Upload
bambang-rianto
View
234
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
1/24
HALAMAN PENGESAHAN
Nama Materi : Enzim
Kelompok : 3 / Senin Siang
Anggota : 1. Bambang Rianto
2. Nadia Sevi Ardiana
3. Senind!a A!i Sito Sand!
Semarang" Mei 2#1$
%engamp&
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
2/24
RINGKASAN
Reaksi kimia yang terjadi dalam sistem biologis selalu melibatkan katalis. Katalis
ini dikenal sebagai katalis biologis (biokatalisator) berupa protein yang sangat spesifik yang
disebut enzim, merupakan katalis yang sedang dikembangkan dalam industri kimia. Enzimmerupakan biokatalisator yang sangat efektif yang akan meningkatkan kecepatan reaksi
kimia spesifik secara nyata, dimana reaksi ini tanpa enzim akan berlangsung lambat.
Enzim memiliki keunggulan sifat, antara lain mempunyai aktivitas yang tinggi,
efektif, spesifik dan ramah lingkungan. erdasarkan biosintesisnya, enzim dibedakan
menjadi enzim konstitutif dan enzim induktif. !erdapat tiga metode isolasi enzim, antara lain
ekstraksi, separation, dan presipitasi.
"ada praktikum kali ini bahan yang digunakan antara lain,
aseton#formaldehid#etanol, cystein, celite, $a%l, ($& ' )*' , $a* %& +%**&, auadest,
induser enzim. edangkan alat yang digunakan diantaranya erlenmeyer, pipet tetes, gelas
ukur, pengaduk, beaker glass, timbangan. %ara kerja yang dilakukan dimulai dari isolasi
enzim kemudian reaksi enzimatis.
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
3/24
PRAKATA
Segala puji bagi Allah SWT atas segala limpahan rahmat, nikmat, serta
hidayah-Nya, sehingga laporan praktikum mikrobiologi industri ini bisa
terbentuk.
Terima kasih kepada asisten laboratorium, Rossa Dwi dan semua pihak
yang telah membantu, sehingga laporan ini bisa selesai terbentuk.
Dalam laporan ini berisi tentang hasil praktikum mikrobiologi industri
materi yoghurt. Di laporan ini dipaparkan hasil praktikum pembuatan
yoghurt dengan beberapa !ariabel.
Semoga laporan ini bisa berman"aat untuk menunjang proses
pembelajaran selanjutanya. Dan kritik serta saran yang bersi"at membangun
masih dibutuhkan agar laporan ini bisa menjadi lebih baik lagi.
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
4/24
DAFTAR ISI
#alaman
$udul .................................................................................. .............................
........ i
%embar
engesahan ........................................................................ .............................
.......... ii
Ringkasan &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&iii
rakata &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&.i!
Da"tar
'si ....................................................................................... ..............................
........... !
BAB I PENDAHULUAN
(.( %atar
)elakang ........................................................................ .............................
............. (
(.* erumusan
+asalah ................................. .....................................................................
.... (
(. Tujuan
erobaan ................................................. .......................................................
..... (
(. +an"aat
erobaan ............................................................ ............................................
... (
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
5/24
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
......................................... ................................................. *
BAB III PELAKSANAAN PERCOBAAN
.( )ahan dan
Alat ..................................................................................................................
/
.* 0ara
1erja .................................................................................................................
........ 2
DAFTAR PUSTAKA
............................................................................................................(3LEMBAR KUANTITAS REAGEN
.................................................................................... ((
DAFTAR TABEL
Tabel 3.1 Variabel Operasi……………………………………………………………….. 1
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
6/24
DAFTAR GAMBAR
Ga!bar ".1 S#e!a Pe!b$a%a& '()*$r%……………………………………………………..+
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
7/24
BAB I
PENDAH,L,AN
I. 1. La%ar Bela#a&)
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
8/24
Reak'i kimia !ang ter(adi dalam 'i'tem biologi' 'elal& melibatkan katali'. Katali'
ini dikenal 'ebagai katali' biologi' )biokatali'ator* ber&pa protein !ang 'angat 'pe'i+ik
!ang di'eb&t enzim ),inarno" 1-$*" mer&pakan katali' !ang 'edang dikembangkan
dalam ind&'tri kimia. %engembangan katali' biologi' dit&(&kan &nt&k meng&rangi
kon'&m'i energi pro'e' 'erta mengilangkan terik&tn!a 'en!aa0'en!aa pengotor
dalam prod&k '&at& pro'e'. Katali' ini dig&nakan 'ebagai alternati+ katali' anorganik
'eperti natri&m" kali&m ata& kal'i&m idrok'ida.
