Upload
iin-eirkha-lembayung
View
225
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
8/16/2019 Medium Iin
1/19
1PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
BAB 1
PENDAHULUAN
A. Latar BelakangMelakukan suatu percobaan didalam laboratorium yang bertujuan
untuk menumbuhkan dan mengembangbiakan atau meneliti suatu
mikrorganisme dibutuhkan suatu medium sebagai tempat tumbuh
mikroorganisme tersebut. Medium merupakan sumber nutrisi bagi
mikroorganisme untuk dapat tumbuh dan berkembang, medium terdiri dari
berbagai jenis dan fungsi sesuai dengan kebutuhan dan apa yang
diinginkan. Umumnya medium dibedakan menjadi medium sintetik dan
nonsintetik. Medium sintetik memiliki komponen-komponen penyusun dari
berbagai zat kimia sedangkan medium nonsintetik berasal dari bahan-
bahan alami. Medium yang digunakan untuk pertumbuhan dan
perkembangan mikroorganisme juga dipengaruhi oleh pH. Dimana pH
tersebut harus sesuai dengan mikroorganisme yang di tumbuhkan
sehingga dapat mikroorganisme dapat tumbuh dengan baik. Dalam
praktikum akan digunakan medium sintetik Tytip oy !roth "T !# dan Mac$onkey %gar "M$%# yang merupakan medium cair dan medium padat
sedangkan untuk medium nonsintetik digunakan kentang dan tauge.
&raktiukum ini bertujuan agar praktikan dapat mengenal jenis-jenis dan
cara pembuatan medium tersebut. ebab dalam bidang farmasi, medium
8/16/2019 Medium Iin
2/19
2PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
diperlukan untuk menumbuhkan mikroorganisme yang dapat
menghasilkan dan sebagai salah satu cara menguji obat atau antibiotik.
B. Rumusan Masalah %dapun rumusan masalah dari praktikum ini adalah '
(. %pa saja macam-macam medium)*. !agaimana cara pembuatannya)+. !agaimana membuat medium nonsintetis dari kentang)
. !agaimana membuat medium nonsintetis dari tauge)
. !agaimana cara membuat medium sintetis)
C. Maksud Praktikum %dapun maksud dari praktikum ini adalah untuk mengenal macam-
macam medium dan cara pembuatannya.
D. Tujuan Praktikum %dapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk membuat medium
agar nonsintetis dari kentang dan tauge serta beberapa medium agar
sintetis.
E. Man aat Praktikum %dapun manfaat dari praktikum ini adalah mengetahui macam-
macam medium, mengetahui cara membuat medium agar nonsintetis dari
kentang dan tauge serta beberapa medium sintetis.
8/16/2019 Medium Iin
3/19
3PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
BAB !!
"A#!AN PU$TA"A
A. Te%ri Umumrganisme dapat dibedakan menjadi dua golongan berdasarkan
sumber karbon yang digunakan yaitu autotrof yang dapat mensintesis
makanannya dari karbondioksida dan heterotrof yang membutuhkan lebih
dari satu senya/a organik sebagai sumber karbonnya "Hadietomo, (00+#.rganisme autotrof menggunakan senya/a anorganik sebagai
sumber nitrogennya sedangkan heterotrof menggunakan asam amino
atau senya/a protein lainnya seperti peptida, preteosa, dan pepton.
