Pemeriksaan MPN ( Most Probable Numnber )

8/19/2019 Pemeriksaan MPN ( Most Probable Numnber )

http://slidepdf.com/reader/full/pemeriksaan-mpn-most-probable-numnber- 1/10

Sejarah Perkembangan MPN

Metode MPN muncul sekitar awal abad 20 sehingga dikenal sudah sangat lama di dalam ilmu

mikrobiologi. Estimasi akurat dari tabel MPN di publikasikan oleh Mc Crady pada tahun

!" kemudian dasar statistik dari metode MPN dikemukakan oleh #al$orson dan %iegler

&!''() Eisenhart dan *ilson &!+'( dan Cochran &!"0(. Pada tahun !", *oodward

menyarankan tentang pengabaian hasil positi- & banyak tabung positi- pada pengenceran

tinggi dan sebaliknya ( yang dapat meningkatkan kesalahan laboratorium dalam tabel MPN.

emudian /e Mann pada tahun !' mempublikasikan tentang metode perhitungan tingkat

kepercayaan &Con$idence inter$al( dalam tabel MPN. Sampai sekarang metode MPN telah

menjadi metode standar untuk menghitung jenis Coliform, Fecal Coliform, E.coli.

1sumsi yang diterapkan dalam metode MPN adalah

• akteri terdistribusi sempurna dalam homogen sampel

• Sel bakteri terpisah3pisah secara indi$idual) tidak dalam bentuk rantai atau kumpulan

&bakteri Coli-orm termasuk E.coli terpisah sempurna tiap selnya tidak membentuk

rantai(

• Media yang dipilih telah sesuai dengan pertumbuhan bakteri target dalam suhu dan

waktu inkubasi tertentu sehingga minimal satu sel hidup dapat menghasilkan tabung

positi- selama masa inkubasi pada media tersebut.

• 4umlah sel yang didapatkan menggambarkan bakteri yang hidup &$iable( saja. Sel

yang terluka dan tidak mampu mengasilkan tabung positi- tidak akan terdeteksi.

Prinsip Metode MPN

/alam metode MPN digunakan medium cair dalam tabung reaksi) dalam hal ini

perhitungan berdasarkan jumlah tabung positi-. Pengamatan tabung yang positi- dapat dilihat

dengan mengamati timbulnya kekeruhan) atau terbentuknya gas. 5mumnya untuk

pengenceran digunakan tiga atau lima seri tabung. Makin banyak tabung yang digunakan

dalam perhitungan nilai MPN) akan menunjukkan tingkat ketelitian yang lebih tinggi.

Metode MPN biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba didalam contoh

berbentuk cair) meskipun dapat pula digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan terlebih

dahulu disuspensikan dengan perbandingan 60 dari contoh tersebut dalam air steril.elompok mikroba yang dapat dihitung dengan metode MPN juga ber$ariasi bergantung



medium yang digunakan untuk pertumbuhannya. &Mikrobiologi dalam Pengelolahan dan

eamanan Pangan)!!! (

ALAT dan BAHAN

ALAT :

Pipet ukur steril ml dan 0 ml

7ampu spritus

4arum ose

apas

8nkubator

Spidol 9 label

:ak tabung reaksi

1utocla$e

ertas copy

;abung /urham

BAHAN :

7actosa roth Single Strength

7actosa roth ;riple Strength

rilliant <reen 7actosa roth

EC roth

Eosin Methylen lue 1gar

Sampel 1ir

Cara erja

;ahap Persiapan

Sampel 1ir

Sampel air yang akan dianalisis dapat berupa air yang tercemar limbah) air kolam) air sumur)

air sungai) dan lain lain. Persiapan sampel air dan penyimpanan dalam suhu +0C tidak lebih





'. ' tabung berisi media lactosa single strength 0ml masukkan pada masing @ masing

tabung 0) ml sampel air

+. Masukkan kedalam inkubator ',0C selama 2+ jam

PEMBACAAN HASIL :&9( 6 eruh dan ada gelembung pada tabung durham

&3( 6 4ernih

0 6 eruh saja

Con$irmed ;est & 5ji epastian untuk Coli-orm (

. Pada masing @ masing tabung yang &9( pada lactosa broth) pindahkan ke media

<7 & rilian green lactosa broth ( kira3kira 2 mata ose.