Enzim mer&pakan biokatali'ator !ang 'angat e+ekti+ !ang akan meningkatkan
keepatan reak'i kimia 'pe'i+ik 'eara n!ata" dimana reak'i ini tanpa enzim akan
berlang'&ng lambat )eninger" 1--*. Si+at0'i+at i'timea enzim adala kapa'ita'
katalitik dan 'pe'i+i'ita'n!a !ang 'angat tinggi. 4i'amping it& enzim memp&n!ai peran
dalam tran'+orma'i berbagai (eni' energi ),inarno" 1-$*. )K&rnia" 2#1#*
I. ". T$-$a& Per(baa&
1 Mengi'ola'i enzim dari 5 )tanaman/b&a0b&aan*.
2 Mengit&ng aktivita' enzim .
3 Membandingkan aktivita' enzim 5 'e'&ai variabel perobaan
I. 3. Ma&/aa% Per(baa&
1. Maa'i'a mamp& mengi'ola'i enzim dari
2. Maa'i'a mamp& mengit&ng aktivita' enzim
3. Maa'i'a mamp& membandingan aktivita' enzim ... 'e'&ai variabel perobaan
BAB II
TIN0A,AN P,STAKA
II. 1. Pe&)er%ia& ,!$! E&i!
Kata enzim bera'al dari baa'a 6&nani 7enz!me8 !ang berarti 7di dalam 'el8.
,ill! K&ne )19$* mende+ini'ikan enzim 'ebagai +ermen )ragi* !ang bent&kn!a
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
9/24
tidak tertent& dan tidak terat&r" !ang dapat beker(a tanpa adan!a mikroba dan dapat
beker(a di l&ar mikroba. 4e+ini'i ter'eb&t ber&ba 'etela dilak&kan penelitian
lan(&tan ole B&ner pada ta&n 1-9. Enzim dapat diprod&k'i ole mikroba ata&
baan lainn!a 'eperti ean dan t&mb&an. Enzim (&ga dapat dii'ola'i dalam bent&k
m&rni ),inarno" 1-$*.
)K&rnia" 2#1#*
II. ". Si/a% 2 si/a% E&i!
Enzim memiliki ke&ngg&lan 'i+at" antara lain memp&n!ai aktivita' !ang tinggi"
e+ekti+" 'pe'i+ik dan rama lingk&ngan )id!a dan 4(enar" 2###*" 'edangkan men&r&t
)Saktian'!a" 2##1*" enzim memiliki 'i+at !ang ka'" !ait& 'angat akti+ ala&p&n
kon'entra'in!a amat renda" 'angat 'elekti+ dan beker(a pada kondi'i !ang rama)mild*" !ait& tanpa temperat&r ata& tekanan tinggi dan tanpa logam !ang &m&mn!a
bera&n. al inila !ang men!ebabkan reak'i !ang dikatali'i' 'eara enzimatik
men(adi lebi e+i'ien dibandingkan dengan reak'i !ang dikatali'i' ole katali' kimia
)A&g&'t" 2###*.
Enzim memp&n!ai kek&'&'an aktivita'" !ait& peranann!a 'ebagai katali' an!a
teradap 'at& reak'i ata& beberapa reak'i !ang 'e(eni' 'a(a. ;adi dapat melibatkan
beberapa (eni' '&b'trat ),inarno" 1-$*. Si+at 'pe'i+ik )'pe'i+i'ita' enzim*
dide+ini'ikan 'ebagai kemamp&an '&at& enzim &nt&k mendi'krimina'ikan '&b'tratn!a
berda'arkan perbedaan a+inita' '&b'trat0'&b'trat &nt&k menapai 'i'i akti+ enzim
)A&g&'t" 2###*. Si+at 'pe'i+inita' ini dapat diman+aatkan &nt&k t&(&an reak'i ata&
(eni' prod&k !ang diarapkan. Si+at ini 'angat meng&nt&ngkan karena tidak akan
di(&mpai reak'i0reak'i 'amping" 'eingga lebi rama lingk&ngan.
)K&rnia" 2#1#*
II. 3. Pe&))(l(&)a& E&i!
Berda'arkan bio'inte'i'n!a" enzim dibedakan men(adi enzim kon'tit&ti+ dan
enzim ind&kti+. Enzim kon'tit&ti+ adala enzim !ang 'elal& ter'edia di dalam 'el
mikroba dalam (&mla !ang relati+ kon'tan" 'edangkan enzim ind&kti+ adala enzim
!ang ada dalam (&mla 'el !ang tidak tetap" tergant&ng pada adan!a ind&'er. Enzim
ind&kti+ ini (&mlan!a akan bertamba 'ampai beberapa rib& kali bakan lebi
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
10/24
apabila dalam medi&m mengand&ng '&b'trat !ang mengind&k'i" ter&tama bila
'&b'trat pengind&k'i mer&pakan 'at&0'at&n!a '&mber karbon )id!a dan 4(enar"
2###*.
