Tehnicile Moet

Ce este MOET?

Abreviere de la Multiple Ovulation and Embryo Transfer

MOET e metoda prin care animalul femel este manipulat hormonal pentru a creste numarul de ovocite a unei ovulatii. Materialul seminal de la mascul selectat este plasat astfel incat sa fertilizeze ovocitele, noii embrioni formati se elimina inainte ca acestia sa se ataseze de peretele uterin. Aceasta este parte a transferului de embrioni. Alte animale female sunt utilizate deoarece ciclul lor menstrual permite ca acestea sa primeasca embrionii nou formati. Pentru sincronizarea ciclului sexual se foloseste de asemenea un tratament hormonal.

Factori care influenteaza superovulatia si transferul de embrioni la caprele Boer

Programele MOET sunt utliziate pentru a creste productia de ovocite la female cu valoare genetic ridicata. Exista insa multe problem in cazul multor specii domestice. De exemplu ratele de ovulatie si numarul embrionilor transferabili sunt inca imprevizibile.

Este cunoscut faptul ca factori cum ar fi rasele, nutritia, sezonul, starea ovarelor, prepararea gonadotropinelor si superovulatii repetate afecteaza atat superovulatia cat si calitatea embrionilor produsi.

De cand au fost introdusele caprele din rasa Boer in China in anii 1990 au fost efectuate multe investigatii asupra superovulatiei si transferului de embrioni care au dus la cresterea populatiei noii rase.

In studiul prezent, asupra caprelor Boer au fost aplicate tratamente pentru superovulatie si embrionii rezultati au fost transferati in mai mult de 1500 de femele receptoare din rase autohtone astfel incat factorii care influenteaza superovulatia au putut fi urmariti.

Experimentul a fost efectuat in patru ferme diferite intre Aprilie 2000 si Ianuarie 2004. Cincizeci si doua de capre Australian Boer intre 7 si 60 de luni au

1

fost folosite ca si donor de embrioni. Caprele donoare au avut superovulatie la cel putin 70 de zile post partum. Toate animalel au fost cazate in adaposturi exterioare in tarcuri si au fost hranite cu fan si cu concentrate si apa ad libitum.

Superovulatia si inseminareaBureti intravaginali cu progesteron au fost introdusi in vaginele

donoarelor si in zilele 12-14 dupa implantare donarele au avut superovulatie cu una din urmatoarele regimuri( retete):1. 7 mg Chinese FSH care a fost administrat intramuscular de doua ori pe zi timp de 3 zile cu un dozaj in scadere2. 6 sau 7 mg Chinese FSH a fost injectat intramuscular timp de 4 zile in doze in cantitati in scadere. 3.240 mg Canadian FSH a fost injectat intramuscular pe o perioada de 4 zile in doze decrescande. 4. 160 mg Canadian FSH a fost administrat intramuscular cu doze constant pe o perioada de 4 zile cu 300 UI de PMSG impreuna cu a treia injective de FSH.

Buretii intravaginali au fost indepartati la a cincea injective cu FSH pentru cele care au avut un tratament de 3 zile cu FSH si la a 7-a injective pentru cele care au avut tratament de 4 zile.

Estrul a fost verificat de doua ori pe zi la orele 06:00 si 18:00 dupa retragerea buretelui cu un tap castrat. O capra a fost considerate a fi in calduri daca aceasta nu a refuzat tapul. La debutul estrului donatorului i s-au injectat 250 UI hCG si a fost insamantat artificial cu material seminal care a fost depozitat in colul uterin. Inseminarile au fost efectuate la 8-10 ore dupa ce a acceptat monta.

