PASTOREX™ STAPH-PLUS5 x 50 563531 x 50 56356

Test d'agglutination au latex pour l'identification de Staphylococcus aureus

TABLE DES MATIÈRES

1- INTERET CLINIQUE.......................................................................13

2- RESUME ET EXPLICATION DU TEST...........................................13

3- PRINCIPE DU TEST.......................................................................13

4- PRESENTATION.............................................................................14

5- CONSERVATION ............................................................................15

6- MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI.......................................15

7- PRECAUTIONS D'UTILISATION....................................................15

8- MODE OPERATOIRE .....................................................................16

9- INTERPRETATION DES RESULTATS ............................................16

10- CONTROLE QUALITE DU TEST....................................................17

11- CONTROLE QUALITE DU FABRICANT ........................................17

12- PERFORMANCES..........................................................................17

13- LIMITES D'UTILISATION ...............................................................19

14- REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ...........................................19

12

1- INTÉRÊT CLINIQUEPASTOREX™ STAPH-PLUS est un test rapide d'agglutination sur lame pourla détection simultanée du facteur d'affinité pour le fibrinogène ("clumpingfactor"), de la protéine A et des polysaccharides capsulaires deStaphylococcus aureus.

2- RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TESTStaphylococcus aureus est l'un des germes pathogènes les plusfréquemment isolés dans les prélèvements cliniques. La distinction rapideentre cette espèce et d'autres espèces de staphylocoques, moins virulentes,est d'une grande importance pour une prise en charge correcte des patients.Le test de détection de la production de coagulase libre permetl'identification de Staphylococcus aureus (11,12) .Cependant, ce testdemande de 4 à 24 heures et le plasma peut présenter, d'un lot à l'autre, desvariations altérant la réaction (16).Des réactifs d'agglutination ont été développés, permettant une détectionplus rapide et plus fiable de Staphylococcus aureus (3). Ces testsd'agglutination sont constitués de latex sensibilisé par du fibrinogène et desIgG afin de détecter le facteur d'affinité pour le fibrinogène et la protéine A,qui sont des protéines caractéristiques de S. aureus. Toutefois, il a étéobservé que certaines souches de Staphylococcus aureus (principalementcelles résistantes à la méticilline) ne sont pas agglutinées par ces tests (15) .Une étude de ces souches a montré qu'elles possédaient toutes despolysaccharides capsulaires (4). Il est donc vraisemblable que la capsulepolysaccharidique qui recouvre toute la bactérie dans certaines conditions(isolement frais, conditions de culture, clone bactérien) masque la protéineA et le facteur d'affinité pour le fibrinogène et empêche ainsi l'agglutinationdes particules de latex sensibilisées uniquement par le fibrinogène et les IgG.

3- PRINCIPE DU TESTLe réactif PASTOREX™ STAPH-PLUS permet la recherche simultanée :1- du facteur d'affinité pour le fibrinogène, également appelé coagulase liée

ou "clumping factor" ; 2- de la protéine A qui possède une affinité pour le "fragment cristallisable"

(Fc) des immunoglobulines gamma (IgG) ; 3- des polysaccharides capsulaires de Staphylococcus aureus.

13

Ce réactif est constitué de particules de latex sensibilisées d'une part avecdu fibrinogène et des IgG, et d'autre part avec des anticorps monoclonauxspécifiques des polysaccharides capsulaires de Staphylococcus aureus (1,5, 6, 8, 10) (brevet Institut Pasteur). L'association, dans un même réactif, defibrinogène, d'IgG et d'anticorps anti-polysaccharides capsulaires permet dereconnaître aussi bien les souches de Staphylococcus aureus très capsuléesque les souches peu capsulées. En effet, pour les souches très capsulés, cesont les anticorps anti-polysaccharides capsulaires qui agglutinent lesbactéries. Pour les souches sensibles ayant perdu leur capsulepolysaccharidique, les bactéries sont agglutinées par le fibrinogène et lesIgG. Les isolats de Staphylococcus aureus sont mélangés avec le réactif au latexsur une carte d'agglutination. Après avoir bien mélangé, la carte est examinéeà l'oeil nu : la formation d'agglutinats indique la présence de Staphylococcusaureus.

