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•Monitorización del desarrollo de comunidades microbianas en as Tumbas de la Necrópolis Romana de Carmona. Ekaterina Akatova •Monitorización del desarrollo de comunidades microbianas en as Tumbas de la Necrópolis Romana de Carmona. Ekaterina Akatova CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS Monitorización del desarrollo de comunidades microbianas en las Tumbas de la Necrópolis Romana de Carmona Ekaterina Akatova Instituto de Recursos Naturales y Agrobiologia Consejo Superior de Investigaciones Científicas Sevilla INSTITUTO DE RECURSOS NATURALES Y AGROBIOLOGIA, SEVILLA Y RED TEMATICA DEL CSIC DE PATRIMONIO HISTORICO Y CULTURAL ¡Preservar nuestro patrimonio cultural es un problema de importancia global!

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•Monitorización del desarrollo de comunidades microbianas en as Tumbas

de la Necrópolis Romana de Carmona. Ekaterina Akatova

Seminario de Guadalupe, diciembre 2004Seminario de Guadalupe, diciembre 2004Las Humanidades y el Patrimonio Cultural: Los Monumentos y la MeLas Humanidades y el Patrimonio Cultural: Los Monumentos y la Memoriamoria

CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS

Monitorización del desarrollo de comunidades microbianas en las

Tumbas de la Necrópolis Romana de Carmona

Ekaterina AkatovaInstituto de Recursos Naturales y Agrobiologia

Consejo Superior de Investigaciones CientíficasSevilla

TTéécnicas avanzadas de diagncnicas avanzadas de diagnóóstico. Cesstico. Cesááreo reo SSááiziz

INSTITUTO DE RECURSOS NATURALES Y AGROBIOLOGIA, SEVILLA Y RED TEMATICA DEL CSIC DE PATRIMONIO HISTORICO Y CULTURAL

¡Preservar nuestro patrimonio cultural es

un problema de importancia global!

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de la Necrópolis Romana de Carmona. Ekaterina Akatova

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Biodeterioración

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85

6 9

2

10

13

41 – Mausoleo circular2 – Tumba de Elefante3 – Tumba de los 4 departamentos3 –Tumba de las Guirnaldas5 – Tumba de Servilia6 – Mausoleo cuadrangular7 – Tumba de las 4 columnas8 – Mausoleo circular9 – Tumba de Postumio10 – Centro de Recepcion de visitantes y sede administrativa

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Tumba de Postumio

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Tumba de Servilia

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Eflorescencia

pinturas murales

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

El esquema del experimento

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

El esquema del experimento

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La muestra U21 de laTumba de Servilia

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La muestra Z26 de laTumba de Postumio

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Tumba de Servilia

BS 2003

U21 2005*

YYY* 2006

Tumba de Postumio

Z26 2005

Z26* 2006*

*- el año de la limpieza

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

El esquema del experimento

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

El esquema del experimento

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

El esquema del experimento

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

El esquema del experimento

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muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

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El esquema del experimento

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

El esquema del experimento

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La selección de las

muestras

DGGE

La extracción de ADN

La amplificacion16SrADN(616F,907R - para bacterias y

CYA107F, CYA781Ra:Rb–para cianobacterias)

La clonación

La secuenciación los clones

La Selecciónlos clones por DGGE

El esquema del experimento

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DGGE perfiles de las comunidades debacterias cianobacterias

Tumba de PostumioTumba de Servilia2003BS

2006*Z26*

2005Z26

2005*U21

2006YYY*

Tumba de PostumioTumba de Servilia2003BS

2006*Z26*

2005Z26

2005*U21

2006YYY*

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Z26

Z26*

U21

BS

YYY*

UPGMA dendrogramas

Bacteriascianobacterias

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Tumba de PostumioTumba de Servilia2003BS

2006*Z26*

2005Z26

2005*U21

2006YYY*

91% Trichodesmium sp.

94% Chroococcidiopsis sp. 94% Cyanidium sp. (alga roja)

92% Cyanobacterium sp.

90% Cyanothece sp.

92% Synechocystis sp.

