Stopper A

B A

Window Chamber A

Peltier temperature control, ±0.001 °C

Insulated copper block

O2k Stainless steel housing

O2 Sensor POS A

Sensor connector POS B

Ion sensitive electrode plug B

Stirrer control light B

Barometric pressure transducer

O2 Sensor POS B

Stopper

Glass chamber

PVDF stirrer

POS

ISS

Syringe A

Titration-Injection microPump TIP2k

Needle A

Mesure du p50 « affinité » pour l’oxygène

Pompe multi-injection

Oxygraph-2k modular system for high-resolution respirometry

O2k-MultiSensor Modules

O2k-Core

Fluoro-metry NO TPP+

+ Ca2+ TIP2k O2k-

Modules + pH

ISS Titration Set

PBI-Shredder Microbalance Auxiliary

HRR-Tools + Dissection Kit

O2k-Fluorescence LED2-Module

Sensor-­‐Guide  Sector  

LED  Photodiode  

Filter-­‐Cap  

Filter-­‐Cap    Guide  

Filters  AmR    

Fluorescence-Sensor

O2k-Window Frame

(A) (B)

O2k-Front Fixation Sensor-

Guide

Amperometric cable

Power switch Control

light

Current control

Fluorescence Sensor Plug

(A) (B)

Fluorescence Sensor Plug

Amperometric Plug

(B)

O2k-Fluorescence-Control Unit

O2k-Chamber Block

Power switch

O2k-Front

Fixation

Fluorescence Sensor

Plug

(A) (B)

Sensor-Guide

Cable Fluorescence Sensor

Control light

Fluorescence Sensor Plug

Connect Fluorescence Sensor

O2k-Chamber Block

Fluorescence Sensor

PEEK-Stopper

Application Sensor Filter set Measurement

Amplex® UltraRed

Fluorescence-Sensor Green

AmR H2O2 production

Safranin Fluorescence-Sensor Blue

Saf mt-membrane potential

Magnesium green

Fluorescence-Sensor Blue

MgG / CaG Free Mg2+: ATP production

Calcium green

Fluorescence-Sensor Blue

MgG / CaG Free Ca2+ in solution

O2k-Catalogue: http://www.bioblast.at/index.php/O2k-Fluorescence_LED2-Module#O2k-Manual:_O2k-Fluorescence_LED2-Module

O2k-Fluorescence LED2-Module

Excitation fibers

Emission fibers

8 mm

safas

stirrer

fiber

Optic fiber

Range [h:min]: 0:300:400:350:300:250:200:150:10

NO R

aw S

igna

l (X)

[V]

3

2.7

2.4

2.1

1.8

1.5

NO S

lope

(X) [

pmol

/(s*m

l)]

1.2

0.96

0.72

0.48

0.24

0

mito20 PMG D0.25 D2 S Rot Omy F F F Mna Ama Myx

Range [h:min]: 0:300:400:350:300:250:200:150:10

O2

Con

cent

ratio

n (X

) [nm

ol/m

l]

200

160

120

80

40

0

O2

Flux

per

V (X

) [pm

ol/(s

*ml)]

200

160

120

80

40

0

mito20 PMG D0.25 D2 S Rot Omy F F F Mna Ama Myx

H 2O2  fl

uorescen

ce  

H 2O2  p

rodu

c/on

 

O2  con

centra/o

n  [µM]  

Respira

/on  [pmol.s-­‐1.m

l-­‐1]  

O2k-­‐Fluorometry:    RespiraAon  and  H2O2  producAon  

Mouse  brain  mitochondria  

OXPHOS,  P  LEAK,  L   ETS,  E  

ROX  Complex  I:    CI   CI+II   Complex  II:    CII  ROX  

LEAK  Pyruvate+M

alate  

+Glutamate  

Mito

chon

dria  

ADP  0.25  

ADP  2.0  

Succinate   Ro

teno

ne  

Malon

ate  

Myothiazol  

An/m

ycin  A  

Oligom

ycin  

FCCP

 

FCCP

 

FCCP

 

Malon

ate  

Roteno

ne  

Oligom

ycin  

ADP  0.25  

P  L  

An/m

ycin  A  

P  

Amplex  Red  

ROX  Complex  I:    CI   CI+II   Complex  II:    CII  ROX  

P   E  L   ROX  P  

1- Les cellules flottent et sont agitées: modèle de shear-stress ? 2- Travail a low pO2 intéressant 3- titration multiple et séquentielle 4- Oxygen kinetics (Jo2 = fpO2). Valeurs de p50 5- Volume élevé (2 ml) 6- Pas de consommable et prix abordable 7- Imposer des états-stationnaires via O2 8- système de fluorescence 9- Faible débit (manips longues)

3

1- Les cellules sont attachées. Mais petites niches (3 ul) avec hypoxie locale ? 2- Travail a low pO2 possible si la machine est dans un incubateur à hypoxie 3- titration multiple et séquentielle impossible par puit. Injection unique mais multipuit. 4- Oxygen kinetics (Jo2 = fpO2). Valeurs de p50 Possible mais peu précis car pas de prise en compte des fuites d’O2 f(PO2) 5- Volume faible et ahut débit (96 puits / 20 000 c) 6- Consommable et prix de départ élevé 7- Imposer des états-stationnaires via O2 8- système de fluorescence (Trophos ?) 9- Haut débit (manips longues)