4- PRESENTATION

1.PASTOREXTM STAPH-PLUS, coffret de 50 tests, code 56356,contenant:• Latex test: 1 flacon compte-gouttes de 1 ml de latex rouge sensibilisé

par une solution d'albumine bovine, du fibrinogène, des IgG et desanticorps monoclonaux antipolysaccharides capsulaires deStaphylococcus aureus.Conservateur : <1.5 % ProClin™ 300

• Negative control: 1 flacon compte-gouttes de 1 ml de réactif témoinnégatif de latex rouge sensibilisé par une solution d'albumine bovine.Conservateur : <1.5 % ProClin™ 300

• 1 sachet 16 cartes d'agglutination jetables• 1 sachet de 150 bâtonnets

2. PASTOREXTM STAPH-PLUS, coffret de 5 x 50 tests, code 56353,contenant :

• Latex test: 5 flacons compte-gouttes de réactif test (1 ml)• Negative control: 5 flacons compte-gouttes de réactif témoin négatif (1

ml)• 4 sachets de 16 cartes d’agglutination jetables• 3 sachets de 100 bâtonnets

14

5- CONSERVATIONAprès ouverture, les réactifs conservés à +2-8°C et en l'absence decontamination sont stables jusqu'à la date de péremption indiquée surl'étiquette.Conserver les réactifs latex verticalement.NE JAMAIS CONGELER LES RÉACTIFS LATEX.

6- MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNI• Öses pour le prélèvement des colonies bactériennes.• Bac désinfectant ou autoclavable pour élimination du matériel usagé.

7- PRÉCAUTIONS D'UTILISATION

Le test PASTOREX™ STAPH-PLUS est uniquement destiné à laconfirmation de cultures pures et fraîches et ne doit pas être utilisédirectement sur des prélèvements cliniques.

La qualité des résultats dépend du strict respect des bonnes pratiques delaboratoire.• Tous les réactifs doivent être utilisés à une température comprise entre 18

et 30°C.• Ne pas passer les doigts sur les surfaces réactionnelles d'agglutination.• Agiter les flacons de latex avant utilisation.• Essuyer l'embout compte-gouttes du réactif afin d'obtenir des gouttes

bien calibrées.• Tenir le flacon de latex en position verticale lors du dépôt de la goutte.• Utiliser les bâtonnets en plastique fournis dans le kit pour mélanger le latex

et la suspension bactérienne. Ne pas utiliser de bâtonnets en bois.• Changer de bâtonnet mélangeur pour chaque réaction. • Après usage, éliminer les cartes d'agglutination et les bâtonnets dans une

poubelle autoclavable ou un bac désinfectant.

CONSIGNES D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ

Observer à tout moment les techniques et précautions en vigueur en matièrede protection contre les dangers microbiologiques.

Attention : Ces réactifs contiennent du ProClin™ 300 < 1.5%. Les risqueset consignes de sécurité sont détaillés dans le tableau à la fin de cettenotice

15

8- MODE OPÉRATOIRE

1. PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONSLes échantillons utilisés avec ce test doivent être purs et frais. Les milieuxd'isolement recommandés (ou équivalent) sont les suivants :

Milieux gélosés • Gélose trypto-caséine soja• Gélose Columbia + sang de mouton• Gélose Columbia• Gélose au sang• Milieu de Chapmann• Milieu de Baird-Parker avec additifs• MRSASelect™Effectuer une coloration de Gram et une recherche de la catalase sur lesbactéries cultivées. Les colonies testées avec le réactif PASTOREX™STAPH-PLUS doivent être des cocci Gram-positifs catalase +.

2. RÉACTION D'AGGLUTINATION• Bien homogénéiser le réactif latex. Mélanger à l'aide d'un Vortex si

nécessaire.• Déposer une goutte de réactif latex test dans un des cercles de la carte

d'agglutination.• Déposer une goutte de réactif latex témoin négatif sur un autre cercle.• Prélever 1 à 3 colonies de coccis Gram-positifs catalase + avec une öse

ou un bâtonnet en plastique, puis les émulsionner avec une goutte delatex pendant 10 secondes.

• Procéder de la même façon pour le réactif latex témoin négatif.• Homogénéiser en effectuant un mouvement rotatif de la carte. La lecture

doit se faire pendant les 30 secondes qui suivent le début desmouvements rotatifs de la carte.

• Effectuer la lecture, puis jeter la carte dans un récipient désinfectant.Ne pas réutiliser.

9- INTERPRÉTATION DES RÉSULTATSRéaction positiveUne réaction est positive lorsqu'il y a formation d'agrégats uniquement avecle latex test, visibles à l'oeil nu sous un éclairage normal, en moins de 30secondes. Les agrégats de particules de latex peuvent être de taille plus oumoins importante, avec un fond rose plus ou moins laiteux. L'apparition d'uneréaction lente et faible peut traduire une réaction non spécifique.

16

Réaction négativeDans le cas d'une réaction négative, la suspension ne présentera pasd'agrégats et gardera son aspect laiteux.

Résultats non interprétablesL'indication d'un résultat non interprétable est donnée dans le cas d'uneagglutination du réactif contrôle négatif. Dans ce cas, rechercher la présencede la coagulase libre et de la DNAse thermostable.

