por lo que inhiben la biosíntesis intracelular hepática del
colesterol y disminuyen su depósito celular.
Todas las estatinas reducen el LDL entre un 20-35% en dosis
bajas y hasta un 60% a dosis mayores. Además reducen los niveles de
TG y VLDL entre un 10-30%. Sus primeros efectos se observan después
de una semana de administración y su efecto máximo entre 4 y
6 semanas.
Sus efectos adversos más frecuentes son molestias
gastrointestinales, miopatías, rabdomiólisis, miopatía mitocondrial y
dermatomiositis.
9
2.2.2. Ezetimibe Es un fármaco inhibidor de la absorción de colesterol en el intestino
delgado, al bloquear el transportador de esterol Niemann-Pick C1-Like 1.
(Staprans y cols, 2006). Esta inhibición es específica, ya que no inhibe la
absorción de vitamina D, estrógenos, ácidos biliares o progesterona
(Gupta y cols, 2002).
La reducción de la absorción de colesterol induce un aumento de su
síntesis. Aumenta también el número de receptores a la partícula
APO-B100 de las LDL, lo que provoca una mayor captación de colesterol
sanguíneo por las células.
El ezetimibe se absorbe casi por completo y es eliminado por la bilis.
Posee recirculación enterohepática, con un mínimo efecto sistémico
(Toht y cols., 2005). La biodisponibilidad aumenta si se asocia con la
comida. No se han descrito efectos adversos especiales. Reduce los
niveles plasmáticos de LDL en un 15-20% y causa generalmente
aumentos leves de HDL y un pequeño descenso de TG.
2.2.3. Fibratos
Son fármacos que estimulan al receptor activado por proliferador de
peroxisomas (PPARα) en el hígado, reducen la secreción hepática de
VLDL e incrementan la lipólisis de los triglicéridos del plasma.
Generalmente son bien tolerados y sus reacciones adversas más
probables incluyen alérgicas, astenia, impotencia sexual y alopecia; se
ha descrito casos de hepatitis y miositis con una baja incidencia (Yuan y
cols., 2007).
10
Se usan como terapia complementaria a la dieta, en casos de
hiperlipoproteinemias tipo III y IV. Reducen principalmente los TG
plasmáticos entre un 10-40%.
2.2.4. Otros
• Ácido Nicotínico (Niacina) Reduce la producción y secreción hepática de VLDL, y por
consiguiente, la producción de LDL. El efecto biológico dura 4 horas,
seguido de un efecto rebote con aumento de ácidos grasos libres, por lo
que debe administrarse constantemente.
Son frecuentes las reacciones adversas como prúrito, erupciones
cutáneas, molestias gastrointestinales e incremento de ácido úrico. Se
usa en hipercolesterolemias tipo II,III,IV y V, junto a una dieta apropiada.
• Moléculas fijadoras de Ácidos biliares Son resinas catiónicas capaces de intercambiar el Cl- con los
ácidos y sales biliares. Así se unen a las sales biliares formando un
complejo, que será eliminado por las heces, impidiendo la recirculación
de estas sustancias (Schulz, 2006). Disminuyen el LDL en un 15-25%,
pudiendo aumentar los TG en un 20% (Kreisberg, 2003). Pueden alterar
la absorción de compuestos, como el ácido fólico y fármacos
anticoagulantes orales, además de entorpecer la absorción de vitaminas
liposolubles (A, D, K) y la digestión de las grasas. Como efectos
adversos, produce flatulencia, nauseas y estreñimiento.
11
2.3. Farmacoterapia con Fitofármacos
2.3.1. Monascus purpureus Monascus purpureus es una levadura que ha sido utilizada
tradicionalmente en Asia desde la dinastía Tang (Li y cols., 1998; Chang-
Chih y cols., 2006). Se ha utilizado para hacer el vino del arroz, como
preservante de alimentos, para mantener el color y el gusto de pescados
y carnes y, en la medicina tradicional, para problemas relacionados a
dislipidemias. (Heber y cols., 1999).
El proceso de fermentación da una familia de componentes
conocidos colectivamente como monocolinas (Nies y cols., 2006). En
particular la monocolina K, también conocida como lovastatina, la cual
inhibe la síntesis endógena de colesterol. Además contiene 2-6% ácidos
grasos, ácido palmítico, ácido linoleico y ácido estearico (Zhang y cols.,
1998). Al ser la monocolina K un inhibidor de la HMG-Reductasa CoA,
reduce la producción de la enzima Q10 (CoQ10) por lo que es necesario
administrar suplementariamente CoQ10 cuando se use por un tiempo
prolongado (Lyn y cols., 2001).
Estudios en animales han demostrado que Monascus purpureus
disminuye los niveles de colesterol y TG en conejos alimentados con una
dieta aterogénica (Li y cols., 1998). Estudios clínicos randomizados,
doble ciego y placebo controlado en 79 personas con
hipercolesterolemia, han demostrado que a las 8 semanas de terapia con
Monascus purpureus una reducción de 27,7% de LDL, 21,5% de CT y los
15,8% de TG (Lin y cols., 2005). Estudios de meta-análisis demostraron
los efectos de la reducción de CT y TG, administrados durante cuatro a
12 semanas (ocho semanas promedio), observándose continuidad de los
12
efectos hasta la semana 24 (Liu y cols., 2006). Se ha reportado baja
incidencia de efectos adversos, los que incluyen malestar
gastrointestinal, flatulencia, alergias y vértigo (Journoud, 2004).
