DijagnostikaDijagnostikaDijagnostika

Dijagnostičke tehnikeDijagnostičke tehnikeDijagnostičke tehnikeDijagnostičke tehnike

• Izolacija i identifikacija uzročnika• Izolacija i identifikacija uzročnika• Izolacija i identifikacija uzročnika– Kultura– Kultura– Kultura

• Podloge za obogaćivanje• Podloge za obogaćivanje

• Selektivne podloge• Selektivne podloge• Selektivne podloge

– Biohemijske karakteristike i serotipizacija– Biohemijske karakteristike i serotipizacija– Biohemijske karakteristike i serotipizacija

• Serološke tehnike• Serološke tehnike• Serološke tehnike– Brza krvna aglutinacija– Brza krvna aglutinacija– Brza krvna aglutinacija

– Brza serumska aglutinacija– Brza serumska aglutinacija– Brza serumska aglutinacija

– Tube agglutination test– Tube agglutination test– Tube agglutination test

– Micro-agglutination test– Micro-agglutination test– Micro-agglutination test

– Drugi testovi (ELISA, hemaglutinacija, Coombs, itd.)– Drugi testovi (ELISA, hemaglutinacija, Coombs, itd.)

UzorciUzorciUzorciUzorciPodloge UzorciPodloge Uzorci

Bujon za Creva, uključujući cekalne tonzile i sadržaj crevaBujon za obogaćivanje

Creva, uključujući cekalne tonzile i sadržaj crevaLjuske jajaobogaćivanje Ljuske jaja

Bujon za Bris kloakeBujon za obogaćivanje i

Bris kloakeSvež fecesobogaćivanje i

selektivne podlogeSvež fecesUzorak iz okolineselektivne podloge Uzorak iz okolineSadržaj jajaSadržaj jajaSadržaj jajaEmbrionEmbrion

Inhibitorni i Sadržaj žučne keseInhibitorni i Sadržaj žučne keseInhibitorni i neinhibitorni bujon

Sadržaj žučne keseOrgani i tkivaneinhibitorni bujon

i selektivne i Organi i tkiva

i selektivne i neselektivne Kliconoše – S. Pullorum – jajnik, jajovod, slezinaneselektivne podloge

Kliconoše – S. Pullorum – jajnik, jajovod, slezina– S. Gallinarum – jajnik, jajovod, slezina, jetra, podloge – S. Gallinarum – jajnik, jajovod, slezina, jetra,

žučna kesa žučna kesa žučna kesa

Serološki testovi Puna krv, serumSerološki testovi Puna krv, serum

UzorciUzorciUzorciUzorci

• najbolji uzorci su nekontaminisani, sa vidljivo • najbolji uzorci su nekontaminisani, sa vidljivo • najbolji uzorci su nekontaminisani, sa vidljivo

promenjenih tkiva, uzeti aseptično. promenjenih tkiva, uzeti aseptično. promenjenih tkiva, uzeti aseptično.

• najbolje je uzeti uzorke sa životinja koje su na • najbolje je uzeti uzorke sa životinja koje su na • najbolje je uzeti uzorke sa životinja koje su na prethodnom serološkom testu dale + reakcijuprethodnom serološkom testu dale + reakcijuprethodnom serološkom testu dale + reakcijuprethodnom serološkom testu dale + reakciju

• ptice sa kojih se uzima uzorak, ne bi trebalo da • ptice sa kojih se uzima uzorak, ne bi trebalo da • ptice sa kojih se uzima uzorak, ne bi trebalo da su tretirane Ab 2-3 nedelje pre uzorkovanjasu tretirane Ab 2-3 nedelje pre uzorkovanjasu tretirane Ab 2-3 nedelje pre uzorkovanja

• S. Gallinarum i S. Pullorum se teško izoluju iz • S. Gallinarum i S. Pullorum se teško izoluju iz • S. Gallinarum i S. Pullorum se teško izoluju iz fecesa i uzoraka iz okolinefecesa i uzoraka iz okolinefecesa i uzoraka iz okoline

UzorciUzorciUzorciUzorci

• S. Gallinarum i S. Pullorum dobro rastu na nesele-• S. Gallinarum i S. Pullorum dobro rastu na nesele-• S. Gallinarum i S. Pullorum dobro rastu na nesele-ktivnim podlogama, ali podloge za obogaćivanje i ktivnim podlogama, ali podloge za obogaćivanje i ktivnim podlogama, ali podloge za obogaćivanje i selektivne podloge su bolje jer sadrže inhibitorne selektivne podloge su bolje jer sadrže inhibitorne selektivne podloge su bolje jer sadrže inhibitorne supstance koje otežavaju rast dr. μosupstance koje otežavaju rast dr. μosupstance koje otežavaju rast dr. μo

• S. Pullorum raste sporo i daje male kolonije pa se • S. Pullorum raste sporo i daje male kolonije pa se • S. Pullorum raste sporo i daje male kolonije pa se preporučuje inkubacija na selektivnim podlogama preporučuje inkubacija na selektivnim podlogama preporučuje inkubacija na selektivnim podlogama tokom 48htokom 48htokom 48h

