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JADE LIMA FORTES
LAYS ALMEIDA LAMOLHA
RELAÇÃO ENTRE PREVALÊNCIA DE CÁRIE E PRESENÇA DE
STREPTOCOCCUS MUTANS NA SALIVA HUMANA
NOVA FRIBURGO
2015
JADE LIMA FORTES
LAYS ALMEIDA LAMOLHA
RELAÇÃO ENTRE PREVALÊNCIA DE CÁRIE E PRESENÇA DE
STREPTOCOCCUS MUTANSNA SALIVA HUMANA
Monografia apresentada à Faculdade de Odontologia da Universidade Federal Fluminense/ Campus Universitário de Nova Friburgo como Trabalho de Conclusão do Curso de Graduação em Odontologia.
Orientador: Profª. Drª Fernanda Volpe de Abreu
NOVA FRIBURGO
2015
F738r Fortes, Jade Lima.
Relação entre prevalência de cárie e presença de streptococcus mutans na
saliva humana. / Jade Lima Fortes ; Lays Almeida Lamolha; Profª. Drª
Fernanda Volpe Abreu, orientadora. -- Nova Friburgo, RJ: [s.n.], 2015.
35f.
Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Odontologia) –
Universidade Federal Fluminense, Campus Nova Friburgo, 2015.
1. Odontologia. 2. Cárie dentária. 3. Streptococcus mutans . I. Lamonha,
Lays Almeida. II. Abreu, Fernanda Volpe, Orientadora. III. Título
CDD M617.6
JADE LIMA FORTES
LAYS ALMEIDA LAMOLHA
RELAÇÃO ENTRE PREVALÊNCIA DE CÁRIE E PRESENÇA DE STREPTOCOCCUS
MUTANS E NEISSERIA SP. NA SALIVA HUMANA
Monografia apresentada à Faculdade de
Odontologia da Universidade Federal
Fluminense/ Campus Universitário de Nova
Friburgo como Trabalho de Conclusão do Curso
de Graduação em Odontologia.
Aprovada em: _______/______/_______
BANCA EXAMINADORA
Prof. Dr. _________________________________________________________
Instituição: ______________________________Assinatura:_________________
Prof. Dr. _________________________________________________________
Instituição: ______________________________Assinatura:_________________
Prof. Dr. _________________________________________________________
Instituição: ______________________________Assinatura:_________________
Nova Friburgo, RJ
2015
Agradecemos aos nossos pais
pelos intermináveis esforços,
focados no objetivo de ver
nossos sonhos realizados.
AGRADECIMENTOS
A Deus que dirigimos nossa maior gratidão. Ele, mais do que nos criar, deu
propósito as nossas vidas. Dele vem tudo o que somos e que temos. Aos nossos
pais pelo incentivo, amor, carinho, dedicação e apoio nas horas mais difíceis, por
lutarem ao nosso lado, nos guiarem no caminho certo e por serem nossos exemplos
de vida.Sem vocês ao nosso lado, seria impossível contabilizar mais essa vitória em
nossas vidas.
A nossa querida professora, orientadora e amiga Fernanda Volpe, pela
paciência nа orientação е incentivo qυе tornaram possível а conclusão deste TCC.
RESUMO
A cárie é uma doença infecciosa não contagiosa mais prevalente no mundo, e a suscetibilidade genética se tornou o foco de alguns grupos de pesquisa, que tem como objetivo fornecer novas estratégias para resolver o problema. Estudos no campo têm sido imensamente facilitados pelo desenvolvimento de abordagens que permitem a obtenção do DNA a partir de amostras de saliva. Para isto, vários métodos são utilizados na identificação destas espécies isoladas da cavidade bucal, tais como, os métodos bioquímicos, imunológicos e genéticos. Sendo que a técnica da reação da polimerase em cadeia (PCR) tem sido bastante usado para este fim e, por isto foi, utilizada neste estudo com o objetivo de se identificar a presença de bactérias relacionadas ao desenvolvimento de cárie dentária, na saliva humana.O objetivo deste trabalho é estabelecer, por meio de uma análise molecular, uma relação do índice CPOD de crianças entre 7 e 16 anos com de Streptococcus mutans. Para a realização deste estudo foram avaliadas 213 crianças e adolescentes, matriculados em 04 escolas municipais da cidade de Nova Friburgo – RJ, na faixa etária de 07 a 16 anos de idade. Para a análise da presença do Streptococcus mutans, foram avaliadas amostras de saliva de 140 crianças em PCR convencional, destas amostras, 52 (37,14%) foram descartadas por contaminação da eletroforese, 09 (6,43%) deram negativas e 79 (56,43%) foram positivas.Os resultados deste estudo mostraram correlação entre a prevalência de cárie e a presença do S mutans.