2.3.2. Commiphora mukul
Commiphora mukul es un árbol de la familia Burseraceae, nativo de
India, y su extracto a sido parte de la medicina holística Ayurvédica por
más de 2.500 años (Firenzuoli y cols., 2003). Se ha utilizado con fines
antirreumáticos, antisépticos, antiinflamatorios y expectorantes, pero lo
más notable es su efecto sobre el metabolismo del colesterol. Diversos
estudios avalan que dicho extracto produce una reducción del colesterol
total, principalmente de la lipoproteína LDL y de los triglicéridos (Meyer y
cols., 2005), en un 10 a 20% (Urizar y cols., 2002).
Commiphora mukul tiene como principio activo las gugulosteronas E
y Z [4,17(20)-pregnadien-3,16-diona] (Urizar y cols., 2003) (Anexo 6),
que explican su efecto hipocolesterolemiante (Wang y cols., 2003). Las
gugulosteronas, además de tener efecto antioxidantes de LDL (Ulbrich y
cols., 2005; Wang y cols., 2004), pueden disminuir la absorción de
colesterol en el intestino, inhibir la secreción de ácidos biliares desde los
hepatocitos, disminuir los niveles de lípidos por inhibición de lipasas
hepáticas y de ciertos receptores que median el catabolismo del LDL y
la síntesis de colesterol hepático (Saxena y cols., 2007). La acción de
las gugulosteronas sobre los receptores nucleares es un aspecto
pivotante en la regulación del metabolismo del colesterol y los ácidos
biliares, ya que éstas actúan como antagonista competitivo del receptor
nuclear farnesoide FXR y del receptor del ácido biliar BAR. El FXR es un
receptor nuclear que regula la expresión de genes involucrados en la
homeostasis del colesterol y la síntesis de ácidos biliares. Para que el
13
FXR actúe, primero debe ser activado por el ácido quenodesoxicólico
(CDCA), por un agonista no esteroidal (GW4064) y por la fexeramina.
Cuando esto ocurre, participa en la regulación de la síntesis de ácidos
biliares, inhibiendo la expresión de algunos genes (colesterol
7α-hidroxilasa y esterol 12α-hidroxilasa), regulando la expresión de
polipéptidos que transportan ácidos biliares (Na+/tarocolato, BSEP,
MDR3 y MRP2), interviniendo en la expresión de proteínas de unión a
ácidos biliares en el intestino y controlando a las lipoproteínas A-I, C-I y
C-III.
La administración de gugulosteronas impiden la activación del FXR,
inhibiendo la acción del CDCA (Meyer y cols., 2005). Cuando el FXR no
es activado, se libera 7α-hidroxilasa que estimula el catabolismo del
colesterol, produce un incremento del metabolismo de ácidos biliares en
el hígado y una reducción del colesterol hepático (Szapary y cols., 2003).
A pesar de los efectos descritos anteriormente para el extracto de
Commiphora mukul, existen autores (Shields y cols., 2005; Sahni y cols.,
2005) que refieren que los cambios producidos sobre los niveles de
colesterol y triglicéridos no son clínicamente relevantes.
14
OBJETIVOS
1. Objetivo general
Determinar si Monascus purpureus tiene mayor eficacia que Commiphora
mukul para disminuir los niveles de triglicéridos y colesterol total en ratas
normales.
2. Objetivos Específicos
• Cuantificar el efecto sobre los niveles plasmáticos de colesterol total y
triglicéridos de Monascus purpureus en ratas normales.
• Cuantificar el efecto sobre los niveles plasmáticos de colesterol total y
triglicéridos de Commiphora mukul en ratas normales.
• Comparar la eficacia hipolipemiante de Monascus purpureus y
Commiphora mukul en ratas normales
HIPÓTESIS
H1: Monascus purpureus posee mayor eficacia que Commiphora mukul en
disminuir los niveles plasmáticos de colesterol total y triglicéridos
15
MATERIALES Y MÉTODOS
1. Método 1.1. Diseño de Investigación: Experimental puro in vivo 1.2. Población de estudio: Ratas Sprague-Dawley. N=12. Criterios de Inclusión:
• Rata (Ratus ratus) cepa Sprage-Dawley
• Ratas macho.
• Perfiles lipídico:
Colesterol total (≤ 200 mg/dl)
Triglicéridos (≤ 150 mg/dl).
• Peso entre 265 y 400 gramos.
Criterios de exclusión:
• Animales que no cumplan con los criterios de inclusión señalados.
• Animales no sanos.
1.3. Diseño Experimental Las ratas fueron asignadas a cada grupo según aleatorización simple. Se
obtuvieron 20 ratas del Bioterio Central del Instituto de Ciencias Biomédicas
(ICBM), de las cuales se seleccionaron 12 ratas que cumplían con los
criterios de inclusión. A cada rata se le asignó un número por sorteo y luego
del mismo modo se conformaron tres grupos experimentales de cuatro
animales cada uno.
16
Grupo 1 (G1): Control.
Se le administró NaCl al 0,9%. Sólo estuvo afectado por las variables
desconcertantes.
Grupo 2 (G2): Tratamiento 1
Se le administró por vía oral Monascus purpureus (150 mg/Kg), diluida en de
2,5 ml/Kg de NaCl al 0,9%, durante 21 días.