Berda'arkan tempat beker(an!a" enzim dapat dibedakan dalam 2 golongan" !ait&
endoenzim dan ek'oenzim. Endoenzim di'eb&t (&ga enzim intra'el&ler" dia'ilkan di
dalam 'el !ait& pada bagian membran 'itopla'ma dan melak&kan metaboli'me di
dalam 'el. Ek'oenzim )enzim ek'tra'el&ler* mer&pakan enzim !ang dia'ilkan 'el
kem&dian dikel&arkan melal&i dinding 'el 'eingga terdapat beba' dalam media !ang
mengelilingi 'el dan bereak'i memea baan organik tanpa tergant&ng pada 'el !ang
melepa'kann!a )Soedigdo" 1-*.
)K&rnia" 2#1#*
II. . Me%(4e Is(lasi E&i!
a. E#s%ra#si
dalam metode ek'trak'i dibagi men(adi tiga (eni'" !ait& :
1. 4etergent
4etergent < detergent anionik" kationik" dan nonionik &k&p e+ekti+ &nt&k
mer&'ak membran 'el.
=onto detergent !ang 'ering dig&nakan &nt&k i'ola'i enzim a.l : 'etiltrimetil
amoni&m bromida )kationik*" natri&m la&ril '&l+at )anionik*" teen'" 'pan'" dan
triton )non < ionik*.
%ada kondi'i % dan kek&atan ion !ang 'e'&ai" detergent akan berinterak'i dengan
lipoprotein &nt&k membent&k mi'el. Akibatn!a lipoprotein !ang mer&pakan
kon'tit&en membran dapat lar&t dan enzim dapat dikel&arkan. %emilian dan
pengg&naan detergent ini ar&' &k&p 'elekti+" karena beberapa enzim dapat
men(adi tak akti+ akibat denat&ra'i protein dan pengendapan ole detergen.
>m&mn!a detergent ar&' 'egera dipi'akan 'ebel&m a'il i'ola'i dig&nakan.
2. Enzim itik
%emeaan dinding 'el dengan ara ini mer&pakan ara !ang paling e+ekti+.
Enzim litik !ang &m&m dig&nakan adala li'ozim !ang diperole dari p&ti tel&r.
Enzim ini memea ikatan ?.01"@ gliko'ida dari poli'akarida )a'am m&ramat*
pen!&'&n dinding 'el. 4inding 'el bakteri gram po'iti+ lebi ban!ak mengand&ng
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
11/24
poli'akarida dibandingkan dengan bakteri gram negati+" 'eingga pengg&naan
enzim litik lebi e+ekti+ &nt&k memea dinding 'el bakteri gram po'iti+. E4A
perl& ditambakan pada media 'ebel&m enzim ini dig&nakan &nt&k memea
dinding 'el bakteri gram negati+" &nt&k mengikat ion0ion divalen !ang dapat
menginakti+kan enzim ini.Enzim li'ozim '&da dig&nakan 'eara komer'ial pada
ek'trak'i enzim gl&ko'a i'omera'e dari Streptom!e' 'p. ;eni' enzim lain : papain
4m&da dikendalikan dan ber'i+at 'elekti+
3. Alkali
%enempatan 'el pada medi&m dengan p 11
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
12/24
klari+ika'i dapat di(&al 'ebagai airan enzim komer'ial. Kon'entra'i 'en!aa
peng&mpal ar&' tepat" agar enzim tidak mengg&mpal. aram amoni&m '&l+at
pada kon'entra'i tinggi men!ebabkan 'alting o&t protein terma'&k enzim.
)Eli'a" 2#12*
II. +. ,-i A#%i5i%as E&i!
a. ,-i A#%i5i%as E&i! Pr(%ease
Ek'trak ka'ar enzim protea'e di prod&k'i dari +ermenta'i media air 'intetik.
Cermenta'i dilak&kan di dalam 7'aker aterbat8 pada '&& 39o=" 1# rpm.
D'ola'iek'trak ka'ar enzim protea'e dilak&kan pada akt& ink&ba'i optim&m !ang
ditetapkan dengan k&rva pert&mb&an !ait& 32 (am. %rotea'e dari
ek'tra'el&lerdiperole dengan men'entri+&ga'i medi&m prod&k'i pada keepatan
$.### rpm pada'&& @o=" 'elama 1 menit. )El+i" 2##3* Enzim ini akan berada di
'&pernatann!a danmer&pakan ek'trak ka'ar protea'e. Ek'trak ka'ar ini kem&dian
dim&rnikan melal&itaap +reeze dr!ing" dan 'elan(&tn!a di+rak'ina'i dengan
amoni&m '&l+at. Creezedr!ing mer&pakan taap pemekatan ata& pengeringan
lar&tan protein &nt&k menega denat&ra'i protein. Sedangkan +rak'ina'i amoni&m
'&l+at mer&pakan pro'e' pengendapan protein dari lar&tann!a. al ini
dilak&kan 'etela ek'trak ka'ar protea'edipekatkan melal&i +reeze
dr!ing.Crak'ina'i dengan amoni&m '&l+at mer&pakan 'ala 'at& ara
pem&rnianprotein melal&i pro'e' pengendapan garam. %engendapan ini ter(adi kare
na ion < iongaram amoni&m '&l+at akan berkompeti'i dengan protein &nt&k
menarik molek&l air'eingga meng&rangi molek&l air pada bagian perm&kaan
idro+ob protein" danmen&r&nkan kelar&tan protein" 'elan(&tn!a protein
berinterak'i 'at& 'ama lainn!amembent&k g&mpalan dan mengendap. Molek&l
protein dengan berat molek&l be'armemerl&kan kon'entra'i garam !ang keil
&nt&k membent&k endapan dan akanmengendap lebi d&l& al ini
men!ebabkan ter(adin!a e+ek 'alting o&t )Catoni" 2##*.Salting o&t adala
peri'tia peningkatan m&atan li'trik di 'ekitar protein" !ang akanmenarik mantel
air dari koloid protein dan men!ebabkan peri'tia idro+obikantarmolek&l protein
pada '&a'ana ionik tinggi !ang men!ebabkan pen&r&nankelar&tan protein.