Recuperarea embrionilor si evaluarea acestoraIn zilele 6 sau 7 dupa estru, morulele si blastocistii au fost recuperate

chirurgical din coarnele uterine a doanoarelor. Tractul de reproducere a fost exteriorizat dupa o incizie mijloc-ventrala in urma unei anestezii locale cu Lignocaina. Un ac bont a fost introdus lent in cornul uterin prin peretele uterin la 1 cm distal fata de jonctiunea uterotubala si 10-15 ml de PBS ( phosphate-bufferd saline) cu un continut de 10% de ser fetal a fost introdus pentru a spala uterul. Lichidul a fost recuperate prin introducerea unui cateter Foley care a fost introdus in cornul uterin proximal fata de bufurcatie si bulbul acestuia a fost umflat cu aer. Lichidul a fost colectat in recipiente sterile de plastic cu fundul plat. Tuburile de colectare stau la temperatura de 37 de grade pentru aproximativ 10 minute, inainte de examinare in cadrul unui microscop de disectie pentru embrioni. Embrionii colectati au fost clasificati in categorii tip

2

A,B,C si D in accord cu criteriul stability de Lindneret(1983) si doar embrionii catalogati cu A sau B au fost considerate transferabili.

Sincronizarea receptoarelor.Buretii cu progesterone au fost plasati in vaginurile receptoarelor in ziua

corespunzatoare cu a donoarelor. Buretii vaginali au fost indepartati de la receptoare cu 10-12 ore mai devreme decat la donoarele din acelasi grup. Estrul receptoarelor a fost verificat cu un tap vasectomizat dupa indepartarea buretilor. Diferenta debutului estrului intre donoare si acceptoare trebuie sa fie de 24 de ore pentru a putea fi efectuat transferul de embrioni.

Transferul de embrioniEmbrionii au fost transferati chirurgical. Tractul reproductiv al

receptoarelor a fost expus printr-o incizie medio-ventrala in urma unei anestezii locale cu Lignocaina. Toti embrionii au fost transferate in coarnele uterine in apropierea jonctiunii utero-tubala. In mod normal un singur embrion a fost transferat in cornul uterin cu ovarul cu corp galben, dar ocazional doi embrioni au fost transferati in cornul uterin daca ovarul are corpi galbeni mai bine dezvoltati cand receptoarea a avut 2 sau mai multe ovulatii. Volumul PBS se pastreaza la aproximativ 5-10 microlitri per transfer.

Au fost luate masuri de precautie pentru a reduce riscul adeziunii atat in cazul donorilor cat a receptorilor. In mod special sangerarea a fost urmarita pentru a fi minima si tractul a fost irigat cu o solutie salina pentru a preveni formarea de cheaguri de sange. Dupa transfer, animale au fost mentinute sub o observatie stricta pentru a observa timpul de revenire al estrului. Doar receptoarele care au avortat dupa 2 luni dupa transferul de emrbioni sau cele care au nastere la sfarsitul gestatiei au fost considerate gestante.

Experimente

Experiment 1Cincizeci si doua de donoare intre 12 si 35 de luni au fost tratate in toamna cu 4 retete diferite pentru a avea superovulatie. Ovulatiile, ratele transferului de embrioni si gestatiile per receptor au fost comparate intre diferite tratamente.

Experiment 2 41 de donoare intre 12 si 35 de luni au fost tratate in 3 sezoane cu reteta 2). Ovulatiile , ratele transferului de embrioni si gestatiile per receptor au fost comparate intre diferite tratamente.

Experiment 3

3

48 de capre intre 7 si 60 de luni au fost trate toamna cu regimul 2). Ovulatiile, rata transferului de embrioni si gestatiile per donor au fost comparate in functie de diferenta mediei de varsta( 7-11, 12-23, 24-35, 36-47 si 48-59 de luni)

Rezultate

Experiment 1 Mai mari ovulatii au fost obtinute cu reteta 2 si 3. Ratele transferului de embrioni de la 2 si 3 au fost mult mai mari decat de la cele tratate cu reteta 1. Rezultatele tratamentelor cu reteta 3 a gestaiilor au fost mult mai slabe decat in cazul celorlalte.

Experiment 2Rezultatele arata ca cel mai bun sezon pentru superovulatii si a

transferului de embrioni este toamna.

Experiment 3Numarul cel mai mare de ovocite a fost obtinut de la caprele in varsta

intre 24-35 de luni. Embrionii recuperati de la cele in varsta intre 12 si 35 de luni au produs cele mai multe gestatii si nu a fost o diferenta semnificativa intre caprele intre 24-59 de luni in proportia embrionilor transferabili.

4