Grupo 3 (G3): Tratamiento 2.
Se le administró por vía oral Commiphora mukul (75 mg/Kg), diluida en de
2,5 ml/Kg de NaCl al 0,9%, durante 21 días.
1.4. Variables Variable Independiente: Fitofármaco
Definición Conceptual: Producto de origen animal, vegetal o mineral,
terminado y etiquetado, cuyo ingrediente activo, orgánico o inorgánico,
proviene de plantas, animales o del reino mineral, y que pueden contener
excipientes (Decreto Supremo 1.876, 1996).
Definición Operacional: Administración de Monascus purpureus y
Commiphora mukul (150 mg/Kg y 75mg/Kg respectivamente)
Variable Dependiente: Nivel plasmático de colesterol.
Definición Conceptual: Colesterol en el plasma sanguíneo.
Definición Operacional: Cuantificación de Colesterol total (mg/dl) en sangre
capilar determinada por bioamperometría (Accutrend®GCT, Laboratorio
Roche).
Variable Dependiente: Nivel plasmático de triglicéridos
Definición Conceptual: Triglicéridos en el plasma sanguíneo
17
Definición Operacional: Cuantificación de Triglicéridos (mg/dl) en sangre
capilar determinada por bioamperometría (Accutrend®GCT, Laboratorio
Roche).
Variables Desconcertantes:
• Diferencias inter e intramanipulador durante la aplicación del protocolo
experimental.
• Variaciones individuales del animal de experimentación durante la
aplicación del protocolo experimental.
• Efectos ambientales durante la aplicación del protocolo experimental.
2. Materiales
2.1. Infraestructura física Los experimentos se realizaron utilizando la infraestructura instalada del
Laboratorio de Farmacodinamia y Fitofarmacología, Programa de
Farmacología Molecular y Clínica, Instituto de Ciencias Biomédicas (ICBM),
Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Todos los experimentos fueron
llevados a cabo en la estación de trabajos de animales de experimentación
del Programa de Farmacología Molecular y Clínica, entre las 14:00 y 16:00
horas con luz de día, a 25 ± 1ºC.
2.2. Animales Se utilizaron ratas macho Sprague-Dawley, entre 265 - 400 gramos de
peso, obtenidas del Bioterio Central del Instituto de Ciencias Biomédicas
(ICBM). A cada una de estas ratas, se les asignó aleatoriamente un número,
el que fue marcado en el pabellón auricular. Las ratas habitaron en jaulas
individuales durante el periodo experimental, en el bioterio del laboratorio de
Farmacología Molecular y Clínica. Se mantuvieron con una dieta normal de
18
alimento (Champion Nutrición Animal, Santiago, Chile) y agua
proporcionados ad libitum hasta completar el estudio, de acuerdo a las
normas internacionales dadas por la Guía para el Cuidado y uso de
Animales de Laboratorio, publicada por el National Institute of Health
(Bennett y cols., 1994).
Los animales fueron utilizados una sola vez y no intercambiados entre
grupos. Se les practicó eutanasia, administrando una sobredosis de
Isofluorano en cámara cerrada al experimentador.
2.3. Reactivos y Soluciones Extracto estandarizado de Monascus purpureus y Commiphora mukul
(Laboratorio Garden House S.A., Santiago Chile), NaCl (Sigma- Aldrich, MO,
EEUU) e Isofluorano (Zeneca, Inglaterra). Monascus purpureus y
Commiphora mukul se disolvieron en solución salina 0,9%. Se utilizó NaCl
0,9% como vehículo.
2.4. Equipos e Instrumentos
• Accutrend ®GCT (Laboratorio Roche)
Equipo diseñado para el control de glicemia, colesterol y TG.
Utiliza cintas reactivas reactivas Accutrend® Cholesterol y Triglycerides.
Rangos de lectura: Colesterol: 150-300 mg/dl
Triglicéridos: 70-600 mg/dl.
• Balanza analítica Sartorius (unidad de medición: mg)
• Sonda aguda intraesofágica
• Material quirúrgico ad hoc
19
3. Procedimiento
3.1. Determinación de parámetros básicos Se constataron el peso, la condición de salud del animal (basada en
signología clínica elemental) y los niveles basales de CT y TG.
3.2. Determinación de niveles plasmáticos de CT y TG.
Las determinaciones de los niveles plasmáticos de CT y TG (Anexo 7),
se realizaron en cuatro instancias (T0, T1, T2 y T3), mediante un corte de
2 mm en la punta de la cola con una tijera, para obtener una gota de sangre
capilar, la cual se dejó caer sobre la cinta reactiva que permitió obtener un
resultado mediante bioamperometría (Anexo 8).
3.3. Administración de Fitofármacos y Vehículo
Los fitofármacos Monascus purpureus y Commiphora mukul fueron
administrados todos los días, durante 21 días de tratamiento, mediante una
sonda aguda intraesofágica (Anexo 9), en las siguientes dosis:
150mg/Kg/2,5 ml y 75mg/Kg/2,5ml respectivamente; mientras que al grupo
Control (G1) se le administró todos los días, durante 21 días, un vehículo por
vía oral de 2,5 ml de NaCl al 0,9%.