Palavras-chave: Cárie dentária; PCR; Streptococcus mutans
ABSTRACT
The decay is a non-contagious infectious disease most prevalent in the world, and genetic susceptibility has become the focus of some research groups, which aims to provide new strategies to resolve the issue. Studies in the field have been facilitated by the development of approaches which allow obtaining the DNA from saliva samples. For this, several methods are used to identify these isolated species of the oral cavity, such as biochemical, immunological and genetic methods. Since the polymerase reaction technique chain reaction (PCR) has been widely used for this purpose, and this was used in this study in order to identify the presence of bacteria related to the development of dental caries in human saliva. The objective of this study is to establish, through a molecular analysis, a relationship of DMF index of children between 7 and 16 years with Streptococcus mutans. For this study were evaluated 213 children and adolescents enrolled in 04 public schools in the city of Nova Friburgo - RJ, aged 07-16 years old. To analyze the presence of Streptococcus mutans, saliva samples from 140 children were evaluated in conventional PCR, from these samples, 52 (37.14%) were discarded because of contamination Electrophoresis, 09 (6.43%) were negative and 79 (56,43%) were positives. The results of this study showed a correlation between the prevalence of caries and the presence of S mutans, however studies suggest that dental caries can occur even in the absence of S mutans as the five samples that were negative for S mutans.
Keywords: dental cavity; PCR; Streptococcus mutans
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO ................................................................................................................................. 10
2 REVISÃO DE LITERATURA ......................................................................................................... 12
3 MATERIAIS E MÉTODOS ............................................................................................................. 17
4 RESULTADO ................................................................................................................................... 21
5 DISCUSSÃO .................................................................................................................................... 27
6 CONCLUSÃO .................................................................................................................................. 30
REFERÊNCIAS ...................................................................................................................................... 31
1 INTRODUÇÃO
A cárie é uma doença infecciosa não contagiosa mais prevalente no mundo, e
a suscetibilidade genética se tornou o foco de alguns grupos de pesquisa, que tem
como objetivo fornecer novas estratégias para resolver o problema. Estudos no
campo têm sido imensamente facilitados pelo desenvolvimento de abordagens que
permitem a obtenção do DNA a partir de amostras de saliva (VIEIRA, 2011).
Nas últimas décadas, tem-se observado um declínio na freqüência da doença
cárie (EKSTRAND et al., 2000). A Organização Mundial de Saúde (OMS), no
entanto, considera a cárie dentária como sendo uma doença de alta freqüência, e
sua prevenção tem sido objeto de atenção de alguns pesquisadores (WEYNE, 1993;
MALTZ, 1996). Embora a prevalência da cárie tenha diminuído muito nos últimos 20
anos, ela persiste como um grave problema de saúde pública em todo o mundo
resultando na principal causa de perda dentária para adultos e crianças
(FEATHERSTONE, et al., 2000).
Vê-se, então, que a cárie dentária é um problema de saúde pública mundial, é
transmissível e causada por bactérias bucais, principalmente Streptococcus mutans
(AZEVEDO et al, 1998; PIMENTA et al, 2001).
No entanto, segundo Rudney em 1995, existem diferenças notáveis no nível
de cárie entre indivíduos, algumas das quais podem ser explicadas pela saliva.
Segundo LOURO FILHO e MAYER (1991) é amplamente reconhecido o papel
protetor da saliva na prevenção da cárie, tanto pela ação mecânica de lavagem das
superfícies orais, carregando restos alimentares ainda não deglutidos e
11
microrganismos, quanto pelo seu poder de dissolução e tamponamento de ácidos
produzidos pelas bactérias da placa e pela sua ação remineralizante e
antibacteriana. Foi observado também no estudo de DOWD (1999) que devido à
importância da saliva em relação à prevenção da cárie dentária, os testes salivares
devem ser incluídos nos exames de rotina para avaliação de pacientes quanto ao
risco de desenvolvimento da doença.