2. tabung diinkubasi ',0C selama 2> 2+ jam

'. 7ihat reaksi yang terjadi

+. Catat hasilnya dari tabung yang &9(

PEMBACAAN HASIL :

&9( 6 eruh dan ada gelembung pada tabung durham

&3( 6 4ernih

6 eruh saja

". /ari jumlah tabung yang &9( lihat dan tentukan jumlah Coli-orm pada tabel MPN)

dapat juga dilakukan dengan menggunakan -omula ;homas.

5ji epastian Becal Coli-orm dan E. Coli

. Siapkan tabung masing @ masing berisi EC broth atau <7 dengan tabung durham

didalamnya

2. Pada masing @ masing tabung yang &9( pada lactosa broth) pindahkan ke media EC

broth atau <7) masing masing tabung 2 mata ose.

'. 8nkubasi pada suhu ++)"0C selama 2+ jam

PEMBACAAN HASIL :&9( 6 eruh dan ada gelembung pada tabung durham

&3( 6 4ernih

0 6 eruh saja

+. ;entukan jumlah -ecal coli-orm dengan menghitung jumalah tabung positi- kemudian

cocokan dengan tabel MPN.

". 5ntuk mengetahui apakah pada tabung EC broth atau <7 adalah -ecal coli-orm

atau E. Coli maka dilanjutkan uji pelengkap E.coli

Compelete Test (Tes Lengkap E.coli )



;est lengkap bertujuan untuk mencari adanya E.Coli dalam sampel yang diperiksa.

Mengambil ose cairan dari EC broth atau <7 yang positi- dan tanamkan pada

EM agar secara igag

Mengeramkan dalam incubator selama > 2+ jam

1pabila tumbuh koloni hijau metalik dengan bagian tengah berwarna hitam pada

EM agar) kemudian koloni ini ditanam pada ;S8 agar) S8M Medium dan citrate agar

untuk memstikan adanya E. Coli.

Mengeramkan dalam incubator > 2+ jam

E. coli positi- apabila hasil reaksi biokimia sebagai berikut 6

;S81 D kk) g&9() #2S&3(

S8M D S&3() 8&9() M&3(Citrat D &3(

Mr D &9(

Fp D &3(

Contoh Pembacaan #asil

:agam 8

• ;abung ">0 ml) <7 &9( gas D '

• ;abung >ml) <7 &9( gas D

• ;abung >0)ml) <7 &9( gas D

8ndeks MPN D =

:agam 88

• ;abung ">0ml) <7 &9( gas D 2

• ;abung ">ml) <7 &9( gas D • ;abung ">0)ml) <7 &9( gas D

8ndeks MPN D !

:agam 888

• ;abung '>0ml) <7 &9( gas D '

• ;abung '>ml) <7 &9( gas D 2

• ;abung '>0)ml) <7 &9( gas D



Perhitungan nilai MPN dapat dilakukan dengan -ormula ;homas

!m!s :

"ete#angan :

1 D 4umlah tabung <7 yang &9( pada tabung yang berisi sampel 0 ml

D 4umlah tabung <7 yang &9( pada tabung yang berisi sampel ml

C D 4umlah tabung <7 yang &9( pada tabung yang berisi sampel 0) ml

S D 4umlah ml semua sampel yang ditanam

N D 4umlah semua sampel yang negati-

Contoh untuk :agam 888

&'929( G & √ 33,3×1,2¿¿ 3 > 00 D !+)!

I. LAMPIAN $AMBA

%. Ca#a "e#&a agam III

MPN = (A+B+C) x (√(s x n) )-1 x 100



'. Conto asil

. Ta*el MPN

+. Cara erja



". Media 7actose roth

=. Media <7



,. ;es 7engkap E. coli &Complete ;est(

1D8ndol&9(?DMr&9(?CDFp&3(?/DSitrat &3(?;S81D7/D



+A,TA P-STA"A

1minah)Siti) dkk. 200+. Buku Penuntun Praktikum Bakteriologi. 7ampung6 Poltekkes

;anjungkarang 4urusan 1nalis esehatan.• Soemarno. 2000. Isolasi Dan Identifikasi Bacteri Klinik . Aogyakarta 6 1kademi 1nalis

esehatan Aogyakarta /epartemen esehatan :epublik 8ndonesia.(

• Supardi)8mam. !!!. Mikrobiologi dalam Pengolahan dan Keamanan Pangan.

andung.Aayasan 1dikarya 8kapi

• No$el)Sinta Saskia. Praktikum Mikrobiologi Dasar .;8M

• http6mikrobiologipraktik.commost3probable3number3mpn3angka3paling3mungkin3

apm

Documents

Pemeriksaan MPN ( Most Probable Numnber )