3.4. Descripción del procedimiento
Las administraciones y determinaciones para todos los grupos
experimentales, se realizaron según la línea de evolución temporal del
protocolo experimental presentada en el anexo 9.
Nuestro experimento se realizó en un periodo total de 22 días, se definió
T0 para el día 1, T1 para el día 8, T2 para el día 15 y T3 para el 22. Las
20
determinaciones de TG y CT, se llevaron a cabo a T0, T1, T2 y T3, mientras
que la administración de ambos fitofármacos y del vehiculo; y las
determinaciones de peso, se efectuaron todos los días desde el inicio del
experimento hasta el día 21. Dichas determinaciones y administraciones se
llevaron a cabo a la misma hora a lo largo del proceso de experimentación
(Anexo 10).
Cada investigador tuvo a su cargo tareas especificas durante todo el
protocolo experimental, uno de ellos realizó la calibración de la balanza
analítica, pesó a los animales y cargó las jeringas, mientras que el otro,
calculaba la dosis de acuerdo al peso y realizaba las determinaciones de CT
y TG, esto es cortar la cola y colocar la muestra de sangre sobre la tira
reactiva. La administración de los fitofármacos y el vehiculo, estuvo a cargo
de un ayudante de laboratorio especializado. Ambos investigadores se
preocupaban de proporcionar alimento y agua ad libitum.
21
RESULTADOS
Para analizar los valores obtenidos en las distintas determinaciones de
cada grupo experimental, se realizó un análisis descriptivo estimando la
mediana, el valor máximo y mínimo (Anexo 12). Para comparar las diferencias
entre los grupos se utilizó la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis y luego
para determinar las diferencias a distintos tiempos dentro de un grupo
experimental, utilizamos las pruebas de Friedman y Wilcoxon.
La figura 1 muestra la evolución temporal de los niveles plasmáticos de
CT (mg/dL) en los grupos Control, Monascus purpureus y Commiphora mukul.
Muestra además la mediana y los valores máximos y mínimos obtenidos de
cada uno de los grupos, a las diferentes determinaciones (T0, T1, T2 y T3).
Al observar esta figura se evidencia una clara tendencia a disminuir la
concentración plasmática de CT en función del tiempo, alcanzando un mínimo
en la última determinación (T3).
La figura 2 muestra la evolución temporal de los niveles plasmáticos de
TG (mg/dL), la mediana y los valores máximos y mínimos obtenidos en cada
uno de los grupos a las distintas determinaciones.
Los niveles plasmáticos de TG (mg/dL) observados en esta figura,
muestran una disminución de todos los grupos respecto de T0, alcanzando un
mínimo en T1 y T2, para luego reflejar una tendencia a aumentar sus valores en
T3.
22
Figura 1. Evolución temporal de las concentraciones plasmáticas de CT de los
grupos experimentales determinados a T0, T1, T2 y T3, correspondiendo T0 al
día experimental 1, T1 al día 8, T2 al día 15 y finalmente T3 al día 22.
23
Figura 2. Evolución temporal de las concentraciones plasmáticas de TG de los
grupos experimentales determinados a T0, T1, T2 y T3, correspondiendo T0 al
día experimental 1, T1 al día 8, T2 al día 15 y finalmente T3 al día 22
24
Inicialmente, cuando los animales fueron asignados aleatoriamente a sus
respectivos grupos experimentales (T0), la determinación de los niveles basales
de colesterol total (CT) y de triglicéridos (TG) no difirió estadísticamente entre
ellos.
Los resultados obtenidos de la comparación entre grupos a los distintos
tiempos para CT no muestran diferencias significativas entre ellos. Sin
embargo, al comparar los valores de TG de los grupos a distintos tiempos, si
hubo diferencias estadísticamente significativas a T1 (p = 0,024), encontrándose
esta diferencia específicamente entre el grupo Control y el grupo tratado con
CM (p = 0,013).
Al realizar la comparación entre los distintos tiempos dentro de un mismo
grupo mediante la prueba de Friedman, se encontraron diferencias
estadísticamente significativas para las concentraciones de CT en los grupos de
tratamiento MP (p = 0,08) y CM (p = 0,021). Para los valores de TG, también
existieron diferencias estadísticamente significativas en el grupo MP (p = 0,017)
y en el CM (p = 0,015).
Finalmente se utilizó la prueba de Wilcoxon para realizar comparaciones
específicas entre los tiempos T0-T1, T0-T2, T0-T3, T1-T2, T1-T3 y T2-T3 para cada
uno de los grupos experimentales, relevando que en ninguna de las
comparaciones existieron diferencias estadísticamente significativas.
En un 35,4% de las determinaciones, los valores de CT y TG
descendieron por debajo del límite de detección del sistema (70 mg/dl para TG
y 150 mg/dl para CT). Dado que resultaba imposible poder precisar con
exactitud el valor de TG y CT en estas circunstancias, decidimos conservar los
datos experimentales y reemplazar las lecturas bajo rango con el valor
inmediatamente inferior al límite de detección; esto es 69 mg/dl para TG y
149 mg/dl para CT.