$ontoh medium yang digunakan untuk menumbuhkan mikrorganisme
heterotrof yaitu kaldu nutrient sedangkan sumber nitrogen biasanya
menggunakan ekstrak daging dan pepton. &ertumbuhan bakteri
dipengaruhi oleh keasaman atau pH tertentu sehingga perlu diperhatikan
pH dari medium yang akan digunakan, bakteri dapat tumbuh dengan baik
pada pH 1 "Hadietomo, (00+#.Media kultur adalah bahan nutrisi yang digunakan untuk
pertumbuhan mikrorganisme di laboratorium. !erdasarkan konsistensinya
media di kelompokkan menjadi dua macam yaitu media cair "li2uid media#
dan media padat " olid media#. Media cair merupakan ekstrak dari
8/16/2019 Medium Iin
4/19
4PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
material biologis maka disebut dengan rich media atau broth. edangkan
media padat membutuhkan bahan pemadat misalnya agar "&rati/i, *334#.Media yang paling umum digunakan yaitu air kaldu, cara
membuatnya dengan merebus daging yang sudah dicacah kemudian
menyaring airnya, air saringan tersebut yang akan digunakan sebagai
medium. %ir saringan ini mengandung pepton dan natrium klorida yang
merupakan sumber nitrogen dan zat anorganik lainnya yang bagus untuk
pertumbuhan bakteri. Tidak lupa juga di perhatikan pHnya agar dapat
disesuaikan dengan pH yang dibutuhkan bakteri untuk tumbuh. Medium-
medium yang mengandung substansi kompleks seperti ekstrak daging,
ekstrak khamir, tripton dan darah disebut juga medium buatan atau
medium kompleks sedangkan medium yang bahan-bahannya dapat
diruliskan rumus kimianya disebut medium sintetis, medium ini lebih rumit
dibanding medium yang lain biasanya digunakan untuk menumbuhkan
mikroorganisme tertentu dalam laboratorium penelitian. Terdapat juga
contoh medium selain yang dijelaskan diatas yaitu medium karbohidrat
yang menggunakan berbagai pada kaldu. &enambahan gula bertujuan
untuk melihat apakah bakteri tersebut menggunakan gula untuk
pertumbuhannya atau tidak. $ontoh dula yang yang sering digunakan
yaitu glukosa, manosa, galaktosa, sukrosa, maltosa, dan laktosa. 5ika
gula digunakan bakteri akan menghasilkan asam atau gas, asam dan gasi
ini dapat diketahui dengan penambahan indikator yang dapat berubah
/arna dalam keadaan asam atau menggunakan tabung kecil yang dibalik
8/16/2019 Medium Iin
5/19
5PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
pada dasar /adah medium untuk melihat gelembung gas yang tertangkap
pada tabung kecil tersebut "6heeler, (00+#.Media perbenihan merupakan media berisi nutrisi yang digunakan
untuk menumbuhkan bakteri dalam laboratorium. Media ini biasanya
mengandung sumber karbon, nirogen, sulfur, fosfor dan faktor
pertumbuhan organik. 7nokulum merupakan bakteri yang di inokulasikan
kesebuah media perbenihan. Dan bakteri yang timbuh dengan dengan
baik pada media tersebut dinamakan biakan bakteri. Untuk media padat
dapat digunakan agar yang berasal dari rumput laut. Media agar
digunakan untuk medium miring yaitu agar yang dimasukkan dalam
tabung reaksi lalu dimiringkan alasannya karena posisi yang miring
memiliki luas permukaan yang lebih besar sehingga lebih banyak juga
bkateri yang dapat dilihat. Terdapat beberapa jenis medium seperti media
sintetik yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri kemoheterotrof
dimana media, bahan uji dan bakteri disatukan lalu di amati pertumbuhan
bakterinya. Media kompleks, mengandung nutrisi yang tinggi yang berasal
dari ekstrak daging, ragi atau tumbuhan. Medium anaerob, digunakan
untuk menumbuhkan bakteri anaerob, digunakan bejana ynag memiliki
bagian yang mengandung oksigen dan bagian yang tidak mengandung
oksigen pada bagian dasar bejana, media ini dipanaskan terlebih dahulu
untuk menghilangkan oksigennya lalu kemudian dapat digunakan, dengan
memasukkan ca/an petri yang telah di inokulsikan bakteri kedalam
bejana tersebut. Media biakan khusus digunakan untuk menumbuhkan
bakteri yang tidak dapat tumbuh pada aeida yang biasa digunakan dalam
