UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE … · Universidad Central del Ecuador para que realice la digitalización y publicación de este trabajo de titulación en el repositorio

i

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE ODONTOLOGÍA

CARRERA DE ODONTOLOGÍA

Efecto antimicrobiano del aceite esencial del coriandrum

sativum (cilantro) al 25, 50 y 100% sobre cándida albicans.

Estudio in vitro.

Proyecto de Investigación presentado como requisito previo a la

obtención del título de Odontólogo General

Autora: Chicaiza Chiguano Myrian Elizabeth

Tutor: Dr. Viteri Moya Juan Alberto

Quito, abril 2019

ii

DERECHOS DE AUTOR

Yo, Myrian Elizabeth Chicaiza Chiguano en calidad de autora y titular de los

derechos morales y patrimoniales del trabajo de investigación “EFECTO

ANTIMICROBIANO DEL ACEITE ESENCIAL DEL CORIANDRUM SATIVUM

(CILANTRO) AL 25, 50 Y 100% SOBRE CÁNDIDA ALBICANS. ESTUDIO IN

VITRO”, modalidad presencial, de conformidad de conformidad con el Art.

114 del CÓDIGO ORGÁNICO DE LA ECONOMÍA SOCIAL DE LOS

CONOCIMIENTOS, CREATIVIDAD E INNOVACIÓN, concedemos a favor de la

Universidad Central del Ecuador una licencia gratuita, intransferible y no exclusiva

para el uso no comercial de la obra, con fines estrictamente académicos.

Conservamos a mi/nuestro favor todos los derechos de autor sobre la obra,

establecidos en la normativa citada. Asimismo, autorizo/autorizamos a la

Universidad Central del Ecuador para que realice la digitalización y publicación de

este trabajo de titulación en el repositorio virtual, de conformidad a lo

d ispuesto en e l Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.

El (los) autor (es) declara (n) que la obra objeto de la presente autorización es

original en su forma de expresión y no infringe el derecho de autor de terceros,

asumiendo la responsabilidad por cualquier reclamación que pudiera presentarse por

esta causa y liberando a la Universidad de toda responsabilidad.

Firma:

Chicaiza Chiguano Myrian

CC. 1727500280

[email protected]

mailto:[email protected]

iii

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Yo, Dr. Juan Alberto Viteri Moya, en mi calidad de tutor del trabajo de titulación,

modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por MYRIAN ELIZABETH CHICAIA

CHIGUANO, cuyo título es: “EFECTO ANTIMICROBIANO DEL ACEITE

ESENCIAL DEL CORIANDRUM SATIVUM (CILANTRO) AL 25, 50 Y 100%

SOBRE CÁNDIDA ALBICANS. ESTUDIO IN VITRO”, previo a la obtención de

grado de Odontóloga, consideró que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios

en el campo metodológico y epistemológico, para ser sometido a la evaluación por parte

del tribal examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo

investigativo sea habilitado para continuar con el proceso de titulación, determinado por

la Universidad Central del Ecuador.

En la ciudad de Quito, a los 12 días de marzo del año 2019

DOCENTE-TUTOR

C.C. 1708461908

iv

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL

El tribunal constituido por: Dra. Carolina Santorum y Dr. Juan Pablo Jaramillo luego de

receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del título de

Odontóloga presentado por la señorita MYRIAN ELIZABETH CHICAIZA

CHIGUANO.

Con el título:

“EFECTO ANTIMICROBIANO DEL ACEITE ESENCIAL DEL

CORIANDRUM SATIVUM (CILANTRO) AL 25, 50 Y 100% SOBRE CÁNDIDA

ALBICANS. ESTUDIO IN VITRO”.

Emite el siguiente veredicto:.........................

Fecha: 23 de abril del 2019

Para constancia de lo actuando firman:

Nombre Apellido Calificación Firma

Presidente Dra. Carolina Santorum ................... ...........................

Vocal Dr. Juan Pablo Jaramillo .................. ...........................

v

DEDICATORIA

Dedico esté presente trabajo de investigación a mi Familia, pilar

importante en mi vida. Principalmente a mis padres Sonia y José

por apoyarme siempre en las decisiones que me han llevado

donde me encuentro ahora.

A mi Familia Materna por siempre estar cuando uno más los

necesitaba, a mi tío y primo paterno porque sin ustedes, no

podría haber continuado.

A mis amigos realizados en esta travesía “la vida Universitaria”

por apoyarme y darme ánimos y a todas aquellas personas que

confiaron en mi trabajo, que gracias a ellos saque fuerzas para

seguir.

vi

AGRADECIMIENTO

A mis Padres por siempre brindarme el amor incondicional, por

guiar mi camino, por su esfuerzo de darme la mayor herencia que

me pudieron dar la Educación.

Al Doctor Juan Viteri por guiarme en el presente trabajo de

titulación, por sus enseñanzas y tiempo, convirtiéndose en un

pilar de soporte científico y técnico, sin usted este trabajo no

podría haberse realizado.

A la Dra. Vicky Arias gracias por confiar en mí, por guiarme y

enseñarme nuevas estrategias y tips para ejercer esta hermosa

profesión, con excelencia y paciencia.

vii

ÍNDICE DE CONTENIDOS

DERECHOS DE AUTOR………………………………………………………….i

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN……………...ii

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN……………...iii

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL…………………iv

DEDICATORIA……………………………………………………………………v

AGRADECIMIENTO……………………………………………………………...vi

ÍNDICE DE CONTENIDOS……………………………………………………….vii

LISTA DE TABLAS………..………………………………………………………x

LISTA DE FIGURAS……………………………………………………………….xi

LISTA DE ANEXOS……………………………………………………………….xii

RESUMEN…………………………………………………………………………xiii

ABSTRACT……………………………………………………………………….xiv

INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………1

CAPÍTULO I………………………………………………………………………………2

1. PROBLEMA……………………………………………………………………...2

1.1. Planteamiento del problema………………………………………………………2

1.2. Justificación………………………………………………………………………..3

1.3. Objetivos…………………………………………………………………………...3

1.3.1. Objetivo General…………………………………………………………………..3

1.3.2. Objetivos específicos………………………………………………………………3

1.4. Hipótesis…………………………………………………………………………...4

1.4.1. Hipótesis de investigación H1……………………………………………………..4

1.4.2. Hipótesis nula H0………………………………………………………………….4

CAPÍTULO II………………………………………………………………………………5

2. MARCO TEÓRICO……………………………………………………………….5

2.1. Microbiología bucal……………………………………………………………….5

2.1.1. Cándida albicans…………………………………………………………………...6

2.1.1.1. Taxonomía………………………………………………………………………....7

2.1.1.2. Características microbiológicas……………………………………………………7

2.1.1.3. Características metabólicas………………………………………………………...8

2.1.1.4. Características genéticas…………………………………………………………...8

2.1.1.5. Factores de virulencia………………………………………………………………9

2.1.1.6. Candidiasis…………………………………………………………………………10

2.1.1.7. Clasificación Candidiásica oral…………………………………………………….11

2.2. Farmacología antimicótica…………………………………………………………13

2.2.1. Antifúngicos tópicos………………………………………………………………..14

2.2.1.1. Nistatina……………………………………………………………………………14

2.2.2. Antifúngicos sistémicos…………………………………………………………….15

viii

2.2.3. Agentes Antifúngicos alternativos………………………………………………….15

2.3. Botánica…………………………………………………………………………….15

2.3.1. Riqueza botánica del Ecuador………………………………………………………15

2.3.2. Coriandrum sativum………………………………………………………………..16

2.3.2.1. Descripción……………………………………………………………………...16

2.3.2.2. Composición química…………………………………………………………...17

2.3.2.3. Taxonomía………………………………………………………………………17

2.3.2.4. Hábitat………………………………………………………………………......18

2.3.2.5. Usos terapéuticos……………………………………………………………..…18

2.3.2.6. Efectos adversos o tóxicos…………………………………...……………..….20

2.4. Fitoterapia…………………………………………………...……………..…..20

2.4.1. Preparado fito-terapéutico…………………………………...…………..……..21

2.4.2. Aceites esenciales……………………………………………………….……...21

2.4.2.1. Propiedades físicas……………………………………………………………..21

2.4.2.2. Obtención de los aceites esenciales………………………………….…………22

2.4.2.2.1. Destilación por arrastre de vapor de agua………………………….…………..22

2.4.2.2.1.1. Descripción………………………………………………...….……………….22

2.4.2.2.1.2. Ventajas…………………………………………………...….………………..23

2.4.2.2.1.3. Desventajas……………………………………………...….………………….23

CAPÍTULO III………………………………………………………………………………24

3. METODOLOGÍA……………………………………………………………………….24

3.1. Diseño de la investigación………………………………………………………………24

3.2. Población de estudio y muestra…………………………………………………………24

3.3. Criterios de Inclusión y exclusión…………………………………………...………….25

3.3.1. Criterios de Inclusión……………………………………………………………….25

3.3.2. Criterios de Exclusión………………………………………………………………25

3.4. Conceptualización de variables…………………………………………………………25

3.4.1. Variable dependiente……………………………………………………………….26

3.4.2. Variable independiente……………………………………………………………..26

3.4.3. Variables de control………………………………………………………………...26

3.5. Definición operacional de las variables…………………………………………………27

3.6. Estandarización………………………………………………………………………….28

3.7. Manejo y métodos de recolección de la información……………………………………28

3.7.1. Recursos humanos………………………....………………………………………..29

3.7.2. Recursos utilitarios………………………………………………………………….30

3.8. Diseño de la Investigación………………………………………………………………31

3.8.1. Recolección de las semillas de coria.um sativum…………………………………..31

3.8.2. Lavado y secado de las semillas coriandrum sativum……………………………...31

3.8.3. Proceso de obtención del aceite esencial…………………………………………...32

3.8.4. Dilución de las distintas concentraciones……………………………………..……33

3.8.5. Medio de cultivo…………………………………………………………..………..34

3.8.6. Activación de la cepa…………………………………………………...…………..35

3.8.7. Patrón de turbidez de McFarland…………………………………...………………35

3.8.8. Rotulación de las cajas Petri para la posterior inoculación…………………………36

3.8.9. Inoculación bacteriana para la experimentación…………...……………………….37

3.8.10. Aplicación de las concentraciones del aceite control positivo y control negativo.....37

3.8.11. Incubación de las muestras……………………………...………………………......39

3.8.12. Medición de los halos de inhibición………………..………………………………39

3.8.13. Manejo de bioseguridad y control……………...………………………………..…40

3.8.14. Eliminación de desechos……………………………………………………………40

ix

3.9. Aspectos bioéticos………………………………………………………………………41

3.10. Riesgos potenciales del estudio…………………………………………………….41

3.11. Beneficios potenciales del estudio………………………………………………….41

3.12. Idoneidad, ética, experticia del investigador……………………………………….42

3.13. Declaración de conflicto de intereses………………………………………………42

CAPÍTULO IV……………………………………………………………………………..43

4. ANÁLISIS E INERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS………………………....43

4.1. Análisis estadísticos…………………………………………………………………....44

4.1.1. Prueba de normalidad……………………………………………………………...44

4.1.2. Prueba no paramétrica, Kruskal Wallis………………….………………………...45

4.2. Discusión……………………………………………………………………………....50

CAPÍTULO V………………………………………………………………………….…..52

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES………………………………………52

5.1. Conclusiones………………………………………………………………………….52

5.2. Recomendaciones……………………………………………………………………..52

BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………….54

ANEXOS………………………………………………………………………………….58

x

LISTA DE TABLAS

Tabla No. 1 Resultados de los halos de inhibición a las 72 horas

Tabla No. 2 Resultados de Prueba de Normalidad

Tabla No. 3 Comparación entre todas las sustancias: Kruskal Wallis

Tabla No. 4 Subconjuntos Homogéneos (Resumen)

