8
The Cytotoxicity and Apoptosis Induced by 4-Tertiary Butylphenol in Human Melanocytes are Independent of Tyrosinase Activity Fan Yang, Rangaprasad Sarangarajan, I. Caroline Le Poole, Estela E. Medrano,* and Raymond E. Boissy Department of Dermatology, University of Cincinnati, Cincinnati, Ohio, U.S.A.; *Huf®ngton Center on Aging and Departments of Cell Biology and Dermatology, Baylor College of Medicine, Houston, Texas, U.S.A. It has been known for several decades that cutaneous depigmentation, i.e., contact/occupational vitiligo, can be caused by some phenolic derivatives that have a similar structure to tyrosine. Among these phenolic depigmenting agents, 4-tertiary butylphenol is the most potent. The cutaneous depigmentation induced by phenolic derivatives results from the loss of func- tional melanocytes. Tyrosinase is a melanocyte speci®c copper-containing enzyme that catalyzes the conversion of the amino acid tyrosine, through a complex series of intermediates, to melanin. In this study we tested the hypothesis that the cytotoxicity induced by 4-tertiary butylphenol is mediated by tyrosinase and occurs via an apoptotic process. Melanocyte cultures derived from African-American and Caucasian donors exhibiting a 3-fold difference in tyrosinase activity and 14-fold difference in melanin content demonstrate comparable concentra- tion-dependent sensitivity to 4-tertiary butylphenol. In addition, cultures of dermal ®broblasts and epi- dermal keratinocytes exhibited similar and reduced sensitivity, respectively, to 4-tertiary butylphenol compared with autologous melanocytes. Two mela- noma cell lines, one melanotic and one amelanotic lacking the expression of both tyrosinase protein and activity, when transfected with the tyrosinase cDNA, exhibited no alteration in its sensitivity to 4-tertiary butylphenol. These data suggest that 4-tertiary butyl- phenol cytotoxicity is not mediated via tyrosinase. Melanocytes treated with 4-tertiary butylphenol, however, did exhibit plasma membrane blebbing, DNA fragmentation, and phosphatidylserine re- localization indicating that 4-tertiary butylphenol induced melanocyte destruction occurs by an apop- totic process. Key words: cell death/melanogenesis/ phenol/transfection/viability. J Invest Dermatol 114:157± 164, 2000 T he depigmenting action of 4-tertiary butylphenol (4-TBP) has been demonstrated both in human skin and animal models (Malten et al, 1971; Gellin et al, 1979; Bajaj et al, 1990). Clinical and experimental studies have corroborated that certain phenolic and catecholic derivatives can induce cutaneous depigmentation and occupational vitiligo (Gellin et al, 1970, 1979; Calnan and Cooke, 1974; Jimbow et al, 1974). 4-TBP appears to be the most potent phenolic derivative causing occupational vitiligo. For example, vitiligo was detected in 54 of 198 men exposed by physical contact as well as inhalation to 4-TBP during its manufacture (James et al, 1977). There are many opportunities for individuals to be exposed to this phenolic compound as it is included in synthetic leather, plastics, latex glues, and rubber anti-oxidants (Fisher, 1976). Vitiligo induced by 4-TBP and its homologs is morphologically indistinguishable from idiopathic vitiligo (Gellin et al, 1979; Fisher, 1986). Biopsies of amelanotic lesions from patients with occupa- tional vitiligo demonstrated absence of melanocytes plus keratino- cytes exhibiting minimal morphologic abnormalities (Malten et al, 1971). Why melanocytes are very susceptible to 4-TBP and homologs is currently unclear. It has been demonstrated that the copper-containing enzyme tyrosinase (EC 1.14.18.1) is the predominant enzyme involved in melanin formation by melanocytes (Hearing and Jimenez, 1987). Tyrosinase catalyzes the rate-limiting step of melanogenesis, the hydroxylation of tyrosine to L-3,4-dihydrophenylalanine (L-DOPA) (for review, Sanchez-Ferrer et al, 1995). In addition, tyrosinase subsequently catalyzes L-DOPA oxidation to dopa- quinone and eventually the conversion of 5,6-dihydroxyindole to indole-5,6-quinone. Tyrosinase is synthesized as a 55 kDa protein. Following glycosylation, tyrosinase shows multiple isoforms and the molecular weight of the mature protein shifts to about 65±75 kDa (Hearing and Tsukamoto, 1991; Chen et al, 1995). The amount of melanin in the epidermis is determined, at least in part, by the activity of tyrosinase (Halaban et al, 1983). It has been proposed that the tyrosinase activity of a melanocyte in¯uences the cytotoxic susceptibility of the cell to phenolic derivatives. As the structures of phenolic derivatives and tyrosine are similar, it has been proposed that phenolic derivatives can be oxidized by tyrosinase to produce some chemical intermediates toxic to melanocytes selectively (Riley, 1970). The mechanism by which 4-TBP and homologs induces depigmentation and destruction of melanocytes is unknown. Cell Manuscript received February 25, 1999; revised September 15, 1999; accepted for publication October 4, 1999. Reprint requests to: Dr. Raymond E. Boissy, Department of Dermatology, University of Cincinnati, PO Box 670592, Cincinnati, OH 45267-0592. Email: [email protected] Abbreviations: NHM, normal human melanocytes; OCA 1, oculo- cutaneous albinism type 1; 4-TBP, 4-tertiary butylphenol. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 157

The Cytotoxicity and Apoptosis Induced by 4-Tertiary Butylphenol in Human Melanocytes are Independent of Tyrosinase Activity

Embed Size (px)

Citation preview

��� ��������� �� �������� �� �� �� �������������������� � ����� ���������� ��� �� ���� ��� ����������� �����

��� ����� ��������� ������� ��� �� ������� �� ������ ����� �� �������� ��� ������� �� ������������� �� ����������� ��� ���� �� ���!������� ���!������� "#��� ����$�% �&'�(����� ����� �� $���� ��� ��������� �� ���� ������� ���

����������� ����� ������� �� ����!���� &�'���� )�*�� ����$�

�� ��� ���� ����� ��� ������� �� �� ���� �������� �� ��������! "�"! �����#��������� ��� �!�� �� ���� �� ���� ������ �������� ���� ����� ����� �������� �� �������" ���� ����� ������ �� ����� � ����! ��������� ����������� � ������� ������" ��� �������� �� �������� � �� �� ������ �������� ������� ���� ��� ���� �� ��������� ����������" ��������� � � ������������$ ������������ ��%��� ���� �����%�� ����������� �� ��� ���� � �������! ����� � ������� ����� �� ������ ����! �� ������" �� ������ � �� ����� ��� ��������� ���� ��� ��������� �� �� ��������� ����������� � �� ��� ����������� �� ���� �� �� ������� ������"��������� ������� ���� ���� �������������� ������� ����� ������ � &���� �������� ��������� ����� �� '����� ������� ������� ������ ���������� ��������� ������������ ���� ��� �������� �� ��������� �����������"

�� � ���! ������� �� ����� $��������� �� ��� ����� ����������� ������ ����� �� �� �� ��������! ����������! �� ��������� ����������������� ��� ������ ��� ����������" ��� ��������� ��� ����! ��� ������� �� ��� ������������ ��� ��������� �� ���� ��������� ������ �� �����! ���� ��������� ��� ��� ��������� ()�!������ �� ��������� � �� �������� �� ��������������������" ����� ��� �� ��� ���� ��������� ������������ �������� � ��� �� ��� �� ���������"���������� ������ ��� ��������� �����������!�������! ����� ������ �������� ������ !()� ��� ��������! �� �������� ������� �������%���� � ��� ���� ��������� ������������ �� ��������� �������� ���� �� �� �������� ������" ��� ����� ��� ��� ����������������������� ������ ����������� �� � ����� ����� �� ������ �!�" #$$$