25
DISCUSIÓN
Diversos estudios sugieren que Monascus purpureus y Commiphora mukul
tienen un efecto importante sobre la disminución de CT y TG, en diferentes
modelos experimentales, pero básicamente en ensayos clínicos con seres
humanos (Li y cols., 2005; Meyer y cols., 2005; Szapary y cols., 2003). Sin
embargo, nuestros resultados se alejaron de lo esperado, esto es que se
observara una disminución de los niveles plasmáticos de TG y CT respecto de
los valores control. Es evidente que si bien se observó dicha disminución en los
lípidos sanguíneos, no es menos cierto que también hubo un cambio en el
grupo Control, por lo cual los cambios en la concentración plasmática de CT y
TG no puede ser atribuida a los fitofármacos MP y CM, hallazgo que coincide
con el de Shields y cols, autor que propone que los cambios producidos por CM
son insignificantes.
Las posibles explicaciones pueden ser varias, sin embargo, creemos que
dos fuentes de variabilidad podrían tener mayor ingerencia.
1. Diseño experimental.
Para poder realizar esta investigación y medir los niveles plasmáticos de
CT y TG de cada uno de los grupos a las distintas determinaciones, utilizamos
el equipo Accutrend ®GCT de Laboratorio Roche (equipo especialmente
diseñado para el control de glicemia, colesterol y triglicéridos). La explicación
más probable de no haber encontrado diferencias estadísticamente
significativas entre el grupo control y los tratados con fitofármacos, y entre MP y
CM, radica en la utilización de un instrumento con rangos de lectura muy
26
pequeños (150-300 mg/dL para Colesterol total y 70-600 mg/dL para
Triglicéridos). Del total de las mediciones realizadas, un 35,4% de ellas no pudo
ser detectada por el instrumento, es decir los valores descendieron bajo el limite
de detección del sistema y se les asignó arbitrariamente un valor
inmediatamente inferior al límite de detección; esto es 149 mg/dL para CT y
69 mg/dL para TG. En varios de estos casos, pudo haber ocurrido que las
concentraciones plasmáticas de CT y TG hayan disminuido mucho más que
149 y 69 mg/dL, y si hubiésemos podido medir estas concentraciones o
hubiésemos utilizado otro instrumento con rangos de lectura más amplios, estos
valores hubieran representado una diferencia estadísticamente significativa.
El diseño experimental del estudio, contemplaba la utilización de ratas
normales en su perfil lipídico, sin inducir hipercolesterolemia por administración
de tiloxapol, por una dieta suplementada con colesterol 3%, o usando ratas
genéticamente hipercolesterolémicas (Berk y cols., 1997; Kurtz y cols., 1989).
Razones presupuestarias no permitieron contar con ratas genéticamente
hipercolesterolémicas. Las dieta suplementada con colesterol 3% implicaba
encargar la preparación especial del alimento en pellet, con una formulación ad
hoc y por una cantidad mínima de media tonelada. Además es importante
recordar que las dietas suplementadas con colesterol 3% tienen un tiempo de
inducción de hipercolesterolemia superior a los seis meses para poder iniciar el
tratamiento (Czakó y cols., 2007).
Por tanto, se intentó determinar el efecto hipocolesterolémico de los
fitofármacos en ratas con perfil lipídico normal. También por consideraciones de
presupuesto acotado, el tiempo de determinación se limitó al mínimo reportado
para observar cambios en la concentración de CT y TG, de acuerdo al
27
mecanismo de acción descrito para los fitofármacos MP y CM (Liu y cols., 2006)
esto es 21 días.
2. Condiciones experimentales.
Las ratas fueron obtenidas del Bioterio Central del ICBM, donde fueron
criadas desde su nacimiento en condiciones que se ajustan a la norma del NIH
para el trabajo con animales de experimentación (Bennett y cols., 1994). En la
estación de trabajo del bioterio del Programa de Farmacología Molecular y
Clínica, las condiciones tienden a ser equivalentes a las del Bioterio Central,
manteniendo los parámetros de temperatura, ciclo de luz, acceso restringido,
agua y alimento disponibles ad limitum. Al analizar los resultados revisamos los
protocolos experimentales y la única diferencia notable dice relación con el
alimento. Las ratas inicialmente fueron alimentadas con pellet para roedores de
la empresa Cisternas® y, en la estación de trabajo, donde se les aclimató por
24 horas y se realizó el procedimiento experimental por 21 días, fueron
alimentadas con pellet de la empresa Champion Nutricion Animal ®. El aspecto
de ambos pellet era claramente distinto en compactación y coloración. No
realizamos análisis químico de los alimentos ni obtuvimos respuesta de la
formulación por parte de las empresas citadas.
Se ha descrito que el estrés puede alterar varias funciones, tanto
neuronales como hormonales, siendo el parámetro más sensible la modificación
del eje renina-angiotensina-aldosterona (Dumont y cols., 1999). El CT y los TG
se modifican en respuesta al estrés, propio de la manipulación y aplicación de
los procedimientos realizados; sin embargo, diversas publicaciones sugieren
que tanto el CT como los TG aumentan su concentración plasmática como
consecuencia del estrés (Agarwal y cols., 1997).
28
Otra fuente de error posible está en las tiras reactivas. Sin embargo
descartamos esta posibilidad ya que se usaron en todas las determinaciones
plasmáticas tiras Accutrend con fecha de caducidad a octubre de 2008, lo que
nos asegura que los resultados arrojados por el instrumento de medición fueran
los correctos.
Finalmente, descartamos que pudiera existir cambio inadvertido de los
animales de experimentación de un grupo a otro, dado que fueron marcados
mediante perforaciones en el pabellón auricular, siguiendo un riguroso protocolo
de registro y habitación en jaulas individuales.