8/16/2019 Medium Iin
6/19
6PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
laboratorium. Media selektif dan diferensial digunakan untuk melihat
bakteri yang lebih spesifik dan yang terhubung dengan suatu penyakit,
dengan menekan bakteri yang tidak diinginkan dan mendukung bakteri
yang diinginkan untuk tumbuh. Media pengayaan, digunakan untuk
mengisolasi bakteri yang berjumlah sangat sedikit "8adji, *3(3#.Media adalah substrat yang digunakan untuk menumbuhkan
mikroba, media ini harus dalam keadaan steril sebelum digunakan agar
tidak ditumbuhi oleh bakteri yang tidak diinginkan. Untuk membuat media
dapat digunakan bahan-bahan alami ataupu senya/a kimi yang organik
maupun nonorganik. Media dapat dibedakan menurut bentuk, susunan,
dan sifat kimia. Menurut bentuknya media ditentukan oleh ada tidaknya
agar-agar, gelatin, dan sebagainya yang dapat dibedakan menjadi media
padat biasanya ditambahkan agar-agar, digunakan untuk pertumbuhan
bakteri, ragi jamur, dan mikroalgae. Media cair, tidak ditambahkan zat
pemadat. Media semi padat, dengan penambahan zat pemadat 39 dari
yang seharusnya, digunakan untuk penumbuhan mikroba yang
membutuhkan banyak air. !erdasarkan susunannya media, yang dilihat
dari komponen penyusun media tersebut. Dibedakan menjadi media alami
yan menggunakan bahan-bahan alami seperti kentang, tepung, daging,
telur, ikan, umbi-umbian dan lainnya, contohnya telur ynag diguakan untuk
pertumbuhan dan perkembangbiakan :irus. Media sintetik, menggunakan
senya/a kimia sebagai komponen media. Media semi sintetik
menggunakan media yang merupakan campuran dari bahan alami dan
sintetik. Misalnya kaldu nutrisi, toge agar dan /ortel agar. !erdasarkan
8/16/2019 Medium Iin
7/19
8/16/2019 Medium Iin
8/19
8PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
ber/arna? tidak berbau atau berbau lemah? rasa
berlendir? jika lembab liat? jika kering rapuh.@elarutan ' &raktis tidak larut dalam air, larut dalam air mendidih&enyimpanan ' Dalam /adah tertutup baik@hasiat A penggunaan ' Bat tambahan
*. A'uades ";7 777, (010 ' 0C#=ama 8esmi ' %2ua Destilata=ama >ain ' %ir uling&emerian ' $airan jernih? tidak ber/arna? tidak berbau? tidak
mempunyai rasa&enyimpanan ' Dalam /adah tertutup baik
(. "entang ) $%lanum tu*er%sum+ "itis.go:#@ingdom ' &lantaeDi:isi ' Trakeophyta@elas ' Magnoliopsida
rdo ' olanales;amili ' olanacea
enus ' Solanumpesies ' Solanum tuberosum
,. Tauge ) -igna radiate+ "it is.go:#@ingdom ' &lantaeDi:isi ' Trakeophyta@elas ' Magnoliopsida
rdo ' ;abales;amili ' ;abaceae
enus ' Vignapesies ' Vigna radiata
. Ma/ C%nke0 Agar a. @omposisi
!acto &epton (1 g!acto &reteosa &eptone + g!acto >actose (3 g
!acto !ile alts =o + (, g!acto %gar (+, g=eutral 8ed 3,3+ g!acto $rystal Eiolet 3,33( g
b. &roduksiDifco >aboratoriesDetroit M7 4*+*-13 4 U %
. Tr0ti& $%0 Br%tha. @omposisi
!actoF Tryptone "&ancreatic Digest of $asein# (1.3 g!acto oytone "&eptic Digest of oybean Meal# +.3 g
lukosa "GDe trose# *. g
8/16/2019 Medium Iin
9/19
9PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
=atrium @lorida .3 gDipotassium Hydrogen &hosphate *. g
BAB !!!
"A#!AN PRA"T!"UM
A. Alat 2ang Di&akai %dapun alat yang digunakan pada praktikum yaitu autoklaf,
batang pengaduk, erlenmeyer, kain saring, kapas, kertas putih, kulkas,
penangas air, pinset besi, pisau, sendok tanduk besi, /adah plastik.
8/16/2019 Medium Iin
10/19
10PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
B. Bahan 2ang Digunakan
%dapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum yaitu
agar-agar, gula pasir, kentang, tauge, Trytip oy !roth "T !#, Mac$onkey
%gar "M$%#.
C. Cara "erja )An%nim3 451 +1. Pem*uatan media nutrien /air
$ara pembuatan '(. Ditimbang dengan teliti '
Ikstrak daging "ekstrak beef# + gram&epton gram
*. Masing-masing bahan tersebut dilarutkan dalam (33 m> air suling,
diaduk sampai homogen.+. Dipanaskan sehingga larutan medium mendidih selama menit.