10-CONTROLE QUALITÉ DU TESTValider le réactif "latex" avant chaque utilisation en vérifiant l'absenced'agglutination lors du dépôt du latex sur la carte. Le latex doit êtrepériodiquement testé avec des souches déjà identifiées de Staphylococcusaureus et de Staphylococcus epidermidis. Le réactif latex test doit donnerune agglutination avec Staphylococcus aureus et pas d'agglutination avecStaphylococcus epidermidis.

11-CONTROLE QUALITÉ DU FABRICANTTous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sontplacés sous un système d'assurance qualité de la réception des matièrespremières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot deproduit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'ilest conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à laproduction et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant.

12-PERFORMANCESLes performances du test PASTOREX™ STAPH-PLUS ont été évaluées dansplusieurs laboratoires (2,13,14). Au total, 440 souches de Staphylococcusaureus et 138 autres souches de staphylocoques ont été testées avec cecoffret. Les cultures ont été identifiées par coloration de Gram, recherche decatalase et de coagulase. Les échantillons discordants ont été vérifiés aumoyen d'une analyse biochimique et d'un test rapide du commerce. Lessouches de S. aureus ont par ailleurs fait l'objet d'un test de sensibilité à laméticilline.

17

Les résultats des essais de sensibilité sur les souches de S. aureusrésistantes à la méticilline (SARM) et sensibles à la méticilline (SASM), ainsique l'ensemble des résultats pour Staphylococcus aureus, sont reportésdans le Tableau 1. Les résultats des essais de spécificité sur des souchesde staphylocoques autres que S. aureus sont reportés dans le Tableau 2.

Tableau 1

Performances du test PASTOREX™ STAPH-PLUS avec des souchesSARM et SASM

* Un résultat non interprétable a été exclu

S. aureus résistant à la méticillineComme le montre le Tableau 1, sur 217 isolats de SARM bien définis, 217ont été correctement identifiés par le test PASTOREX™ STAPH-PLUS. La sensibilité du test PASTOREX™ STAPH-PLUS pour les SARM a étéestimée à 100%, en excluant le résultat non interprétable qui représente 0,4% des souches analysées.

S. aureus sensible à la méticilline

Toutes les souches SASM cultivées (222 au total) ont donné un résultat positifavec le test PASTOREX™ STAPH-PLUS, comme le montre le Tableau 1.La sensibilité du test était de 100 % avec cette population bactérienne.

Autres staphylocoques

Tableau 2

Performances du test PASTOREX™ STAPH-PLUS avec d'autressouches de staphylocoques

18

Total Positives Négatives Spécificité

SARM 217* 217 0 100%

SASM 222 222 0 100%

Total S. aureus 439* 439 0 100%

Total Positives Négatives Spécificité

Autres souchesde staphylocoques

138 1 137 99,3%

138 isolats de staphylocoques autres que S. aureus, dont S. epidermidis,S. haemolyticus, S. hominis, S. saprophyticus, S. schleiferi, S. lugdunensis etd'autres espèces, ont également été analysés avec le test PASTOREX™STAPH-PLUS. Un résultat négatif a été obtenu pour 137 des 138 isolats,comme le montre le Tableau 2.La souche discordante a été identifiée comme étant S. lugdunensis et aégalement donné un résultat positif avec le test rapide alternatif.

13-LIMITES D'UTILISATIONStaphylococcus lugdunensis et Staphylococcus schleiferi qui possédent unfacteur d'affinité pour le fibrinogène (7,9) peuvent donc donner une réactionpositive avec le test de détection de ce facteur, en fonction des souches etdu milieu d'isolement. Certaines souches de staphylocoques, notammentStaphylococcus saprophyticus, peuvent provoquer une agglutination nonspécifique des particules de latex; il est recommandé d'utiliser le latex témoinfourni dans le coffret avec chaque souche testée. Staphylococcusintermedius et Staphylococcus hyicus, retrouvés en pathologie animale maistrès rarement isolés chez l'homme, peuvent donner une réaction positiveavec les tests classiques de coagulase et donc, théoriquement, réagir aussiavec les tests de détection du facteur d'affinité pour le fibrinogène.Comme pour tout technique immunologique, on ne doit pas écarter lapossibilités de réactions croisées. Certains streptocoques possèdent uneprotéine ayant une affinité pour le fragment Fc des immunoglobulines etpeuvent donc réagir avec le latex. Des réactions non spécifiques auxtechniques latex ont également été signalées avec plusieurs espèces, dontEscherichia coli et Candida albicans (17). Il est recommandé d'effectuer unecoloration de Gram et une recherche de catalase sur les colonies à tester.Des réactions faussement négatives peuvent s'observer si la souche deStaphylococcus aureus isolée ne produit pas de facteur d'affinité pour lefibrinogène ("clumping factor"), de protéine A ou de polysaccharidescapsulaires correspondant aux anticorps monoclonaux préparés.Des résultats faussement négatifs peuvent apparaître avec un inoculuminsuffisant.