29
CONCLUSIÓN
Nuestros resultados no nos permiten asegurar que Monascus purpureus y
Commiphora mukul tengan un efecto positivo o negativo sobre la concentración
plasmática de colesterol total y triglicéridos. Por lo tanto no se puede afirmar
que Monascus purpureus tiene un mayor efecto hipolipemiante que
Commiphora mukul.
30
PROYECCIONES
Son necesarias futuras investigaciones en las que se empleen
instrumentos o técnicas analíticas con un rango de medición más amplio y un
diseño experimental que mantenga las condiciones en las cuales se puedan
controlar la mayor parte de las variables desconcertantes.
Sugerimos que un futuro seguimiento de nuestra hipótesis de trabajo, se
extienda el diseño para incorporar un grupo al que se le administre MP y CM,
para explorar la posible sinergia hipolipemiante, pues los extractos
estandarizados de MP bajan LDL-colesterol y, CM disminuye LDL-colesterol y
en mayor grado TG.
La finalidad de estas investigaciones debe enfocarse en la necesidad de
dar una alternativa de tratamiento a la enfermedad dislipidemia, a través de la
creación de fitofármacos con acciones hipolipemiamtes, que tengan menores
reacciones adversas que los fármacos alopáticos.
La investigación de los parámetros farmacocinéticos de Monascus
purpureus y Commiphora mukul como absorción, biodisponibilidad,
metabolización, unión a proteínas plasmáticas y toxicidad aumentarían los
conocimientos en general estos fitofármacos, lo cual constituye una de las
principales críticas farmacológicas.
31
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Agarwal, V., B. Gupta, U. Singhal. 1997. Examination stress: changes in serum cholesterol, triglycerides and total lipids. Indian journal of physiology and pharmacology 41(4):404-408
2. Bennett, B., M. Brown, J. Schofield. 1994. Elementos esenciales para la investigación animal. 2º edición, Biblioteca Nacional de Agricultura, Beltsville, Maryland.
3. Berk, P., S. Zhou, C. Kiang. 1997. Uptake of Long Chain Free Fatty Acids Is Selectively Up-regulated in Adipocytes of Zucker Rats with Genetic Obesity and Non-insulin-dependent Diabetes Mellitus. The American Society for Biochemistry and Molecular Biology 272(12): 8830-8835
4. Chang-Chih, C., L. I-Min. 2006. Release of acetylcholine by Hon-chi raise insulin secretion in Wistar rats. Neuroscience Letters 404: 117-121.
5. Charatan F. 2001. Bayer decides to withdraw cholesterol lowering drug. BMJ (Clinical research ed.) 323(7309): 359.
6. Czakó, L., A. Szabolcs, A. Vajda. 2007. Hyperlipidemia induced by a cholesterol-rich diet aggravates necrotizing pancreatitis in rats. European journal of pharmacology 572(1): 74-81
7. Dumont, E., G. Drolet. 1999. Relationship between the central renin-angiotensin system, stress and hypertension. Archives des maladies du coeur et des vaisseaux 92(8) : 11111-1113
8. Firenzuoli, M., L. Gori. 2003. Guggulipid and Colesterol levels. Journal of the American Medical Association 290: 2800-2801.
9. Flórez, J., J. Freijanes. 2003. Farmacología Humana. 4ª edición. Masson, Barcelona, España.
10. Ganong, W.F. 2005. Fisiología Médica. 20ª edición. Manual Moderno, D.F, México.
11. Goodman, A., J. Hardman, L. Limbird. 2003. Las Bases Farmacológicas de la Terapeútica. 10ª edición. Mc Graw-Hill, D.F, México.
12. Gupta E., M. Ito. 2002. Ezetimibe: the first in a novel class of selective cholesterol-absorption inhibitors. Heart disease 4(6): 399-409.
13. Heber D., I. Yip, J. Ashley, D. Elashoff, R. Elashoff, V.Liang. 1999. Cholesterol-lowering effects of a proprietary Chinese red-yeastrice dietary supplement. American Journal of Clinical Nutrition 69: 231-236.
14. Journoud, M., P. Jones. 2004. Red yeast rice: a new hipolipidemic drugs. Life Sciences 74: 2675-2683.
32
15. Kurtz,T., R. Morris, H. Pershadsingh.1989. The Zucker fatty rat as a genetic model of obesity and hypertension. Hypertension 13: 896- 901
16. Li, C., Y. Zhu, Y. Wang, J. Zhu, J. Chang, D. Kritchevsky. 1998. Monascus purpureus (red yeast): A natural product that lowers blood cholesterol in animal models of hypercholesterolemia. Nutrition Research 18 (1): 71-81.
17. Lin, Ch., Li, T., Lai, M. Efficacy and safety of Monascus purpureus went rice in subjects with hyperlipidemia. 2005. European Journal of Endocrinology 153: 679-686
18. Liu J., J. Zhang, Y. Shi, S. Grimsgaard, T. Alraek, V. Fonnebo. 2006. Chinese red yeast rice (Monascus purpureus) for primary hyperlipidemia: a meta-analysis of randomized controlled trials. Chinese Medicine 1(4): 1-13.
