IMT’ T t l Bi b d AIMT’s Total Bioburden Assays

dAndy MorenoVice President, Microbiology Sales Engineering

Cell: +559‐827‐8245Cell: +559 827 8245FAX: +866‐776‐3746

andy.moreno@imt‐pcr.comhttp://www.imt‐pcr.com

Linkedin ProfileSk pe And MorenoSkype: Andy Moreno

Slide 1 of 13

Industrial Microbial Testing

– Based in Newport Beach, Calif., manufactures and markets assays to support rapid real‐time quantitative PCR microbial testing. 

– IMT's One‐Step Total Bacteria Count (TBC)  and T t l Y t d M ld C t (YMC) tit tiTotal Yeasts and Molds Count (YMC) quantitative real‐time polymerase chain reaction (qRT‐PCR) assays replace standard plate countmethodsassays replace standard plate countmethods.

Slide 2 of 13

TRADITIONAL PLATE COUNT (48 HOURS)

Slide 3 of 13

TOTAL BACTERIA COUNT BY PCR (1 HOUR)

DNA dilutions after boil prep for PCR

Real‐Time  Standard CData Curve

Slide 4 of 13

Slide 5 of 13

“Organism Prospecting Package”

• Water/matrix/Ingredients/In Process/Final Product sample

• Total Bacterial Count (TBC) screen•Is there bacteria? 

•Presence/Absence•QuantitationQuantitation•Gram Negative/Gram Positive

•Total Yeasts and Molds Count (YMC) screen•Are there yeasts and molds? 

•Presence/Absence•Quantitation•Quantitation

Slide 6 of 13

IMT’s TBA: “Internal Investigation Tool”

• Any matrix, post sample preparation30 i t ti i S tC l• 30‐minute run time in SmartCycler

• Sensitivity to one (1) cell for TBCP /Ab• Presence/Absence

• Quantification

Slide 7 of 13

IMT’s OneStep Assays

~30 minute run time

85 µl molecular‐grade water added

5 µl purified DNA Sample

25 µl Total reaction volume in

30 minute run time

grade water added to primers & probes included in dried‐down reagents

Sample volume in SmartCylcer tube

Slide 8 of 13

Typical QA/QC Protocol

• IMT TBA Assays and Cepheid SmartCyclerIMT TBA Assays and Cepheid SmartCycler• Minimally‐trained QA Team• 30 minute easy to use cheap results• 30 minute, easy‐to‐use, cheap results

Slide 9 of 13

Collaborative Study to evaluate a Total Bacteria Count A i Q tit ti R l Ti PCRAssay using Quantitative Real‐Time PCR

A collaborative study was undertaken to demonstrate the precision and accuracy of a total bacteria count (TBC) assay developed to run withaccuracy of a total bacteria count (TBC) assay developed to run with commercially available PCR reagents and a rapid thermocyclingplatform.  The TBC assay can be completed within one hour.  The TBC assay has many applications for enhanced HACCP applications 

The overall conclusions are that all the labs performed well in constructing the standard curve and had some variance with the unknown samples.  However, the results show that all collaborators 

f ll d h C if b i l l d lsuccessfully used the TBC assay to quantify bacterial load accurately within one hour.  The TBC assay can be used for a rapid real‐time measure of bacteria in many diverse applications and support HACCP for real‐time statistical process control. 

Slide 10 of 13

IMT Testing Assays‐Screen for presence/absence, quantitation

‐Total Bacteria Count (TBC)

‐Total Yeasts and Molds Count (YMC)

‐Salmonella

E li i‐E. coli species‐O15:H7

‐Listeria

‐C. botulisum “A”, “B”, “C” and “E”

Slide 11 of 13

Quantitative Real‐Time PCR SystemsQuantitative Real Time PCR Systems

Eppendorf

Slide 12 of 13

Questions & AnswersQuestions & Answers

Slide 13 of 13