• S. Gallinarum raste brže, daje veće kolonije (1-2 • S. Gallinarum raste brže, daje veće kolonije (1-2 • S. Gallinarum raste brže, daje veće kolonije (1-2 mm), blago izdignute, karakterističnog mirisa (se-mm), blago izdignute, karakterističnog mirisa (se-mm), blago izdignute, karakterističnog mirisa (se-minalna tečnost)minalna tečnost)minalna tečnost)

PodlogePodlogePodlogePodloge

• Neinhibitorne podloge• Neinhibitorne podloge• Neinhibitorne podloge

– hranljivi agar – hranljivi agar (beef extract, peptone, agar)– hranljivi agar (beef extract, peptone, agar)

– krvni agar– krvni agar Hranljivi agar– krvni agar Hranljivi agar

• Pre-enrichment broth• Pre-enrichment broth• Pre-enrichment broth

– buffered peptone water– buffered peptone water– buffered peptone water

– universal pre-enrichment broth– universal pre-enrichment broth– universal pre-enrichment broth

Krvni agarKrvni agar

PodlogePodlogePodlogePodloge

• Tečne selektivne podloge za obogaćivanje• Tečne selektivne podloge za obogaćivanje• Tečne selektivne podloge za obogaćivanje

– Selenit F bujon – Selenit F bujon – Selenit F bujon

– inhibiše koliformne μo– inhibiše koliformne μo– inhibiše koliformne μo

– Tetra-thionate/brilliant green broth – Tetra-thionate/brilliant green broth – Tetra-thionate/brilliant green broth

– inhibiše koliformne μo i Proteus, ali i – inhibiše koliformne μo i Proteus, ali i – inhibiše koliformne μo i Proteus, ali i neke sojeve S. Pullorum/Gallinarumneke sojeve S. Pullorum/Gallinarumneke sojeve S. Pullorum/Gallinarum

Rappaport-Vassiliadis soya peptone broth– Rappaport-Vassiliadis soya peptone broth– Rappaport-Vassiliadis soya peptone broth

PodlogePodlogePodlogePodloge

• Čvrste selektivne podloge:• Čvrste selektivne podloge:• Čvrste selektivne podloge:

•MacConkey agar•MacConkey agar•MacConkey agar

•BGA•BGA•BGA

•XLD agar•XLD agar•XLD agar

MacConkey agarMacConkey agar

– inhibiše rast ne-enteričnih (G+) μo (žučne soli, kristal violet)– inhibiše rast ne-enteričnih (G+) μo (žučne soli, kristal violet)

– diferentuje laktoza + (roza kolonije) od laktoza – (bezbojne)– diferentuje laktoza + (roza kolonije) od laktoza – (bezbojne)

– NaCl ograničava rast Protus-a– NaCl ograničava rast Protus-a

– podloga izbora za direktnu inokulaciju iz tkiva– podloga izbora za direktnu inokulaciju iz tkiva– podloga izbora za direktnu inokulaciju iz tkiva

Laktoza +: Laktoza - :Laktoza +: Laktoza - :Laktoza +:

Npr. E. coli

Laktoza - :

Npr. SalmonellaNpr. E. coli Npr. Salmonella

ShigellaShigella

BGA (Brilliant Green Agar)BGA (Brilliant Green Agar)

– inhibiše rast G+ i većine G- μo – inhibiše rast G+ i većine G- μo

– za diferencijaciju kolonija enteričnih bakterija– za diferencijaciju kolonija enteričnih bakterija

– Salmonella, (Shigella ,Citrobacter) - bledo crvene, prozirne, – Salmonella, (Shigella ,Citrobacter) - bledo crvene, prozirne, konveksne kolonije (1-3 mm)konveksne kolonije (1-3 mm)konveksne kolonije (1-3 mm)

– Lactoza + bakterije (koliformne) – zelene kolonije– Lactoza + bakterije (koliformne) – zelene kolonije– Lactoza + bakterije (koliformne) – zelene kolonije

– Podloga izbora nakon podloge za obogaćivanje– Podloga izbora nakon podloge za obogaćivanje– Podloga izbora nakon podloge za obogaćivanje

XLD (Xylose Lysine Deoxycholate) agarXLD (Xylose Lysine Deoxycholate) agarXLD (Xylose Lysine Deoxycholate) agar

– inhibiše rast ne-enteričnih μo– inhibiše rast ne-enteričnih μo– inhibiše rast ne-enteričnih μo

– sadrži šećere (ksilozu, laktozu, saharozu), aminokiselinu lizin, – sadrži šećere (ksilozu, laktozu, saharozu), aminokiselinu lizin, – sadrži šećere (ksilozu, laktozu, saharozu), aminokiselinu lizin, indikator (fenol crveno) i sumporindikator (fenol crveno) i sumpor

S. Pullorum – male, crvene prozirneprozirne kolonije– S. Pullorum – male, crvene prozirneprozirne kolonije– S. Pullorum – male, crvene prozirneprozirne kolonije