Sendo assim, estudos (AZEVEDO et al, 1998; PIMENTA et al, 2001) têm
mostrado a importância de se estudar, na saliva humana, a presença ou não de
bactérias que estejam relacionadas com o desenvolvimento da cárie dentária, para
que se possa instituir programas preventivos cada vez mais eficazes para o controle
da doença.
Para isto, vários métodos são utilizados na identificação destas espécies
isoladas da cavidade bucal, tais como, os métodos bioquímicos, imunológicos e
genéticos (IGARASHI et al., 2001). Sendo que a técnica da reação da polimerase
em cadeia (PCR) tem sido bastante utilizada para este fim e, por isto será, utilizada
neste estudo com o objetivo de se identificar a presença de bactérias relacionadas
ao desenvolvimento de cárie dentária, na saliva humana.
O objetivo deste trabalho é estabelecer, por meio de uma análise molecular,
uma relação do índice CPOD de crianças entre 7 e 16 anos com a presença dos
micro-organismos Streptococcus mutans.
2 REVISÃO DE LITERATURA
A cárie dental é a doença crônica mais comum na infância, afetando
aproximadamente três quartos de todas as crianças pela idade de 17 anos. A
maioria das crianças tem experiências de caries leves na dentição permanente, que
são facilmente tratadas. Mas aproximadamente 20% das crianças sofrem com
lesões de cárie agressivas, que são destrutivas e freqüentemente recorrentes.
(GROSS, 2010).
Sabe-se que a cárie dentária é uma doença multifatorial, mas a presença de
micro-organismos produtores de ácidos na cavidade bucal é imprescindível para o
seu desenvolvimento.
Segundo Wang Zhan-yong, Wang Jian-qiu, Zhou Yan, Zhao Dong and
XiaoBaia cárie é uma das doenças infecciosas mais comuns que afligem os seres
humanos e tem uma etiologia polimicrobiana. Os Streptococcus mutans são
geralmente aceitos como um dos principais agentes etiológicos da cárie dentária.
Com isso, diversos estudos vêm sendo realizados com o objetivo de se estabelecer
um maior controle da doença.
Mais de 700 diferentes filotipos bacterianos são encontrados na cavidade oral,
tal como determinado por seqüenciarão do gene de rRNA 16S. Os colonizadores
iniciais de superfícies dentárias são uma especificidade do subconjunto oral da
microflora. Destas bactérias, aqueles que colonizam a superfície do esmalte limpo,
independentemente de outras bactérias possuem mecanismos de fixação a película
adquirida salivar cobrindo o esmalte e a capacidade de metabolizar os componentes
salivares, como a única fonte de nutrição. Alternativamente, algumas espécies
13
bacterianas participam em consórcios, sendo capazes de se anexar ao esmalte e
estabelecer como uma comunidade inicial, exigindo interações metabólicas entre
seus membros. Vários estudos têm identificado os Streptococcus como
colonizadores predominantes do biofilme precoce do esmalte(FEATHERSTONE,
2000).
Para a cárie dentária, é relevante a presença, nos biofilmes dentários, de
altas concentrações de cocos Gram positivos produtores de ácidos como os S.
mutans, S. sobrinus e outros não mutans e bastonetes Gram positivos como os
lactobacilos. Lembrando que, várias bactérias Gram negativas também têm o
potencial de produzir ácidos a partir de carboidratos, como algumas espécies de
Neisseria. (RYAN e KLEINBERG, 1995).
A saliva é o principal fator do hospedeiro capaz de fornecer proteção às
estruturas dentárias, impedindo o desenvolvimento da doença cárie (SIMMONDS et
al., 2000; FARIAS et al., 2003; VAN NIEUW AMERONGEN et al., 2004). Dentre as
muitas propriedades inerentes ao fluido salivar encontram-se: um sistema tampão
com capacidade neutralizadora dos ácidos (LAGERLÖF et al., 1994; FARIAS et al.,
2003; VAN NIEUW AMERONGEN et al., 2004), funções remineralizadoras (DENNY
et al., 1991; FARIAS et al., 2003; VAN NIEUW AMERONGEN et al., 2004) e de
retardo da desmineralização do esmalte (LAGERLÖF et al., 1994; SIMMONDS et al.,
2000; FARIAS et al., 2003).