14-REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUESVoir la version anglaise.

19

12-BIBLIOGRAPHY1. Boutonnier A., Nato F., Bouvet A., Lebrun L., Audurier A., Mazie J.C.,

and Fournier J.M. Direct testing of blood cultures for detection of theserotype 5 and 8 capsular polysaccharides of Staphylococcus aureus. J.Clin. Microbiol. 1989. 27: 989-993.

2. Davies S. Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus: theevaluation of rapid agglutination methods, Br. J. Biomed. Sci., 1997,54:13-15.

3. Esserts I., and Radebold K. Rapid and reliable identification ofStaphylococcus aureus by a latex agglutination test. J. Clin. Microbiol.1980. 641-643.

4. Fournier J.M., Boutonnier A., and Bouvet A. Staphylococcus aureusstrains which are not identified by rapid agglutination methods are ofcapsular serotype 5. J. Clin. Microbiol. 1989. 27:1372-1374.

5. Fournier J.M., Bouvet A., Boutonnier A., Audurier A., Goldstein F.,Pierre J., Bure A., Lebrun L., and Hochkeppel H.K. Predominance ofcapsular polysaccharide type 5 among oxacillin-resistant Staphylococcusaureus. J. Clin. Microbiol. 1987. 25:1932-1934.

6. Fournier J.M., Hannon K., Moreau M., Karakawa W.W., and Vann W.F.Isolation of type 5 capsular polysaccharide from Staphylococcus aureus.Ann. Inst. Pasteur/Microbiol. 1987. 138:561-567.

7. Freney J., Brun Y., Bes M., Meugnier H., Grimont F., Grimont P.A.D.,Nervi C., and Fleurette J. Staphylococcus lugdunensis sp. No. andStaphylococcus schleifer sp. Nov., two species form human clinicalspecimen. J. Clin. Microbiol. 1989. 38:2110-2111.

8. Hochkeppel H.K., Braun D.G., Vischer W., Imm A., Sutter S., StaeubliU., Guggenheim R., Kaplan E.L., Boutonnier A., and Fournier J.M.Serotyping and electron microscopy studies of Staphylococcus aureusclinical isolates with monoclonal antibodies to capsular polysaccharidetypes 5 and 8. J. Clin. Microbiol. 1987. 25:526-530.

9. Jean Pierre H., Darbas H., Jean-Roussenq A., and Boyer G.Pathogenicity in T cases of Staphylococcus schleiferi, a recently describedspecies.

10.Karakawa W.W., Fournier J.M., Vann W.F., Arbeit R., Schneerson, R.S.and Robbins. J.B. Method for the serological typing of the capsularpolysaccharides of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1985,22:445-447.

11.Kloos W.E. and Lambe D.W. (1991). Staphylococcus Manual of ClinicalMicrobiology, 5th Ed. Edited by Balows A., Hausler W.J., Herrmann K.L.,Isenberg H.D., and Shadomy J.J. American Society for Microbiology,Washington, D.C., Pages 222-237.

9

12.Kloos W.E., and Scleifer K.H. Staphylococcus Bergeyís manual ofsystematic bacteriology. 1986, vol. 2, 1013-1035.

13.Luijendijk AD., Alex van Belkum, Verbrugh H., and Kluytmans J.Comparison of Five Tests for Identification of Staphylococcus aureus fromClinical Samples. J. Clin. Microbiol., 1996, 34:2267-2269.

14.Neher C., Allerberger F., Prodinger W. Dierich M.P., Evaluation ofcommercially available agglutination tests for methicillin-resistant. 8thECCMID Congress, Lausanne, 1997.

15.Ruane P.J., Morgan M.A., Citron D.M., and Mulligan M.E. Failure ofrapid agglutination methods to detect oxacillin-resistant Staphylococcusaureus. J. Clin. Microbiol. 1986. 24:490-492.

16.Selepack S.T., and Witebsky F.G. Inoculum size and lot-to-lot variationas significant variables in the tube coagulase test for Staphylococcusaureus. J. Clin. Microbiol., 1985, 22:835-837.

17.Kronvall G. A Surface Component in Group A, C, and G Streptococci withNon-Immune Reactivity for Immunoglobulin G. J. Immunology., 1973,vol.11, 1401-1406.

10

51

52

Distributed in the USA by Bio-Rad Laboratories Diagnostics Group6565 185th Avenue N.E.Redmond, WA 98052-5039For Customer Orders Call : 1-800-2-BIORADFor Technical Service Call : 1-800-2- BIORAD(1-800 224-6723)

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 05/2011 Fax.: +33 (0) 1 47 41 91 33 code: 881072 www.bio-rad.com

Prin

ted

in F

ranc

e