. Didinginkan, kemudian dinetralkan larutan medium tersebut
"menggunakan indikator phenol red pada /aktu menetralkan#.
Untuk netralisasi digunakan =a H ( = sedikit demi sedikit sampai
/arna indikator berubah /arna menjadi merah jambu.. %ir yang hilang selama pemanasan supaya diganti dengan
menambahkan air suling sampai :olume tepat (333 m>.C. Disaring dengan kapas atau kain flanel yang bersih.1. Disterilkan dengan menggunakan otoklaf ( menit pada tekanan *
atm.4. Pem*uatan medium nutrien agar
$ara kerja '
(. Dibuat nutrient seperti yang telah disebutkan diatas.*. Ditimbang agar sebanyak ( -*3 gram setiap (333 m> medium.+. Dimasukkan agar tersebut ke dalam medium, kemudian panaskan
sambil diaduk, sehingga semua agar-agar mencair "pemanasan
dilakukan diatas penangas air /ater bath#.. %ir suling yang hilang selama pemanasan supaya diganti dengan
air suling. !ila perlu dilakukan penyetelan pH sekali lagi.
8/16/2019 Medium Iin
11/19
11PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
. Disaring dalam keadaan panas-panas dengan kapas atau kain
flanel yang bersih.C. Dimasukkan medium tersebut kedalam tabung-tabung reaksi yang
steril dan banyaknya medium yang diisikan tergantung dari pada
keperluannya. Untuk medium agar tegak diisikan (3 m>,
sedangkan untuk medium agar miring diisikan m> medium.1. Disterilkan dengan otoklaf selama ( menit dengan tekanan * atm.
Untuk medium agar miring setelah disterilisasi letakkan miring +3
derajat terhadap garis mendatar dan biarkan memadat.
BAB !-
"A#!AN HA$!L PRA"T!"UM
A. Hasil PraktikumTa*el
"el%m&%k Medium 6arna "%sistensi kegunaan
8/16/2019 Medium Iin
12/19
12PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
$e*elum $esudah
( T !Merah
kecokelatan
$oklatpekat cair &ertumbuhanbakteri
* &D% kuning@uningkeruh
Mediumpadat "agar#
&ertumbuhan jamur
+Mac$onkey
agar Merahbata
Merahkecokelat
ancair
&ertumbuhan jamurJbakteri
TI%@uningcerah
@uningpucat
padat&ertumbuhan
bakteri J jamur
B. Pem*ahasan
&raktikum ini bertujuan untuk membuat beberapa medium sintetik
dan sintetik, adapun medium sintetik yang digunakan adalah Trytip oy
!roth dan Mac$onkey %gar, sedangkan untuk non sintetik digunakan
kentang dan tauge, masing-masing medium digunakan dikerjakan oleh
kelompok yang telah ditentukan dan kelompok + mengerjakan medium
sintetik mac$onkey agar. Mac$onkey agar digunakan untuk memilah
bakteri gram negatif yang dapat memfermentasi laktosa. !akteri yang
memfermentasi laktosa akan menyebabkan penurunan pH sehingga
mempermudah penyerapan neutral red dan mengubah koloni bakteri
menjadi merah bata. !akteri lain yang tidak dapat memfermentasi laktosa
tidak akan ber/arna. !akteri yang dapat tumbuh antara almonella,
higella, Ischerichia coli, Interococcus dan taphylacocus. Medium
pertama-tama dihitung berapa banyak yang akan ditimbang dan diperoleh
gram dalam 43 m> a2uadest, medium kemudian dimasukkan dalam
erlenmyer (33 m> dan ditambahkan a2uades sampai tanda batas 43 m>,
8/16/2019 Medium Iin
13/19
13PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
dilarutkan. >alu di panaskan dalam penangas air hingga benar-benar
homogen. Medium didalam erlenmeyer kemudian disterilkan dalam
autoklaf. ebelumnya mulut erlenmeyer ditutup menggunakan kapas dan
dibungkus dengan kertas putih. etelah ( menit disterilkan
menggunakan autoklaf medium didinginkan dan diamati perubahan /arna
serta bentuknya apakah tetap cair atau memadat. M$% sebelum di
panaskan ber/arna merah bata setelah dipanasakan menjadi merah
kecoklatan untuk bentukmya sebelum dan sesudah tetap masih dalam
bentuk cair atau larutan. etelah itu di simpan didalam kulkas.