No entanto, pode-se considerar que a saliva é um excelente meio de cultivo,
contendo proteínas, sais minerais, células descamadas da mucosa bucal, micro-
organismos indígenas ou não e quando a pessoa se alimenta, entra o ingrediente
carboidrato que completa este meio de cultura que já se encontra a uma
temperatura de 37 graus Celsius. (QUINTANILHA et al., 1997b)
Necessita-se, assim, para estudos epidemiológicos da cárie um método de
identificação de espécies de micro-organismos capazes de produzir ácidos, isolados
da cavidade bucal, tais como, os métodos bioquímicos, imunológicos egenéticos
(IGARASHI et al.9, 2001).
Quintanilha et al. (1997b) desenvolveram um teste microbiológico salivar que
identifica a condição de infecção por bactérias GRAM negativas, de interesse a
14
Neisseria bucalis (JAEWTZ; MELNICK; ADELBERG, 1998; RYAN; KLEINBERG,
1995; STUDERVANT et al., 1996) determinando o nível de autocuidado bucal do
indivíduo e faz uma associação deste exame com um teste microbiológico específico
para bactérias GRAM positivas, de interesse os Streptococos do grupo mutans
(QUINTANILHA et al., 1997a) o que eleva a sensibilidade e a especificidade da
avaliação (D’ERAMO et al., 1998).
Em trabalho de conclusão de curso apresentado por MOREIRA e
FELGUEIRAS, 2013, aplicando-se o teste salivar proposto por Quintanilha et al.
(1997b) em crianças na faixa etária de 1 a 5 anos de idade, elas verificaram que a
grande maioria das crianças avaliadas (94%) tinham um nível de infecção salivar
não compatível com estado de saúde, por bactérias acidogênicas, Gram positivas e,
sendo assim, elas entrarão na fase de erupção dos primeiros molares permanentes
altamente susceptíveis ao desenvolvimento da cárie dentária.
Os Streptococcus mutans são uma espécie bacteriana predominante na
microbiota de alunos da pré-escola com doença severa de cárie. Embora a
associação entre os Streptococcus mutans e a cárie precoce da infância aparenta
convincente, a maioria das crianças colonizadas pelo Streptococcus mutans não
manifesta a doença, sugerindo que, entre outras possibilidades, estes
microorganismos variam na sua capacidade para iniciar a cárie. (Deepak Saxena,
Page W. Caufield, Yihong Li et al. Genetic Classification of Severe Early Childhood
Caries by Use of Subtracted DNA Fragments from Streptococcus mutans; Published
Ahead of Print 2 July 2008).
Vários métodos têm sido utilizados para identificar S. mutans, incluindo os
métodos convencionais de cultura, os testes bioquímicos e métodos imunológicos.
Estas técnicas são demoradas e baixas em sensibilidade, não sendo adequadas em
situações em que são necessárias decisões de diagnóstico rápido. Assim, o
conjunto de espécies bacterianas identificadas pelo método de cultivo não é uma
representação verdadeira da composição bacteriana da saliva ou da placa dental.
Sendo difícil adquirir um entendimento completo das mudanças dinâmicas da
microbiota oral no progresso da cárie dental. (WANG, WANG e ZHOU, 2012)
Detecção quantitativa de Streptococcus mutans e de grupos de bactérias
causadoras ou não da cárie dentária em dentes permanentes de uma população no
norte da China).
15
Recentemente métodos baseados na extração do DNA têm sido usados para
estudar a presença de micro-organismos na saliva, que são causadores da doença
cárie.
Abordagens moleculares baseadas na reação em cadeia da polimerase
(PCR) têm sido, por conseguinte, desenvolvido para a detecção e identificação de
amostras orais de S. mutans, que são mais rápidas, altamente sensíveis e
específicas do que os métodos mencionados acima.
Técnicas moleculares alternativas – como a PCR-DGGE – são capazes de
fazer o levantamento de comunidades inteiras de bactérias sem o cultivo
(MUYZERet al.,1993).
A utiçização do DGGE é que permite que os diversos produtos de gene
amplificado por PCR de comprimentos similares, mas com diferentes sequências,
sejam separados em um gel gradiente desnaturante. A diferenciação de espécies
bacterianas é baseada nas suas diferentes migrações no gel.