)#� ������������ �!���� �� +,������ -'����#����.+,)��/ #� -��� ���������� -��# �� #'��� 0����� ������ ����� .������ �� ��� 1231% 4����� �� ���1232% �� � �� ��� 1225/� �����!�� ��� �*����������'��� #� � !��-����� �#�� !����� �#�����! ���

!���!#���! ��� ��� � !�� ���'!� !'�����' �������������� ����!!'�������� ������� .4����� �� ��� 1235� 1232% ������ ��� ���0��123+% 6��-�7 �� ��� 123+/� +,)�� ����� �� -� �#� ��� �������#�����! ��� ��� � !�'��� �!!'�������� �������� �� �*������ ������� 7� ����!��� �� 8+ �� 129 ��� �*���� -� �#��!�� !����!�� 7��� � ��#������� �� +,)�� �'��� �� ���'��!�'� .6��� �� ���1233/� )#�� �� ���� �����'����� �� ���� ��'�� �� -� �*������ �#� �#�����! !����'�� � �� � ��!�'��� �� ���#���! ����#�������!� ����* ��'�� ��� '--� ����,�*����� .��#�� 123:/�;������� ���'!�� -� +,)�� ��� �� #������ � ���#�����!������������'�#�-�� ��� �������#�! ������� .4����� �� ��� 1232% ��#��129:/� ������ �� ���������! ����� ��� ������� 7��# �!!'��,������ ������� ���������� �-��!� �� ������!��� ��' 0������,

!��� �*#�-����� ������� ���#�����! �-��������� .������ �� ���1231/� <#� ������!��� �� �� '!����-�� �� +,)�� ���#������ � !'����� '�!����

�� #� -��� ���������� �#�� �#� !����,!��������� ��=���������� .�� 1�1+�19�1/ � �#� ���������� ��=��� �� �� ���� ������� �������� -� ������!��� .&����� ��� 6�����=� 1293/�)������ !�����=� �#� ���,�������� ��� �� �������������#� #���*������� �� ������ �� �,>�+,��#����#�����������.�,�"�$/ .�� � ��7� ���!#�=,��� �� ��� 1228/� �� ���������������� '-�?'����� !�����=� �,�"�$ �*������� �� ����,?'����� ��� � ���'���� �#� !�� ���� �� 8�:,��#���*������� ��������,8�:,?'������ )������ � ���#��=�� � � 88 0�� ������������7��� ���!��������� ������� #�7 �'������ ����� ��� �#�����!'�� 7���#� �� �#� ���'� ������ #��� �� �-�'� :8@38 0��.&����� ��� )'0������ 1221% �#�� �� ��� 1228/� )#� ���'�� ��������� �� �#� ������� � ���������� �� ���� �� ���� -� �#��!�� ��� �� ������� .&���-�� �� ��� 129>/� �� #� -��� ������ �#���#� ������� �!�� ��� �� � ������!��� ��A'��!� �#� !�����*�!'!����-����� �� �#� !��� �� �#�����! ��� ��� �� $ �#� �'!�'� ���#�����! ��� ��� � ��� ������ �� ������ �� #� -��� �������#�� �#�����! ��� ��� � !�� -� �*���=�� -� ������� �� ���'!���� !#���!�� ����������� ��*�! �� ������!��� ���!�� ���.������ 1235/�

)#� ��!#���� -� 7#�!# +,)�� ��� #������ ���'!��������������� ��� ���'!���� �� ������!��� � '�0��7�� ����

���'!��� �!�� �� ��-'�� B8� 1222% � ��� ������-� 18� 1222%�!!����� �� �'-��!����� "!��-� +� 1222�

������ �?'�� ��C �� ������� �� ����� ��������� ������������� ��� ���� �� ���!������� �" ��* :3582B� ���!�������"& +8B:3,582B� �����C -����D�,�����'!���'

$--� ������C E&�� ����� #'��� ������!���% "�$ 1� �!'��,!'�����' ��-���� ���� 1% +,)��� +,������ -'����#�����

55BB,B5BFG55GH18�55 I ������#� � B555 -� )#� ��!���� �� �� ������� � ����������� ��!�

'*+

����# �������� �!!' -� ���#� ������� � ��!��� $������� ��������� !��� ����#� � � ������!���� ��������� ��� ��'�������!�� $������ � ��!����� 7��# !��� #��0���� ��������-��� -��--���� !#������ !����������� ��� �'!��� �E$������������ .�� � ��7� ���7��� 122+/� $������ !�� -��#�'�#� �� � � ���� ��� ���� ��!� �� ����� !��� 7��# ������������� �� '�'����� !��� � ��'�� $������ � !�������� -����� ������� '!# � -!�,B� �8>� !,��! .���7��� 122+/� ��!������ !��� ���'!���� �� ��!�� ����� �� ��A������������ �� �#� ��'� -� ����� �� !��������! !�����'��� ������!���'�� ��!��

�� �#� �'�� 7� ���������� �#�� �#� !�����*�!��� ���'!�� -�+,)�� � ����������� �� ������� �!�� ��� ��� �#� !�����*�! !�������# !�'�� -� +,)�� � �� ��������! ��!� �� ������!����

�$)���$�� $E� ��)&"��

���� ������ ����� !'��'� �� ����� #'��� ������!��� .E&�/7�� ���-��#�� ��� �������� ���0�� �-������ ��� �������� 0�� ����J����� $��!��,$���!��� ��'!����� ��� �!'��!'�����' ��-���� ���� 1."�$ 1/K � ��!�-�� �� ��'�� .$-���,����0 �� ��� 122B% L#�� �������� 122+/� )#� ��7�# ����'� �� ������!��� !'��'� !������ ������ 18> '���������� 7��# 15@9� �,������!��� ���'������#������ 1�� ������� ����� 1�� ������ � ����� 5�: �� #'����!��-����� -��! (-�-��� ��7�# ��!�� ����� 8�� ��'��� ����� 9 ��1B,�,������!������#�-��,1>,�!������ +M ����� -� ��� �'� .����'!#��� ��� ������ �� ��'�� �"/ ��� 1� ����-����!G����,��!���!��'���� .4�-!�� ���� 4��� ������ E�/�

�'�����' (-�-��� !'��'� 7�� ���-��#�� ��� �#� ���� ���������� �������� ���0�� �-������ ��� $��!��,$���!�� ��� ��'!�������� ��'��� $��� ����� ��������� �#� ���� 7� ���!�� �� !����������� B # �� >3��� ���*��� ��� ����� ���� � B8 !�B 7��� 7��# (-�-�����7�# ����'� !������� �� ��� ����'� .4�-!�/ !��������� 15M �����-� ��� �'� ��� 1� ����-����!G����,��!���! ��'���� .4�-!�/�

&'��� ����� 0������!��� 7�� ���-��#�� ��� �#� ������� ���������� ���0�� '��� �#� ���#�� ��!�-�� ���7#�� .�� ����� �� ��� 122>/�)#� ��7�# ����'� �� 0������!��� !'��'� !������ �� ����'� 18+!��������� #'��� 0������!��� ��7�# '�������� ��� ��!����������!�� .�������� "�/ ��� 1� ����-����!G����,��!���! ��'�����

��������! ���,���,6 .4'�� �� ��� 1292/ ��� ���������! ��������.��� ���� ���!������ ����������/ !��� ���� �*����� ��� ��!0��� �#��*����� �� ������� ������ ��� �!�� ���� ���!�� ��� .�� ������ -� ������ �� ������/� 7�� ���������� �� �'�-�!!�N ������� �����N����'�G�,1B .1C1/ ����� !��������� 5�>�� ����!��� ���� .�����/� 8����'��� ����� 8�� ������� ����� 8�� �������� ��7�# ��!�� �������� 15M ����� -� ��� �'��

����������� �� ��� ������ ���� 7�� ����� �� �����!��� 2�: !�B

7��� �� :� 15+ !��� �� 7��� ��� ����7�� �� ����!# �� B+ #� )#�� !���7�� ������ 7��# +,)�� �� �������� !��!�������� � 7��# �?'�� ��'���� �#�!�� ����� .��#����/ �� ���' ���� $��� �#� ��������� �#� 7���7�� 7�#�� �7�!� 7��# �#��#���,-'����� ����� .���/ ��� ����!#�� !���7�� ������=�� ��� !�'���� '��� � ��'��� ��'����

��������� ����� )����� #���*���� 7� ��������� ��� !'��'��!��� .����*������� B� 15:/ ��'-���=�� �� 855�� �� 5�8M E�+5G��� -����!������ $��� !�����'������ .>555� �/ �� +�� �� 15���� �#�'�������� 7� !����!��� ��� '�� �� ������ ������������ �����=�����! ��� � ��!�-�� .L#�� ��� ����� 122+/� �� #��� �#���!���� ��*�'�� !��������� 15 ��� &>,������ ���� .��!�(! �!�� ���8+�B�� �� ����/ .�'����� ������ �$/� 95 �� �,�"�$� ��� 155������� ������ ����� 7� ��!'-���� �� >3�� �� :5���� $�� ����� 7������� �� �����!���� )#� �����!�� ��� �� �#� ��'�� �� ����'� 7��� �������'��� ��=�����! #���*������� �� ������ �� �"�$ 7� !�'���� �� ���!0�� 1255 �$ ��?'�� !����������� �����=�� )����� #���*�����!�� ��� 7� �*���� � 15:��� �� # �� �� �������

������ ����� )���� ������� !������ 7� ��������� � �� ��'����!�-�� .L#�� ��� ����� 122+/� �� -���� 155�� #��������� ��������!��� �� 5�8M E�+5G��� 7�� ��'-���=�� �� 5�8�� �� 5�1����'� #���*��� ��� �#� ����!�� ������ �� �#� ��'���� 7� ���'�� ��+38 �� '��� � ������ ��� 1551 ��' ��!���#������� .��!#���� E�/�

,���� ��������� $ 1�99 0- ���� ������� !��������� �#� �'�������# #'��� ������� !�E$ 7� ������� ��� �!�F;,> �!�� .�#� ������� � <������ "������ ��� ��!#�� O���� ��� ���� �� ��������/ ���

'-!����� ���� �#� '��?'� ���� ��� �� �#� ���!��-�� ����������*����� �!�� �!�E$ >�1.P/ .�� ������� ���-��� �$/� )#��!�E$>�1.P/ �!�� ����7 �*����� �� !�E$ '��� �#� !����� ��!��������� �' ���� ������� )#� ���������� �� �#� ���� 7���������� -� ���!���� ��=��� ��� !��(��� -� �E$ �?'��!����

���������� &'��� ��������! .���,���,6/ ��� ���������! .���/�������� !��� 7�� ��-�� �����!��� 7��# �!�E$>�1.P/ !��������� �#��'�� �����# #'��� ������� !�E$ '��� �#� ����!���� �����!���� ������.Q'������ ;����!��� �$/� ����!���� �� �����!���� 7��# 1�8�� ����4+19 .�� ������/ 7� ����� �� ��� > ���� �����!����� �������������� �� ��� 15@1+ ���� ���!����� )#� �����!��� !��� 7��!��(��� �� �#� �*����� �� ������� -��# ��=�����!���� . ������� � ������� �!�� ��� ���/ ��� ����!'���� . �� ����� ����'����!���� 7��# ����,#'��� ������� ����-���/�

-������ ������ )���� !���'�� ������ .>5 ��/ ��� �����!��� ���'������!��� ��� !���� � ������ � !����� .���,15$ -��� !��!� !���/���� � ����� � !����� .���,���,6 ��������! �������� !���/ 7����!�������� �� � 1BM ���'� ����!�� '�����@�����!������� ���� $���-�������� �#� ���-��� 7� ��!'-���� 7��# 8M ������ �� ���0 �� ���).���� �& 3�+ 7��# 5�BM )7���,B5/ �� 1 # �� ��� �������'�������7��� -��!0���� �#� ���-��� 7� ��!'-���� � ����#� 7��#����!����� ����#'��� ������� ����-��� .� ���� ��� �� ��!#�� O������� ���� �� ��������� ����������� �E/ .1CB55/ �� BM ���0G���)�)#� ���-��� 7� 7�#�� �#�� ���� 7��# ���) ��� ��!'-���� 7��#.1C15 555/ #�����# ���*����,!�� '����� ���� ����,�--�� ��4����'����!�� ��� 7� ��������� '��� �#� ��#��!�� !#���,�'����!��!� ��!���� .$��#��� $������� &���#�� ��/�

.������ ������� �'��'�� ������!��� 7�� ����� �� �� ��-,)�0 !#��-� ���� .E'�!� E��� ����� ��/ !����� 7��# 1M ��� ������� �����7� �� 25M !��A'��!�� ������!��� ������ 7��# ���#� +,)��.+55 ��/ � �#�!�� ����� �� 1: # 7�� (*�� ��� ��!��� � ��!�-��.���� �� ��� 1229/� �����#�� �!���� 7�� �#�� ������ 7��# �� �?'��'��'���� �� '���� �!����� .BM/ ��� ���� !����� .5�>M/ �� 18��� ��!# ����#�� ��7�� ��� �#������#�� �� � 6�"� 6��,155�F �����������!��� ��!�!���� .$�� ��'� ��!���� '����� 7�� �'!#��� ���)�� ������ )'���� �$�/

�� �� % �������� ����� )$�� � � �� ������� ����!���� 0�� 7��-������ ��� )� ���� .4���#�-'�� ��/� ���A�� ������!��� 7�������� 7��# 385�� +,)�� � �#�!�� ���� �� > �� �'-�?'��� ����������� !'��'� 7�� ������� ���� ����!#�� !��� �#�� 7�� !����!������ ����'� -� !�����'������ ��� ����!#�� !��� �#�� 7�� �������� ����������=����� -� !�����'������� ���� 7�� ����-���=�� �� �� ��� ������� �E$ ������� ���'!�� �'��� ������� 7�� ��-���� '��� O����7��=��� !�� '����� 7��# ����� ����@A'��!��� �!!����� �����'��!�'�N ���'!����� ����� 7�� ��7�� ����������� '��� � ����=����'* A'��!��!� ��!�!��� ��� �#������#���

.���� ������� ����� )#� ����*�� ;,A'��!��� ���#��!������

.;,��)�/ ������� ����!���� 0�� ."�!����� ����!# ���'!�����-����� �$/ 7� '�� �� �������� !��� �� ���� ���� �� ��������)#� ���!���� �� �#� ��� � -��� �� �#�� ����*�� ;,��)� !�� -����#��#������ ���� �#�� -�!��� �*��!���'���� �*���� �� �#� !��� '��!��'��� ���� ���� �� ������� .����0 �� ��� 122B/� �� ��������� ������'������� .��/ � �*!�'��� ��� -��# ��-�� .��)� ������ �/ ��� ������������! !��� .��)� ����� �/ ��� �� !����� � ��!������� -� ���� !��������� ���� ��������! � ��!���! !��� .��)� ����� �/ .��=��0��7�!= �� ���122+/� )#������ �#� !��-������� �� �� ������� ��� ����*�� ; �������!�� ������'�# -��7��� ���� ��������! ��� ���� ��������! !����������!��� 7�� ������ 7��# +55�� +,)�� � �#�!�� ����� �� > ��$���!#�� ��� ����!#�� !��� 7�� !����!���� ���!�� ���� ��� ������ 7��#����*�� ;,��)� ��� �� �!!����� �� �#� ���'��!�'�N ���'!��������� �#� A'��!��!� ��!�!���� ���� ��������! !��� ��������� ��������� ������� �� !��� ���-��� '��!� ��� ���� ��������! � ��!���! !������������ �����7@�� ������� �#�'�#�'� �#� !�������� "�� #'����!��� 7�� !�'���� �� ��!# �� �7� �*������� ��� �#� ��!������ ������*�� ;,��)� ����� � !��� ����������

/������ ���� 7�� �����=�� ������!���� -� ��'����N � ����

�����)�

��������� �� ����0 � ���������� ����� � �������������� )����� #���*���� �!�� ��� ��� ������� !������ 7��

'*1 �$E4 �� �� )&� 6"��E$� "� �E;��)�4$)�;� ����$)"�"4�

��������� �� !'��'�� ������!��� ��� �� ��� �#�� ��'!����.E&� 1+>� :13� ��� :>5/ ��� �#�� $��!��,$���!�� .E&�:>3� 353� ��� 319/ ����� )������ �!�� ��� �� $��!��,$���!��������!��� 7� #��#� �#�� ��'!���� ������!��� .2 '&/� )#��������!� �� ��=�����! �!�� ��� -��7��� �#� #��#�� .E&� 319/��� �#� ��7�� .E&� 1+>/ 7� >,����� ��������� �#� �������!������ �� $��!��,$���!�� ������!��� 7� #��#� �#����'!���� ������!��� .2 '&/� )#� �������!� �� �������!������ -��7��� �#� #��#�� .E&� 319/ ��� �#� ��7�� .E&�:13/ 7� 1+,����� ������*�!��� �� +,)�� �� �#�� ������!��������� �� ������� �!�� ���G������� !������ 7� !��!'��������������� ������!��� !'��'� ������ 7��# +,)�� .155� 855���� 385��/ �� > � �*#�-���� !�����*�!��� �� � !��!��������,��������� ����� .2 ''/� $� 385��� �#� �'�-� �� ��-��������!��� 7� �� �#�� B5M �� !������ $��#�'�# �#�� ���'������!��� �*���� �������� �� �� �� ������� �!�� ���� �!������ � �������!� �� '!����-����� �� +,)�� 7� ��� ����=���

��������� �� ����0 � 3�� ' ���������� "�$ 1������!��� ��!0 � �'�!������ ������� ��� �� ��� ���#��=�

������� �'� �� �'������ �� ������� ���� ."������ ��� O����122+% ����=� 122+/� )#� "�$ 1 ������!��� '�� �� �#� �����7����*������� #� � �� ��'�� -��� ���������� �� ��!0 ������#���*���� �!�� ��� !��������� .L#�� ��� ����� 122+/� )#�'!����-����� �� "�$ 1 ������!��� �� +,)�� 7� ��������� ���!������ 7��# ����� ������!��� .E&� :2/ ��� �� ��� ��$��!��,$���!�� ���� .2 4/� "�$ 1 ������!��� �*#�-����������!���� ����� ����� ��� �� +,)�� !������ 7��# �����������!��� ���� �������� �� +,)�� .155� 855� ��� 385��/ ��> �� $� 385��� #�7� �� �#� "�$ 1 ������!��� �*#�-���� �������!� �� -� ��� '!����-�� �� !�����*�!��� -� +,)��� )#� ��� !����� �� �' �*��!��� �'�� .����� 7��#�'� � !�������!�����'�!������ �������� �#� "�$ 1 ������!��� 7�'�� -� ���������� �� �#� !�����*�! ����!� �� �#� �'���� � '-���� +,)��/�)#� �������� ���#�'�# ��� ������!���� ����(!���� '!����-����� ��"�$ 1 ������!��� �� �#� #��# ��� �� +,)�� ��� �A�!� �#����!0 �� ������� ��� !���?'������ ��'!�� �-����� �� ��'����=��*���� ���!�� .���� �� ��� 12:5% ����� 122B/�

��������� �� ����0 � �������� $��������� �� ����������� )#� !�����*�! ����!� �� +,)�� �� ���,��������� !��� �� ������� ��� ���� 7� ����� �����,��� �� (-�-��� ��� $��!��,$���!�� .2 &&/ ��� ��'!����.2 &'/ ���� 7�� ������ 7��# +,)�� .155� 855� ��� 385��/�� > �� )#�� !��� �*#�-���� ����� '!����-����� �� +,)��!������ 7��# ������!��� ��� �� ��� ��� ���� .2 &/� $�385��� �#� �'�-� �� ��-�� (-�-��� 7� �� �#�� B5M ��!������

��������,��� �� 0������!��� ��� $��!��,$���!��.2 &&/ ��� ��'!���� .2 &'/ ���� 7�� ������ 7��#+,)�� .155� 855� ��� 385��/ �� > �� O������!��� �*#�-������'!�� '!����-����� �� +,)�� ��� ����-�� �� #��# !��!����,���� .855 ��� 385��/ .2 &/ !������ 7��# !'��'�� �'������'������!��� ��� �� ��� �#� ��� ����� ������������ ������������ 7��# -��# 855 ��� 385��� �#� �'�-� �� ��-��0������!��� 7� :5M@35M �� !������

.���� �� ����0 �� 5�( ���� ��������� ��� �������������� ()� )� �� ������� �'�#� �#� ��� �� ��������!�� ��� �� �#� !�����*�!��� �� +,)��� #'��� ������� !�E$ 7�

2 ��� '" ,����� �� ���������� ���� ����� ��� �������� ������� ��� ����� ����� ��������� �� ����0" E&� 7��!'��'�� ��� �#�� ��'!���� .E&� 1+>� :13� ��� :>5/ ��� �#��$��!��,$���!�� .E&� :>3� 353� ��� 319/ ����� .�/ )�����#���*���� ��� ������� !������ 7�� ��������� � ��!�-�� �� ����� ������ ������� )����� #���*���� �!�� ��� ����� ��� 1�9+ �� 8�83����� �� ������ �� # � 15: ��� ������� !������ ����� ��� 95�:5 ��11>>�>>�� �� �� ������� ;��'� �� �#� ����� �� �� �#��������������� .�/ $��� �������� 7��# +,)�� .155� 855� ��� 385��/�� > �� ��-�� !��� 7�� !�'���� -� � ��'��� ��'���� ;��-����� �� ��� �*������!��� ���� ���������� !�����-�� !��!��������,��������������� ������ 7��#�'� �������� �� +,)�� ������ 155M ��-������;��'� �� �#� ����� �� �� ��' ������������� )#� �'�� 7�� ������� �7� ���������� ����������� �*��������

2 ��� 4" ,����� �� 3�� ' ���������� ����� ��������� ������0" E���� ������!��� .E&� :2/ ��� �� ��� �� $��!��,$���!�� ���� ��� "�$ 1 ������!��� ."&� +>/ 7�� ������ 7��#+,)�� .155� 855� ��� 385��/ �� > �� ;��-�� !��� 7�� !�'���� -� ���'��� ��'���� ;��-����� �� "�$ 1 ��� ����� ������!��� �����,����� !�����-�� !��!��������,��������� ������ ������ 7��#�'��������� �� +,)�� ������ 155M ��-������ ;��'� �� �#� ����� �� ����' ������������� )#� �'�� 7�� ����� �� ����������� �*����������!# �� �� �������� ��'� 7�� !������ ������!���� -� �#� ��'����N ����% ��R 5�58�

;"�� 11+� E"� 1 6$E�$�� B555 ��)")"F���)� $E� $�"�)"��� �E ���$E"��)�� '*6

�����!��� ���� ���,���,6� � ��������� �������� !��� ����� ������ !���� �� ���������! �������� !��� ���� �#�� ��!0 ��������!�� ��� ��� ������� ������� ���# ������� �!�� ��� .������#���*����/ .2 �&/ ��� ������� ������ .2 �'/ 7�����'!�� �� ���,�����!��� ��� !���� �� !������ ����=�����! �!�� ��� ��� ������� ������ 7�� ����!��� �� ���!��� '������!��� � �����!��� 7��# ���#� �!�� ����� � ����,��� ������� !�E$ .2 �&� '/� �*����� �� #'���������� !�E$ �� ��� !��� ��� ��� ��A'��!� ��������������� .2 �&/� �� �������� �� �������� ��� !��� �����!0 �#� �*����� �� -��# �������,������ ������ 1 ��� B.)��,1 ��� )��,B/ .���� ��� #�7�/ �#�� �� ������� ��'������ �#� !�� ���� �� ������ �� ������� .����= ��� &������122+/� )#������ �#� �����!���� �� ������� ���� ��� !������ ��� '�(!������ �!�����'�� �#� ����!'�� ������� �?'����� ������� ���#��� ���,���,6� � �������,��� �������,����� � �������� !��� ����� �*#�-���� ��������' �� �� ��������� ������� ������� �!�� ���� ��� ������� �#�� 7�� �������(!����� ��!���� -� �����!���� 7��# ��� ������� !�E$

.2 �&� '/� )#� '������!��� ��� �����!��� . �!��� ����,������ ���/ ���,���,6 ��� ��� !��� 7�� ������ 7��# +,)��.155� B85� 855� ��� 385��/ �� > �� E� ������!�� �������!� ��'!����-����� �� !�����*�!��� -� +,)�� 7� �*#�-���� -� �#� ���,�����!��� !��� !��������� ������� �!�� ��� �� !������� 7��#���#� �#� '������!��� � ��!0 �����!��� !��� �� ���#� �� �#������!��� !��� ���� .2 �(� �/� )#�� �'�� '���� �#��������� �!�� ��� ��� ��� ���� � !'!��� ��� �� �#� !�����*�!����� +,)���

����0 � ��� �������� � ����� ���������� )��������� 7#��#� �#� !�����*�! ����� �� ������!������'!�� -� +,)�� � �� ��������! ��!�� �#� �����7�������'� �� ������� 7�� ����C .�/ ����� ���-���-��--���% .��/ �E$ ������������% ��� .���/ �#��#�������������!���=������ ������!��� ������ 7��# +,)�� .+55��/ �� 1: #�*#�-���� ����� ���-��� -��--��� .2 *&/� �� !������ !�����������!��� .������ 7��# �#�!�� �����/ �*#�-���� ����� ��������-��� ��(�� .2 *'/� �E$ ������������ �� ������!��������� 7��# +,)�� .385��/ �� > � 7� ����!��� '��� �#� )$��� � �� ������� ����!���� 0��� E���#� �#�!�� ������ !���.2 7&/ � ����!#�� !��� ��� ������ ��'� .���� ��� #�7�/�*#�-���� ����� � �E$ ������� �������� �� !������ ����!#��!��� ��� ������ ��'� �*#�-���� ����� � �E$ ������� �������.2 7'/� ���� '�������� ������� ��� ���-��� ���������� �*���� �#��#���������� �� �#� �'�� ���A�� �� �#� ��������-��� �� �� ���� ���� �� ������� .����0 �� ��� 122B/�������!��� 7�� ������ 7��# +,)�� .855��/ �� > �� ������� �� ����*�� ; ������� -� A'��!��!� ��!�!��� �� �7������� �*������� .� ��!�-�� �� ����� ��� ��� ������/� $ ������� B8M .B8� B/ �� ����!#�� ������!��� .2 +�� �/ ��� �� !�����������!��� .2 +� �/ �*#�-���� ����*�� ; �������� ����!#��!��� ��� �#� ������ ��'� 7�� ����� � �� -��# ����*�� ;.2 1�/ ��� �� .2 1�/� $�� �#�� �'�� '���� �#�� ������!�������# ���'!�� -� +,)�� � �� ��������! ��!��

��������"E

���!� "�� � �� �� .12>2/ ������ �#�� '--� ��� � !����������#�����! ��� ��� � !�'�� !�'� �������������� �� ��!���7�0�� ���� �� ��������� �� #'��� �*���� �� �#�����!G!���!#���! ��� ��� � ��� �*��������� �'��� �� ������ �����#� � -��� ������� .O�#�� 1235% ������ �� ��� 1231% 6����� ��� 1233% 4����� �� ��� 1232% "N������ �� ��� 1299/� �� #� -���!��(��� �#�� ��� �#�����! ��� ��� � ��!�'���� +,)��!�'�� !'�����' �������������� �� #'��� .�!!'��������G!����!� �������/ ��� �������������� �� -��!0 �'���� ����������!��� 7�� '��������� �-��� �� ����������� ����� ���������� 7��# ������� !�'�� -� +,)�� ��� �� #������.������ �� ��� 1231/� ����� .1235/ ������ �� �#� ����������'���0� �� ����'�,��-���� +,#���*�������� � �#�����! ��� �,�� �� �� ��������� �� ������!��� !�!'��'�� 7��# 0������,!���� ��� �#�� �-� ������ �� #� -��� #����#��=�� �#��������!��� �� ��� '!����-�� �� �#�����! ��� ��� �� ���#�� '� � '-���� �� ������� 7��# �#� '-�?'������'!���� �� ��*�! ����������� �� �#� ������!��� ���!�� ����"' �'�� ���������� �#�� #'��� ������!��� 7�� ���'!����-�� �� +,)�� �#�� 0������!���� -'� �#� !�����*�!��� ������������ �� ������� �!�� ���� )#� !��!�'��� � -��� ���' �����7��� �-� ������ ;���' �� �� �� ������� �!�� ������ ������� !������ �� ������!��� ��� ��� !������ 7��# ���A'��!� �#� '!����-����� �� ������!��� �� +,)��� �'�����'(-�-��� ��� "�$ 1 ������!��� �#�� �� ��� �*��������� �!�� ���� #�7� �� �*#�-�� ����� '!����-����� �� +,)�� !������ 7��# �'������' � ��������� ������!�������!�� ���� �� ��������� �#� � ��*����� �� #'��� �������!�E$ ��� �#� !��!������� �����'!���� �� ������ #���,*���� �!�� ��� �� ���������! ��� !��� � 7��� � ������������,���,6 !��� ��� ��� ��A'��!� �#� '!����-����� �� �#�� !������� �� +,)��� )#�� �'�� '���� �#�� +,)�� � !�����*�! ��

2 ��� &" ,����� �� ������ ��� �������� $���������! ������������! �� ���������� ����� ��������� �� ����0" ��-�-����0������!���� ��� ������!��� 7�� ���-��#�� ��� ��� $��!��,$���!�� .�/ ��� ��� ��'!���� .�/ ����� ���!�� ���� $��� ���������� +,)�� .155� 855� ��� 385��/ �� > �� ��-�� !��� 7�� !�'���� -� ���'��� ��'���� ;��-����� �� �'������' (-�-��� ��� ������!������������� !�����-�� !��!��������,��������� ������ O������,!��� ���������� ��� ��-����� �#�� �'������' ������!��� �� +,)������� �� 855 ��� 385��� ������ 7��#�'� �������� �� +,)�������� 155M ��-������ ;��'� �� �#� ����� �� �� �* �������������

'78 �$E4 �� �� )&� 6"��E$� "� �E;��)�4$)�;� ����$)"�"4�

!���� ��!�'���� ������!���� (-�-���� �������� !���� ���0������!���� �� � ���#7��G��!#���� ����������� �� ��,������ <� #� � �!����� ���������� �#�� �#� !�����*�!������'!�� �� ������!��� -� +,)�� � �������� �#�'�# �#�!�!��! �������� �����#��#��� ��� ������ 0���� �����������#7�� .���� �� ��� 1222/�

)#� �'!�'� �� +,)�� ��� ������� #�7� �� ������!'���� ����� '������� �#�� +,)�� !�'�� -� �*���=��-� �������� <� #� � �� ��'�� ���������� �#�� �#� +,)��� � !�������� � ��#�-��� �� ������� !��(���� �#�� �#��#���� !�� -� '����=�� � � '-���� .���� ��� ����� 1222/�)#� ��#�-������ #�7� �� �!!' �� � !��!�������� 15,������7� �#�� �#�� �?'��� �� ����!� �#� ��-����� �� ������!������,������= �� �� .122>/ ���������� �#�� ������ -'����#����7� �*���=�� -� �'�(�� ������� �� � ���!�!��=�-�� ��� ��-�������� -'���?'����� �� �&3�5� )#������ 7� '���� �#���#�� ����������� ��� ��� -� !�����*�! �� ������!�����'�#� �� ���������� #�7� �� � 7�������

�� #� -��� ���������� �#�� ������� ����!�� ��� �-�-���!�� �*���� ��!�� .���� �� ��� 12:5% "�� 0� �� ��� 1293%�!���� �� ��� 1225% ���-0�,�'��� �� ��� 122B/� )#������ ��!�'�� -� ��'�� �#�� ��� ���� ���'!���� �� �'���� � ������!�� �������� ��� +,)�� �� ������!��� 7��# � #��# �� ���� ������� �!�� ��� .� �� ������!��� ��� $��!��,$���!������/ !�'�� -� ��� ��(!������ -'����� -� �#� ��� ����������� !������ �� �#�� ������!���� �'!# � !����� !�'�����'!� � ���� ������ � �'��� <� �#����� �� �������� �#���� �� ������� �� �#� !�����*�!��� �� +,)�� '��� ��������!����� )#�� �������� !��� ��!0 �#� �*����� �� -��#������� ��� )��,1 ��� !���?'����� !��������� ��!0������� ���#��� $��� �����!���� �� ��� �������� !���7��# #'��� ������� !�E$� ���'!���� �� ������� ���#��7� ��� �-� �� .2 �&/� )#������ �#�� !��� !�� -� '���� �� �#� !�������! ��� �� ������� 7��#�'� �#� �'���� ����!�� �*���� ��!�� !� ������ ����!� �� �������� )#��������,����� � ��� �����!���� 7��#�'� ������� �*#�-����

2 ��� �" ������� �� ����0 �������� � 5�( �� �����.9�: ���� �������� ��� ����� ����� ��������� ()�" .�/ ����� ��������!�� ��� ��� ������� !������ �� ��� �����!��� ��� '������!��� ��������� ���,���,6 �������� !��� ��� �����!��� . �!�� ������ ����,���� � ���/��� '������!��� ��� !��� ��� ����� #'��� (-�-���� ���� �����!��� !��� ��������� ���'!���� �� ������� �!�� ��� �� -��# �����!��� !��� ������� � !��!������� ��!��� �� ������� !������ �� �#� ���,���,6 ���� ����� ;��'� �� �#� ����� �� �� �#�� ������������� ���� ����0 ����!��� �#�����!�� � ��'� �� ������� �!�� ��� 7�� ��� ����!���� ����� ����0 ����!��� �#�� ��'� � ����(!����� ��!���� � � �#� ��'� �� �#� ���!�� �'������!��� !�'������� .�/ ����� ���'��-������� ������ �� �������� ���� ����� 7�� ������ ��� �����!��� ��� !��� .���� ����,���� � �!�� �����/� '������!��� ��� !���� �����!��� .��� ��� �!�� �����/ ���,���,6 !���� '������!��� ���,���,6 !��� ��� ����� #'��� (-�-��������!���� �� ������� ������ -� ���'����!���� 7� ������� � ��!�-�� ������� ��� ��� ������� $ 38 0�� ������� ����� � -��� 7� ����!��� ������ �#� ��� �����!��� ��� ��� �� ��� �#� ���,���,6 !��� 7#�� �#� ����� � ���'�� �� ������� 7� ��!���� ���� �����!���� �� ������� ���!�E$� .�/ ����� ��-����� �� �����!��� .���� ����,���� � �!�� �����/ ��� '������!��� ��� !���� ��� .�/ ����� ��-����� �� �����!��� .��� � �!�� �����/ ��� '������!��� ���,���,6 !��� ���� �������� 7��# +,)�� .155� B85� 855� ��� 385 ��/ �� > �� ;��-�� !��� 7�� !�'���� -� � ��'�����'���� ������ .7��#�'� +,)��/ ������ 155M ��-������ ;��-����� �� ��� !��� ���� ���������� !�����-�� !��!��������,��������� ������ ;��'��� �#� ����� �� �� �* �������������

;"�� 11+� E"� 1 6$E�$�� B555 ��)")"F���)� $E� $�"�)"��� �E ���$E"��)�� '7'

�� !#���� �� �#�� '!����-����� �� �#� !�����*�!��� �� +,)��� � �#� ������� !��� ����� )#������ �#� �'�� '���� �#������#� ������� �� ������� �� �� �� �� �� �#� !�����*�!��!� �� +,)�� �� ������!����

������!��� �� ��� �� ��-����!���� ��� �#� ��'�� !��.����� �� ��� 1229/ ��� ��!� ���-��#�� �� �#� 0�� #� � ����-����� �� ��������� ���G� ������� )#� ���'!���� ������������!� �� ������!��� ��� �#� ������� �'����� ����#� !�����*�!��� �� �#�����! ��� ��� � � �������� ��� ���������!��� �� ��� ������ ������#��� <� #� � �����������#�� !'��'�� 0������!��� �*#�-���� �� '!����-����� �� +,)���#�� �'������' ������!���� O������!��� '����� ��������������������� ��� ��?'������� �� �#� ������� ��� �#' � ����'������ �� !�����'���� -���� ������#��� )#������ �#�'-��� ���#�����! ����!� �� 0������!��� �#�� #� � -�����!'������ �� �!!'�������� ������� .������ �� ��� 1231/ ����A�!� �#�� ��'!�� '!����-����� �� �#�����!G!���!#���!��� ��� � ��� ���� �'�� ��

$������ � � �'������ ����!'�� ��!� !'��������� �� !�������#� )� !��(� �#� !������� ��!� �� �������� � ��� !������� !��-������� �� ''���� �?'����<� ���������� �#�� �#� ����#�� ������!��� 7� � ��������! ��!� -� �#�� ��������! ����

' ����� ���-��� -��--��� 7� ������� -� ���!��� ��!�,!��� �� ������!��� 7��# �������� �� +,)��� )#� ����!�� !#������ ���#����� '���� �#�� ������!��� �� �� � ��!� ��#��0��� ���� �������� �� +,)���4 ����!#�� ������!��� ���� �������� �� +,)�� �*#�-���� ������ � �E$ ������� ������� -� O����7 ��-������& ������!��� ������ 7��# +,)�� �*#�-���� �*��!���'���*����� �� �#��#�����������

������������ ������!��� �#�� ������� ����!#�� ���� ���������� +,)�� ��� ��� #�7 �E$ �������� -'� � '-���'������ ���#�� ��� �*#�-�� ���� �� ��������! � ��� ���������� -� �#�

2 ��� *" .������ ������� �� ��� �� � ��� ������ ���������� ������ ���������� ��� �� ������ ����0 ���������" .�/������!���� ������ 7��# +55�� +,)�� �� 1: #� ���������� -��--����� �#� ����� ���-��� .����/� .�/ ������!���� ������ 7��# �#�!�������� ��� ��� �*#�-�� ��� !#���� �� �#� ����� ���-���� ���������C 5�33 �� .�/ ��� 5�3�� .�/�

2 ��� 7" (������ �� ()� ��� ����� � ������� ���� �� ��� ���� % �������� �����" �'��'�� #'��� ������!��� 7�� ������ 7��#+,)�� .385��/ � �#�!�� ����� �� > �� �E$ ������� 7�� ����!���'��� �#� O����7 ��=��� !�� '����� �� ����� ����@A'��!���� �E$������������ 7� ��� ������� �� .�/ !����� ������!��� ������ 7��# �#�!�� ������ -'� ������� �� .�/ ����!#�� ������!��� ������ 7��#385 �� +,)��� ����� ���C 11���

'74 �$E4 �� �� )&� 6"��E$� "� �E;��)�4$)�;� ����$)"�"4�

����*�� ; ���� �'��� �������� ��!�(! ���� �#�� ��'���� �#���!� �� �������� !��� ����# �� ������������� �*����� ���*������ ���� '��� ����� � ���������� �#� �� �� �� �!�,B 7�����(!����� ��'!�� �� ������!���� �!!�������� -� �!!'�'��,���� �� �8> .�� �� ��� 1229/� <� ��'�� -� 7���� ������ �#�� �#��� �� �� �!�,B ��� �8> �*����� 7�� ��� ������ �'���������� ���'!�� -� +,)�� �� ������!��� .���� ��� #�7�/� �� �7��� 0��7� �#�� �!�,B � �� ��#�-��� �� ������� ��� �8> � �����'!� �� ������� .���7��� 122+/� �� � ����������� ������ ����� �' ��-������ #�7� �� �� #� -��� ��'�� �#�� �#� ���������!���� $B- � '���'����� ���� �������� �� +,)�� .�� ����� �� ���1222/� $������� !�� ���'!� ������� �� ��� !��� �������!�'���� !��� �� �#� �� �' ���� .$--�!!#�� �� ��� 1228%<�0���� 1228/�

�� '����� +,)�� � !�����*�! �� ������!��� �� � !��!����,����,��������� ����� ��� ������� ��� ��� ������� �#�!�����*�!���� �� ��������� �#� ����# �� ������!��� ���'!�� -�+,)�� � �� ��������! ��!��

�� ���������� ���������� �� ��� !�� ��� �� "�� #� ��� �� ���$ � $��$�� ��

��� %������ $�& �� � ��� ��� ��$$���� �� ��� '�� ��� ( � � � )����� �

*�����+ �,-+ ��� .��� ���� )����� � *� �� ���� + �/-+ ��� ��� '�� ���

��� ����� � /����� *����� �& �.01223-&

������E���

$--�!!#�� ��� ��'�� �� ��-��� �� ���!�!#� �� ������ <� ������ �������-��� �C $ �� �� �!���� �� ��������C ������� �� �������� !��� �� ��-��� ����� !'��'�� � ���% � $��� .�� �%%�� B1>C259@258� 1228

$-���,����0 L� �7��� ;�� ����� 6� O'� O� E���'�� 66C ��������!� ����������!���� !$�� ����� �� !'��'�� �������� #'��� ������!��� �� !�������'�� �������� " ���� 4��� � 185C+1:@+B8� 122B

�� � $O� 4'��� ��� �#���� �� $OC �����!� �������������� ��� ��� ���,������-'����#���� �� -���� ��#�� �� ������ ���%�� � � BBC22@15B� 1225

���� ��� L#�� �� 4�#� <$C $����� ������ ��!���=����� �� ������!��� ���&����0�@�'���0 ������C '���� �� �#� ��� �� �#� &�� ���� ���'!� ������!���'�� ���(!0���� ��� �5��� 39C15>3@15+9� 1229

������ ��� ���0� �$C ��'!����� �� ���'��� " �� ����$ ��� B+C82@:1� 123+�#�� �)� ���!0�� �� )��� �� ������ O$� "�� �6C ���'���#��������� ��

�������� �� �������C �����!����� �� �!!��� �� ��������� 4�� '��� ������ 6�� 2BC91B8@91B2� 1228

��=��0��7�!= L� �� F� 4��� 6C $�� �� !��� ��-�����C ��!��������� �� !��� �����-� �������� ������ ���� � � +1C18@>3� 122+

����0 ;$� ;���0� ��� ����-��� �$� ��#�� 66� ������ ��� &���� ��C�*��'� �� �#��#���������� �� �#� '��!� �� ��������! ����#�!�������� ��!�(! �!�������� ��� ��� �� -� ��!��#���� " %%��� 1+9CBB53@BB1:� 122B

��#� $$C ;������� �'� �� !����!����� ��� � 13C+>1@++9� 123:��#� $$C ������ ���%�� � �� >� ���� �#�������#��C ��� S ��-���� 129:� �� :38@

:984����� 4$� ���!0 �$� ����� ;�C �������������� ��� +,������ -'����#����C ��

�*��������� �'��� " �5��� ���%��� 88C125@123� 1235

2 ��� +" (������ �� �������� ������� �� ������ , ��� �������� ��� � �� ��������" �'��'�� #'��� ������!��� 7�� ������ 7��#.�� �/ +,)�� .+55 ��/ � .�� �/ �#�!�� ����� �� > �� $���!#�� !��� 7��!����!��� ��� ��-���� 7��# ����*�� ;,��)�� )7����,( � ��!��� ��������!��� ������ 7��# +55�� +,)�� .����/ �*#�-���� ����� ��������� �� !������ ������!��� ������ 7��# �#�!�� ����� �*#�-���� ��������� .�� �C 7��#�'�% �� �C 7��# A'��!��� (���/� ����� ���C 15 ���

2 ��� 1" (������ �� ������ ,�2��� �� 0� ����� � ����� ���� ����� ��������� �� +*8�� ����0" ���# ����*�� ; .�C 7��#A'��!��� (���/ ��� �� .�C 7��# #������� (���/ ������� 7� �*#�-���� ����� �� �#�� !���� ����� ���C 11���

;"�� 11+� E"� 1 6$E�$�� B555 ��)")"F���)� $E� $�"�)"��� �E ���$E"��)�� '7&

4����� 4$� ���-�!# &L� ����=�0 �&� ���� �C ����!���� �� �� ��������������������� '-����� ������ ���%�� � � 8CB51@B5>� 1232

4'�� �� ����# 6� ��� '�0� �� ����� �� ������ ��C �#��!���=����� �� ���,���,6C � ��7 ��� #��#�� #���������' #'��� �������� !���� 4 �%��� ����.�� BC85+@852� 1292

&���-�� �� �������= �&� ��#��� �� ���-�� �)� ���� $�C ���'������ ��������� �� #'��� ������!��� ��7� �� !'��'�� " ���� � � 23C+95@+99�129>

&����� ;6� 6�����= �C ��������� �������C �#� !���!�� ��'����� !����� ������� ������!��� ������������� �� " � ���% 12C11+1@11+3� 1293

&����� ;6� )'0����� OC ��=�����! !����� �� ������������ �� ������� )����8CB25B@B252� 1221

�� �� ��� "� ���� �� ������ ��� ������' 6� ��-!�!0 4� E���'�� 66� $-���,����0 LC $!�� ����� �� �#� !�!��! $�� ���#7�� -� �,����������� ��������#� ����� �� #'��� ������!��� �� '��� ����� � ��������� ������ .��89C+3@8+� 1229

6��� "� ���� �<� ��� ���� �)C "!!'�������� ������� ���'!�� -� $,������-'����#����� � ���� �����T ������ ��C1B13@1B19� 1233

6��-�7 O� "-��� &� ���#�0 �$� ���=����!0 )�C ��!#���� �� �������������� -�#���?'������ " �5��� ���%��� :BC+>:@++2� 123+

O�#� 4C �������������� !�'�� -� �#�����! �������� ����!���� ���� ���%���15BC133@193� 1235

�� ����� ��� ;�� ��� <� ����� ��646� <���#�� <� ;�0'��� ��� �'���'*��� �� �OC �#���!���� -� ����� #'��� ������!��� � 5 ��� �7$ ���� .��B58C>99@>28� 122>

�� ����� ��� ���� �� ��7� )�� ������' 6� ��-!�!0 4� �� �O� ���� ��C$����� ���� �*����� �� ������!��� �*���� �� +,������ -'����#���� .+,)��/% '���'������ �� �#� $B- �������� �!����� " �5��� ���%��� 11>C3B8@3>1� 1222

������ O�� ��'��� �� &�� �� E�0� ��� )C "!!'�������� ������� �'� �� ���������-'����#���� ��� #������'�� ����� �� "��8� /�$ ���% �� 83C118@1>1� 1231

���� &�� ����� 6�� $���� �C )#� ��� ���!�� ������ �� �������� ���� � ���%� $��� 9:CBB8@B>5� 12:5

"N������ �$� ���#�� �4)� ����� �� ������ �� 4��� $$� &������ <�C"!!'�������� ������� �'� �� '�'��!��� ����!� �� �#�����! �����*����� -����'!� �� !����!��� -'�0 '--�� " ����$ ��� >5C81B@81:� 1299

"������ <�� O��� �$C ����!'�� -�� �� �!'��!'�����' ��-����� " �5��� ���%���15>C1>1@1>:� 122+

"�� � �$� �!#7��= �� <��� �&C "!!'�������� ��'!������ " �% ��� ����11>C2B3@2B9� 12>2

"�� 0� �$� ��0��� E�� ����� $�C $� �����*����� ��� �� �!'�� !�������������� ( � � .�� B3C92>@299� 1293

���-0�,�'��� �� ��0��� E�� ������� O�� ����� $�� <��!=�0 )C $����*����� ��!�� ��� �� ���#���! �������� ���������� ������� ������ � �� % � $������� 111:C11@1:� 122B

����� �;� ���!#� ��� ��!0�� �$� ���� O$� ���,���� �O� ���'������ ��������-��� �������� ��� ��������������� ��C E���'�� 66� ���� ��� &�����;6� O��� �$� "����� 6� .��/� ��� 4 �%������ �����%9 4��� ��� ���4���$��� ���� E�7 ��0C "*��� ��� ���� ��� 1229� �� 38@2:

����� �$C ��!#���� �� �������,!��� ��*�!��� ���'!�� -� #���*�������� " 4���151C1:>@1:2� 1235

��,������= 6�� �����'�=,����= 6E� ��������� �;� 4�!��,���� � �C��!��������� -��7��� �7� 0�����! ��!#���� �� �#� �����#�������!�� ��� �� �������� � ���% " B2+C:B1@:B>� 122>

���!#�=,��� $� �����'�=,����= 6L� 4�!��,���� � �� 4�!��,������ �C)������C � !����#��� � � ��7 �� �� ��!#����� � �� % � $��� ����1B+3C1@11� 1228

���� )C ������� ��� �'�!���� �� �#� �!'�� �������U� �#���-���#��!�� ��7�" 4�����% 4��� � � 1BCB18@B89� 122B

�!���� ��� 4����� �� ���� �� ������ �� ��!#�� 4C ����� ���*������� ����������� ��� '���������� �� � ��'�C ����!�� � ��� �� �������� 4 �%������� .�� >C118@112� 1225

����= �$C ����!'�� ������! �� �!'��!'�����' ��-����� /�% �� #���� >C1+:2@1+38� 122+

����= �$� &����� ;6C 4�����! ��� �� ������������� ��C &�!##�� O� &�� &.��/� ��5����� � /�%�� #���� ��� BB�� ���� E�7 ��0C ����'� �'-��#����122+� �� 1@+8

���7�� �<C ��!#���� �� �������C ���������� �� ������!� -��!#���!�� ���!���'�� ����!���� " '��� ������ ��� 9:C1B9:@1B28� 122+

<�0��� $�C $�������,���'!�� ������� �� !#�!0 ��-����! �����#���! ��'��C� ��7 �#�������!�� ��� �� ��������� " 4��� � +99C1B>@1>9� 1228

���� �� ���� ��C ����!� �� +,������ -'����#���� �� ������� �!�� ��� �� #'���������!���� 4 �%��� ���� .�� 1BCB>3@B+8� 1222

���� �� $-���,����0 L� ���� ��C ����!� �� !������� '�� ������� �� �#�!�����*�!��� �� +,������ -'����#���� �� #'��� ������!���� � ( �� ���� ��5� � >8C8::@835� 1222

L#�� &� ���� ��C ������'�#��� -��7��� �#� !�������! ��������� ��� ��������*����� �� ������� �!�� ����� �% " ��� �� >59C>BB@>>5� 122+

'7� �$E4 �� �� )&� 6"��E$� "� �E;��)�4$)�;� ����$)"�"4