MICROBIOLOGA ACUTICA

UNIVERSIDAD PEDRO RUIZ GALLOMICROBIOLOGA ACUTICA

MICROBIOLOGA ACUTICA

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUZ GALLO LAMBAYEQUE Facultad de Ciencias Biolgicas

PRACTICA N 08

RECUENTRO DE CLOSTRIDIOS SULFITO REDUCTORES: MTODO DE LOS TUBOS MLTIPLES

DOCENTE: Dra. Olga Francia AranaALUMNO:Tarrillo Dvila, Miguel ngel

Lambayeque, Ciclo 2015 I

RECUENTO DE CLOSTRIDIOS SULFITO REDUCTORES: MTODO DE LOS TUBOS MULTIPLES

INTRODUCCIN

El origen de los anaerobios sulfito-reductores no es exclusivamente fecal, ya que pueden proceder de otras fuentes ambientales como suelo, sedimentos marinos, vegetacin en descomposicin, heridas infectadas de hombre y animales, aguas superficiales, como tambin en los alimentos, especialmente cuando las condiciones de higiene en la elaboracin son deficientes.

Los anaerobios sulfito-reductores constituyen un grupo asociado a los Clostridium spp. su representante ms caracterstico es Clostridium perfringens son deteriorantes, ya que producen malos olores y, con mucha frecuencia, ennegrecimiento del agua cuando sta tiene hierro, formando un precipitado oscuro de sulfuro de hierro. Estos microorganismos tienen la capacidad de reducir los sulfitos a sulfuros a partir de aminocidos y compuestos azufrados y para su deteccin se utiliza la evidente coloracin negra dada por la formacin del precipitado.

Clostridium perfringens se elimina por las heces produce intoxicacin alimentaria y contaminan el agua de consumo. La ventaja ms importante es que sus esporas sobreviven en el agua mucho ms tiempo que los organismos del grupo coliforme y son resistentes a la desinfeccin, al punto que pueden ser detectados en algunas muestras de agua despus de haber recibido pre-desinfeccin, floculacin, sedimentacin, filtracin y la desinfeccin terminal.

El aislamiento de anaerobios sulfito-reductores se propone para indicar el riesgo de sobrevivencia de agentes patgenos en ciertos ecosistemas expuestos a contaminacin fecal remota, como tambin que, por sus caractersticas de tamao y resistencia a la desinfeccin, logren escapar a los tratamientos habitualmente aplicados al agua.

OBJETIVOS

Determinar la calidad microbiolgica del agua a travs del recuento de clostridios.

Aislar clostridios de muestras de aguas contaminadas.

MATERIALES

Material biolgico

TIPO DE ANLISIS:MicrobiolgicoMUESTRA: CaoPROCEDENCIA: ViviendaTEMPERATURA Y pH:DESCRIPCIN DE LA MUESTRA: Color: incoloro Olor: inodoro Turbidez: poco Sedimento: escasoMaterial de laboratorioM. de vidrio Probeta Frascos estriles 2 tubos para caldo diferencial para clostridios sulfito reductores de concentracin doble 4 tubos para caldo diferencial para clostridios sulfito reductores de concentracin simple Pipetas de 1 y 10 mL Tubos para leche tornasoladaMedios y reactivos Agar Clostridium Leche tornasolada Caldo diferencial para clostridios sulfito reductores de concentracin doble Caldos diferenciales para clostridios sulfito reductores de concentracin simple.

PROCEDIMIENTO

Preparacin de la muestraConsiste en agitar la muestra de arriba hacia bajo de 20 a 25 veces, en ningn momento se debe dejar reposar la muestra.

Prueba presuntiva

Aplicar la Tcnica los tubos mltiples.

1 cc2 cc3 cc

MUESTRA 10 mL10 mL1 mL1 mL0.1 mL0.1 mL

TUBO10 mL10 mL1 mL1 mL0.1 mL0.1 mL

0.1 mL1 mL10 mL

Incubar en anaerobiosis 35C / 48-72 horasRealizar la lectura: observar precipitados negros que indicarn la presencia de clostridios sulfito reductores.Anotar el cdigo del NMP.

Prueba Confirmativa

Confirmar la prueba inoculando 1 ml. de los tubos con caldo diferencial positivos en tubos con leche tornasolada (tomar el inoculo del fondo del tubo con sedimento negro).

Inocular en anaerobiosis a 35-37 C/ 24-48 horas.

Realizar la lectura observando alguno de los siguientes resultados: Se confirma el cdigo del NMP.

Formacin de coagulo Acidificacin del medio (color amarillo). Fermentacin turbulenta de la leche; formacin de grandes cantidades de gas con rompimiento del coagulo.

Se confirma el cdigo del NMP.

Prueba presuntiva

Serie N 1Serie N 2Serie N 3

Muestra10 ml.1ml.0.1 ml

Cdigo220

Tubos(-)Precipitado negro (-)Turbidez(-)Tubo(+)Precipitado negro (+)Turbidez(+)Tubos(+)Precipitado negro (+)Turbidez(+)

Prueba confirmativa

Serie N 1Serie N 2Serie N 3

Prueba Presuntiva220

Prueba Confirmativa20-

Se hizo tincin GRAM

RESULTADOS DE LECTURA

En la primera lectura (presuntiva) se sospecha la presencia de Clostridiun sulfitos reductores por la presencia del precipitado negro. La lectura sali 2:2:0. En la segunda lectura (confirmativa) se confirmo la presencia de Clostridiun sulfito reductores por la Formacin de coagulo, Acidificacin del medio y fermentacin de la leche (fermentacin turbulenta) en el medio de leche tornasolada. La lectura sali 2:0:-. El recuento resulto de 23 NMP/ml de clostridios sulfitos reductores. Realizamos la tincin de GRAM y efectivamente observamos bacilos gran positivos.

CONCLUSIN En esta prueba los resultados fueron 23 NMP/ml de clostridios sulfitos reductores, podramos tomar que para 100ml de la muestra el numero de clostridios sulfitos reductores es mayor al lmite establecido por la Norma Tcnica Peruana (ausencia de clostridios) Se logr identificar el gnero Clostridium mediante la prueba de tincin GRAM. Se encontraron Clostrdium reductores de sulfitos por lo que concluimos que el agua no se encuentra apta para el consumo humano.