Sedangkan pada kon'entra'i renda" ion0ion ini akan mengelilingimolek&l protein
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
13/24
dan menega mereka ber'at& 'eingga protein melar&t. %eri'tia inidi'eb&t
'alting in.%engendapan ter(adi 'eara perlaan dan di'etimbangkan 'elama 12
(am.Endapan !ang terbent&k dipi'akan dengan ara 'entri+&ga'i" >nt&k
mengilangkan'i'a0'i'a garam amoni&m '&l+at dan molek&l0molek&l keil lainn!a"
maka endapan!ang diperole didiali'i' mengg&nakan tab&ng 'elovan )El+i" 2##3*.
)El+ira" 2#1@*
b. ,-i A#%i5i%as E&i! A!ilase
D'ola'i enzim amila'e mer&pakan enzim ek'tra'el&ler 'eingga dalam pro'e'
i'ola'in!a tidak memerl&kan pro'e' pemeaan 'el. %eman+aatan ampran onggok
dan dadak &k&p poten'ial dig&nakan 'ebagai media pert&mb&an kapang
a'pergill&' niger dalam &pa!a prod&k'i enzim dalam 'i'tem +ermenta'i media 'emi padat 'e&b&ngan dengan kadar pati" protein" vitamin 'erta mineral !ang ma'i
terkand&ng didalamn!a. Enzim amila'e !ang diperole dari a'pergil&' niger lebi
lan(&t dilak&kan i'ola'i )pem&rnian* 'eara pr'ial dengan penambaan
)N@*2S@. al ini dim&ngkinkan karena garam ber+&ng'i &nt&k mer&'ak mantel
air !ang terdapat di'ekitar enzim )protein* 'eingga protein akan mengendap.
%engendapa mak'im&m diperole dengan penambaan )N@*2S@ $#F.
Selan(&tn!a dilak&kan 'entri+&ga'i dingin dengan +reezedr!ing 'eingga diperole
'erb&k enzim ka'ar amila'e 'eban!ak #" g radi 1## ml '&pernatan.
Kondi'i optim&m aktivita' enzim amila'e dapat dipengar&i beberapa +aktor"
diantaran!a pengar& dari '&& dan %. 4ari a'il peng&(ian pengar& p teradap
aktivita' enzim diperole a'il" baa p optim&m enzim amila'e adala $"#. %
ber&b&ngan dengan 'tr&kt&r enzim !ang terdiri dari a'am < a'am amino.
%er&baan p dalam '&at& lar&tan men&n(&kan per&baan < per&baan (&mla ion
G !ang ada dalam lar&tan. ;&mla ion !an ada akan mempengar&i 'tr&kt&r enzim
!ang terdiri dari a'am < a'am amino" ter&tama pada ikatan idrogenn!a. Karena
aktivita' enzim berkaitan erat dengan 'tr&kt&rn!a maka per&baan 'tr&kt&r akan
men!ebabkan per&baan < per&baan aktivita' enzim. Sedangkan pada p
optim&m (&mla ion G tidak mempengar&i kon+orma'i enzim 'eingga
kon+orma'i '&b'trat 'ama dengan kon+roma'i enzim. al ini men!ebabkan
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
14/24
interak'i antara enzim dan '&b'trat meningkat" 'edangkan pada p optim&m
aktivita' enzim paling tinggi.4ari a'il peng&(ian pengar& '&& teradap aktivita' enzim diperole a'il"
baa '&& optim&m enzim amila'e adala $#o=. Sebel&m menapai '&& ter'eb&t
terliat baa aktivita' enzim keil" al ini di'ebabkan karena '&& ter'eb&t energi
aktiva'i !ang diperl&kan enzim &nt&k mengkatali'i' reak'i idroli'i' '&b'trat
amil&m tidak &k&p 'eingga enzim tidak dapat beker(a dengan baik. Kenaikan
'&& men!ebabkan aktivita' enzim meningkat 'ampai '&& optim&m. Setela
menapai kondi'i optim&m terliat baa aktivita' enzim men&r&n. er(adin!a
pen&r&nan aktivita' ini diperkirakan karena pada '&& tinggi 'tr&kt&r ter'ier enzim
!ang terdiri dari ikatan b&kan kovalen ata& elektro'tatik" ikatan idrogen" ikatan
di'&l+ida dan ikatan idro+obik bila men!erap energi tinggi akan ter(adi pem&t&'andan menagkibatkan ter(adin!a pemb&kaan 'tr&kt&r ter'ier dan k&artener !ang
men!ebabkan kon+orma'i enzim ber&ba dan men!ebabkan aktivita' men&r&n.