Tabla No. 5 Sensibilidad de las sustancias

xi

LISTA DE FIGURAS

Figura No. 1 Recolección de la planta Coriandrum Sativum (cilantro)

Figura No. 2 Lavado y secado de la planta

Figura No. 3 Trituración de la semilla seca de la planta

Figura No. 4 Equipo de destilación por arrastre de vapor con semillas trituradas

Figura No. 5 Concentraciones de Aceite esencial de coriandrum sativum

Figura No. 6 Elaboración del Agar Dextrosa Sabouraud

Figura No. 7 Activación de la Cepa

Figura No. 8 Obtención del Patrón de Turbidez de McFarland

Figura No. 9 Rotulación de a caja Petri

Figura No. 10 Inoculación de la cepa

Figura No. 11 Colocación de los discos en cada una de las soluciones

Figura No. 12 Incubación de la muestra

Figura No. 13 Medición de los halos

Figura No. 14 Cabina de seguridad Biológica

Figura No. 15 Manejo de desechos previo a esterilización

Figura No. 16 Comparación de medias entre sustancias

Figura No. 17 Prueba no paramétrica de Krukal Wallis

Figura No. 18 Prueba dos a dos entre sustancias

Figura No. 19 Sensibilidad de las sustancias

xii

LISTA DE ANEXOS

Anexo No. 1 Factura de la compra de la cepa de Cándida Albicans ATCC®10231™

Anexo No. 2 Aceptación de tutoría.

Anexo No. 3 Coincidencia; Tema del trabajo de titulación.

Anexo No. 4 Inscripción del Tema de Tesis con Aceptación.

Anexo No. 5 Oficio a uso de laboratorio y asesoramiento de la Facultad de Química

Anexo No. 6 Oficio para uso de laboratorio de Microbiología de la Facultad de

Odontología.

Anexo No. 7 Aprobación del tema en el departamento de SEISH-UCE

Anexo No. 8 Certificado de Supervisión del Bioquímico Farmacéutico.

Anexo No. 9 Certificado de calidad de la cepa.

Anexo No. 10 Recomendaciones de activación y uso de la cepa.

Anexo No. 11 Normas del manejo de desechos del Ministerio de Salud la cual se rige

en la FOUCE

Anexo No. 12 Certificado de la supervisión del Doctor del Laboratorio de

Microbiología de la Facultad de Odontología.

Anexo No. 13 Idoneidad, ética y experticia del investigador y tutor.

Anexo No. 14 Conflicto de interés del investigador y tutor.

Anexo No. 15 Certificado del Urkund

Anexo No. 16 Certificado de traducción del Abstract

xiii

Tema: Efecto antimicrobiano del aceite esencial del coriandrum sativum (cilantro)

al 25, 50 y 100% sobre cándida albicans. Estudio in vitro.

Autora: Chicaiza Chiguano Myrian Elizabeth

Tutor: Juan Alberto Viteri Moya

RESUMEN

Las plantas han beneficiado al hombre desde los principios del tiempo, muchas de ellas

tiene distintos usos, en cambio otras solo son empleadas en un fin, desconociendo sus

demás propiedades, por ello elegimos al coriandrum sativum (cilantro) como planta

objeto de estudio corroborando la acción antimicrobiana del aceite esencial al 25, 50 y

100% de concentración extraído de ella, frente a la cándida albicans ATCC ®10231™ ,

un microorganismo que se encuentra en la flora normal de la boca, que cuando se rompe

el equilibrio de este ecosistema puede causar enfermedades como la candidiasis y sus

variaciones.

La metodología de la investigación fue la siguiente para obtener el aceite esencial se

consiguió mediante la técnica de destilación por arrastre de vapor de las semillas secas,

en cambio para determinar la sensibilidad utilizamos el método Kirby-Bauer que

consiste en conseguir el Microorganismo con su certificado de autenticidad, activarlo e

inocularlo, en cajas Petri con agar Dextrosa Sabouraud 4% Merck, y colocar los discos

con cada una de las concentraciones, el control positivo que es la nistatina y el control

negativo que el suero fisiológico, en total 5 discos por cada caja Petri.

Se las incubo a una temperatura de 37ºC por 72 horas, después medimos los halos de

inhibición cuyos resultados fueron que el aceite esencial al 100% es el que tiene una

actividad antimicrobiana similar al Control positivo.

PALABRAS CLAVES: CORIANDRUM SATIVUM, CANDIDA ALBICANS,

ACEITE ESENCIAL, ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA

xiv

Tittle: Antimicrobial effect of the essential oil of the coriandrum sativum

(coriander) at 25, 50, and 100% against the candida albicans. study in vitro.

Author: Chicaiza Chiguano Myrian Elizabeth

Tutor: Juan Alberto Viteri Moya

ABSTRACT

Plants have benefited humanity since the beginning of time, many of them have

different uses, while others are only used in one end, ignoring their other properties, so

we chose Coriandrum Sativum (coriander) as the plant object of study which

corroborates the antimicrobial action of the essential oil at 25, 50 and 100%

concentration extracted from it, compared to the candida albicans ATCC ®10231 ™, it

is a microorganism found in the normal flora of the mouth, when the balance of this

ecosystem is broken, It can cause diseases such as candidiasis and its variations.

The methodology of the research to obtain the essential oil, the technique of steam

distillation of dry seeds was applied, however to determine the sensitivity we use the

Kirby-Bauer method that consists of getting the Microorganism with its certificate

Authenticity, activate it and inoculate it, in Petri dishes with agar; Agar Dextrose

Sabouraud 4% Merck, and place the discs with each of the concentrations, the positive

control that is nystatin and the negative control that the physiological saline, in total 5

discs for each Petri dish.

We incubated them at 37ºC temperature for 72 hours, then we measured the inhibition

zones whose results were that the 100% essential oil that is the one that has an

antimicrobial activity similar to the positive control.

KEYWORDS: CORIANDRUM SATIVUM, CANDIDA ALBICANS, ESSENTIAL

OIL, ANTIMICROBIAL ACTIVITY

Yo, CERTIFICO que esta traducción es fiel copia del original en español.

I CERTIFY that the above is a true and correct translation from the document in Spanish.

18 Marzo/March 2019.

MSc. Nancy Jacqueline Sangoluisa Sangoluisa

TRADUCTOR/TRANSLATOR

CI:1715374276 Cel.: 0997475991

SENESCYT 1005-2016-173989

1

INTRODUCCIÓN

El Ecuador, país privilegiado rico en flora y fauna, posee gran variedad de plantas,

de las cuales desconocemos sus propiedades, especialmente sobre

microorganismos que nos causan enfermedades, como la cándida albicans que se

encuentra con frecuencia en la boca y relacionado con varias patologías fúngicas

bucales.

Existe evidencia científica gracias a investigaciones realizadas por Lalitha

mencionado que el aceite esencial del coriandrum sativum demostró ser bactericida

contra S. typhi y bacteriostático contra E. coli., esta propiedad se la atribuye al

componente principal del aceite, Linalool. (15).

Gracias a esta información nos propusimos a identificar el efecto antimicrobiano del

aceite esencial del coriandrum sativum al 25%, 50% y 100% de concentración sobre

la cándida albicans ATCC ®10231™ cultivadas en agar Dextrosa Sabouraud.

El aceite esencial se conseguirá mediante la técnica de destilación por arrastre de

vapor de las semillas secas, el Microorganismo se obtendrá en Medibac con su

certificado de autenticidad, se activará y usará el método Kirby-Bauer para

determinar la sensibilidad al aceite esencial.(40)

Las distintas concentraciones se colocarán en discos de papel, así como la nistatina

control positivo y agua destilada como control negativo, correspondiendo a 5 discos

en cada caja Petri, 15 muestras en total. Luego se colocarán en la incubadora por un

tiempo de 72 horas a 37 °C. Se Obtendrá datos midiendo el halo de inhibición de

los discos que serán registrados en el programa Excel y analizados por medio del

programa estadístico SPSS.

Con este estudio incentivaremos a nuevas investigaciones sobre plantas de uso

común y endémicas de fácil acceso, a que las Universidades del Ecuador sean

testigos de nuestro interés y puedan en un futuro aprobarnos patentes para crear

productos a base de plantas.

2

CAPÍTULO I

1. PROBLEMA

1.1.PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La cándida albicans se considera como uno de los patógenos fúngicos más comunes

de los seres humanos, que pueden producir infecciones superficiales de la piel y

mucosas, incluso infecciones sistémicas, Höfs incluso aseguró que son la cuarta

causa de infecciones nosocomiales a nivel sanguíneo en los Estados Unidos (10).

Muchos investigadores le atribuyen su capacidad patogénica a la formación de

biopelículas, Pozo incluso mencionó que muchos biodispositivos médicos pueden

actuar como sustrato para el desarrollo de biopelículas (41), a nivel bucal estos

dispositivos pueden ser las prótesis removibles y totales (42).

Millsop y Patil mencionaron que existen factores locales y sistémicos que puede

conducir a que las biopelículas de cándida albicans adquieran patogenicidad entre

ellas tenemos Xerostomía, estado nutricional, consumo de tabaco, trastornos

inmunes, endocrinos y congénitos entre otros (21) (27). Por ello se ve la necesidad

de buscar alternativas de tratamiento como es el uso de productos naturales como el

aceite esencial del coriandrum sativum.

Existe ya evidencia de la acción antimicrobiana del aceite esencial del coriandrum

sativum ya que Delaquis examinó esta propiedad ante microorganismos de la

putrefacción de alimentos tanto gram positivos como gram negativos (13).

Matasyoh mencionó que la acción letal del aceite esencial del cilantro puede deberse

a su gram capacidad de romper la barrera de permeabilidad de la membrana celular

y la pérdida de control quimiosmótico (43). Existe relación entre las propiedades de

los aceites esenciales y las condiciones del suelo, el medio ambiente en donde se

desarrollaron las plantas de donde se obtienen (34).

Teniendo toda esta evidencia científica publicada en la actualidad, se requiere

conocer si ¿existirá efecto antimicrobiano del aceite esencial del coriandrum

sativum 25, 50 y 100% de concentración ante la cándida albicans ATCC ®10231™?

3

1.2.JUSTIFICACIÓN

Nobile mencionó que la cándida albicans se ha relacionado con un sin número de

enfermedades que afectan al ser humano, siendo importante resaltar una como la

candidiasis de la cavidad oral, produciendo principalmente incomodidad, ardor,

dolor e incluso halitosis a los pacientes. (24).

Se desea realizar esta investigación con el objeto de obtener mayor información

sobre la existente propiedad antimicrobiana del aceite esencial de la coriandrum

sativum, al 25, 50, 100 % de concentración, especialmente sobre microorganismos

propios de la boca, en este caso la cándida albicans ATC 10231™.

Buscando beneficiar a investigadores, aportando evidencia científica sobre esta

propiedad antimicrobiana para futuros proyectos farmacológicos y sus afines,

cambiando o siendo alternativa de plan de tratamiento, la utilización misma del

aceite esencial de la coriandrum sativum. Ayudando a resolver o controlar las

posibles enfermedades que causa este microorganismo a nivel oral y corporal.