BAB -
"E$!MPULAN DAN $ARAN
A. "esim&ulanTelah dilakukan pembuatan medium sintetis Mac$onkey %gar, M%$
ber/arna merah dan merupakan medium padat, digunakan sebagai
media seleksi untuk bakteri gram negatif yang dapat memfermentasi
laktosa dengan menyebabkan /arna merah bata pada bakteri yang positif
memfermentasi laktosa.
B. $aran
8/16/2019 Medium Iin
14/19
14PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
Diharapkan para kakak asisten membimbing kami sebagai praktikan
dengan lebih baik lagi selama praktikum, karena bimbingan asisten sangat
penting demi kelancaran praktikum.
DA7TAR PU$TA"A
Dit5en & M, (010, Farmakope Indonesia , Idisi 777, Depkes 87 ' 5akarta.
Hadioetomo, 8atna ri, (00+, Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek , &T.ramedia &ustaka Utama ' 5akarta.
&rati/i, yl:ia T., *334, Mikrobiologi Farmasi , Irlangga ' 5akarta.
8adji, Maksum, *3(3, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan MahasiswaFarmasi & Kedokteran , I $ ' 5akarta.
uria/iria, H. Unus, *33 , Mikrobiologi Dasar , &apas inar inanti '5akarta.
6heeler A Eolk, (00+, Mikrobiologi Dasar , Irlangga ' 5akarta.
8/16/2019 Medium Iin
15/19
15PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
LAMP!RAN
LAMP!RAN 1. $kema "erja
@elompok +
Dihitung M$% yang akan digunakan dalam 43 m>
Ditimbang M$% sebanyak g
Dimasukkan dalam erlenmeyer
Di tambahkan a2uadest hingga tanda batas
Diaduk hingga larut
Dipanaskan menggunakan /ater bath atau penangas air
Dipanaskan hingga M$% larut dengan baik dalam a2uadestDidinginkan pada suhu ruangan
Dibungkus menggunakan kertas dan menutup mukut erlenmeyer
menggunakan kapas
Disterilisasikan menggunakan autoklaf
8/16/2019 Medium Iin
16/19
16PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
LAMP!RAN 4 . 8am*ar97%t%
U=7EI8 7T% MU >7M 7=D =I 7%
M%$$ =@IK % %8
U=7EI8 7T% MU >7M 7=D =I 7%
M%$$ =@IK % %8
8/16/2019 Medium Iin
17/19
17PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
U=7EI8 7T% MU >7M 7=D =I 7%
MID7UM M%$$ =@IK % %8
U=7EI8 7T% MU >7M 7=D =I 7%
T8KT7& K !8 TH
8/16/2019 Medium Iin
18/19
18PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
LAMP!RAN ( . Perhitungan
a. "el%m&%k 1Dik ' Trytip oy !roth "T !#
Dibuat dalam C3 m>
TSBditimbang =30 g
1000 g x60 mL
¿ 1 ,8 gram
*. "el%m&%k 4Dik ' &otato de tra %gar "&D%#
Dibuat dalam * 3 m>
kentang=
250 g1000 g
x200 g= 50 gram
dextrosa =250 g
1000 g x 10 mL= 2 ,5 gram
agar=
250 g1000 g
x 20 mL= 5 gram
/. "el%m&%k (Dik ' Mac $onkey %gar "M$%# G 3 gram
Dibuat dalam 43 m>
MCA ditimbang =50 g
1000 g x 80 mL
¿ 4 gram d. "el%m&%k ,
Dik ' Tauge Ikstra %gar "TI%#Dibuat dalam (33 m>
tauge =100 g
1000 g x200 g= 20 gram
dextrosa=
100 g1000 g
x10 mL= 1 gram
8/16/2019 Medium Iin
19/19
19PEMBUATAN MEDIUM
MUH. ARFAH 15020140072
agar=
100 g1000 g
x 20 mL = 2 gram
LAMP!RAN , 7:T:C:P2 L!TERATUR