19. Lyn P., M. Uzick. 2001. Cardiovascular Disease: C-Reactive Protein and the Inflammatory Disease Paradigm: HMG-CoA Reductase Inhibitors, alpha-Tocopherol, Red Yeast Rice, and Olive Oil Polyphenols. Alternative Medicine Review 6(3): 248-271.
20. Beers, M., R. Berkow. 1999. El Manual Merk. 10ª edición. Harcourt Madrid, España.
21. Meyer, U., G. Costantino, A. Macchiarulo. 2005. Is Antagonism of E12-Guggulosterone at the Farznesiod X Receptor Mediated by a Nonconical Binding Site A molecular Modeling Study. Journal of Medicinal Chemistry 48: 6948-6955.
22. Nies, L., A. Cymbala, S. Kasten, D. Lamprecht, K. Olson. 2006. Complementary and Alternative Therapies for the Management of Dislipidemia. The Annals of Pharmacotherapy 40: 1984-1992.
23. Sahni, S., C. Hepfinger, K. Sauer. 2005. Guggulipid use in hiperlipidemia: Case report and review of the literature. American journal of health-system pharmacy 62: 1960-1962.
24. Saxena, G., S. Pratap, R. Pal. 2007. Guggulipid and extract of Commiphora whighitti with lipid lowering proprties, has protective effects agains streptozotocin induced memory deficits in mice. Pharmacology biochemistry an behavior 86(4): 793-805.
25. Shields, K., M. Moralville. 2005. Guggul for hypercholesterolemia. American Journal of Health-system pharmacy 62(10): 1012-1014.
26. Staprans, I., X. Pan, J. Rapp, A. Moser, K. Feingold. 2006. Ezetimibe inhibits the incorporation of dietary oxidized cholesterol into lipoproteins. Journal of Lipid Research 47: 2575- 2580.
27. Szapary, P., D. Rarder. 2003. Guggulipid and colesterol levels. Journal of the American Medical Association 290: 2802-2803.
28. Toth P., M. Davidson.2005. Cholesterol absorption blockade with ezetimibe. Current drug targets Cardiovascular & haematological disorders 5: 455-462.
33
29. Ulbricht, C., E. Basch, P. Szapary. 2005. Guggul for hiperlipidemia: A review by the natural standard research collaboration. Complementary Therapies in Medicine 13: 279-290.
30. Urizar, N., A. Liverman, D. Dodds. 2002. A natural product that lowers cholesterol as an antagonist ligand for FXR. Science 296: 1703-1706.
31. Urizar, N., D. Moore. 2003. Guggulipid: A Natural Cholesterol-Lowering Agent. Annual review of nutrition 23: 303-313.
32. Valenzuela, A., J. Sanhuesa, S. Nieto. 2002. Óxidos del colesterol: Factores que condicionan su formación, efectos biológicos, y su presencia en los alimentos. Revista Chilena de Nutrición 29:116-124.
33. Wang, X., J. Greilberger, G Ledinski. 2003. The hipolipidemic natural product Commiphora mukul and its component gugulosterone inhibit oxidative modification of LDL. Atherosclerosis 172: 239-246.
34. Wang, X., J. Greilberger, G. Ledinski, G. Kager, B. Paigen, G. Jürgens. 2004. The hypolipidemic natural product Commiphora mukul and its component guggulsterone inhibit oxidative modification of LDL. Atherosclerosis 172: 239-246.
35. Yuan, G., K. Al-Shali, R. Hepele. 2007. Hypertriglyceridemia: its etiology, effects and treatment. Canadian Medical Association journal 176: 1113-1120.
36. Zhang M., Z. Duan. 1998. Active components of Xuezhikang. Chinese Journal New Drugs 7: 213–214.
37. 1.876. Decreto Supremo. Título III de los medicamentos complementarios artículo 70. Diario Oficial de la República de Chile 9 de septiembre de 1996.
34
ANEXOS
Anexo 1 1. Biosíntesis del colesterol
Después de varios procesos Acetil-CoA se transforma a mevalonato mediante
la acción de la enzima Reductasa de HMG-CoA. Seis moléculas de mevalonato
se convierten en escualeno, el cual luego se hidroxila para transformarse en
colesterol (Ganong, 2005).
Anexo 2 Apoproteínas Las apoproteínas son muy importantes porque proporcionan estabilidad
estructural a las lipoproteínas, y diversas apoproteinas funcionan como ligandos
en interacciones entre lipoproteína y receptor, o son cofactores en procesos
enzimáticos que regulan el metabolismo de lipoproteína (Goodman y cols.
2003) Apolipoproteína Concentración
[mg/dl]
Sitios de síntesis Funciones
ApoA-I 130 Hígado, intestino Estructural en HDL; cofactor de
LCAT; ligando para receptor de
HDL; transporte inverso de
colesterol
ApoA-II 40 Hígado Forma complejo con ApoE
ApoB-100 85 Hígado Proteína estructural de VLDL,
IDL y LDL
Acetil CoA -- Aceto acetil CoA -- Acetoacetato -3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA –
Mevalonato – Escualeno -- Colesterol
35
ApoB-48 Fluctúa Intestino Proteína estructural de
quilomicrones
ApoC-I 6 Hígado Activador de LCAT, regula la
unión de remanentes a receptor
ApoC-II 3 Hígado Cofactor de lipasa de
lipoproteína
ApoC-III 12 Hígado Regula la unión de remanentes
a receptor
ApoE 5 Hígado, encéfalo, piel,
gónadas, bazo
Ligando para receptor de LDL y
receptores que unen a
remanentes; transporte inverso
de colesterol
Apo(a) Variable Regulador de Fibrinolisis
Anexo 3 Tipos de lipoproteínas: Principales lipoproteínas.
