-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
1/17
PELATIHAN KULTUR SEL
Makmal Kejuruteraan Tisu
Fakulti Perubatan
Hospital UKM
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
2/17
KULTUR JARINGAN KULIT
Alat :
pinset skalpel ! sur"i#al bla$e
petri $is%
tube &' ml '( mlpipet bo) ! $isposibel pipet
laminar *lo+
inkubator ,-.
re*ri"erate$ #entri*u"e
s%aker +aterbat%$r) in#ubator s%aker
bilik %itun"
mikroskop in/erte$
mikroskop #a%a)a
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
3/17
0a%an :
1 2arin"an kulit 3$alam 4P0S atau me$ium Epili*e5
1 4ispase 36I0,- &7&('8(9&51 4P0S me$ium
1 Alko%ol 7( steril 3$i*ilter5
1 Mili;iu
1 4isp s)rin"e .( ml1 Filter (
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
4/17
Persiapan alat :
1 Semua alat %arus steril > $isposibel : sterilisasi
$en"anauto#la/e atau silikon sterili?er
1 Persiapan Rea"en @ ba%an :
1 4P0S 34ulbe#o P0S 6I0,- &9.(( 3*ree serum
biasan)a $ijual pekat$ilarutkan &( $en"an mili;iututup
aluminium *oil$iauto#la/e ! antibiotikbisa
$isimpan ali;uot
1 Epili*e 3botol '(( ml5 ! HK6S & tube ! & AA ! l
"entamisin< 0isa $isimpan $alam +aktu & bulan
3ali;uot5
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
5/17
1 4ispase ((' "ram ! &( ml me$ium a$ . #ampur
3/orte slo+ tak bole% berbui%5$i*ilter! &( ml
me$ium a$ . 34ispase (('"ram>.( ml me$ium58C(o,
1 Tripsin E4TA (('
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
6/17
PEMISAHAN DERMIS DAN EPIDERMIS
(DENGAN DISPASE)
CARA KERJA :
Ambil jaringan kulit
Bersihkan dengan DPBS pada petri dish (buang rambut lemakk!t!ran
darah"
Cu#i dengan alk!h!l $%& bagian epidermis saja (dermis di
permukaanatas" : sebentar saja
Bilas dengan DPBS ') kali (ganti petri dish * DPBS
untukmenghilangkan alk!h!l"
P!t!ng kulit ukuran lebar 'mm + panjang , #m
Siapkan tube ,- ml dilabel: nama pasien tanggal jaringan dispase
masukkan kulit .ang sudah dip!t!ngp!t!ng ke dalam tube tersebut
isi
dengan dispase sampai semua jaringan terendam/
simpan dalam suhu 0!C selama ,1 jam (ada .ang men.impan
dalam)$!C ') jam saja"
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
7/17
PR-SES K-LA6ENASE:
Untuk men$apatkan sel *ibroblast
Pisahkan dermis dan epidermis dengan pinset/ Epidermis
tampaktransparan disisihkan untuk kultur keratin!sit/
Bagian dermis dip!t!ng ke#ilke#il Dimasukkan dalam tube -% ## *
#!llagense t.pe 2 %3&
inkubasi pada dr. inkubat!r shaker )$!C maks '%% rpm -3 jamtube
p!sisi tidur
Di#entri4uge -%%% rpm )$!C - menit5 supernatan dibuang Cu#i
dengan DPBS - ## seban.ak ' 6 5 supernatan dibuang
7ambah DPBS - atau ,% ml
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
8/17
1 Hitun" sel $en"an tr)pan blue 3&( l T0 ! D( l suspensi
sel5
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
9/17
1 Me$ia $alam *lask atau +ell $iambil $an
$imasukkan ke$alam tabun" '( ml
1 Kultur $ibersi%kan $en"an 4P0S< 4P0S lalu
$ibuan"
1 Masukkan tripsin8E4TA ((' . ml $iinkubasi
$alam inkubator ,-. C7o, selama ' menit
1 Hisap suspensi tersebut $an masukkan keme$ium )an" tela%
$ipakai untuk kultur
sebelumn)a 3men"an$un" F0S5 seba"ai tripsin
in%ibitor
TRIPSINASI:
untuk melepaskan sel. $ari +ell>*lask
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
10/17
1 0ilas +ell $en"an suspensi tersebut 3tembak.5 %isap
$an masukkan kembali ke $alam tube '( ml )an" berisisuspensi
sel
1 4i#entri*u"e '((( rpm C7o, ' menit supernatan$ibuan"
1 Pellet $i#u#i $en"an 4P0S &( ml 3/orte5
#entri*us'((( rpm C7o, ' menit supernatan $ibuan"
1 Hitun" sel $en"an %emo#)tometer 3$en"an tr)pan blue5
1 ,entri*us '((( rpm C7o, ' menit supernatan$ibuan"
1 Masukkan me$ia kultur baru 3F4 &(F0S5 kulturkembali
seba"ai passa"e & 3P&5
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
11/17
,ARA MEN6HITUN6 SEL
1 Ambil tr)pan blue &( l masukkan $alam
eppen$or* tube ! D( l suspensi sel
1 Pasan" bilik %itun" pa$a mikroskop %in""a
tampak kotak. bilik %itun"
1 Teteskan suspensi pa$a pin""ir $e" "lass
%in""a merembes pa$a bilik. sel mati &((
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
12/17
Neni Po 4&
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
13/17
neni po $9
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
14/17
Neni P( 4'
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
15/17
m+aj$i po $.
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
16/17
-
7/26/2019 Kultur Jaringan Kulit
17/17