Los miembros de la comunidad de cianobacterias

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Los miembros de comunidad bacteriana

Tumba de PostumioTumba de Servilia2003BS

2006*Z26*

2005Z26

2005*U21

2006YYY*

γ-Proteobacteria

NitrospiraeFirmicutes

β-Proteobacteria

α-Proteobacteria

Actinobacteria

Cyanobacteria

Bacteroidetes

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Tumbade Postumio

Tumba de Servilia

Z262005

Z26*2006*

BS2003

U212005*

YYY*2006

Actinobacteria 37,5 58,4 54,5 37 44Bacteroidetes 18,75 11 14 8,5 34,5Cianobacteria 12,5 8,3 8,7 14 6α-Proteobacteria 3,75 8,5 3,3 11,5 9,5β-Proteobacteria 7,5 5,5 6,5 6 6γ-Proteobacteria 20 8,3 13 14 -Firmicutes - - - 6 -Nitrospirae - - - 3 -

Los porcentajes de los grupos filogénicos en las comunidades de las muestras investigadas

*- el año de la limpieza

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Tumbade Postumio

Tumba de Servilia

Z262005

Z26*2006*

BS2003

U212005*

YYY*2006

Actinobacteria 37,5 58,4 54,5 37 44Bacteroidetes 18,75 11 14 8,5 34,5Cianobacteria 12,5 8,3 8,7 14 6α-Proteobacteria 3,75 8,5 3,3 11,5 9,5β-Proteobacteria 7,5 5,5 6,5 6 6γ-Proteobacteria 20 8,3 13 14 -Firmicutes - - - 6 -Nitrospirae - - - 3 -

Los porcentajes de los grupos filogénicos en las comunidades de las muestras investigadas

*- el año de la limpieza

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Tumba de Postumio

Tumba de Servilia

Z262005

Z26*2006*

BS2003

U212005*

YYY*2006

Actinobacteria 37,5 58,4 54,5 37 44Bacteroidetes 18,75 11 14 8,5 34,5Cianobacteria 12,5 8,3 8,7 14 6α-Proteobacteria 3,75 8,5 3,3 11,5 9,5β-Proteobacteria 7,5 5,5 6,5 6 6γ-Proteobacteria 20 8,3 13 14 -Firmicutes - - - 6 -Nitrospirae - - - 3 -

Los porcentajes de los grupos filogénicos en las comunidades de las muestras investigadas

*- el año de la limpieza

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Tumba de Postumio

Tumba de Servilia

Z262005

Z26*2006*

BS2003

U212005*

YYY*2006

Actinobacteria 37,5 58,4 54,5 37 44Bacteroidetes 18,75 11 14 8,5 34,5Cianobacteria 12,5 8,3 8,7 14 6α-Proteobacteria 3,75 8,5 3,3 11,5 9,5β-Proteobacteria 7,5 5,5 6,5 6 6γ-Proteobacteria 20 8,3 13 14 -Firmicutes - - - 6 -Nitrospirae - - - 3 -

Los porcentajes de los grupos filogénicos en las comunidades de las muestras investigadas

*- el año de la limpieza

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97% 99%

Propionibacterium sp.

92% Saccharopolyspora sp.

96%97%91%94%

Rubrobacter sp.

93%87% Kibdelosporangium sp.

Pseudomonas sp.99%100%

Tumba de Postumio

Tumba de Servilia

2003BS

2006*Z26*

2005Z26

2005*U21

2006YYY*

γ-Proteobacteria

β-Proteobacteria

α-Proteobacteria

Actinobacteria

Nordella sp.94%95%

97% Mesorhizobium sp. 99% Phyllobacterium sp.

98% Acinetobacter sp.

94% Salinisphaera sp.90% Alkalilimnicola sp.99% Stenotrophomonas sp.

95% Mycobacterium sp.99% Micrococcus sp.97%99%

Arthrobacter sp.

93% Saccharothrix sp. 95% Pseudonocardia sp.

82%93% Ralstonia sp.99%

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ConclusionesLas comunidades de cianobacterias de las Tumbas de Servilia y Tumba de Postumio

son diferentes.La comunidad bacteriana de la muestra YYY* de la Tumda de Servilia que fue recogida

después de 1 año del la tratamiento de restauración fue más parecida a la muestra Z26 de la Tumba de Postumio que fue recogienda antes de estos procedimientos que de otras muestras de la Tumba de Servilia.Los miembros de las comunidades de cianobacterias de las Tumbas de Servilia y

Postumio tienen porcentajes de similitud de secuencia menores de 95%. Esto indica que las cianobacterias correspondientes podría ser miembros de grupos filogenéticos nuevos o todavía no descritos.El grupo filogénico predominante en todas las muestras es Actinobacteria. Los porcentajes de Actinobacteria y α-Proteobacteria subieron después de los

tratamientos de restauración. Estos grupos podria ser los más resistentes a estos procedimientos.

La mayoría de las secuencias pertenecen a microorganismos no cultivables.