– S. Gallinarum – male crvene kolonije sa crnimcrnim centrom (H S)– S. Gallinarum – male crvene kolonije sa crnimcrnim centrom (H2S)– S. Gallinarum – male crvene kolonije sa crnimcrnim centrom (H2S)

Identifikacija uzročnikaIdentifikacija uzročnikaIdentifikacija uzročnikaIdentifikacija uzročnika

Chart flow [praktikum]• Chart flow [praktikum]• Chart flow [praktikum]

• Biohemijski testovi:• Biohemijski testovi:• Biohemijski testovi:• TSI agar• TSI agar

• Lysine iron agar• Lysine iron agar• Lysine iron agar

• Lysine decarboxylation medium• Lysine decarboxylation medium

• Urea agar• Urea agar

• Tryptone/tryptophan medium za indol reakciju• Tryptone/tryptophan medium za indol reakciju• Tryptone/tryptophan medium za indol reakciju

• Dulcitol• Dulcitol

• Maltoza• Maltoza

• Ornitin dekarboksilacija• Ornitin dekarboksilacija• Ornitin dekarboksilacija

• Polučvrsti medijum za motilitet• Polučvrsti medijum za motilitet

Biohemijski testoviBiohemijski testoviBiohemijski testoviBiohemijski testovi

Serološki testoviSerološki testoviSerološki testoviSerološki testovi

• se koriste za testiranje jata, ne individua, jer • se koriste za testiranje jata, ne individua, jer • se koriste za testiranje jata, ne individua, jer pojedinačni rezultati variriajupojedinačni rezultati variriajupojedinačni rezultati variriaju

1. Brza krvna aglutinacija1. Brza krvna aglutinacija1. Brza krvna aglutinacija

2. Brza serumska aglutinacija2. Brza serumska aglutinacija2. Brza serumska aglutinacija

3. Tube agglutination test3. Tube agglutination test3. Tube agglutination test3. Tube agglutination test

4. Micro-agglutination test 4. Micro-agglutination test 4. Micro-agglutination test

5. Drugi serološki testovi5. Drugi serološki testovi5. Drugi serološki testovi

Brza krvna aglutinacijaBrza krvna aglutinacijaBrza krvna aglutinacijaBrza krvna aglutinacija

• može da se koristi i u terenskim uslovima, za detekciju S. Pullorum • može da se koristi i u terenskim uslovima, za detekciju S. Pullorum i S. Gallinarumi S. Gallinarum

kokoške se mogu testirati u bilo kom uzrastu, mada se negde • kokoške se mogu testirati u bilo kom uzrastu, mada se negde • kokoške se mogu testirati u bilo kom uzrastu, mada se negde ograničava na starije od 4 nedelje (zbog maternalnih At)ograničava na starije od 4 nedelje (zbog maternalnih At)ograničava na starije od 4 nedelje (zbog maternalnih At)

• nije pouzdan kod ćuraka – mnogo lažno pozitivnih rezultata• nije pouzdan kod ćuraka – mnogo lažno pozitivnih rezultata• nije pouzdan kod ćuraka – mnogo lažno pozitivnih rezultata

• Ag – S. Pullorum soj Ag strukture 9, 12 , 12• Ag – S. Pullorum soj Ag strukture 9, 121, 1231 3

• Ag se boji kristal violet bojom• Ag se boji kristal violet bojom

Izvođenje:Izvođenje:

1. Kap obojenog Ag i kap sveže krvi (iz krilne vene, iglom sa trouglastim vrhom)1. Kap obojenog Ag i kap sveže krvi (iz krilne vene, iglom sa trouglastim vrhom)

2. Mešanje 2 kapi staklenim štapićem pa rotiranje ploče sa kapima 2 minuta2. Mešanje 2 kapi staklenim štapićem pa rotiranje ploče sa kapima 2 minuta

3. Pozitian rezultat – vidljiva aglutinacija nakon 2 minuta3. Pozitian rezultat – vidljiva aglutinacija nakon 2 minuta

Brza serumska aglutinacijaBrza serumska aglutinacijaBrza serumska aglutinacijaBrza serumska aglutinacija• koristi se isti obojeni Ag i serum (umesto krvi)• koristi se isti obojeni Ag i serum (umesto krvi)• koristi se isti obojeni Ag i serum (umesto krvi)

• uzorci se testiraju unutar 72h od sakupljanja• uzorci se testiraju unutar 72h od sakupljanja

• pozitivni rezultati se mogu potvrditi TAT-om• pozitivni rezultati se mogu potvrditi TAT-om

Tube Agglutination TestTube Agglutination TestTube Agglutination TestTube Agglutination Test

Mikro-agglutination testMikro-agglutination testMikro-agglutination testMikro-agglutination test

Drugi serološki testoviDrugi serološki testoviDrugi serološki testoviDrugi serološki testovi• ELISA, hemaglutinacija, imunodifuzija itd.• ELISA, hemaglutinacija, imunodifuzija itd.