)Cirman" 2#1*
. ,-i A#%i5i%as E&i! Lipase
Akti+ita' lipa'e memp&n!ai 'at&an &nit )>*. Sat& &n dengan 1 Hmol a'am lemak
beba' !ang dia'ilkan dari idroli'i' '&b'trat !ang dikatali'i' ole lipa'e tiap
'at&an menit )anda!ani" 2##*. >nt&k menent&kan akti+ita' optim&m pada
kondi'i optim&m lipa'e maka perl& dilak&kan peng&k&ran. akti+ita' enzimatik pada
varia'i temperat&r dan p" 'eingga akan diketa&i akti+ita' lipa'e di'etiap rentang
temperat&r dan p !ang ditent&kan. >(i aktivita' enzim lipa'e dapat dilak&kan
dengan metode poten'iometri. %rin'ip dari &(i aktivita' enzim ini adala '&b'trat
olive oil dib&at dalam bent&k em&l'i dan diberi enzim lipa'e !ang bel&m diketa&i
keakti+ann!a" diink&ba'i pada temperat&r 3#= dan p "$ )=r&eger" 1-@*.
Selama ink&ba'i a'am lemak beba' dilepa'kan dan akan mengalami pen&r&nan p.
4engan ara titra'i" baik 'eara man&al ma&p&n otomati' akan didapat (&mla titer
per'at&an akt& !ang mer&pakan arga aktivita' lipa'e. >nt&k mendapatkan
em&l'i !ang 'tabil bia'an!a ditambakan g&m arabik" tetapi dapat (&ga dig&nakan
idrok'imetil'el&lo'a ata& natri&m oleat ),inarno" 1-$*. Aktivita' enzim dengan
metode poten'iometri dapat diit&ng dengan mengg&nakan r&m&' )arnanik"
2###* :
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
15/24
Aktivita' enzim I )A < B* J N Na J 1### )2.* J t
Keterangan :
A I vol&me Na 'ampel )m*
B I vol&me Na blanko )m* N Na I #"#1 N < #"# N
1### I konver'i dari m mol ke Hmol
I vol&me enzim !ang dig&nakan )dalam ml*t I akt& ink&ba'i
Keakti+an lipa'e diketa&i dengan abi'n!a '&b'trat ata& timb&ln!a prod&k
idroli'i' a'am lemak beba'. abi'n!a '&b'trat dapat didetek'i antara lain dengan
pearna nile bl&e '&l+at !ang bearna bir&. Sebel&m idroli'i'" lar&tan lemak akan
berarna pink !ait& arna !ang ditimb&lkan ole reak'i antara nile bl&e '&l+at
dengan glob&la lemak. Bila '&b'trat tela abi' diidroli'i'" arna pink akan
ber&ba kembali men(adi bir&. %rod&k a'am lemak !ang dibeba'kan dapat
dig&nakan &nt&k mendetek'i keberadaan enzim lipa'e dengan mengg&nakan
metoda pelat dengan media agar. Metoda pelat dilak&kan dengan mengg&nakan
'en lain met!l red" penol red" rodamine B" !ang ter(adi men!ebabkan
terbent&kn!a arna ata& di'ekitar koloni )K&lkarni" 2##2*. Metoda !ang
dig&nakan &nt&k k&antitati+ adala metoda titrimetri" )potometr!" +l&orimetr!
imm&noemi'tr! dan kond&ktometri. Sebagian be'ar metoda ter'eb&t dide'ain
&nt&k memperkirakan prod&k a'il reak'i idroli'i'. %ro'e' idroli'i' !ang ter(adi
men!ebabkan terbent&kn!a arna ata& +l&ore'ent alo' )K&lkarni" 2##2*. %ro'e'
idroli'i' +l&ore'ent alo' ata& ila!a memperkirakan aktivita' lipa'e 'eara
inter+aial ten'iometr!" Spetro'op! dan t&rbidimetri*" kromatogra+i" dan
kond&ktometri. Sebagian be'ar metoda ter'eb&t dide'ain )K&lkarni" 2##2*.
Aktivita' enzim !ang di&k&r mengg&nakan metoda titrimetri pada prin'ipn!a
adala pemb&atan '&b'trat dalam bent&k em&l'i kem&dian diberi enzim lipa'e
!ang bel&m diketa&i keakti+ann!a dan diink&ba'i pada dan p optim&mn!a.