1.3.OBJETIVOS

1.3.1. OBJETIVO GENERAL

Identificar el efecto antimicrobiano in vitro del aceite esencial del coriandrum

sativum sobre la cándida albicans.

1.3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

- Comprobar la actividad antimicrobiana del aceite esencial del coriandrum

sativum sobre cepas de cándida albicans ATCC ®10231™ en una

concentración del 25%.

4







1.4.HIPÓTESIS

1.4.1. HIPÓTESIS DE INVESTIGACIÓN H1: El aceite esencial de la planta

coriandrum sativum posee actividad antimicrobiana sobre cándida albicans.

1.4.2. HIPÓTESIS NULA H0: El aceite esencial de la planta coriandrum sativum no

posee actividad antimicrobiana sobre cándida albicans.

5

CAPITULO II

2. MARCO TEÓRICO

2.1.MICROBIOLOGÍA BUCAL

La microbiología bucal se refiere al estudio de los microorganismos que viven o que

realiza alguna de las etapas biológicas en la cavidad oral, y las interacciones con el

medio en el que habitan. Perturbaciones en este medio puede ser o no responsable

de ciertas patologías que se encuentran en los diferentes órganos que la constituyen

(1).

Scannapieco menciona que los microorganismos que viven o se encuentran en la

cavidad oral son fascinantes y únicos, ya que realizan todas o algunas de sus

funciones vitales en diferentes áreas como mucosa bucal, lengua, encía, paladar duro

y blando, piso de boca, tejidos duros como los dientes, que están en contacto

constante con el ambiente externo y con la saliva que contiene componentes

químicos de defensa inmunitarios como no inmunitarios que controlan la población

microbiológica.

La población microbiológica de la boca es la segunda más diversa después del

intestino delgado, existen aproximadamente 700 especies de microrganismos, entre

ellos, virus, hongos, bacterias, protozoarios. Está diversidad es adquirida al

momento en que nacemos, ya que la boca está expuesta al medio ambiente, por el

simple hecho de respirar, hablar, comer, besar estamos modificando este

microbioma (7).

Estos microrganismos bucales se los encuentra de dos maneras: los de libre

flotación que se encuentran en la saliva que es aproximadamente el 1 % y aquellos

que se adhieren a las diversas superficies de esta cavidad el 99% (32). Los que se

adhieren a superficies forman la llamada biopelícula o biofilm ya que las superficies

de la boca ofrecen un sustrato al cual estos se pueden adherir, denominada película

adquirida compuesta por lípidos, proteínas, carbohidratos, ácidos nucleicos que

provienen principalmente de la saliva, el líquido crevicular y productos producidos

por bacterias (7).

6

Pero este microbioma bucal se encuentra en simbiosis con el ser humano, es decir

coexistimos en una asociación continua para beneficiarnos mutuamente, por lo

tanto, los microrganismos de la boca nos ayudan en ciertos procedimientos

biológicos que nosotros por si solos no podemos, como por ejemplo la conversión

de los nitratos en nitritos, gracias a la oxido reductasa que estos generan. Los

nitritos nos ayudan a mantener una buena salud cardiovascular y a la generación del

moco gástrico (7).

Pero este estado de simbiosis que nos proporciona una buena salud bucal puede

verse perturbado y romperse, manifestándose con el aumento y diversificación de

las poblaciones celulares microbiológicas generando patología orales. Esto puede

suceder por una dieta rica en carbohidratos o deficiente de frutas y vegetales, el

estrés, la inmunodeficiencia del huésped, etc.

2.1.1. CÁNDIDA ALBICANS

Microrganismo que hace parte del microbioma oral, que pude dar lugar a

infecciones cuando la inmunidad del huésped se ve afectada, aquejando

mayormente a la mucosa del cuerpo y hasta originando afecciones sistémicas

(20). Lockhart aseguró que la prevalencia de cándida albicans es mayor en

adultos mayores, embarazadas, enfermos con diabetes, pacientes con

inmudeficiencia, portadores de prótesis totales o parciales, o pacientes que están

en tratamiento con antibióticos u corticoides (19).

Tsui et al menciona que la cándida albicans es un hongo dimorfo, que tiene la

capacidad de pasar de levadura células individuales ovaladas a formar hifas

células filamentosas unidas de extremo a extremo, una estrategia que utiliza para

poder formar parte de la película adquirida facilitando así su virulencia. Se

considera que las hifas intervienen facilitando la adhesión y la invasión de otros

tejidos (20). Se cree que cambio de la morfología de este microorganismo tiene

que ver con la temperatura del ambiente en el que se encuentra: permanece

como levadura a una temperatura de 37°C y toma la forma de hifas a 25 °C (11).

7

La cándida albicans es una colonizadora inicial del cuerpo humano que es

resistente al medio externo, se encuentra en todas las membranas del cuerpo y en

especial del sistema digestivo y reproductor, la cual hasta la actualidad no

conocemos que beneficios da al cuerpo cuando esta se encuentra en simbiosis,

ya que las investigaciones se han centrado más a las patologías que esta causa

(28).

2.1.1.1.TAXONOMÍA

La Taxonomía se refiere a la ciencia de la clasificación científica que se aplica a

cualquier organismo vivo para facilitar su estudio.

La especie Cándida albicans pertenece:

Dominio: eucariota

Reino: Fungi

Filo: deuteromycota

Subfilo: Deuteromicotina

Clase: Deuteromycetes

Orden: Blastomycetidae

Familia: Criptococcaceae

Género: Cándida (40).

2.1.1.2.CARACTERÍSTICAS MICROBIOLÓGICAS

Struthers menciona que los hongos son eucariotas, que poseen pared celular que

contiene 1,3 betaglucano, quinina y pequeñas cantidades de otros carbohidratos,

y se caracterizan por su membrana celular que utiliza como esteroide al

ergosterol que es blanco de antifúngicos. La Cándida albicans es un

microorganismo anaerobio, Gram positivo, levaduriforme (36).

Vistas bajo el microscopio óptico la cándida albicans, se puede encontrar en

forma de levadura sus células son redondeadas u ovaladas, de un tamaño

8

aproximado de 3-8 x 2-7 micras de tamaño, pero cuando están en forma de hifas

sus células se tornan alargadas tomando la apariencia de filamentos, y una forma

intermedia entre las dos que se conoce como dimorfismo (11).

Pardi y Cardozo manifiestan que en agar sabouraund y otros cultivos similares,

las colonias crecen lisas, suaves, húmedas, de color y aspecto cremoso, cuyo

tamaño oscila entre 1,5 a 2mm, de consistencia blanda en forma de levadura que

proyecta sus hifas hacia el interior del agar. Cuando estas colonias crecen in

vitro lo deben hacer en un ambiente de aerobiosis, en un pH que oscile entre 2,5-

7,5 a una temperatura entre 20 y 38°C, su crecimiento se puede evidenciar

después de 24 a 72 horas (26).

2.1.1.3.CARACTERÍSTICAS METABÓLICAS

El metabolismo de la cándida albicans, depende mucho del lugar donde estas se

encuentren, la morfología que está presente por ende con la patogenicidad de la

misma y la presencia de antibióticos u antimicóticos que se presenten en el

medio que ella habite. Existe una relación directa entre el metabolismo de los

carbohidratos y la morfología de la cándida albicans, a mayor presencia de

carbohidratos en su medio, mayor es la capacidad de formas hifas o biopelículas

que serán explicadas más adelante. En cambio, el metabolismo de los

aminoácidos y lípidos tiene poca importancia para el crecimiento de este

microorganismo (26).

2.1.1.4.CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS

McManus aseguró que el genoma de la cándida albicans consta de ocho pares de

cromosomas homólogos. Esta especie se caracteriza especialmente en ser

diploide, y tener una gran capacidad de plasticidad es decir de cambiar su

genoma, hasta de realizar reordenamientos cromosómicos, dependiendo de las

condiciones ambientales a la que estén expuestas (20).

9

McManus afirma que la reproducción de este microorganismo es clonal pero

también puede utilizar un ciclo parasexual (20). Este ciclo se caracteriza por

implicar cambios en el número de cromosomas y asemejarse a la reproducción

sexual (3).

2.1.1.5.FACTORES DE VIRULENCIA

Existen ciertas cualidades propias de este microrganismo, que ayudan a su

patogenicidad, como las siguientes:

Morfogénesis

Höfs confirma que la transformación de levadura a hifa representa el factor de

virulencia más importante de la cándida albicans. Ambas formas tienen

importancia para la patogenicidad, las levaduras que se encuentran libre ayudan

a la diseminación en distintos lugares para su infección, mientras que las hifas

son más invasivas contribuyendo al daño tisular del huésped (10). Paulain

asegura que etas distintas formas en las que se presenta son adoptadas

dependiendo las condiciones ambientales como: pH, temperatura, composición

del medio, presión del CO2, etc (28).

Adhesión y formación de biopelículas

Rivera explicó que esta es la una fase importante para el inicio de la formación

de biopelícula de cándida albicans, esto comienza cuando la levadura se adhiere

a la superficie tisular, y en al cabo de 8 -11 horas se encuentra en etapa

temprana, intermedia de 12 a 30 horas y madura a las 38-42 horas. Cuando está

madura posee una red densa de hifas, seudohifas, levaduras, recubierta por

matriz extracelular y asociada a bacterias (29).

Nobile menciona que la formación de la biopelícula de cándida albicans consta

de cuatro etapas temporales: adherencia a una superficie, proliferación para

10

formar una capa basal de anclaje de células, crecimiento de seudohifas e hifas,

dispersión lenta de células (levadura) para sembrar nuevos sitios (24)(38).

Höfs argumenta que la unión a la célula huésped, se da por medio de las

adhesinas que posee la cándida para poderse adherir a las células hospedadoras,

así también como las fuerzas de Vanders Waals y las interacciones hidrofóbicas

(10).

Matriz extracelular

Las biopelículas maduras de la cándida albicans están encerradas en un material

complejo conocido como matriz extracelular (24). Se ha encontrado formando

parte de ella carbohidratos, proteínas, ácidos nucleicos, glucosa, fósforo y ácido

urónico. Además, se le atribuye la capacidad de resistir a fármacos específicos

por la síntesis de B 1-3 glucano que se realiza en ella (14).

Capacidad invasora de hifas

Höfs menciona que durante la patogenia de la cándida albicans se puede

observar un cierto grado de invasión de las células huésped, las hifas se pueden

encontrar intracelularmente, lo que demuestra que esta forma es la más invasiva,

para penetrar el epitelio las hifas deben hacerlo más rápido que la descamación

normal de la piel, para evitar su desprendimiento (10).

Para la invasión la cándida utiliza dos mecanismos que son: la endocitosis

inducida que es utilizada por las células hospedadoras independiente de la

viabilidad de la célula de la cándida, y la penetración activa impulsada por los

hongos independientemente si la célula huésped este viva o no. Esto

especialmente se da en el epitelio oral, por las características del mismo (10)

(38).

11

2.1.1.6.CANDIDIASIS

García afirmó que el término candidiasis corresponde a infecciones micóticas

oportunistas más comunes que afectan a la cavidad oral del ser humano. (9).

Estas son causadas principalmente por la cándida albicans que se encuentra

formando parte la microbiología oral aproximadamente entre el 30 y 50 % de las

personas portan este microorganismo (35).