Qms: Quilomicrones. R: Remanentes
Lipoproteínas
Tamaño
(nm)
Composición % Origen
Proteína
Colesterol
libre
Esteres de
Colesterilo
TGs Fosfolípidos
Qms. 75-1000 2 2 3 90 3 Intestino
R. de Qms. 30-80 capilares
VLDL 30-80 8 4 16 55 17 Higado e
intestino
IDL 25-40 10 5 25 40 20 VLDL
LDL 20 20 7 46 6 21 IDL
HDL 7.5-10 50 4 16 5 25 Higado e
intestino
36
Anexo 4 Valores normales de colesterol CT (mg/dl) LDL (mg/dl) HDL (mg/dl) TG (mg/dl)
Deseable <200 <130 >40 <150
Riesgo bajo 200-239 130-159 <35 >200
Riesgo alto >240 >160 <35 >400
Anexo 5 Tipo de dislipidemias Fenotipo Lipoproteína elevada Lípido elevado
I Quilomicrones TG
IIa LDL Colesterol
IIb LDL-VLDL TG y colesterol
III VLDL y Quilomicrones
remanentes
TG y colesterol
IV VLDL TG
V VLDL y quilomicrones TG y colesterol
Anexo 6 Esqueleto general de gugulosterona
37
Anexo 7 Tabla 1 Determinación temporal de Peso, TG y CT.
Nota: Las determinaciones de los parámetros se realizarán en el tiempo
indicado por (+) en todos los grupos experimentales.
Anexo 8 Accutrend ®GCT (Laboratorio Roche) Equipo diseñado para el control de glicemia, colesterol y TGs Utiliza cintas
reactivas reactivas Accutrend® Cholesterol y Triglycerides.
Rangos de lectura: Colesterol: 150-300 mg/dl; Triglicéridos: 70-600 mg/dl
Material de Muestra: Sangre capilar fresca
Tiempo de reacción: Colesterol: 180 segundos; Triglicéridos: 174 segundos
Parámetro Tiempo (días)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
Peso + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
TGs + + + +
CT + + + +
38
Anexo 9
Esquema temporal del protocolo Experimental
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22T0 T1 T2 T3
A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A D D D D
Números: indican los tiempos destinados al estudio
A: Administración de los Fitofármacos (Monascus purpureus y Commiphora
mukul) y el vehículo a los grupos experimentales correspondientes.
D: Determinación de CT y TG
T0: Determinación basal
T1: 2º Determinación
T2: 3º Determinación
T3: Determinación final
39
Anexo 10 Temporalidad de las intervenciones de cada grupo experimental.
Grupo/
Parámetro
Tiempo (días)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
G1 Nacl
MP
CM
Medición
+
+
+
+ + + + + +
+
+ + + + + + +
+
+ + + + + +
+
G2 Nacl
MP
CM
Medición
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
G3 Nacl
MP
CM
Medición
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Nota: Las intervenciones de cada grupo experimental están señaladas por (+).
40
Anexo 11
FICHA CLÍNICA Grupo:
Numero Rata:
Día Hora Fecha Peso
(gr)
Dosis
(mg/Kg)
TG
(mg/dl )
CT
( mg/dl)
Observaciones:
Otras Observaciones:
41
Anexo 12 Tabla Descriptiva
T0
Grupo
Media Mediana Percentil 50 Máximo Mínimo Desviación Estándar
CM
Par
ámet
ro
CT 174,25 177 177 180 163 7,804912983TG 96,5 98,5 98,5 108 81 11,61895004
MP CT 173,25 173,5 173,5 178 168 4,991659711TG 91 93,5 93,5 105 72 14,07124728
NaCl CT 175 174,5 174,5 182 169 6,480740698TG 110,5 104,5 104,5 150 83 28,87328638
T1
Grupo
Media Mediana Percentil 50 Máximo Mínimo Desviación Estándar
CM
Par
ámet
ro
CT 161,75 165 165 168 149 8,770214745TG 69 69 69 69 69 0
MP CT 164,25 164 164 167 162 2,217355783TG 71 69 69 77 69 4
NaCl CT 166,5 170 170 171 155 7,681145748TG 85,75 82 82 106 73 15,94521872
T2
Grupo
Media Mediana Percentil 50 Máximo Mínimo Desviación Estándar
CM
Par
ámet
ro
CT 149 149 149 149 149 0TG 74,75 74 74 82 69 6,751543034
MP CT 149 149 149 149 149 0TG 93,75 88 88 130 69 25,97915831
NaCl CT 154,75 149 149 172 149 11,5TG 79,75 73,5 73,5 103 69 16,07015868
T3
Grupo
Media Mediana Percentil 50 Máximo Mínimo Desviación Estándar
CM
Par
ámet
ro
CT 149 149 149 149 149 0TG 103,5 104 104 128 78 22,30844384
MP CT 149,25 149 149 150 149 0,5TG 129,5 124 124 160 110 23,86769085
NaCl CT 149,25 149 149 150 149 0,5TG 100,25 93 93 135 80 26,20909511