Selama ink&ba'i" pro'e' beba' dilepa'kan. al ini akan men&r&nkan p. itra'i
!ang dilak&kan mengg&nakan lar&tan alkali akan menga'ilkan (&mla titer
per'at&an akt& !ang men&n(&kkan (&mla a'am lemak !ang dia'ilkan. ;&mla
a'am lemak ter'eb& men&n(&kkan arga aktivita' lipa'e. Em&l'i !ang 'tabil dan
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
16/24
peningkatan 'en'iti+ita' peng&(ian dapat dilak&kan dengan menambakan g&m
arabik" idrok'imetil'el&lo'a ata& natri&m oleat ),inarno" 1-$*. a(& reak'i
mer&pakan +&ng'i linier dari lipa'e dan k Kon'entra'i '&b'trat !ang berada pada
kondi'i inter+a'ial 'angat penting" 'eingga tria'ilgli'erol dibent&k dalam bent&k
em&l'i" antara lain dengan metoda 'oniation. %enelitian !ang dilak&kan ole
oodman dan 4&rgan )1-$-*" Enzim ipa'e dari A'pergill&' niger 'ebagai
Biokatali' pada %ro'e' li'eroli'i' Menga'ilkan Monoa'ilgli'erol %eng&(ian
aktivita' lipa'e dengan 'pekto+otometri dan +l&ore'en. Aktivita' enzim !ang di&k&r
mengg&nakan metoda titrimetri pada prin'ipn!a adala pemb&atan '&b'trat dalam
bent&k em&l'i kem&dian diberi enzim lipa'e !ang bel&m diketa&i keakti+ann!a
dan diink&ba'i pada temperat&r men&n(&kkan baa 'onika'i min!ak zait&n !ang
diem&l'ikan dengan g&m arabi meningkatkan 'en'iti+ita' peng&(ian )K&lkarni"
2##2*.
)K&rnia" 2#1#*
II. 6. Fa#%(r 2 Fa#%(r 7a&) Me!pe&)ar$*i A#%i5i%as E&i!
Aktivita' dari enzim dalam mengkatali' reak'i dipengar&i ole beberapa +aktor"
diantaran!a adala:
1. K(&se&%rasi e&i!
%ada '&at& kon'entra'i '&b'trat tertent& keepatan reak'i enzimati' bertamba
pada 'aat ber0tamban!a kon'entra'i enzim.
". K(&se&%rasi s$bs%ra%
%ada 'aat kon'entra'i enzim kon'tan ber0tamban!a kon'entra'i '&b'trat
meningkatkan ke0epatan reak'i enzimati'. %ada kon'entra'i tertent& tidak
ter(adi peningkatan keepatan reak'i ala&0p&n kon'entra'i '&b'trat ditamba.
3. S$*$
%ada '&& renda reak'i kimia berlang'&ng lam0bat" pada '&& tinggi 'eara
&m&m reak'i kimia berlang'&ng epat. %ada '&& optim&m keepatan reak'i
enzimati' adala mak'im&m. %ada '&& meleati '&& optim&mn!a dapat
men!ebabkan ter(adin!a denat&ra'i enzim 'eingga men&r&nkan keepatan
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
17/24
reak'i.
. Dera-a4 Keasa!a& 8pH9
Str&kt&r enzim dipengar&i ole p lingk&ngann0!a. Enzim dapat berm&atan
po'iti+" negati+ ata& berm&atan ganda )zitter ion*. %engar& per&0baan
p lingk&ngan berpengar& pada aktivita' 'i'i akti+ dari enzim.
+. I&*ibi%(r
Keberadaan inibitor akan men&r&nkan keepatan reak'i enzimati'. Dnibitor
dapat membent&k kom0plek' dengan enzim baik pada 'i'i aktiv enzim ma&p&n
bagian lain dari 'i'i aktiv enzim. er0bent&kn!a komplek enzim inibitor akan
men&r&nkan aktivita' enzim teradap '&b'tratn!a )%oed(iadi" 1--@*
),&r!anti" 2##@*
II. :. Ki&e%i#a Rea#si E&i!a%i#
Kon'entra'i '&b'trat mempengar&i keepatan reak'i !ang dikatali' ole enzim.
%engar& berbagai kon'entra'i '&b'trat teradap keepatan reak'i aal (ika
enzim di(aga on'tant dapat diliat di gra+ik berik&t :
ambar 2.1 ra+ik &b&ngan kon'entra'i '&b'trat teradap
keepatan reak'i enzimati'
%er'amaan Miaele' < Menten 'eara matemati' dapat din!atakan dalam per'amaan :
o:Vmaks+[S ]
km+[S ]
dengan : o I keepatan aal pada kon'entra'i '&b'trat LS
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
18/24
mak' I keepatan mak'im&m
Km I tetapan Miaele' < Menten enzim bagi '&b'trat tertent&
)Mari'on"D.," 1-*.