Esta enfermedad se presenta más a los extremos de la edad; generalmente el 5-

7% de los niños desarrollan candidiasis oral, la prevalencia en pacientes con sida

está entre el 9-31% y en el 20% de pacientes con cáncer (35).

Millsop describió que la candidiasis oral se presenta en dos formas blancas que

se desprenden fácilmente o eritematosa con intensa inflamación (21).

Existen factores tanto locales como sistémicos que puede presentar los seres

humanos que pueden conducir a la cándida de comensal a patógena (21). Entre

los factores locales tenemos: disfunción de las glándulas salivales como la

xerostomía, el uso de prótesis dentales, medicamentos tópicos, el tabaco, la dieta

rica en carbohidratos. Mientras que los factores sistémicos tenemos: la edad, el

estado nutricional, el uso prolongado de fármacos sistémicos como los

antibióticos, desordenes endocrinos, trastornos inmunes, quimioterapia,

radioterapia, y las condiciones congénitas (21) (27).

García recomendó que el diagnóstico de la candidiasis oral se realice

clínicamente basándose en el reconocimiento de las lesiones por parte del

profesional y confirmarse con la identificación microscópica de cándida. Entre

las técnicas disponibles están frotis citológico, el cultivo de los microorganismos

y la biopsia que está indicada para los casos hiperplásicos porque este tipo

pueden presentar displasias (9).

2.1.1.7.CLASIFICACIÓN CANDIDIÁSICA ORAL

Esta clasificación es según Parihar la cual será manifestada a continuación: (27)

12

Agudas: Pseudomembranosa y eritematosa.

Crónicas: eritematoso, pseudomembranoso, hiperplásico o nodular.

Lesiones asociadas a cándida: estomatitis subprotésica, queilitis angular,

glositis romboidal media.

Candidiasis Pseudomembranosa

Se presenta en las superficies orales como placas cremosas confluentes de color blanco

o amarillo blanquecino que se asemejan a cuajadas de leche o requesón. Estas placas

consisten en células epiteliales descamadas, agregados enmarañados de hifas, fibrina y

material necrótico, esta placa se puede eliminar con el frotis, pero deja una superficie

eritematosa sangrante. Los síntomas de la forma aguda son leves y los pacientes indican

que solo sienten hormigueos y un sabor desagradable con juntamente con mal aliento

(27).

Candidiasis eritematosa

Se presenta en las superficies de la cavidad oral como parches eritematosos dolorosos

que se presentan mayormente en el paladar duro, pero también se pueden encontrar en

la mucosa bucal o la cara dorsal de la lengua, puede estar acompañada de atrofia de las

papilas. Se ha relacionado directamente con el uso continuo de antibióticos y

corticoides, el VIH, la diabetes no controlada, la anemia y deficiencia de vitamina B12

(21). El diagnóstico diferencial debe realizarse con estomatitis protésica, eritema

migratorio, quemaduras térmicas y eritroplaquia (27).

Candidiasis hiperplásica o nodular

Otero aseguró que esta es la menos común de todas las candidiasis orales, se caracteriza

ya que sus placas blancas no se desprenden al raspado, persisten con el tiempo y tienden

a encontrarse en mucosa yugal retromolar, lengua, paladar y labios. Se distinguen dos

formas la homogénea que es uniforme adherente y asintomático; y la forma nodular,

dolorosa con presencia de nódulos blanquecinos en una mucosa eritematosa. Sugirió

realizar siempre en esta candidiasis la biopsia para diferenciarlas de otros procesos (25).

13

Estomatitis subprotésica

Shankargouda Patil menciona que también es conocida como candidiasis atrófica

crónica, que se caracteriza por una inflamación crónica de la mucosa, restringida al

área que ocupa la prótesis dental. Clínicamente las lesiones se pueden observar como

hiperemia puntual, tipo eritematoso difuso o granular, generalmente asintomáticas pero

el paciente se puede quejar de dolor y ardor (27)

Queilitis angular

También es conocida como boquera o perleche, clínicamente se presenta como parches

eritematosos y fisurados bilaterales a lo largo de la comisura de la boca, con formas

costrosas a su alrededor, el paciente puede presentar un dolor intenso, con afección de la

capacidad funcional propia de los labios (21) (25).

Glositis romboidal media

Millsop aseguró que esta patología se presenta clínicamente como un parche simétrico

eritematoso, con forma romboidal, despapilada (21). Localizado típicamente en la línea

media de la lengua, se presenta lisa o lobulada, asintomática, pero puede existir dolor,

plurito o irritación se ve comúnmente en fumadores y usuarios de esteroides inhalados

(27).

2.2.FARMACOLOGÍA ANTIMICÓTICA

Shankargouda Patil afirma que existen tres categorías de agentes antifúngicos para

el tratamiento de la candidiasis: los polienos conformados por la nistatina y

anfotericina B; los inhibidores de la biosíntesis de ergosterol como los azoles,

alilaminotestiocarbamatos y morfolinas; y análogo de ADN 5- flurocitosina y

agentes más nuevos tales como caspofunginas. La elección del fármaco a usar tiene

mucha relación entre las características de la lesión y el estado sistémico del

14

paciente. Hay tres objetivos principales de los medicamentos antimicóticos en

cándida: la membrana celular, la pared celular y los ácidos nucleicos (27).

Los polienos estos se unen al ergosterol en la membrana fúngica causando la

alteración en su estructura y función. Los inhibidores de la biosíntesis de ergosterol

trabajan a nivel del retículo endoplásmatico impidiendo la formación de esta

molécula. El análogo de ADN 5-florocitosina inhibe la síntesis de ADN y las

Caspofunginas que trabajan inhibiendo la enzima 1-2 B-D- glucano componente

principal de la pared celular de las levaduras (27) (40).

Millsop aseguró que para los casos leves de candidiasis oral, los agentes

antimicóticos tópicos pueden ser adecuados. Para las enfermedades resistentes a los

medicamentos tópicos, los pacientes con riesgo de candidiasis diseminada y en

pacientes inmunodeprimidos, es necesaria la terapia antimicótica sistémica (21).

García recomienda complementar el tratamiento de la candidiasis mediante la

eliminación de cualquier causa subyacente o factor de riesgo identificables, como

por ejemplo la higiene, el ajuste y el uso controlado de las prótesis dentales (9).

2.2.1. Antifúngicos tópicos

Otero aseguró que los casos de candidiasis más simples, localizada y en

pacientes con función inmune normal pueden ser tratados tópicamente, este va a

requerir que el fármaco entre en contacto con la superficie afectada el tiempo

suficiente para evitar la residivancia de la enfermedad, y recomienda continuar

el tratamiento de 2 a 3 semanas después de que las características clínicas hayan

desaparecido, pero hay que tener cuidado ya que la exposición prolongada a

antifúngicos puede causar resistencia (25).

Los antifúngicos tópicos normalmente utilizados son: nistatina, anfotericina B,

derivados azólicos (miconazol, clotrimazol, econazol y ketoconazol) (25).

15

2.2.1.1.Nistatina

Millsop define a la nistatina como un agente antifúngico que es derivado de la

especie Streptomices noursei, cuya función es unirse al ergosterol de la

membrana fúngica generando poros para interrumpir la permeabilidad de la

membrana. La presentación de este medicamento puede ser en crema,

ungüentos, pastillas, o suspensión oral (18) (21).

La pastilla de nistatina tiene una acción de mayor duración, pero contiene

glucosa que puede aumentar el riesgo de aparición de caries, y empeorar la

diabetes. La suspensión oral puede causar malestar estomacal, disminución de la

intolerancia de la glucosa y mayor riesgo de caries (21).

García recomienda la siguiente dosificación de la nistatina:

Suspensión oral de 60 ml, 4 a 6 ml cada 6 horas que es muy bien tolerada.

Ungüento 30 gr, 2 o 4 aplicaciones al día.

Tabletas 2 cada 8 horas, pero puede haber náuseas, vómitos y problemas

gastrointestinales (9).

2.2.2. Antifúngicos sistémicos

Ruiz asegura que las micosis sistémicas suelen afectar a pacientes con factores

predisponentes, y pueden tener mal pronóstico si no se identifica primero el

factor que la causo. Se recomienda que no todas las candidiasis se traten igual,

realizar la identificación de las cepas y estudios de sensibilidad (30).

2.2.3. Agentes antifúngicos alternativos

Existen investigaciones nuevas sobre las propiedades antifúngicas de plantas que

se pueden utilizar como tratamiento alternativo. Cuyas presentaciones pueden

ser, extractos naturales, aceites esenciales, lociones, cremas, etc. Algunas de las

plantas que ya se ha observado que tienen una buena acción antifúngica son:

hojas de té, canela, jengibre, orégano, menta, romero, tomillo, etc. (27).

16

2.3.BOTÁNICA

Es aquella ciencia que estudia a las plantas tanto en sus características, propiedades,

clasificación, reproducción, relación con su medio y los demás seres vivos, se

consideran como mantenedoras primarias de vida, ya que aportan con el Oxígeno

del ambiente importante para los animales y seres humanos, además de ser y proveer

alimento, y muchas otras cualidades como por ejemplo la medicinal (40).

2.3.1. Riqueza botánica del Ecuador

El Ecuador país que se encuentra en la mitad del mundo, es uno de los países

con mayor diversidad tanto de flora y fauna. Internacionalmente se encuentra en

el puesto diecisiete entre los países más megadiversos y en el número uno si esta

megadiversidad es relacionada a su superficie (22).

Consta de cuatro regiones que poseen un ambiente, clima, flora característica,

que propicia lugares óptimos para el desarrollo de todo tipo de platas.

Concentrando un 10 % de todas las especies de platas del planeta. El cuarto

informe Nacional para el Convenio sobre la diversidad biológica informa que el

Ecuador posee más de 17. 058 especies de plantas vasculares o platas con flor

(24).

Con la cantidad expuestas de plantas que se encuentran en nuestros territorios, se

requiere investigar más a las distintas especies, muchas de ellas poseen efecto

antimicrobiano y antifúngico, recordemos que estas propiedades están

relacionadas con el ambiente y la calidad de suelo en donde habitan.

2.3.2. Coriandrum Sativum

En nuestro país es más conocido como cilantro o culantro, se cultiva

mayormente en la sierra, es utilizado en la gastronomía ya que brinda un olor y

sabor únicos, por esta delimitación de su uso, son para muchas desconocidas sus

propiedades medicinales.

17

2.3.2.1.Descripción

Bhat definió al coriandrum sativum como una plata anual que se cultiva a partir

de sus semillas a cualquier temporada del año, que es endémica de las regiones

del mediterráneo y medio oriente, que a partir de aquí se extendió a la mayor

parte del mundo (4).

Shyamapada la describió como una planta erecta con raíz pivotante, con tallos,

esbeltos ramificados que miden de 20 a 70 cm de altura. Sus hojas son

lanceoladas y otras variables en forma lobuladas, de color verde claro a oscuro.

Las flores son pequeñas, con pétales blancos o rosados, asimétricos, que nacen

en umbelas (34).Las semillas son ovaladas, tienen un saber suave, dulce

ligeramente agrio, sus componentes principales son el aceite esencial y

triglicéridos (4).

2.3.2.2.Composición Química

Laribi aseguró que las hojas contienen aceites esenciales, flavonoides, ácidos

fenólicos y polifenoles. También posee betacarotenos precursores de la vitamina

A. Se encontraron mayor cantidad de ácidos grasos poliinsaturados, la cantidad

de ácidos grasos depende de la cantidad de NaCl presente en el suelo donde se

cultiva (17). Shyamapada menciona que el follaje verde posee vitaminas,

hidratos de carbono, proteínas, fibra y minerales como el fósforo, hierro y calcio

(34).

La capacidad terapéutica u nutricional de las semillas del coriandrum sativum se

debe a que esta contiene muchos compuestos bioactivos como: ácidos grasos,

esteroles, tocoles, compuestos volátiles, proteínas en un 3.3% y carbohidratos en

un 6 %(17) (34). Bhat afirmó que en las semillas se encuentran mayormente

aceites volátiles en un 1.8 %, el cual contiene un 65% de linalool (4). Pero en

cambio Shyamapada menciona que el ácido petrosilínico es el que se encuentra

en mayor porcentaje, seguido por el linalool, después el oleico y por último el

palmítico.

18

2.3.2.3.Taxonomía

Al coriandrum sativum o cilantro como comúnmente se le conoce, pertenece a:

Reino: Plantae

División: Magnoliophyta

Clase: Magnoliopsida

Orden: Apiales

Familia: Apicaceace

Subfamilia: Apioideae

Tribu: Coriandreae

Género: Coriandrum (40).

2.3.2.4.Hábitat

La planta en si es originaria de Europa en la región mediterránea y en la parte de

Asia menor, estos lugares se caracterizan por el clima cálido seco, pero a pesar

de esto esta especie tiene la cualidad de aclimatarse y adaptarse a climas no

óptimos, propagándose a la mayoría de países del mundo. Por ello en cada

región o país donde se encuentre lo que más varía es su tamaño, y el tiempo de

cosecha, ya que son estrategias para vivir en diferentes climas (37).

2.3.2.5.Usos terapéuticos

Existen varias investigaciones las cuales aseguran que el coriandrum sativum

posee las siguientes propiedades terapéuticas.

Actividad analgésica: Laribi aseguró que el linalool tiene propiedades

analgésicas este estudio se realizó en ratones. Por lo que recomienda usar el

extracto acuoso o el aceite esencial (17).

Actividad antihiperglusémica: Bhat menciona que la integración de la semilla

molida a la dieta conduce a una disminución marcada de la glucosa en sangre y

aumento de la insulina, así mismo esto se comprobó en ratas diabéticas (4).

19

Actividad antihelmíntica: Se comprobó tanto in vivo como in vitro que el

extracto hidroalcohólico del coriandrum sativum tiene mejor actividad contra los

parásitos adultos, en cambio el extracto de la semilla tiene mejor actividad

contra el Haemonchus cortantus (17).

Efecto Hipolipidémico.- la hiperlipidemia es cuando se produce más productos

de oxidación de los lípidos que se acumulan en la periferie de los vasos y en el

hueso, en el hueso puede acelerar su degeneración, se investigó con ratones con

esta patología administrándoles 1gr/kg, se encontró que se disminuyó la

absorción y mejora la degradación de los lípidos (4).

Actividad Ansiolítica: el cilantro se ha utilizado en Irán como medicina popular

contra el insomnio. Se realizaron investigaciones con ratones, se encontró que

administrando 100 a 200 mg /kg de extracto hidroalcohólico producía efectos

similares ansiolíticos que el diazepam (4).

Actividad Antibacterial: Laribi mencionó que recientemente se aisló un

péptido antimicrobiano denominado “Plantaricin CS” de las hojas del

coriandrum sativum, se mostró que este tiene mayor efecto antibacterial ante el

Staphylococcus aureus y mayormente en bacterias gram positivas (17). Se ha

observado que el aceite esencial de esta planta es eficaz contra las bacterias

gram positivas y gram negativas, afectando principalmente la permeabilidad de

la membrana (17) (34).

Actividad Diurética: se comprobó mediante un estudio con ratones en el cual

se administró como infusión, se confirmó que el aumento significativo de orina

similar a la furosemida, por lo que se recomienda su uso en esta afección (4).

Actividad anticancerígena: Laribi señalo que el linalool ha demostrado tener

efectos anticancerígenos ya que inhibe moderadamente la proliferación celular.

Además se atribuye esta actividad por su función protectora contra los efectos

nocivos del metabolismo de los lípidos ya que esto se asociado con la

malignidad de los tumores (17).

20

Desintoxicación de metales: Bhat aludo que los compuestos químicos que se

encuentran en el cilantro tienden adherirse a los metales y ayudar a su

eliminación como el mercurio, se debe principalmente al efecto vinculante del

grupo carboxílico al mercurio (4).

Actividad Antifúngica: gracias al linalool y a la presencia de plantaricin CS se

ha observado que el aceite esencial del coriandrum sativum produce una

inhibición considerable en el crecimiento del contra especies de cándida y

Trichophyton. Debido a esta propiedad y baja toxicidad, podría ser un plan de

tratamiento alternativo para afecciones, provocadas por la cándida albicans, pero

necesariamente se requiere más investigaciones (17).

2.3.2.6.Efectos adversos o tóxicos

Shyamapada menciona que de acuerdo con Hedge y Stener que la dosis parcial

estimada para que el aceite esencial de coriandrum sativum sea tóxico es de

2139, 98 mg/kg, lo que indica una baja toxicidad. En cambio Patel mencionan

que hasta 3000mg/kg de peso corporal el extracto de esta planta no es tóxico,

esto también realizado en ratones, por lo tanto que el cilantro se puede

considerar inofensivo para el consumo humano (34).

2.4.FITOTERAPIA

El médico francés Henric Leclerc fue el primero en implementar este término, años

más tarde se definió como ‘Terapia complementaria que utiliza plantas o partes de

estás, donde el empirismo de la medicina tradicional se transforma en fundamento

científico’ 34 p.p. 63

, es decir la utilización de las propiedades medicinales y

terapéuticas de las plantas, pero respaldarla con un fundamento científico (35).

Caracterizándose principalmente por utilizar tanto la planta, una parte de esta, como

también productos de estas, como extractos, aceites esenciales, esencias, lociones

etc., conocidos como fitocomplejos, un fitocomplejo es un combinado de la

sustancia activa con otro agregado para lograr un mismo fin terapéutico (5).

21

Cruz menciona que alrededor de cuatro mil millones de personas es decir cerca del

80% de la población mundial hace usó de las plantas para tratar diferentes

afecciones, se debe a distintas razones uno de los más principales es el factor

económico, esto se ve muchas veces hasta en los países desarrollados, con fuerte

investigación farmacológica (8).

Además, se ha visto gran popularidad por consumir los productos naturales en

países desarrollados, ya que muchas investigaciones avalan su utilización segura y

eficaz, además que muchos productos sintéticos pueden producir efectos

secundarios, aunque se estén administrando de la manera más segura (8).

2.4.1. Preparado Fito- terapéutico

Según el Instituto nacional de vigilancia de medicamentos y alimentos de

Colombia un preparado Fito-terapéutico es aquel producto medicinal que posee

elementos activos derivados de plantas o de la asociación de varias de ellas, que

puede hallarse en estado bruto o en forma farmacéutica que se utiliza para fines

curativos (12).

Los que se encuentran en estado bruto son: extractos, tinturas, aceites

esenciales, infusiones, agua aromática, decocción, lociones, ungüentos (17).

2.4.2. Aceites esenciales

Usano aseguró que el aceite esencial es una combinación de compuestos

volátiles altamente concentrados, resultado del metabolismo secundario que solo

las plantas lo pueden hacer. Son utilizados aproximadamente el 90 % en la

cosmetología, gastronomía, farmacéutica. Generalmente se extraen los aceites de

las siguientes familias de plantas: como lamiaceae, asteraceae, solamaceae, entre

otras (33) (39). La gran parte de platas liberan estos aceites esenciales de

estructuras denominadas tricomas glandulares (39).

22

Como los aceites esenciales son productos del metabolismo secundario estos

pueden modificarse dependiendo las necesidades de la planta, eso quiere decir

que el clima, las condiciones del suelo, los fertilizantes, pueden ayudar a esta

modificación. La cantidad y la calidad también dependen de que parte de la

planta se extraigan, el proceso de elaboración, y la técnica de almacenamiento

(39).

2.4.2.1.Propiedades físicas

Los aceites esenciales con de aspecto oleoso, muy volátiles al ambiente,

insolubles en agua, pero solubles en alcohol, etér de petróleo, aceites inertes,

solventes orgánicos, teracloruro de carbono. Son altamente inflamables, son los

responsables del darle el olor y sabor característico a las plantas. Su densidad es

menor a la del agua (33).

2.4.2.2.Obtención de los aceites esenciales

Sena aseguró que, según el material a utilizar, es decir que parte de la planta,

dependerá la elección de la técnica de extracción, la calidad del aceite dependerá

mucho de la técnica escogida, pero de igual manera si la materia prima no es

apropiada, mucho menos lo va a ser el producto que se obtenga (33).

Sena menciona las siguientes técnicas:

Métodos directos: Extrusión, Exudación.

Destilación: Directa, Arrastre con vapor de agua, Maceración.

Extracción con solventes

2.4.2.2.1. Destilación por arrastre con vapor de agua (DAV)

Es una de las técnicas más utilizadas, ya que se asegura que la materia prima

no se combine con otra sustancia que ayude a su obtención, ya que

únicamente utilizará el vapor, para este proceso se puede utilizar cualquier

parte de la planta, pero deben estar molidas para facilitar la liberación del

aceite.

23

2.4.2.2.1.1.Descripción

La destilación por arrastre con vapor de agua es un proceso que utiliza el

calor, para que el vapor entre en contacto con la materia prima vegetal,

liberando sus componentes volátiles difundiéndolos desde los tricomas

glandulares hacia el exterior, para después condensarlos enfriando este vapor

y expresarlo a manera de aceite (2) (33).

Balboa aseguró que la destilación por arrastre con vapor de agua se utiliza

para los compuestos que expresen las siguientes características: alta

volatilidad, inmiscibles en agua, presión de vapor baja, punto de Ebullición

alto (2).

2.4.2.2.1.2.Ventajas

SENA afirma que como esta técnica usa únicamente agua evitamos la

contaminación de la materia prima vegetal, además los productos son más

exacto y reproducibles, gracias a que se tiene control: de la velocidad de

destilación, de la presión, satisfaciendo las necesidades de calidad y

cantidad comerciales (33).

2.4.2.2.1.3.Desventajas

Si la temperatura no es controlada podría: eliminar completamente los

compuestos volátiles, variar la presión del vapor óptima para la obtención

del aceite, y por ende variar la velocidad de la destilación. Se debe

controlar la cantidad de materia prima que se ingresa a destilación, ya que

puede rebasar la cantidad que permite el DAV (2) (33).

24

CAPÍTULO III

3. METODOLOGÍA

3.1.DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN

EXPERIMENTAL.- intervenimos mediante la inclusión de las variables

independientes (concentraciones del aceite esencial del coriandrum sativum)

sobre los cultivos de la cándida albicans ATC 10231 para observar si hay efecto

antimicrobiano.

IN VITRO.- ya que la investigación se llevó a cabo por modelos

experimentales, estudio y observación en laboratorio.

ANALITICO.- porque se analizó cuantitativamente el halo de inhibición de

cada una de las muestras, correspondiente a cada una de las concentraciones del

aceite esencial y para el grupo control positivo y negativo.

COMPARATIVO.- ya que se comparó los valores finales obtenidos de los

diferentes grupos con el fin de contrarrestar la efectividad de la actividad

antimicrobiana ante la cándida albicans ATC 10231.

3.2.POBLACIÓN DE ESTUDIO Y MUESTRA

POBLACIÓN

La población es la cepa de Cándida Albicans ATC 10231 la cual se adquirió en

el Importador Integral de Equipos e Insumos para Laboratorios MEDIBAC, el

cual es una institución privada que se encuentra en Pichincha - Quito: Av.

República de el salvador e Irlanda Edf. Rosania. Teléfonos: (02) 226 1478 – 246

6318 el cual nos brinda ya con el certificado de autenticidad, modo de activación

y fecha de caducidad de la cepa. (ANEXO1)

Además de ello se utilizó 1000 gramos de semillas secas de coriandrum sativum

traídas del cantón mejía con el que se preparó el aceite esencial.

25

MUESTRA

El criterio de selección de muestra fue por conveniencia, tomando en cuenta el

propósito de la presente investigación para esto se ha tomado como referencia el

artículo de Azuero Andrea, et al, Análisis de la actividad antimicrobiana de

plantas medicinales en el Ecuador, del 2016. Se realizó en 15 muestras (cajas

Petri), utilizando el método Kirby Bauer, medio de cultivo agar Sabouraud-

Dextrosa sembrados con Cándida Albicans ATCC ®10231™, 15 para cada

concentración del aceite esencial de la coriandrum sativum 25, 50 y 100% y 15

para control positivo que se realizó con nistatina y otras 15 para el control

negativo que se realizó con suero fisiológico.

3.3.CRITERIOS DE INCLUSIÓN Y EXCLUSIÓN

3.3.1. CRITERIOS DE INCLUSIÓN

Cepas de Cándida Albicans ATCC ®10231™, que no contengan ningún

medicamento o reactivo previo a la experimentación.

3.3.2. CRITERIOS DE EXCLUSIÓN

Cepas de Cándida Albicans ATCC ®10231™, incapaces de desarrollarse en el

medio de cultivo.

Cepas de Cándida Albicans ATCC ®10231™, que se hayan utilizado para

experimentos previos.

Cepas que no sean Cándida albicans ATCC® 10231™.

Cajas Petri que no fueron esterilizadas previamente.

Cajas Petri que tienen algún daño estructural.

3.4.CONCEPTUALIZACIÓN DE LAS VARIABLES

En el proyecto de investigación se determinó:

26

3.4.1. VARIABLE DEPENDIENTE

- Efecto Antimicrobiano. - Característica química del aceite esencial de las

semillas secas del cilantro; habilidad de producir el efecto esperado, tras su

aplicación logra la acción.

3.4.2. VARIABLE INDEPENDIENTE

- Aceite Esencial de coriandrum sativum al 25, 50 y 100% de concentración.

- Sustancia química proveniente de la destilación por arrastre de vapor de las

semillas secas de cilantro para luego diluir en aceites inertes para obtener las

distintas concentraciones.

3.4.3. VARIABLES DE CONTROL

- Control positivo: Nistatina 100.000 U.I

- Control negativo: Suero Fisiológico

3.5.DEFINICIÓN OPERACIONAL DE LAS VARIABLES

27

VARIABLE DEFINICIÓN OPERACIONAL TIPO CLASIFIACIÓN INDICADOR

CATEGÓRICO

ESCALA DE

MEDICIÓN

Actividad

antimicrobiana

Se registrará la presencia de halos

de inhibición de crecimiento en

mm

Dependiente Ordinal

Nula

Intermediamente Sensible

Sensible

≤ 8 mm

9-11 mm

12-15mm

Aceite esencial del

coriandrum

sativum en distintas

concentraciones

Representa en el porcentaje en el

que el aceite será disuelto Independiente Nominal

Concentraciones 25%

50%

100%

A

B

C

Nistatina 30 mg/ml

(control positivo)



mm, fármaco de elección para

tratamiento de patologías

candidiásicas

Variable de

control Ordinal

Nula


Sensible

≤ 8 mm

9-11 mm

12-15mm

Suero fisiológico

(control negativo)



mm

Variable de

control Ordinal

Nula


Sensible

≤ 8 mm

9-11 mm

12-15mm

28

3.6.ESTANDARIZACIÓN

El presente proyecto fue realizado en base a protocolos ya establecidos del método

Kirby-Bauer. La cepa se activó y se procedió a cultivarla por dispersión con un

hisopo estéril en medio de cultivo Agar Dextrosa Sabouraud 4% Merck. Después se

procedió a incubar la cepa a temperatura de 37°c por 72 horas en el Laboratorio de

Microbiología de la Facultad de Odontología de la Universidad Central del Ecuador.

La turbidez estandarizada que se utilizó fue de 0,5 McFarland, obteniendo la

cantidad de bacterias por ml dentro de los parámetros establecidos. Se colocó cada

una de las concentraciones del aceite esencial, en discos de papel estériles, en el

control positivo se colocó la nistatina y en el control negativo suero fisiológico en

sus respectivos discos.

Se medirán los halos de acción antimicrobiana trascurrido las 72 horas de

incubación, utilizando una regla milimetrada Merck Sharp & Dohme y un contador

de colonias tipo Quebec. Esto se llevará a cabo con el acompañamiento del Dr. Juan

Viteri tutor y responsable del área de Laboratorio de microbiología de la Facultad de

Odontología de la Universidad Central del Ecuador.

El aceite esencial se obtuvo mediante la técnica de destilación por arrastre de vapor

de agua y para obtener cada una de las concentraciones se diluyo con aceites inertes.

Este proceso se logrará junto con el acompañamiento del Bioquímico Farmacéutico

Darwin Roldán, Profesor de la Facultad de Química de la Universidad Central del

Ecuador.

3.7.MANEJO Y MÉTODOS DE RECOLECCIÓN DE LA INFORMACIÓN

Para la elaboración del proyecto de investigación “Efecto Antimicrobiano del aceite

Esencial del coriandrum sativum (cilantro) al 25, 50 y 100 % frente a la cándida

albicans. Estudio in vitro” se realizó la solicitud para la tutoría del proyecto al Dr.

Juan Viteri. (ANEXO 2)

Una vez aceptada a Tutoría por parte del tutor, se realizó el pedido del oficio que

compruebe que el tema no se encuentra repetido, en la base de datos de titulación de

29

la Facultad de Odontología, provisto en Dirección de Carrera, por la Dra. Quezada.

(ANEXO 3)

Una vez con el oficio de dirección de Carrera y la aceptación de tutoría, se envió al

Departamento de titulación de la facultad de Odontología, para que se apruebe el

tema y pueda constar en la base de datos de titulación. (ANEXO 4)

Se realizó el oficio dirigido a la Decana de la Facultad de Ciencias Químicas de la

Universidad Central del Ecuador Dra. Isabel Fierro para que se facilite el trabajo del

investigador, permitiendo el uso de las instalaciones del Laboratorio de Análisis

Clínico y Bacteriológico del departamento de Ofertas Servicios y Productos para la

obtención del Aceite Esencial al 25, 50 y 100% de concentración, y las instalaciones

del Laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriológico para realizar el proyecto

piloto. (ANEXO 5)

Después se realizó el oficio dirigido al Dr. Jorge Naranjo Decano Encargado de la

Facultad de Odontología para poder utilizar las instalaciones del Laboratorio de

Microbiología para realizar la experimentación. (ANEXO 6)

Así mismo la propuesta del proyecto de investigación se envió al Subcomité de

Ética de Investigación en Seres Humanos de la Universidad Central del Ecuador

SEISH- UCE para su debida aprobación. (ANEXO 7)

3.7.1. RECURSOS HUMANOS

Una vez con los permisos aprobados se necesitó la colaboración del Dr. Juan

Viteri Microbiólogo, quién supervisó el proceso experimental, el bioquímico

farmacéutico B.F Darwin Roldán, quien contribuyo a la obtención del aceite y

las tres distintas concentraciones, El Ingeniero Jaime Molina que ayudo con la

acogida de los datos de la experimentación para realizar los respectivos cuadros

y tablas estadísticas, y las personas encargadas de valorar el progreso del trabajo

del proyecto de investigación de la Facultad de Odontología para tener

confianza en sus resultados.

30

3.7.2. RECURSOS UTILITARIOS

EQUIPOS

Autoclave

Incubadora

Estufa

Refrigeradora

Cabina de seguridad Biológica

Equipo tipo Quebec

MATERIALES

Mandil

Mascarilla

Gafas

Guantes

Hisopos

Discos de papel filtro de 6mm de diámetro

INSTRUMENTOS

Mortero y pistilo

Cajas Petri

Tubos de ensayo

Gradilla

Pipetas

Puntas para pipetas

Pinzas estériles

Asas bacteriológicas

SUSTANCIAS

Cepas liofilizadas de Cándida Albicans ATCC®10231™

Aceite esencial de coriandrum sativum

Agar Sabouraud dextrosa

Solución Mcfarland 0,5

31

Suero fisiológico

Nistatina 30mg/ml

3.8.DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN

3.8.1. RECOLECCIÓN DE LAS SEMILLAS DE CORIANDRUM SATIVUM

Las semillas del coriandrum sativum se recolectaron en la provincia Pichincha,

Cantón Mejía, de plantas maduras.

Figura 1.- Recolección de la Planta Coriandrum Sativum (Cilantro)

Elaboración: Provincia Pichincha, Cantón Machachi

Fecha: 30/11/2018 Fuente: Myrian Elizabeth Chicaiza Chiguano

3.8.2. LAVADO Y SECADO DE LAS SEMILLAS DE CORIANDRUM

SATIVUM

Las semillas se lavaron con agua clorificada apto para el consumo humano, a

temperatura ambiente, se dejaron secar 3 días en una superficie limpia y seca a

la luz natural. Después fueron colocadas en fundas limpias con selle hermético

llevándolas a los Laboratorios de la Facultad de Ciencias Químicas de la

Universidad Central del Ecuador.

32

Figura 2.- Lavado y secado de la Planta Coriandrum Sativum (Cilantro)

Elaboración: Provincia Pichincha, Cantón Machachi

Fecha: 30-4/11-12/2018 Fuente: Myrian Elizabeth Chicaiza Chiguano

3.8.3. PROCESO DE OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL

Se procedió de la siguiente manera:

A las semillas, se las pesaron y trituraron en un mortero de vidrio, con el fin de

lograr que el aceite contenido en ellas sea arrastrado por el vapor de agua en el

proceso de destilación, facilitando la obtención.

Figura 3.- Trituración de la semilla seca de coriandrum sativum

Elaboración: Laboratorio de Ofertas, Servicios y Productos de la Facultad de Ciencias Químicas

Fecha: 4 /12/2018 Fuente: Myrian Elizabeth Chicaiza Chiguano

Se colocan 50 gramos de semillas en el balón de destilación y se añadieron

alrededor de 400 ml de agua, se armó el equipo de destilación por arrastre de

vapor y se procedió a calentar a temperatura de ebullición del agua (90 – 91 °C) .

33

Figura 4.- Equipo de destilación por arrastre de vapor con semillas trituradas


Fecha: 5 /12/2018 Fuente: Myrian Elizabeth Chicaiza Chiguano

El vapor generado arrastra los componentes volátiles de las semillas (aceite) y de

esta manera se puede extraer el aceite. El proceso dura de 2 a 3 horas y una vez

que toda el agua se evapora, se enfría el balón y se procede a realizar otra

extracción con las mismas semillas añadiendo solo 400 ml más de agua. Para

obtener la cantidad de aceite necesario para el estudio se utilizaron alrededor de

1000 gr de semillas.

3.8.4. DILUCIÓN DE LAS DISTINTAS CONCENTRACIONES

Posteriormente el aceite resultante fue dividido en tres muestras, las dos fueron

disueltas con aceite inerte para conseguir el 25 y 50% de concentración y la

tercera pura para el 100%.

Para obtener el aceite esencial de coriandrum sativum al 25 % de concentración

se tomaron 0.50 ml de aceite puro de cilantro y se diluyeron con 1.50 ml de

aceite deodorizado inerte.

Para obtener el aceite esencial de coriandrum sativum al 50 % de concentración

se tomaron 0.75 ml de aceite puro de cilantro y se diluyeron con 0.75 ml de

aceite deodorizado inerte.

34

Se procedió a esterilizar los productos finales con luz UV, las distintas

concentraciones se colocaron en un recipiente ámbar estéril con tapa rotulado

que nos asegure que no se contamine y que la luz no los modifique. (ANEXO 8)

Figura 5.- Concentraciones de Aceite Esencial de Coriandrum Sativum



3.8.5. MEDIO DE CULTIVO

Se usó el medio de cultivo Agar Dextrosa Sabouraud 4% Merck, adecuado para

el crecimiento de la Cándida Albicans. Este medio selectivo es recomendado por

el Dr. Juan Viteri tutor y encargado del Laboratorio de Microbiología de la

FOUCE.

Figura 6. Elaboración de Agar Dextrosa Sabouraud.

Elaboración: Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología


35

3.8.6. ACTIVACIÓN DE LA CEPA

Fueron respetadas las condiciones de temperatura al momento de importar la

cepa de Cándida Albicans ATCC® 10231™ en estado de liofilización en su

envase KWIK-STIK™, proporcionada por MEDIBAC. (ANEXO 9)

Para su activación la cepa fue retirada de refrigeración dejando equilibrar la

temperatura de la cepa a la del ambiente por media hora, se abrió y activo

siguiendo las recomendaciones que son suministradas por el distribuidor. Luego

fueron incubadas a temperatura de 37°C por 72 horas en el Laboratorio de

Microbiología de la FOUCE. (ANEXO 10)

Figura 7. Activación de la cepa.

Elaboración: Laboratorio de Microbiología de la FOUCE


3.8.7. PATRÓN DE TURBIDEZ DE MCFARLAND

Este patrón es la estandarización en la cantidad de microrganismo a usar, que es

proporcionada por el mismo distribuidor de la cepa, se comparó visualmente con

el caldo del inóculo que fue previamente elaborado con la cepa Cándida albicans

ATCC® 10231™ .

36

Figura 8. Obtención del Patrón de Turbidez de Mcfarland



3.8.8. ROTULACIÓN DE LAS CAJAS PETRI PARA LA POSTERIOR

INOCULACIÓN

Se marcaron cada una de las 15 cajas Petri, ya que se colocaron 5 discos de

papel filtro de 6mm de diámetro en cada una. Tres pertenecientes a las

concentraciones del aceite esencial al 25,50 y 100% de concentración, uno al

control positivo que fue la Nistatina y uno al control negativo que fue suero

fisiológico.

Figura 9. Rotulación de la caja Petri que contiene el agar Dextrosa Sabouraud 4% Merck



37

3.8.9. INOCULACION BACTERIANA PARA LA EXPERIMENTACIÓN

El contenido fúngico una vez establecido el patrón de turbidez de Mcfarland, fue

dispersado con un hisopó estéril en el medio de cultivo Sabouraud Dextrosa 4%

Merck. La dispersión se realiza en diferentes direcciones teniendo como objetivo

esparcir sobre toda la superficie la levadura. Esto se realizó en las 15 cajas Petri.

Figura 10. Inoculación de la cepa en cada una de las cajas Petri



3.8.10. APLICACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DEL ACEITE, EL

CONTROL POSITIVO Y CONTROL NEGATIVO EN LOS DISCOS Y

EN LOS CULTIVOS

15 discos de papel estéril se depositaron en las diluciones del aceite esencial de

coriandrum sativum al 25%, 50% y 100% de concentración que se encontraban

en Vasos Dapen debidamente rotulados previamente esterilizados, 15 en

nistatina y 15 en suero fisiológico que se colocaron en una caja petri dividida

previamente estéril. Los discos deben sumergirse por 3 minutos para que se

impregnen bien las soluciones.

38

Figura 11. Colocación de los discos de papel filtro en cada una de las soluciones.



Se procedió a colocar cada uno de los discos de papel filtro en las 15 cajas petri, según

como esta se encontraba rotulada, con pinzas debidamente esterilizadas.

Figura 11. Colocación de los discos de papel filtro en cada una de las cajas petri.



39

3.8.11. INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS

Las cajas Petri con las muestras fueron incubadas por 72 horas a una

temperatura de 37°C.

Figura 12. Incubación de la muestra.



3.8.12. MEDICIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN

Cada uno fue medido tras las 72 horas de su incubación, utilizando una regla

milimetrada Merck Sharp & Dohme y un contador de colonias tipo Quebec.

Figura 13. Medición de los Halos.



40

3.8.13. MANEJO DE BIOSEGURIDAD Y CONTROL

La experimentación se realizó dentro de la cabina de seguridad biológica, equipo

que filtra el aire mientras dura el proceso, asegurándose de no contaminar las

muestras y al personal del laboratorio.

Figura 14. Cabina de seguridad Biológica.



3.8.14. ELIMINACIÓN DE DESECHOS

Absolutamente todos los hisopos, cajas Petri, tubos de ensayo, etc.

Contaminados con la cepa en la experimentación fueron clasificados y llevados

a una autoclave específica para procesar material contaminado, después se

enfriaron durante 30min y se colocaron en fundas rojas rotuladas con su

respectiva fecha, se enviaron al Depósito final de Desechos de la Facultad de

Odontología de la Universidad Central.

Los desechos infecciosos de la Universidad son retirados por la empresa

“EMGIRS-EP”. Toda información adicional en base al manejo de material

infeccioso fue proporcionada por el laboratorio de Microbiología de la Facultad

de Odontología. (ANEXO 11)

41

Figura 15. Manejo de desechos previo a esterilización.



3.9.ASPECTOS BIOÉTICOS

El proyecto de investigación requirió condiciones controladas, sin experimentar en

seres vivos, únicamente con cepas liofilizadas fúngicas, no requiriendo un

consentimiento informado ni la declaración de confidencialidad.

3.10. RIESGOS POTENCIALES DEL ESTUDIO

Se siguieron las medidas de bioseguridad propuestas por el laboratorio de

Microbiología de la Facultad de Química de la Universidad Central del Ecuador

evitando así que exista riesgo para el investigador, la experimentación

microbiológica in vitro fue supervisada por un especialista, llevando normas de

orden en todo momento. (ANEXO 12)

3.11. BENEFICIOS POTENCIALES DEL ESTUDIO

Principalmente para la Universidad Central del Ecuador ya que impulsa a los

estudiantes a realizar futuras investigaciones relacionadas a este tema, no

únicamente de la facultad de Odontología sino también de facultades con carreras

relacionadas a este fin, e incentivar para que las Universidades del Ecuador

aprueben patentes para crear productos a base de plantas ya que en la actualidad no

lo hacen.

42

Con los resultados que fueron obtenidos, el beneficio será como aporte de

información y fundamento para motivar a seguir investigando y lograr un avance

científico futuro en el consumo y utilización de productos naturales para tratar

patologías producidas por el microorganismo en mención.

3.12. IDONEIDAD, ÉTICA, EXPERTICIA DEL INVESTIGADOR

La autora fue guiada por los conocimientos y experiencia del Tutor para el

desarrollo del presenté proyecto de investigación. (ANEXO 13)

3.13. DECLARACIÓN DE CONFLICTOS DE INTERESES

La autora, así como el Tutor no mantienen ningún tipo de vínculo o relación directa

económica, laboral, académica o de otro tipo con la casa comercial MEDIBAC. Los

resultados se manejarán como propiedad del autor. (ANEXO 14)

43

CAPITULO IV

4. ANÁLISIS E INERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Los datos obtenidos en el proceso experimental fueron codificados y se transfirieron

al programa Excel, que se utilizó como matriz para guardarlos en un archivo para

verificar la ausencia de errores.

Como referencia en la medición de los halos de inhibición se utilizó la escala de

Rosco la cual es usada en sus investigaciones del 2011:

- Sensible: 12-15 mm

- Intermediamente Sensible: 9-11mm

- Nula: ≤ 8 mm (31)

Tabla 1.- Resultados de los halos de inhibición en milímetros a las 72 horas

EFECTO ANTIMICROBIANO DEL ACEITE ESENCIAL DEL

CORIANDRUM SATIVUM (CILANTRO) AL 25%, 50 Y 10% FRENTE A

CÁNDIDA ALBICANS. ESTUDIO IN VITRO

RESULTADOS

CILANTRO (CORIANDRUM

SATIVUM)

NISTATINA SUERO

FISIOLÓGICO

25% 50% 100%

REPETICIÓN HALOS DE INHIBICIÓN

(mm)

HALOS DE INHIBICIÓN

(mm)

1 6 10 16 20 6

2 6 10 17 20 6

3 6 9 15 18 6

4 6 10 15 18 6

5 6 12 16 18 6

6 6 10 17 19 6

7 7 11 17 18 6

8 7 10 15 18 6

9 6 11 15 18 6

10 6 11 14 18 6

11 6 10 15 18 6

12 6 10 15 18 6

13 7 9 15 19 6

14 7 11 15 18 6

15 6 10 15 18 6

44

Fuente: Autora

4.1.ANÁLISIS ESTADÍSTICOS

4.1.1. PRUEBA DE NORMALIDAD

Según el “Manual para presentar documentos escritos de trabajo de titulación –

modalidad proyectos de investigación e intervención” se verifica que las

muestras provienen de una población con distribución Normal, esto se realiza

con ayuda de las pruebas de Kolmogorov – Smirnov o con la prueba de Shapiro

– Wilk (menor a 20 datos).

Esto se comprueba mediante el valor de significación (Sig), este valor se

compara con el valor 0,05 (95% de confidencialidad), de esto se obtiene que:

- Ho: (hipótesis inicial) Las muestras provienen de poblaciones con

distribución Normal cuando su valor de significación es superior a 0,05.

- Ha: (hipótesis alterna) Las muestras no provienen de poblaciones con

distribución Normal cuando su valor de significación es menor a 0,05.

Tabla 2.- Resultados de prueba de normalidad

Advertencias

SUERO FISIOLÓGICO es constante.

Pruebas de normalidad

Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk

Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.

CILANTRO 25% 0,453 15 0,000 0,561 15 0,000

CILANTRO 50% 0,297 15 0,001 0,865 15 0,028

CILANTRO 100% 0,362 15 0,000 0,781 15 0,002

NISTATINA 0,440 15 0,000 0,596 15 0,000

Fuente: Myrian Elizabeth Chicaiza Chiguano

En la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk, todos los valores del nivel de

significación (Sig) en las muestras son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), por lo

tanto se comprueba la hipótesis alterna, que menciona que las muestras NO provienen

45

de poblaciones con distribución Normal, entonces para la comparación de grupos se

utiliza pruebas no paramétricas: Kruskal Wallis.

4.1.2. PRUEBA NO PARAMÉTRICA, KRUSKAL WALLIS

- Ho (hipótesis nula): Las muestras provienen de poblaciones con la misma

distribución de probabilidad (Medias, medianas similares)

- Ha (hipótesis alternativa): Existen diferencias respecto a la tendencia

central de las poblaciones (medias medianas no son similares)

Tabla 3.- Comparación entre todas las sustancias: Kruskal Wallis

Descriptivos

HALOS

N Media Desviación

estándar

95% del intervalo de

confianza para la media Mínimo Máximo

Límite

inferior

Límite

superior

CILANTRO 25% 15 6,27 0,46 6,01 6,52 6 7

CILANTRO 50% 15 10,27 0,80 9,82 10,71 9 12

CILANTRO 100% 15 15,47 0,92 14,96 15,97 14 17

NISTATINA 15 18,40 0,74 17,99 18,81 18 20

SUERO FISIOLÓGICO 15 6,00 0,00 6,00 6,00 6 6

Total 75 11,28 5,02 10,12 12,44 6 20


46

Figura 16. Comparación de medias entre sustancias


- La muestra de CILANTRO 25% tiene una de las medias más bajas con un valor

de 6,27mm

- La muestra CILANTRO 50% con una media de 10,27mm,

- La muestra CILANTRO 100% con una media de 15,27mm

- La muestra de NISTATINA con una media de 18,40mm

- La muestra de SUERO FISIOLÓGICO con una media de 6,00mm con el valor

más bajo.

Para determinar si las diferencias entre las muestras son significativas se realiza la

prueba no paramétrica de Kruskal Wallis para muestra independientes:

6,27

10,27

15,47

18,40

6,00

0,00

5,00

10,00

15,00

20,00

CILANTRO25%

CILANTRO50%

CILANTRO100%

NISTATINA SUEROFISIOLÓGICO

COMPARACION DE MEDIAS ENTRE SUSTANCIAS

47

Figura 17. Prueba no paramétrica de Kruskal Wallis para muestra independientes


De la Prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig.

asintótica (prueba bilateral = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad),

comprobando la hipótesis alterna, que menciona que existen diferencias respecto a la

tendencia central de las poblaciones. No todas las medias, medianas de las muestras son

similares.

48

Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:

Figura 18. Prueba dos a dos entre sustancias Fuente: Myrian Elizabeth Chicaiza Chiguano

De la prueba de dos a dos son similares (significancia mayor a 0,05) tenemos:

- El suero fisiológico es similar al cilantro al 25%

- El cilantro al 25% es similar al cilantro al 50%

- El cilantro al 100% es similar a la Nistatina.

49

De la prueba de dos a dos no son similares (significancia menor a 0,05) tenemos:

- El suero fisiológico no es similar al cilantro al 50%.

- El suero fisiológico no es similar al cilantro al 100%

- El suero fisiológico no es similar a la Nistatina.

- El cilantro al 25% no es similar al cilantro al 100%.

- El cilantro al 25 % no es similar a la Nistatina.

- El cilantro al 50% no es similar a la Nistatina.

-

Tabla 4.- Subconjuntos Homogéneos (resumen)

HALOS

SUSTANCIAS N Subconjunto para alfa = 0.05

1 2 3 4

SUERO FISIOLÓGICO 15 6,00

CILANTRO 25% 15 6,27

CILANTRO 50% 15 10,27

CILANTRO 100% 15 15,47

NISTATINA 15 18,40

Sig. 0,964 1,000 1,000 1,000


50

Tabla 5. Sensibilidad de las sustancias


Figura 19. Sensibilidad de las sustancias


A B C

Coriandrum Coriandrum Coriandrum

Sativum Sativum Sativum

25% 50% 100%

Cant. 0 1 15 15 0 31

% 0,00% 6,66% 100% 100% 0,00% 41,33%

Cant. 0 14 0 0 0 14

% 0,00% 93,33% 0,00% 0,00% 0,00% 18,66%

Cant. 15 0 0 0 15 30

% 100% 0,00% 0,00% 0,00% 100% 40%

Cant. 15 15 15 15 15 75

% 100% 100% 100% 100% 100% 100%

SE

NS

IB

IL

ID

AD Sensible

Intermediame

nte sensible

Nula

TOTAL

SENSIBILIDAD DE LA SUSTANCIA (Tabulación cruzada)

SUSTANCIAS

TOTALN

Nistatina

S

Suero

Fisiológico

0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%

A CORIANDRUM SATIVUM 25%

B CORIANDRUM SATIVUM 50%

C CORIANDRUM SATIVUM 100%

N NISTATINA

S SUERO FISIOLÓGICO

SENSIBILIDAD DE LAS SUSTANCIAS

NULA INTERMEDIAMENTE SENSIBLE SENSIBLE

51

4.2.DISCUSIÓN

Estudios como Ardila Q. et al., Saeed et al., P. Aelenei et al., Asma Ashraf et.al,

Azucero et al, que fundamentan la actividad antimicrobiana del coriandrum

sativum, Ardila Q. et al. (2009) Estudió la actividad antimicrobiana de varios

extractos de plantas entre ellas el coriandrum sativum frente a Clostridium

perfringens, bacteria Gram positiva anaerobia, utilizando el método Kirby-Bauer y

medio de difusión de pozos de 5mm, en el cual se produjo dos extractos con

diferentes vehículos, el hexano-diclorometano inhibiendo con mayor eficacia

comparado con el hexano-cloroformo, cuyo gol estándar en el estudio era la

vancomicina.

Soares et al. (2012) menciona que el aceite esencial del C. sativum es activo in vitro

contra Microsporum canis y Candida spp. Lo que demuestra buena actividad

antifúngica. Los MIC y las concentraciones fungicidas mínimas (MFC) para las

cepas de M. canis variaron de 78 a 620 y de 150 a 1,250 μg / mL, respectivamente, y

los MIC y MFC para Candida spp. las cepas variaron de 310 a 620 y 620 a 1,250 μg

/ ml, respectivamente.

Saeed et al., (2013) menciona que existe inhibición a los siguientes

microorganismos gram positivos y gram negativos como la eschericha coli,

estafilococos áureos, Klesiella peumonia, basillus subtillis, proteus mirabillis,

utilizaron el mismo método mencionado en esta investigación, pero usando el

extracto del coriandrum sativum.

En el trabajo investigativo de P. Aelenei et al. Publicado en el 2018 menciona que el

aceite esencial del coriandrum sativum es rico en linalool en su 70,11%, a la cual se

le atribuye su capacidad antibacterial, se aplicó in vitro a gram positivos como el

Staphylococos aureus y epidermitis y gram negativos como Pseudomonas

aeruginosa y escherichia coli, combinados con otros antibióticos como por ejemplo

la oxacilina, amoxicilina, gentamicina, tetraciclina y ciprofloxaxina. Comprobaron

que en esta combinación la concentración mínima inhibitoria de los antibióticos se

redujo. Dando resultados prometedores para el desarrollo de nuevas opciones

terapéuticas para las infecciones bacterianas.

52

Asma Ashraf y colaboradores realizaron una investigación en el 2018 con

nanopartículas resultantes de la combinación del extracto del coriandrum sativum

con nitrato de plata, verificando su actividad antimicrobiana contra gram positivos y

gram negativos. Resultado ser efectivos contra, Enterobacter aerogenes y

Staphylococcus aureus, pero con mayor efecto en basillus subtilis, Pasteurella

multocida. Potenciando sus capacidades ya que el coriandrum sativum con el

linalool afecta a la membrana celular, en cambio los iones de plata se combinan con

el ADN, inhibiendo su reproducción.

En cambio en Ecuador, la investigación realizada por Azuero y colaboradores

análisis del efecto antimicrobiano de doce plantas medicinales de uso ancestral en el

Ecuador (2016) se ha demostrado que el aceite esencial del coriandrum sativum

inhibe el crecimiento de la cándida albicans, con halos de 10 a 14 mm en las cuatro

muestras realizadas, por el método Kirby-Bauer, por el tamaño de la muestra

utilizada, el estudio puede tener falencias, en cambio en la presente proyecto

investigativo se realizó en quince muestras, para tres concentraciones al 25, 50 y

100%, demostrando que existe inhibición desde una concentración al 50%,

utilizando la misma metodología antes mencionada.

53

CAPITULO V

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

5.1.CONCLUSIONES

- Se comprobó que existe efecto antimicrobiano in vitro del aceite esencial del

coriandrum sativum al 50% y 100% de concentración sobre la cándida albicans

durante sus 72 horas de incubación.

- El aceite esencial del coriandrum sativum al 25% de concentración no posee

actividad antimicrobiana sobre cepas de cándida albicans ATCC ®10231™,

siendo su acción similar al control negativo que fue el suero fisiológico,

mostrando la cepa una sensibilidad nula a esta sustancia.

- El aceite esencial del coriandrum sativum al 50% de concentración posee


mostrando la cepa ser intermediamente sensible a esta sustancia.

- El aceite esencial del coriandrum sativum al 100% de concentración posee


mostrando la cepa ser sensible a esta sustancia, siendo similar al control

positivo que fue la Nistatina.

5.2.RECOMENDACIONES

- Se sugiere realizar esta misma investigación, pero en cambio in vivo, para

corroborar su efecto antimicrobiano y su comportamiento ante la mucosa bucal.

- Elaborar más investigaciones con el coriandrum sativum, utilizando otro tipo

principios activos de la planta, para corroborar su actividad antimicrobiana y

utilizando otro tipo de gol estándar.

54

- Analizar cada uno de los componentes que forman el aceite esencial del

coriandrum sativum, especialmente el linalool, y en qué porcentaje se encuentra,

ya que las cualidades de estos componentes pueden estar relacionados con la

calidad del suelo en donde se cultivó.

- Continuar las investigaciones en plantas tanto en especies nativas como

introducidas, pero sin olvidar la capacidad adaptativa y el acceso que las

personas pueden tener a las mismas.

55

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59

ANEXOS

ANEXO 1.- Factura de la compra de la cepa de Cándida Albicans ATCC®10231™

60

ANEXO 2. Aceptación de tutoría.

61

ANEXO 3. Coincidencia; Tema del trabajo de titulación.

62

ANEXO 4. Inscripción del Tema de Tesis con Aceptación.

63

64

ANEXO 5. Oficio a uso de laboratorio y asesoramiento de la Facultad de Química.

65

ANEXO 6. Oficio para uso de laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología.

66

ANEXO 7.- Aprobación del tema en el departamento de SEISH-UCE

67

ANEXO 8.- Certificado de Supervisión del Bioquímico Farmacéutico.

ANEXO 9.- Certificado de calidad de la cepa.

68

ANEXO 10.- Recomendaciones de activación y uso de la cepa Cándida Albicans® 10231™.

69

ANEXO 11.- Normas del manejo de desechos del Ministerio de Salud la cual se rige en la

FOUCE

70

ANEXO 12.- Certificado de la supervisión del Doctor del Laboratorio de Microbiología de la

Facultad de Odontología.

71

ANEXO 13. - Idoneidad, ética y experticia del investigador y tutor.

72

73

ANEXO 14.- Conflicto de interés del investigador y tutor.

74

75

Anexo 15. Certificado del Urkund

76

Anexo 16. Certificado de traducción del Abstract

77

78

Documents

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE … · Universidad Central del Ecuador para que realice la digitalización y publicación de este trabajo de titulación en el repositorio