Essa técnica se tornou uma importante ferramenta de estudo para
comunidades bacterianas complexas numa variedade de habitat, incluindo biofilmes
ambientais, processo de fermentação de comidas, infecções do trato gastrointestinal
, e bolsas periodontais (ZOETENDAL et al,1998, BONIN et al, 2002; PEIXOTO et al,
2002; MEROTH et al, 2003; ZIJINGE et al, 2003).
Em estudo realizado da microbiota bucal presente em 80 crianças de 2 a 6
anos de idade, com cárie de desenvolvimento precoce, através da clonagem e
sequenciamento do gen 16S rRNA e da amplificação por PCR para Streptococcus
mutans e outras bactérias, verificou-se que a Neisseria flavescens (p ≤0.05) e os
Streptococcus mutans ((p = 0,002 ) foram mais encontrados nas crianças
acometidas pela doença. (KANASI, DEWHIRST, CHALMERS et al, 2010)
Análise desenvolvida no norte da China, teve por objetivo detectar o S.
mutans, bactérias da cárie dentária e grupos de bactérias que não são da cárie
dentária em dentes permanentes, por reação em cadeia da polimerase em tempo
real (PCR) e comparar a relação entre o número destas bactérias e a prevalência de
cárie dentária na dentição permanente.
Amostras de saliva foram coletadas de 142 indivíduos com dentes
permanentes. Esses 142 sujeitos foram divididos em grupo com cárie dentária (DT
=1) e um grupo sem cárie (DT = 0) de acordo com seus dentes. Com os iniciadores
específicos para S. mutans and 16S rRNA, o número total de S. mutans e bactérias
16
totais de 142 amostras de saliva foram detectados por PCR em tempo real e
analisados estatisticamente.
Não houve diferença significativa entre as taxas de detecção de S. mutans (P
= 0,118) e medianas de S. mutans (P = 0,115). A proporção de S. mutans para
bactérias totais em pessoas com cárie dentária foi significativamente maior do que
naqueles sem cárie (p <0,001), mas o número total de bactérias em pessoas com
cárie dentária foi significativamente menor do que naqueles sem cárie (P <0,001).
3 MATERIAIS E MÉTODOS
Comitê de Ética
Este trabalho foi submetido ao Comitê de Ética da Faculdade de Medicina
Hospital Antônio Pedro – UFF / Niterói, CAAE 08005112.1.0000.5243 e aprovado
em 18/12/2012 ( Número do parecer - 176.827).
Tipo de estudo
Trata-se de um estudo transversal que foi realizado em campo e no
laboratório de Biologia do Instituto de Biologia da UFF.
Sujeitos da pesquisa
A população objeto deste estudo foi formada por:
Crianças e adolescentes na faixa etária de 7 a 16 anos de idade matriculadas
nas escolas municipais de Nova Friburgo, RJ
A seleção dos elementos formadores do referido grupo foi baseada nos
seguintes critérios:
Inclusão
18
Crianças cujos responsáveis autorizaram sua participação no
estudo, através do Termo de Consentimento Livre Esclarecido (TCLE) pós-
informação.
Exclusão
Crianças que não cooperaram com o exame clínico bucal
Delineamento inicial
Inicialmente, foi feito contato com a Secretaria Municipal de Educação de
Nova Friburgo, RJ e com as autoridades das escolas para esclarecimentos sobre o
presente estudo.
Depois, enviou-se, aos responsáveis, o TCLE esclarecendo quanto ao
objetivo do estudo, a importância de sua execução para o meio científico e para a
população avaliada e a importância de sua participação no mesmo. Os responsáveis
foram orientados a assinarem o TCLE e enviarem de volta as creches.
Procedimentos de avaliação dentária
As crianças que participaram deste estudo foram submetidas a um criterioso
exame clínico.
Este exame foi realizado pelas alunas envolvidas neste Projeto, e conferido
pela orientadora do mesmo. As examinadoras trabalharam em dupla para que uma
fosse a examinadora e a outra a anotadora.
Todos os exames foram realizados com luvas descartáveis e instrumentais
devidamente autoclavados. Estes exames foram realizados nas escolas municipais
de Nova Friburgo. Utilizou-se para o exame, sonda exploradora n. 5 romba e
espelho bucal plano.
19
Para o registro da cárie dentária foi utilizado o índice ICDAS (International
Caries DetectionandAssessment System – 2002) (ISMAIL et al., 2007) e o índice
CPO-D (WHO, 1997).
Estas informações foram anotadas em ficha própria.
Procedimentos de avaliação da microbiota salivar
Coleta do material biológico
Como fonte de material biológico, amostras de saliva foram coletadas
seguindo como base um protocolo previamente publicado (KUCHlERET al., 2012).
Os indivíduos realizaram um bochecho com 5 mL de solução salina durante 1 minuto
e em seguida expectoraram a solução em tubos falcon de 15 ml (CORNING Inc.,
CORNING, NY, EUA) que foi mantido sob refrigeração -20°C. O material coletado foi
processado,armazenado e analisado no laboratório de Biologia do Instituto de
Biologia da UFF. Cada tubo contendo a suspensão salivar foi centrifugado a 550 g
durante 10 minutos para sedimentação do precipitado de células. O sobrenadante foi
descartado e o precipitado resuspendido em 1 ml de tampão de extração (TE) (Tris-
HCl 10 mM, pH 7,8; EDTA 5 mM; SDS 0,5%). Posteriormente, o material biológico
foi transferido para um microtubo de 1,5 ml (tipo eppendorf), podendo ser
armazenado a -20°C, até o momento da extração do DNA.
Extração de DNA
As amostras foram descongeladas e incubadas com 100 ng/ml de Proteinase
K em banho-maria a 56°C overnight e submetidas a processos de precipitação
utilizando-se 400 µL de solução de acetato de amônio a 10 M. A seguir, todos os
tubos foram agitados manualmente por 5 minutos e centrifugados por 15 minutos
(12000 rpm). O sobrenadante foi dividido em dois tubos de 700 µL cada. O mesmo
volume de álcool isopropílico gelado (700 µL) foi adicionado em cada espécime e
20
agitado manualmente de maneira vigorosa. A formação de "nuvem de DNA” foi
observada em cada espécime de todas as alíquotas que foram posteriormente
centrifugadas por 20 minutos a 12000 rpm. Então o sobrenadante foi descartado
com cuidado para não deslocar o precipitado de DNA e 1 ml de etanol 70% gelado
foi adicionado e centrifugado por 15 minutos a 12000 rpm. Posteriormente o
sobrenadante foi descartado e o tubo foi aberto e emborcado em papel para secar
por pelo menos 30 minutos e evaporar o excesso de etanol 70%. O pellet de DNA foi
resuspendido em 50 µL de TE e congelado a -20°C.
Após a extração do DNA foram utilizados primers específicos para pesquisa
da presença de Streptoccoccus mutans nas amostras.
Análise dos dados
Foi utilizada uma metodologia do tipo quantitativa.
Para a análise quantitativa dos resultados, os dados foram tabulados em um
programa estatístico (EPI_INFO 6.04) e analisados através dos testes estatísticos
pertinentes, sendo que aqueles que apresentaram diferença estatística a nível de
5% foram considerados estatisticamente significantes.
4 RESULTADO
Para a realização deste estudo foram avaliadas 213 crianças e adolescentes,
matriculados em 04 escolas municipais da cidade de Nova Friburgo – RJ, na faixa
etária de 07 a 16 anos de idade, com idade média de 9,88 ± 1,56. Quanto ao
gênero, 116 (54,46%) eram meninas e 97 (45,54%) eram meninos.
Para a avaliação da experiência de cárie foram utilizados os índices ceo-d
para dentes decíduos, CPO-D para dentes permanentes e o grau de infecção (ceo-d
+ CPO-D) para as crianças que estavam em dentição mista. Os resultados
mostraram um índice ceo-d médio de 1,45 ± 1,63, índice CPO-D médio de 1,32 ±
2,35 e o grau de infecção médio de 2,38 ± 2,78.
Não foi verificada diferença estatisticamente significante entre grau de
infecção e idade (p=0,3848), mas encontrou-se diferença entre ceo-d e idade
(p=0,0257) e CPO-D e idade (0,0121) quando aplicado o Teste de Kruskal-Wallis.
Em relação ao índice ceo-d, embora a maioria das crianças livres de cárie
estivessem entre as idades de 8 a 11 anos, a maior prevalência de cárie estava
entre as crianças de 8 a 9 anos, enquanto que, para o CPO-D a maior prevalência
ficou entre as crianças de 10 e 11 anos.
Não foi observada diferença estatística significante, com o Teste de Kruskal-
Wallis, entre gênero e grau de infecção (p=0,8601), gênero e CEO-d (p=0,3976) e
gênero e CPO-D (p=0,5651).
22
Para a análise da presença do Streptococcus mutans, foram avaliadas
amostras de saliva de 140 crianças em PCR convencional, destas amostras, 52
(37,14%) foram descartadas por contaminação da eletroforese, 09 (6,43%) deram
negativas e 79 (56,43%) foram positivas.
(Tabela 01). As figuras de 01 a 08 mostram as eletroforeses para detecção do S
mutans.
Tabela 01 - Presença de S mutans nas amostras avaliadas.
SM Frenquência Porcentagem Porcentagem
Cumulativa
C 52 37,14% 37,14%
N 9 6,43 % 43,57%
S 79 56,43% 100%
Total 140 100% 100%
Figura 01 – Eletroforese das amostras de 1 a 14.
23
Figura 02 – Eletroforese das amostras de 15 a 39.
Figura 03 – Eletroforese das amostras de 40 a 61.
24
Figura 04 – Eletroforese das amostras de 62 a 83.
Figura 05 – Eletroforese das amostras de 84 a 95
25
Figura 06 – Eletroforese das amostras de 106 a 127.
Figura 07 – Eletroforese das amostras de 134 a 149.
26
Figura 08 – Eletroforese das amostras de 150 a 158.
A análise de regressão linear mostrou um forte coeficiente de correlação
(r=0,00) entre o grau de infecção e a presença do S mutans, no entanto, na tabela 2
pode-se observar que 05 das amostras que foram negativas para S mutans
correspondiam a crianças que apresentavam pelo menos uma lesão de cárie
Amostra Streptococcus
Mutans
Grau de Infecção
117 Negativo 4
114 Negativo 2
115 Negativo 11
50 Negativo 0
52 Negativo 0
134 Negativo 0
136 Negativo 6
149 Negativo 0
138 Negativo 1
5 DISCUSSÃO
A cárie dentária tem sido discutida no Brasil e no mundo como um importante
tema da saúde pública, pois, apesar dos avanços da odontologia preventiva, a cárie
dentária ainda é uma das doenças que mais afeta os seres humanos.
Dentre esses avanços preventivos desta doença pode-se citar o flúor que tem
participação ativa em todos os programas de saúde coletiva, uma vez que reduz os
índices de cárie das populações.
Produtos fluoretados têm sido apontados como os principais responsáveis pelo declínio observado na prevalência da cárie. No Brasil, estudos pioneiros realizados nos anos 50 e 60 corroboraram a eficácia preventiva da fluoretação das águas. No período de 1986-1996, com 42% da população recebendo água fluoretada, a queda na prevalência da cárie entre crianças de 12 anos de idade foi de 53%. Além da água fluoretada também os dentifrícios são, no presente, amplamente utilizados como veículos para uso do flúor em saúde pública.(NARVAI, 2003)
Apesar da Cidade de Nova Friburgo não dispor de água de abastecimento
fluoretada, este trabalho demonstrou que as crianças avaliadas apresentaram uma
condição de sáude bucal satisfatória, com os índices ceo-d e CPO-d médio baixos
(1,45 ± 1,63 e 1,32 ± 2,35, respectivamente).
Os resultados obtidos não demonstraram diferença estatística significante
entre gênero e experiência de cárie e nem entre esta e a idade das crianças, no
entanto, embora a maioria das crianças livres de cárie estivessem na faixa etária de
8 a 11 anos, os índices ceo-d mais altos encontram-se entre crianças de 8 a 9 anos,
enquanto que, para o CPO-D, entre as crianças de 10 a 11 anos.
28
Vale ressaltar que enquanto as crianças estão nas creches (até 6 – 7 anos),
elas são obrigadas a levar escova dental para as escolas., depois disto a escovação
fica a cargo das próprias crianças ou dos responsáveis. Este fato pode estar
relacionado com o aumento da prevalência de cárie na faixa etária de 8 – 11 anos.
Além disto, a literatura propõe que a cárie dentária é consequência de
mudanças no equilíbrio natural da microflora residente causadas por uma alteração
nas condições locais do ambiente. (KLEINBERG,2002; MARSH, 2003)
Durante muitos anos acreditou-se que os Streptococcus mutans eram os
grandes responsáveis pela iniciação e progressão do processo da cárie dentária.
No presente estudo foi utlizada a PCR convencial para avaliar a presença de
Streptococcus mutans na saliva das crianças avaliadas e observou-se que 05 das
crianças com resultado negativo para Streptococcus mutans tinham pelo menos 1
lesão de cárie, sendo que uma delas apresentou 11 lesões. Por outro lado, muitas
crianças possuíam a bacteria na cavidade bucal, porém não apresentaram atividade
de cárie. O que nos mostra que existem outros fatores que levam a formação da
doença na cavidade bucal.
De acordo com Kanasi et al em 2010, os Streptococcus mutans são
fortemente associados com a cárie dental em virtude do seu metabolismo e seus
atributos ecológicos. È uma espécie bacteriana predominante na microbiota de
crianças com doença severa de cárie. Embora sua associação com a cárie precoce
da infância aparenta convincente, a maioria das crianças colonizadas pelo
Streptococcus mutans não manifesta a doença, sugerindo que, entre outras
possibilidades, esses variam na sua capacidade para iniciar a cárie. (artigo 2 -
Classificação genética de cáries severas na infância usando fragmentos de DNA dos
Streptococcus mutans)
Vale ressaltar que, segundo Nyvad & Kilian, 1990a, independentemente do
tipo de superfície dentária (esmalte ou raiz), os colonizadores iniciais constituem
uma porção altamente selecionada da microbiota oral, principalmente o S. sanguinis,
S. oralis e S. mitis e ainda, o Actinomyces spp. E as bactérias Gram-negativas como
o Haemophilus spp. e Neisseria spp.
29
Por muitos anos acreditou-se que os S. mutans constituíam uma parte
significativa da microbiota inicial devido a sua habilidade de elaborar polissacarídeos
extracelulares adesivos a partir de sacarose, in vitro. Entretanto, estudos clínicos
têm mostrado que os S. mutans compreendem apenas 2% ou menos da microbiota
estreptocócica inicial (MARSH e NYVAD, 2013).
Estes mesmos autores ressaltam que, para a cárie dentária, é relevante a
presença nos biofilmes dentários de altas concentrações de cocos Gram positivos
produtores de ácidos como os S. mutans, S. sobrinus e outros não mutans e
bastonetes Gram positivos como os lactobacilos. Lembrando que várias bactérias
Gram negativas também tem o potencial de produzir ácidos a partir de carboidratos,
como algumas espécies de Neisseria. (RYAN e KLEINBERG, 1995)
Embora estudos de cultura mostraram que os Streptococcus mutans são os
patógenos mais importantes associados com a cárie (Loesche & Grenier , 1976;
Loesche, 1986), esta doença tem ocorrido na ausência do S. mutans (Beighton,
2005; Gross et al., 2012), o que está de acordo com os achados do presente estudo.
Segundo o levantamento do SB-Brasil (2007), os índices de cárie entre
adolescentes foram mais elevados do que na infância, sendo expressivo o aumento
da doença num período crítico de transição para a fase adulta. Entretanto, o
aumento do índice CPOD entre os jovens, se não for controlado, pode progredir até
a velhice, com aumento do número de dentes perdidos.
Nesse sentido, identificar os determinantes sociais e individuais da cárie
dentária entre os jovens pode contribuir para a prevenção da cárie e para a
promoção da saúde bucal. (FRIAS, ANTUNES, JUNQUEIRA et al., 2007).
Programas de Educação em Saúde Bucal promovem o aumento do
conhecimento sobre esse assunto e contribui com a redução do índice da cárie.
Assim, a importância da educação em saúde bucal é tornar o paciente um
colaborador no programa de prevenção e não apenas um alvo do mesmo. Também,
o cirurgião-dentista precisa sensibilizar-se quanto à sua responsabilidade como
agente de saúde junto à comunidade, procurando motivar a criança e conscientizar
seus pais e/ou responsáveis.
30
6 CONCLUSÃO
Os resultados deste estudo mostraram correlação entre a prevalência de cárie
e a presença do S mutans, no entanto, 05 amostras que foram negativas para S
mutans correspondiam a crianças que apresentavam pelo menos uma lesão de cárie
e tiveram crianças com S mutans que não apresentaram lesões cariosas. Estes
resultados sugerem que a cárie dentária pode ocorrer mesmo na ausência dos S
mutans.
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