II. ;. E&i! Papai&
a. Papai&
Enzim %apain mer&pakan enzim protea'e !ang terkand&ng dalam geta papa!a" baik
dalam b&a" batang ma&p&n da&nn!a. Sebagai enzim !ang berkemamp&an 'ebagai
memeakan molek&l protein" dea'a ini papain men(adi '&at& prod&k !ang 'angat
berman+aat bagi keid&pan man&'ia" baik di keid&pan r&ma tangga ma&p&n
ind&'tri. Men&r&t angket kami" didapatkan baa !ang mengeta&i 'eara pa'ti
tentang enzim papain 2 orang" 'edangkan !ang tidak mengeta&i tentang enzim
papain 1# orang dan !ang ma'i rag&0rag& tentang enzim papain adala 2 orang. ;ika
dit&angkan dalam per'en maka 9#F !ang pa'ti mengeta&i tentang enzim papain"
1#F !ang tidak mengeta&i tentang enzim papai dan 2F !ang ma'i rag&0rag&
tentang enzim papain.)N&r&l" 2#12*
b. Apli#asi 4ala! I&4$s%ri 4a& Ke*i4$pa& Se*ari 2 Hari
Melal&i angket !ang tela kami 'ebarkan" didapatkan a'il baa ban!ak re'ponden
!ang men!atakan man+aat enzim papain dapat mengilangkan ra'a a&' adala
orang )F*" !ang men(aab 'ebagai krim pember'i 3# orang )9F* dan !ang
men(aab &nt&k mengilangkan (eraat orang )F*.4ari a'il ter'eb&t dapat ditarik ke'imp&lan baa 'ebagian re'ponden baa '&da
ban!ak !ang mengeta&i man+aat dari enzim papain.
Adap&n man+aat Enzim %apain !ait& dig&nakan dalam ind&'tr! pengolaan daging.
4aging dari ean t&a p&n dapat men(adi l&nak (ika diberi Enzim papain. Bia'an!a
daging ean t&a bertek't&r 'angat kera'. 4engan demikin adirn!a enzim papain
dapat meningkatkan ek'por dan impor ean t&a !ang 'ebel&mn!a tidak lak&
dipa'aran. %apain 'ebagai pel&nak daging ban!ak di(&al dipa'aran dalam kema'an
keil 'e'&ai dengan keb&t&an r&ma tangga. Enzim %apain ini '&da diamp&r
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
19/24
dengan baan lain 'eperti garam dan g&la agar kand&ngan enzim papainn!a tidak
terlal& k&at. Enzim papain (&ga dig&nakan 'ebagai baan pengan&r 'i'a ata& b&angan a'il
ind&'tr! pengalengan ikan men(adi b&b&r ikan ata& kon'entrat protein eani. B&b&r
ikan ata& kon'entrat eai ini dig&nakan &nt&k keperl&an baan pakan ternak dan
ikan ata& bakan dapat diola men(adi keap.
4a!a memeakan protein !ang dimiliki ole enzim papaindapat ditingkatkan lebi
(a& men(adi kegiatan idroli'i' protein. al ini 'ering dig&nakan dalam pemb&atan
pepton dan a'am0a'am amino. %epton dan a'am amino diperl&kan dalam penelitian
mikrobiologi dan ind&'tri. Bia'an!a arga prod&k 'emaam ini 'angat maal.
%ada ind&'tri pen!amakan k&lit" Enzim papain 'ering dig&nakan &nt&k melemb&tkan
k&lit. K&lit !ang lemb&t dapat dib&at 'ar&ng tangan" (aket bakan kao' kaki.
4an (&ga enzim papain berperan penting dalam ind&'tri bir. 4i'trib&'i dan pen!impanan bir berlang'&ng &k&p lama ata& '&a'ana 'ekitarn!a dingin karena iklim
ata& 'enga(a didinginkan maka dapat terbent&k kab&t p&ti 'eingga dapat
meng&rangi m&t& dan 'elera dari bir ter'eb&t. 4engan penambaan enzim papain 'aat
akan dibotolkan" pembent&kan kab&t ini tidak ter(adi. Dt&la 'ebabn!a enzim papain
'ering di'eb&t 'ebagai obat antidingin.
Enzim papain dapat dig&nakan 'ebagai baan akti+ dalam preparat +arma'i 'eperti
&nt&k obat gangg&an penernaan protein" di'pe'ia" ga'triti'" 'erta obat aing.
Enzim papain (&ga dapat dig&nakan 'ebagai baan krim pember'i k&lit" ter&tama
m&ka. Dni di'ebabkan enzim papain dapat melar&tkan 'el0'el mati !ang melekat pada
k&lit dan '&kar terlepa' dengan ara +i'ik. Selain it&" enzim papain 'ering di(adikan
baan akti+ dalam pemb&atan pa'ta gigi. Enzim papain dalam pa'ta gigi dapat
member'ikan 'i'a protein !ang melekat pada gigi. ama Si'a protein ini 'ering
menimb&lkan ba& b&'&k bila terlal& lama dibiarkan.
Selain beberapa man+aat diata'" enzim papain p&n dapat dig&nakan &nt&k beberapa
keb&t&an" diantaran!a !ait&:a. Baan pen&ian kain '&tera )deter(en*
b. Baan pen&i len'a.
. %eren!a dalam pemb&atan k&e kering
d. Baan pen(erni pada pemb&atan min&man te.e. Baan pengg&mpal '&'& pada pemb&atan ke(&.
)N&r&l" 2#12*
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
20/24
BAB III
METODOLOGI PER
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
21/24
III. ". Ga!bar Ala%
Beaker gla'' =entri+&ge =&vet
Kerta' Saring
Magneti 'tirer ab&ng Reak'i Erlenme!er %engi'ap
ermometer ela' >k&r %engad&k
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
22/24
Stopat imbangan Dndikator %
Kompor i'trik
III. 3.
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
23/24
didapatkan endapan DD dan +iltrat DD.
Keringkan dan timbang endapan DD )mi'al a gram*" 'impan endapan DD
i ambakan garam pengendap 2 gram L'e'&ai variabel pada +iltrat DD" lal& 'impan 1
malam dalam lemari e'.
( Saring +iltrat DD dengan kerta' 'aring dan mengg&nakan pompa vak&m" 'eingga
didapatkan endapan DDD dan +iltrat DDD.
k Keringkan dan timbang endapan DDD )mi'al b gram*.
l Ambil endapan DD" amp&rkan dengan endapan DDD" (ika (&mla dari endapan DD dan DDD
)a G b gram* lebi be'ar dari 1 gram" ambil 1 gram endapan ter'eb&t" lar&tkan dalam
air 'ampai 1# ml )lar&tan ini adala enzim*.
m ;ika aGb k&rang dari 1 gram" ambil 1 ml +iltrat DDD" enerkan 'ampai 1# ml )lar&tan ini
adala enzim*.
Rea#si E&i!a%is
Enzim %rotea'e
a B&at lar&tan '&'& @# F , dengan ba'i' 12# ml L'e'&ai variabel.
b %ana'kan lar&tan a'ein ter'eb&t 'ampai '&& 3o="@o="o="$o= L'e'&ai variabel.
Ambil 1 dan 3 ml lar&tan enzim dan 3 dan 1 ml lar&tan a'ein L'e'&ai variabel.
d Setela menapai '&& ter'eb&t" t&angkan lar&tan enzim ke dalam lar&tan a'ein.
e =atat akt& 'ampai ter(adin!a pengg&mpalan
pertama. +. %erit&ngan aktivita' enzim
proteolitik :
O
)S&ler dan Cikret" 1--2*
4engan :
I den'ita' '&'& )ka'ein*
I perbandingan vol&me enzim : '&'&
t I akt& pengg&mpalan
8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi
24/24
DAFTAR P,STAKA
A&g&'t" E. 2###. Ka(ian %engg&naan ipa'e Amobil dari A'pergill&' Niger pada
%emb&atan Monoa'ilgli'erol !ang Ber'i+at Antibakteri dari Min!ak Kelapa. Bogor:D%B.
El+ira" ;&mra. 2#1@. Kinetika dan Aplika'i Enzim 7Enzim %rotea'e8
Eli'a" ;&lianti. 2#12. ttp'://eli'a(&lianti.+ile'.ordpre''.om/2#12/#-/i'ola'i0dan0
pem&rnian0enzim1.pd+ " diak'e' pada tgl 19 'eptember 2#1
Cirman" S&ba!ang. 2##. D'ola'i dan %eng&(ian Aktivita' Enzim P0amila'e dari
A'pergill&' niger dengan Mengg&nakan Media =amp&ran nggok dan 4edek.
K&rnia" 4R4. 2#1#. St&di Aktivita' Enzim ipa'e dari A'pergill&' Niger 'ebagai
Biokatali' %ada %ro'e' li'eroli'i' &nt&k Menga'ilkan Monoa'ilgli'erol.
eninger. 1--. 4a'ar0da'ar Biokimia. ;akarta:Erlangga.
Miael S&ler dan Kargi Cikret. 1--2. Bioproe'' Engineering Ba'i =onept'. Ne
;er'e!:%rentie all
N&r&l" ,arda. 2#12. ttp://!oroelz#-.blog'pot.o.id/2#12/12/enzim0papain0dari0
pepa!a.tml. 4iak'e' pada tgl 1 'eptember 2#1
Sragg" A.". 1-. Biotenolog! +or Engineer'. Ne 6ork: E. orood
,inarno" C. 1-$. Enzim %angan. ;akarta: ramedia.
,&r!anti. 2##@. D'ola'i dan %enent&an Aktivita' Spe'i+ik Enzim Bromelin dari B&a
Nana') -nanas comosus .)
https://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdfhttps://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdfhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttps://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdfhttps://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdf