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U A 4 - Z --+ESS
/NOMBRES
TELEFONO PARTICULkR
mnm I c u ~ A
/CARRERA
AREh DE CONCENTRICION
TRIMESTRE
HORAS SEmkNA
LUGAR WNDE SE LLEVmII n CABO
8 0223 25 4
INC. BIOOUIMICt9 INDUSTRIAL
FECHh DE KNICIO
'FECHA DE TERIIIü#Cm
JNOMFIRE DEL TUTOR INTERM) wm. JOSE m)* BARBA CHAVEZ.
TUTOR a
,I- - 111" .... . , .. .. . .. ,
1.- TITULO DEL PROYECm
“ü0TCNCION DE LA FRACCIC)N INSAPONIFICABLE O€ DOC TIPOS DE PHACEOLUS VULGARIS L. V PHASEOLUCi COCCINELIS L.”
2.- JUCTIF‘ICACION V MANRALEZA DEL PROVECTO
Coadyuvar an los trabejos do unveatigacibn que 8e realizan an e1 - área de Productos Nsturale8 de l a U.A.M.I., raapcto a lw componentea qua sa encuentran en l a t‘raecion insaponiPicable de Pheaeoiui. üulgarii.
3.- INTRODUCCION
Dentro de l a s legtA.noaai,el f r i j o l r e ha cultivada -de &pocas prehirst6ricaa, ya que aqibn e1 e8hdiO et identfficacibn d. reetoe ar- queolbgicoa encontrados an e l aatado de Riebla, P6xic0, aMelan que - e l frtjol me cultiva d.~ok hac8 aprcxintadmmt. 7wla anor.
U tratamiento da1 f r i j o l me ha limitada 1 au cocción, por tal m- tivo nm ae han hmho ntudirn Eoip.rablm a i& que i. han realizado can l a soya,por ejniiplo,por l o que (u consirkrs de gran ieportancia - invantigar l a naturaleza d. lw coiponmtr #el f r i j o l , robm toda en su fraccion ineapanificahle.
i
4.- ANTECEOENTES
5.- OBJETIVO
1 aceite di, frijol.
6,- PROGRAMA Y KTOOMOGIA DE: TR!ABAJO
1.- Fieme? 8 F k . u , C#woci 2s- Ed., Editor&# Grijslba S.A. Maxico, 1960.
2.- Badui Diirgal, Salvador- Mmíco de inn A I L m b , Aihabrs Wxicane t&nico,IL961.
3.- Aprociencia. kh 26, 1976- .In(iiaii Pufiaico de 68 pmotim del género Riaseolrm cultivador, m Mxib , pp 26-42,
IIVDICE
I
T I T U L O DEL. P R O Y E C T O
1NTRODUCCl:ON
O B J E T I V O
M A T f R I A L E S Y METOODS DE TRdIüAJO
R E S U L T ADO!;
DISCUSION
C O P EL UCIONES
RESUMEN
CONCLUSION
RIBLIOGRAFIA
1
2
8
9
36
46
49
51
56
5%
T I T U L O DEL. PROYECTO
"OETENCION DE LA FRACCIfIN INSAPONIFICABLE DE DOS TIPOS
DE PHASEOLUS VULGARIS L. Y PHASEOLUS COCCINEUS L."
-1 -
I N T R O ¡)U C C I O N
r" L
1:::
1 ...
Dentro del grupo de l a s leguminosas, e l f r i j o l ha sido - cult ivado desde épocas prehistdricas. E l estudio e i d en t i f i ca - c i6n de rsstos arqueoldgicos encontrados en el estado de Pue-
b l a , en l e i República Mexicana, sefialan l a ex istencia de este
cu l t i vo desde hace 7 O00 años (Kap ian 1975.).
Siendo mesoamérica un centro de d ivers i f i cac idn de este
cu l t i vo (Yavi lov, 1949-1950), ha ex is t ido interés en someter
l a s colectas disponibles para establecer una c las i f i cac ión i n - t raespec í f i ca de Phaseolus vulgar is - L.
La cl .asi f icacidn de que se h a b l d anteriormente, se basa
en l a s rel.aciones entre aspectos f í s i c o s del grano, t a l e s co-
mo; forma, tamaño, espesor, carec te r f s t i cas de l a p l a n t a etc.
Tamb i f in sf3 ha intentado c l s s i f i c a r a l f r i j o l en base a cam---
puestos que forman parte del su composicidn t a l e s como: protef - nas, amino6cidos, azúcares etc . , y todo esto ha servido como
b a s e para l a se lección de una s e r i e representativa de l a s ca-
tegor ías intraespecí f icas.
E l tratamiento y estudio del f r i j o l s e ha l imitado Único - mente a SU cocción, no se han hecho estudios comparables a -- los que SIB han efectuado en l a s o y a , y por ello se h a pensado
en invest igar l a naturaleza de l o s componentes del f r i j o l , so
bre todo en l a fraccián insaponif icable de su ace i te . -
En l a s grasas y ace i t es ex i s t e una fracción insaponif ica - -2-
c
I .
I" I. ,
c :
b l e y en calla se encuentran s u s t a n c i a s l lamadas e s t e r o l e s , los
c u a l e s putiden ser de origeri animal o v e g e t a l . E s t e t i p o de corn - puestos st? encuentran generalmente d i s u e l t o s en l a f r a c c i á n li - p í d i c a ya que pueden formar 6 s t e r e s con algunos á c i d o s grasos ,
aunque también se encuentran en l a natura leza unidos a azbca--
res , formando glucdsidos l o s c u a l e s son i n s o l u b l e s en l a s gra-
sas.
muchos de los e s t e r o l e s de p l a n t a s y animales poseen como
e s t r u c t u r a b á s i c a e l esquel .eto del c o l e s t e r o l ;
Entre e l l o s d i f i e r e n en e l número y/o p o s i c i á n de dobles
e n l a c e s , par t i cu larmente a t r a v h s de grupos m e t i l o a d i c i o n a l e s
por ejemplo en los Btomos iie carbono C4 , c14 y part icularmen - t e en C24 . Ocasionalmente se puede encontrar u n grupo e t i l o - en l o s átomos de carbono anter iormente mencionados.
E s t e t i p o de compuestos frecuentemente pueden e n c o n t r a r s e
como mezclas , ya sea en forma l i b r e o e s t e r i f i c a d a .
La fórmula abreviada Fx C y F, es una r e p r e s e n t a c i ó n muy
empleada para l o s e s t e r o l e c : en e l l a f t x f f r e p r e s e n t a e l nbmero
de dobles e n l a c e s en l a p a r t e de los a n i l l o s ; t fy" r e p r e s e n t a - e l número t o t a l de átomos ije carbono y tiztf r e p r e s e n t a e l núme-
-3-
r-' I 4 L. .
i' : t . ,
?" L...
r"
.". .
r o de dobles e n l a c e s en l a cadena l a t e r a l . be e s t a manera e l - c o l e s t e r o l , s e r e p r e s e n t a como F C27 : e l desmosterol 6 24-dehi - d r o c o l e s t e r o l F c~~ F ; e l e s t i g m a s t e r o l F C29 F y e l campeste - r o l F C28 *
Cuando se e f e c t ú a una e x t r a c c i ó n con é t e r , de l a so luc ión
r e s u l t a n t e de s a p o n i f i c a r t e j i d o c e r e b r a l , y después de evapo-
r a r e l s o l v e n t e , se o b t i e n e u n res iduo cuyo componente p r i n c i -
p a l es e l c o l e s t e r o l ; que se encuentra en l a f r a c c i d n insaponi - f i c a b l e .
El c c ~ l e s t e r o l se encuentra en los t e j i d o s del organismo - animal , especia lmente en e l c e r e b r o y c & c u l o s b i l i a r e s . E n l a
i n d u s t r i a e l c o l e s t e r o l se o b t i e n e a p a r t i r de l a médula e s p i -
nal de res, de l a s g l h n d u l a s s u p r a r r e n a l e s y de l a yema de hue
V O . E 1 c o l e s t e r o l c r i s t a l i z a en 6 t e r 6 en cloroformo formando
unas a g u j a s f i n a s y de aspec to sedoso; es i n s o l u b l e en agua,
-
El organismo hidroyena e l c o l e s t e r o l y lo e l imina por l a s
heces en l'orma de c o p r o s t e r o l . Cuando e l c o l e s t e r o l se acumula
en l a s a r t e r i a s da lugar a l a enfermedad llamada a t e r o s c l e r o - -
sis, cuyo o r i g e n más probable es una h i p e r c o l e s t e r o l e m i a (au--
niento del c o l e s t e r o l en l a sangre y cuyos v a l o r e s normales son
de 152 a 250 mg %), l a b i o s f n t e s i s de c o l e s t e r o l se e f e c t ú a en
e l hígado,
Los e s t e r o l e s de o r i g e n v e g e t a l ( t a m b i 6 n llamados f i t o s t e
r o l e s ) m6:j importantes son: e l e r g o s t e r o l y e l e s t i g m a s t e r o l - que constan de 28 6 2 9 átomos de carbono. E 1 e r g o s t e r o l se en-
c u e n t r a eri l a f r a c c i ó n i n s a p o n i f i c a b l e del centeno y de l a l e -
vadura de cerveza. E l e s t i g m a s t e r o l se encuentra en l a s f r a c - -
-
-4-
ciones insaponif icables de l o s ace i t es de haba y s o y a ,
L
I' r .
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<. I"' .
ergosterol
est ignasterol
otros estero les de origen vegetal que se h a l l a n muy repar
t i dos entre l a s plantas son l o r llamados s i tostero les . Entre - estos l o s más importantes !son e l - s i tos te ro l y e l -s i toste-
r o l , Se ha observado que este t i po de compuestos l i m i t a n l a a b
sorcidn de co i es te ro l en e:L intest ino, sobre todo el más impor
tante d e e l l o s que es e l - s i tos te ro l ; e l co lestero l s e absor
be, p e r o no los estero les wge t a l o s que además l i m i t a n l a ab--
-
- - -
-5-
sorcidn di3 aquél .
I" 1. .
I' i.
i" 1. .
OC .- s i t o s t e r o 1
I "
e - s i tos te ro l
E l hecho de que l o s estero les de origen an imal sá io se en
cuentren en los t e j i d o s animales y los f i t o s t e r o l e s en l a s --- plantas, permite descubrir l a s fa l s i f i cac iones de l a s grasas - de uno u otro origen, mediante e l estudio de l a fraccidn insa-
pani f icable , ya sea por medio de reacciones de acet i iac ión de
l a s es te ro l es o bien formando sus combinaciones con digitonina
para foraiar compuestos llamadas digitónidos. LOS puntos de f u -
-
I -6-
I' siÓn de los compuestos o b t e n i d o s y e l aspec to c r i s t a l i n o de -- l a s a c e t a t o s c o r r e s p o n d i e n t e s observados a l m ic roscóp io , nos - pueden r e v e l a r s i se t r a t a de un sólo e s t e r o l o b i e n de mezc la
de e l l o s , t a n t o en l a s grasas an ima les como vege ta les , l o c u a l
p r o b a r í a l a f a l s i f i c a c i ó n . Por ejemplo: en l a s m a n t e q u i l l a s l a
p r e s e n c i a de f i t o s t e r o l e s p r o b a r f a que e l p r o d u c t o ha s i d o mar - oar inado.
Se hri l o g r a d o e s t a b l e c e r que l a e s t r u c t u r a fundamenta l de
la que d e r i v a n los e s t e r o l e s es e l ciclopentanoperhidrofenan--
t r e n o . Esta e s t r u c t u r a e s tie una g r a n i m p o r t a n c i a p a r a l a s í n -
t e s i s de rnuchos c o r t i c o i d e c , hormonas sexua les y a n t i c o n c e p t i -
vos.
En e l l organismo humana, es p rec i samen te e l c o l e s t e r o l e l
p r e c u r s o r de es te t i p o de compuestos mencionados ( e s t e r o i d e s y
hormonas sexua les) , además de que en l a i n d u s t r i a ha s e r v i d o - como m a t e r i a p r i m a p a r a l a s í n t e s i s de hormonas e s t e r o i d a l e s .
I ' I
1 "
-7-
O R J E T I V O
E 1 o t i j e t i v o d e l p r e s e n t e t r a b a j o , e s l a o b t e n c i 6 n de l a - f r a c c i ó n i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de l o s s i g u i e n t e s t i p o s de
f r i j o l : N€!po , i lyocote , A lub ia y F l o r de mayo, mismas que se--
r á n a n a l i z a d a s p a r e d e t e r m i n a r en e l l a s l a p r e s e n c i a de corn---
~ u e s t o s den o rn i nado s e s t e r o 1 e s,
- 8 -
MATERIALES Y METODOC DE TRAEnJO.
OETENCION DEL n C E I T E DE FRIrJOL.
Se t r a b a j a con una c a n t i d a d de 2 K g de cada t i p o de f r i - j o i , que se p rocede a mo le r en un m o l i n o s i n f i n h a s t a ob tener
l a h a r i n a , con e l o b j e t o d e t e n e r un tamaño de p a r t f c u l a l o su - f i c i e n t e m e n t e pequeña p a r a f a v o r e c e r l a e x t r a c c i ó n d e l a c e i t e .
Si e l f r i j o l c o n t i e n e mwcha humedad, e s t e debe eer c o l o c a - do en e s t u f a s o a l s o 1 p a r a s e c a r l o y a s í poder m o l e r l o con ma - yor f a c i l i d a d .
Una vez que se ha o b t e n i d o l a h a r i n a , e s t a se c o l o c a en - p o r c i o n e s de 700 g en un mn t raz b a l ó n de fondo p l a n o de 2 1. y
p o s t e r i o r m e n t e se a d i c i o n a a i ma t raz un l i t r o de hexano, que - es e l s o l v e n t e empleado p a r a r e a l i z a r l a s e x t r a c c i o n e s . Una -- vez a d i c i o n a d o e l s o l v e n t e , se somete a r e f l u j o p o r espac io de
dos h 3 r a s y a l t e r m i n o de insta operac ión , se van j u n t a n d o los
e x t r a c t o s o b t e n i d o s de cads p o r c i ó n de h a r i n a y se procede a - f i l t r a r a v a c i o con e l ob j i z to de que no se a r r a s t r e h a r i n a .
Una vez f i l t r a d o , e l .L iqu ido o b t e n i d o se c o l o c a en e l ma-
t r a z d e l r o t a v a p o r , p a r a poder evapora r e l s o l v e n t e mismo que
se r e c u p e r a p a r a poder ser empleado nuevamente.
Una vez que e l s o l v e n t e ha s i d o evaporado y recuperado,--
-9-
7' ' I I...
qupda en 6.1 matraz del rotatvapor e l a c e i t e de f r i j o l que será
saponi f i codo poster iormente .
fl caija porción de h a r i q a de f r i j o l se l e hacen t r e s e x -- I<
t r a c c i o n e 13. 1.
c
/. .
[ ' 1 .
i" t. .
Para e f e c t u a r l a sapor i i f i cac ión , se t r a b a j a c o n 20 g de - a c e i t e obtenido de los d i f e r e n t e s t i p o s de f r i j o l con los que
se t r a b a j a . E l a c e i t e es colocado en u n matraz de 250 m l . de - c u e l l o esinerilado y se adic ionan 1 0 0 m l . de una s o l u c i ó n de h i
dróxido de p o t a s i o 1 N a l c o h ó l i c o , s e colocan unas p e r l a s de y
e b u l l i c i ó n y r e f r i g e r a n t e o n p o s i c i ó n de r e f l u j o , e l cual se - mantiene por 45 minutos.
-
lJna vez que e l r e f l u j o ha terminado, l a mezcla contenida
en e l matraz se d e j a e n f r i a r y s e adic ionan dos g o t a s de f e -- n q l f t a l e f n a , se procede a n e u t r a l i z a r con ác ido c l o r h í d r i c o 1 N
hasta que el c o l o r guinda del i n d i c a d o r en la mezcla o r i g i n a l
desaparezca. La mezcla se d e j a en u n v a l o r de pH e n t r e 4 y 5 .
DBTENCION DE LOS JI\BONES DII C A L I X O .
Para poder obtener l o : j j abones de c a l c i o , que son inso lu-
b l e s en agua a d i f e r e n c i a ide l o s j a b o n e s de p o t a s i o , se a d i c i o
non a l a s o l u c i 6 n a n t e r i o r 15 g de óxido de c a l c i o y s e somete
- -.10-
a r e f l u j o p o r espac io de 45 minutos.
Cuando e l r e f l u j o se ha te rminado, se procede a separa r - e l a l c o h o l po r d e s t i l a c i ó n , E s t e p roceso debe e f e c t u a r s e de -4
p r e f e r e n c i a en baño marfa, con e l o b j e t o de que l a p a s t a que - vu quedando en e l ma t raz a medida que e l a l c o h o l va d e s t i l a n d o ,
no se queme p o r r e c i b i r e l c a l o r de manera más d i r e c t a .
y 1 .
I.
"","
1
1
EXTRACCION DE LA FRACCION 1:NSAPONIFICABLE.
Una vez que e l a lcoho l . se ha evaporado, l a p a s t a formada
c o n t e n i d a en e l m a t r a z se Eixtrae t r e s veces, con p o r c i o n e s de
1 0 r m l . di? c l o r o f o r m o cada vez. L o s o x t r a c t o s se j u n t a n en un
embudo de s e p a r a c i d n de 50Cl m l . En e l caso de que se forme una
emuls ión , e s t a se puede romper f á c i l m e n t e ad ic ionando una pe--
qüeña c a n t i d a d de c l o r w r o de sod io .
L a f a s e c i o r o f ó r m i c a , que c o n t i e n e ya l a f r a c c i ó n insapo-
n i f i c a b l e 58 pasa a un mat raz e r lenmeyer de 500 ml. y s e l e a-
d i c i o n a una pequeña c a n t i d a d de carbbn a c t i v a d o , con l a f i n a l i
dad de e l i m i n a r impurezas y c l a r i f i c a r un poco l a solucilin. -
F o s t e r i o r m e n t e l a s o l u c i ó n se f i l t r a a vac io , u t i l i z a n d o
un embudo buchner a l que p rev iamen te se l e ha co locado una ca-
ma de c e l i t a .
Cuando se ha te rm inado de f i l t r a r l a s o l u c i ¿ n , se p rocede
a recupere i r e l s o l v e n t e p o r d e s t i l a c i b n . Es c o n v e n i e n t e u t i l i -
z a r nuevamente un baño m a r í a p a r a que l a d e s t i l a c i 6 n s e r e a l i -
c e de manera suave. E l s o l v e n t e se r e c u p e r a h a s t a un 80% a p r o x i -
-11-
I : t': I .
ximadaaents, quedando en e l matraz un l í q u i d o de c o n s i s t e n c i a - o l e o s a , mismo que s e d e j a e n f r i a r y se l e adic ionan 5 m l . de -- acetona y 2 m l . de metanol , con l a f i n a l i d a d de favorecer l a il-
c r i s t a l i z a c i ó n .
F l U E B A S D i C O L U S I L I D n D .
Cada f r a c c i ó n i n s a p o n i f i c a b l e Ubtenida s e coinetió a prue--
bas de s o l u b i l i d a d en l o s s i g u i e n l t e s s o l u e n t e s : a c e t o n a , agua, -
bonceno, c loroformo, e t a n o l , é t e r y metanol. Los r e s u l t a d o s de
e s t a s pruebas se d e t a l l a n en l a E8ncci6n correspondiente .
D L T E R M I M n C I O N I U A L I T f l T I V A DE ESTER!YLEC.
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3..
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fl cada f r a c c i ó n i n s a p o n i f i c o b l e de l o s a c e i t e s de f r i j o l - COI lcs q.ie s e t r a b a j ó se l e s h i z o l a s i g u i e n t e prueba para de-
t e r m i n a r l e s l a p r e s e n c i a de e s t e r o l e s .
9eacc i6n de Hegger-5ailkovsky.- En un t u b o de ensaye de 1 5 x -- 1 5 0 mm. S O colocan u n o s c r i s t a l e s de l a f r a c c i ó n i n s a p o n i f i c a - -
b l e a protiar, se adic ionan 5 m l . de cloroformo para d i s o l v e r l o s
y poster iormente se a d i c i o n a p o c o a p o c o y resbalando p o r l a s - paredes del tubo 1 m l . de & c i d 0 s u l f ú r i c o concentrado y s in ag i
t a r . L a forvación de un ani117 de c o l o r r o j o en l a i n t e r f a s e -- nos i n d i c o l a p r e s e n c i a de e s t e r o l e s . Los r e s u l t a d o s de e s t a -- prueba s e indican también en l a 9 e c c i á n correspondiente ,
-
-1 2-
r ' 1 .
I '
,. ,.
,.. ,, . ..,
~1 p u n t n de f u s i ó n es a q u e l l a t e m p e r a t u r a a l a c u a l una -- ~ t ~ ~ t a r ~ c i a s ó l i d a s e r e b l a n d e c e y funde comple tamente . L o s pun--
t u s de f u s i ó r : de l a s f r a c c i o n e s i n s a p o n i f i c a b l e s o b t e n i d a s fue-
r o n d e t e r n i n a d o s en e l a p a r a t o Thomas H o f l V e r , que s e e n c u e n t r a
en e l l a b o r a t o r i o de F i t o q u i m i c a d e l Departamento de B i o t e c n o l o - gis de l a ij.n.r~i. I z t a p a l a p a t y p a r a e l l o se p r o c e d i ó de l a s i -- g u i e n t e nonera:
LUS c r i s t a l e s o b t e n i d o s de cada i r a c c i ó n i n s a p o n i f i c a b l e - s e p u l v a r i z a r o n f inmne!i te y se c o l o c a r o n en un d e s e c a d o r por e s
patio de 24 h o r a s , d e s p u é s de e s t o se l l e n ó un t u b o c a p i l a r s e -
l l a d o por un ext remq. E l C L I ~ O se l l e n a con c r i s t a l e s h a s t a a l - -
r a n z a r I J ~ ; , a l t , u r a aproximada de 2 .5 a 5 .0 mm procurando que l a
columna quede "compacta" golpeando suavemente l a s p a r e d e s de e l
c a [ > i l a r .
-
cuando l a m u e s t r a ha s i d o c o l o c a d a en e l t u b o como se ha - d e s c r i t o , a n t e r i o r m e n t e , se prgcede a i n t r o d u c i r l a en e l a p a r a t o
y con l a ayuda d e l r e o s t a t o d e l misino, s e va graduando l a tempo
r a t u r s de c a l e n t a m i e n t o . Obserwando a t r a v é s de l a m i r i l l a d e l
e p a r a t o , pridem.~s d e t e r m i n a r en que mgmento empieza y t e r m i n a de
r u n d i r l a s u s t a n c i a , a s í como e s t a b l e c e r l a t e m p e r a t u r a a l a 3-
que e s t o Sucede!.
-
L O S p u n t o s de f u s i 6 n r ib t en idos p a r a cada f r a c c i 6 n i n s a p o n i - f i c a b l e o b t e n i d a , se mues t r an en l a s e c c i ó n de r e s u l t a d o s ,
-1 3-
I : 1 .
1'' . .
I' '. ~
"" .
r '.
/. .
I "
C R O M A T O G R / \ F I A EN CAPA F I N A .
General idedes.
La cromatograffa en capa f i n a ( C C F ) ha encontrado resonan - c i a en c a s i todos los l a b o r a t o r i o s qufmicos debido a SU f á c i l
e j e c u c i 6 n y b a j o c o s t o . muchas de l a s determinaciones rutina--
r i a s seguidas en l a i n d u s t r i a farmaceút ica y en l a a l i m e n t i c i a
se basan en los métodos c r o m a t o g r ~ f i c o s . Actualmente se empie-
za a extender en e l medio de los l a b o r a t o r i o s de a n á l i s i s c l í -
n i c o s como Única arma para determinaciones e s p e c i a l e s y en ge-
n e r a l su campo de a c c i ó n e s i l i m i t a d o .
E l b o t s n i c o ruso michael Tswett separó p o r primera vez en
1 9 0 3 pigmentos de p l a n t a s mediante f i l t r a c i ó n de sus e x t r a c t o s
sobre una columna de carbonato de c a l c i o en tubo de v i d r i o ,
Durante muchos años quedaron archivados e s t o s conocimien-
t o s y no fu6 s i n o h a s t a p r i n c i p i o s de los años t r e i n t a cuando
K u h n y co laboradores l o g r a r o n separar carotenos en cant idad -- p r e p a r a t i v a c o n l a ayuda da l a cromatograf ía en columna. E s t e
impresionante t r a b a j o contr ibuyó a una d i f u s i ó n r6pida de e s t e
método de separac ión mediante e l c u a l , pr incipalmente l a q u i m i
c a de l o s productos n a t u r a l e s r e c i b i d u n gran impulso. -
L a separac ión cromatográf ica se puede l l e v a r a cabo median - t e los s i g u i e n t e s p r i n c i p i o s f i s i c o - q u i m i c o s i
a ) . - P o r adsorc ión en una f a s e s ó l i d a ( t tadsorbentestl o t l s o p o r - -1 4-
["
I "
t e s " ). t i p o s ; l iquid i i - l€quido y gas- l i q u i d o
b).- Por d i s t r i b u c i ó n en do!j f a s e s i
- l i q u i d o - l i q u i d o
- gas- l i q u i d o
c ) , - Por formación de puentiss de hidrógeno.
d ) , - Por formación de s a l e s / intercambio i 6 n i c o .
e ) , - Por f i l t r a c i ó n ( en tamices moleculares o f i l t r a c i ó n de
g e l e s ).
E s t o s fenómenos se presentan según l a s condic iones de t r a
b a j o y s o n completamente d i f e r e n t e s los unos de los o t r o s . S i n
embargo, en l a mayoria de l o s c a s o s se presentan algunas de es
t a s f u e r z a s accionando en conjunto en a l g ú n s i s tema cromatográ
f i c o . L O que t i e n e n en comúii todos e s t o s p r i n c i p i o s cromatogrs
f i c o s son su forma de a p l i c , s c i ó n , ya s e a cromatograffa en colum
na, en papel , en capa f i n a 13 de g a s e s , además de que todos t i e
nen como f i n a l i d a d l a separac ión de mezclas de s u s t a n c i a s depen
diendo de l a s c a r a c t e r i s t i c a s moleculares de l a s mismas. La mez
cia de s u s t a n c i a s problema [puede ser l i q u i d a , gaseosa o en so-
l u c i ó n .
-
- - - - - - -
Las p r i n c i p a l e s t é c n i c i i s cromatográf icas son las de adsor - c i Ó n y de p a r t i c i ó n .
E n l a cromatograf ia de adsorc ión se l l e v a a cabo l a sepa-
r a c i ó n de mezclas de sustanlcias dependiendo de l a s d i f e r e n t e s
c a r a c t e r f s t i c a s p o l a r e s de i e l l a s , o sea de su capacidad de f o r
mar e n l a c e s en l a s u p e r f i c i e a c t i v a d e l sorbente . E n l a super-
f i c i e del s o r b e n t e e x i s t e n fuerzas e l e c t r o s t á t i c a s en forma de
-
-15 -
r '
I ' L .
I ' I. I
r e j i l l a s dependiendo t a n t o d e l tamaño d e l g rano como de l a Su-
p e r f i c i e de B s t e , por l o que l a s s u s t a n c i a s p o l a r e s o p o l a r i z a - b l e s se u n i r á n e l e c t r o s t á t i c a r n e n t e . ñ e s t e p r o c e s o se l e l lama
a d s o r c i ó n .
En u n a s u s t a n c i a p o l a r e l c e n t r o de mayor c a r g a se encuen - t r a en d i f e r e n t e p o s i c i ó n e s p a c i a l que e l c e n t r o de carga nega - t i v o . E s t o es , q u e l a s u s t a n c i a forma u n d i p o l o e l c u a l es a--
t r a í d o e l e c t r o s t 6 t i c a r n e n t e por e l s o r b e n t e . Una vez u n i d a l a - s u s t a n c i a e l e c t r o s t á t i c a r n e n t e a l s o r b e n t e , se procede a e l u i r
e s t a d e l s o p o r t e con l l q u i d o s de d i f e r e n t e p o l a r i d a d , es d e c i r
a r r a s t r a r 1.a s u s t a n c i a de donde e s t á un ido med ian te l a s fuer - -
zns c o m p e t i t i v o s de l s o l v e n t e a p l i c a d o .
E l e f e c t o de e l u c i ó n depende n a t u r a l m e n t e de l a c o n s t a n t e
d i e l e c t r i c o o p o l a r i d a d d e l e l u e n t e .
Los s o l v e n t e s se ordenan s e g h n s u p o l a r i d a d e n l a s e r i e - e l u o t r ó p i c o d e s c r i t a p o r G . Wohlleben, s i e n d o e l agua l a s u s t a n - c i a más po:iarr
n-Pentono
E t e r de p e t r ó l e o
n-Hexano
n-Heptano
C i c l oh ex a no
T e t r a c l o r u r o de
ca rbono
T r 1. c i o r o e t il en0
Eerizoi ñ c e t o n a
Dic:lorometano n-Propanol
Cl ci r o f or mo
Etsr d i e t f l i c o metano1
p i r i d i n a
E t a n o l
ñcei ta to de e t i l o Agua
-1 6-
ii .
I ' L .
t. ,.
I "
Un fe i c to r que tambi f in es d e c i s i v o p a r a e l medio adsorben-
t e es e l c a r a c t e r de l a mezc la se s u s t a n c i a s , ya que juegan un
p a p e l muy i m p o r t a n t e los grupos f u n c i o n a l e s de l a mezcla. H i - -
d r o c a r b u r o s s e n c i l l o s serán d i f i c i l m e n t e adso rb idos , l o s mis--
mos con dob les e n l a c e s seráln mejor adsorb idos .
L a a l ' i n idad a l a a d s o r c i ó n se i n c r e m e n t a segíin l a s i g u i e n - t e t a b l a :
a l d e h f d o s y cetonais
t5ter
13 n l aces n o t r o so s
iqrupo é s t e r
grupo amino
grupo a l c o h o l
grupo amida
grupo c a r b o x i l o
En e s t a secuenc ia se deber6 i n c r e m e n t a r l a p o l a r i d a d d e l
e l u e n t e p a r a poder e l u f r s u s t a n c i a s que contengan e s t o s grupos
es d e c i r , se aumenta l a a f i n i d a d a l a a d s o r c i d n de l a s u s t a n c i a
p r o b l ema.
Completamente d i f e r rites son l a s bases de l a c r o m a t o g r a f f a
de d i s t r i b u c i ó n , l a c u a l como e l nombre lo i n d i c a , se l l e v a a
cabo med i i ln te l a separac Or1 p o r d i s t r i b u c i ó n en dos f a s e s no .. m i s c i b l e s e s t o es, e n t r e dcie l f q u i d o e no rnf8ciblBs. Tthmbi6n la
c r o m a t o g r a f f a de d i s t r i b u c i d n t u v o su pun to de p a r t i d a en l a - columna. i f l a r t i n y Synge c a r g a r o n una columna de t i e r r a c i l f c e a
con agua como f a s e e s t a c i o n a r i a sobre l a c u a l a p l i c a r o n una so
l u c i ó n no m i s c i b l e con agua como f a s e m ó v i l y d u r a n t e e l t r a n s
cu rso de c o r r i m i e n t o se 11evÓ a cabo una d i s t r i b u c i 6 n c o n t i n u a
d e l p rob lema e n t r e l a s dos fases. L a s s u s t a n c i a s se separa ron
- -
-1 7-
r
L .
!. .
i"' ! *. .
en base a sus d i f e r e n t e s c o e f i c i e n t e s de d i s t r i b u c i ó n .
E 1 profesor Izmailow en 1938 apl icando dxido de aluminio
sobre una p l a c a y r e a l i z a n d o sobre e l l a c romatograf ía en colum - na a b i e r t o , s e n t 6 l a s b a s e s de l a CCF. E s t e metodo tuvo una -- enorme a c s p t a c i ó n y actualmente es una de l a s tecnicas de ma--
yor U S O .
S u s v e n t a j a s a n t a l a cromatografía so papel son!
- La mayor rapidez del proceso s e p a r a t i v o .
- Una mayor s e n s i b i l i d a d en aproximadamente una 10'
potenc ia .
- E n u n c o r t o r e c o r r i d o , una menor d i f u s i d n de l a - mancha.
- L a p o s i b i l i d a d de u t i l i z a r reve ladores y s o l v e n t e s
a g r e s i v o s por E'jemplo: ácido f o s f ó r i c o o s u l f ú r i c o ,
Es to no q u i e r e d e c i r clue l a CCF haya s u s t i t u f d o completa-
mente a 1;i cromatograf ía en papel , ya que en algunos c a s o s es-
p e c i a l e s iista ú l t ima t i e n e p r e f e r e n c i a por ejemplo para i a se-
parac ión ide sustancias muy po lares . S i n embargo, también en es
t o s casos l a CCF, empleandci c e l u l o s a pulver izada , puede ser -- u t i l i z a d a con f i n e s s i m i l a r e s . Las formas de i d e n t i f i c a c i ó n -- son:
-
a) . - Hacer v i s i b l e s l a s sustancias e n caso de que no l o sean
y para e s t o se empl.ean r e v e l a d o r e s e s p e c í f i c o s depen--
d.iendo de l a s s u s t a n c i a s que se t r a t e n o de los grupos
-18-
r
I" i
,.. " : I , . .
f u n c i o n a l e s que e l 1 . a ~ con tengan .
b).- Enpleando l u z u l t r « v i o l e t a p a r a a p r e c i a r f l u o r e s c e n c i a .
c ) . - Apl icando c a l o r has t a l a a p a r i c i ó n de l a s manchas.
d ) . - Crimbinando a l g u n o s de l o s p r o c e s o s a n t e s mencionados.
P a r a lo e v a l u a c i ó n c u a n t i t a t i v a de l a s manchas se pueden
u t i l i z a r .los s i g u i e n t e s p r o c e s o s :
1.- Conparac ibn v i s u a l del tamaño de l a s manchas.
2.- p l a n i m e t r i a de l a s manchas.
3.- v e d i d a de r e e m i s i ó n .
4. - D e n s i t o m e t r i a .
5.- r l u o r i m e t r i o .
6. - Dete rminac ión despuhs de una mancha r a d i o a c t i v a .
ROTA: L O S metodos 1 y 2 son c l a s i f i c a d o s como s e m i - c u a n t i t a t i
vos .
Todo:; e s t o s métodos scin p a r a uno e v a l u a c i ó n d i r e c t a sobre
l a p l a c a . En c a s o de que nci se d i sponga de l o s a p a r a t o s adecua
dos se puede p r o c e d e r a c u a n t i f i c a r :
-
a).- Por e l u c i ó n de l a s u s t a n c i a y medida direcCa de su ab-
s o r c i b n u l t r a v i o l e t a,
b).- Par e l u c i Ó n de l a aiancha c o l o r i d a y med ic idn co lo r imé-
ti:i ca,
c ) . - Pr imero e l u c i 6 n y d e s p u é s r e a c c i ó n de c o l o r p a r a su -- cuan t i f i c a c i 6 n c o l o r im6 t r i ca
-19-
b. ,
6 ' * Y L. ,.
Y'' i.
i' * ,
T ' I
i ' S' L .
<., ,
.'. .
,,..
... , )".I
1 ,.<.
d ) , - F o r e l u c i 6 n con e l ireactivo de c o l o r para hacer s i m u l -
t á n e a l a e l u c i ó n y : reacción de c o l o r . E n seguida cuan-
t i f icando c o l o r i m 6 t r icamente
CROmATOGRfliFIA DE LAS FRACCIONES INSAPONI FICfiBLES.
Las f r a c c i o n a s i n s a p o n i f i c a b l e s obtenidas se sometieron a
c romatogrof ía en p laca . Para l a preparación de e s t a s ú l t imas - se procedió de l a s i g u i e n t e manera:
Se oesan 30 g de s i l i c a g e l GF 254 y s e colocan en u n ma-
t r a z erlenmeyer de 250 m l . Se adic ionan 60 m l . de aqua d e s t i l a - da en porc iones de 20 m l . , se l e c o l o c a a l matraz u n tapdn l i m - p i a y se a g i t a vigorosamente por u n tiempo de u n o a dos m i n u - -
t o s para (que l a mezcla quede perfectamente homogenea y sin g r u - mes. una v e z terminada l a a g i t a c i ó n , l a mezcla se v a c i a en e l
c a r r o a p l i c a d o r , e l cual previamenta ha s i d o lavado perfectamen - t e . Una vlez colocada l a mezcla en e l c a r r o a p l i c a d o r , e s t a se
d i s t r i b u y e de u n s o l o movimiento sobre l a s p l a c a s de v i d r i o , - t ra tando de que l a capa de s i l i c a g e l quede 10 mas perfectamen - t e homogenea en grosor y d i s t r i b u c i ó n a l o l a r g o de todas l a s
p i ocas .
Las p l a c a s de v i d r i o idaben ser l avadas con agua u jabón y
enjuagadas perfectamente con agua d e s t i l a d a , ya s e c a s l a s pla-
c a s se l e s debe pasar u n a:lgodón con a c e t o n a , e s t o es para e l i -
-20 -
I
r ’ I * .
L. .
minar toda l e grasa que pudiera haber quedado en e l l a s y con - e l l o e v i t a r que l a capa de s i l i c a g e l que se a p l i c a pueda que-
dar heterog6nea en algunas s e c c i o n e s de l a p l a c a a s í como de - f a c i l i t a r l a adherenc ia de’ l a s i l i c a a l a placa .
Después de l a a p i i c a c i d n de l a s i l i c a g e l , l a s p l a c a s se
de jan s e c a r y pos ter iormente se meten a l a e s t u f a por espac io
de dos horas para ac t ivar las , después de lo cual e s t á n l i s t a s
o a r a su IJSO.
S e l i raba já con d i f e r e n t e s s i s t e m a s de s o l v e n t e s para l a s
p l a c a s y l a mezcla de s o l v e n t e s en l a s que se obtuvieron los
mejores iresultados y observac iones de l a s manchas fue e l si---
q u i ent e : c l o r o formo-hept ario-a cetona 5 : 3 : 2 . Todas l a s f r a c c i o n e s se s o l u b i l i z a r o n en cloroformo a n t e s
de su ap:t icacidn a l a s pleicas cromatograf icas . Para e l reve lado
de l a s p.Lacas se u t i l i z ó 1.uz u l t r a v i o l e t a de onda c o r t a y tam-
b i é n fu6 u t i l i z a d a una c6niara con vapores de iodo , s iendo en - e s t a Última donde se a p r e c i a r o n mejores r e s u l t a d o s , ya que l a s
manchas fueron observadas con mayor c l a r i d a d y e s t o ayudd a de
terminar mejor l o s v a l o r e s de r f para cada f r a c c i d n obtenida ,
Los r e s u l t a d o s obtenidos se muestran en l a s e c c i ó n c o r r e s - pondiente.
:. I. . -21-
DETERMINIICION FOTOMETRICA DE ESTEROLES.
Uno de los métodos f i c i c o q u f m i c o s más empleados en a n á l i -
s i s es e l de l a medida de l a absorc ibn 6 amisibn de energfa r a - diante . L a gran d i f u s i á n de e s t a t 6 c n i c a es consecuencia de -- los f a c t o r e s s i g u i e n t e s :
- E 1 amplio i n t e r v a l o dt3 l o n g i t u d e s de onda o de frecuen-
c i a s de energ ía r a d i a n t e y sus d i f e r e n t e s formas de i n -
t e r a c c i ó n con l a materia.
- ~a e x i s t e n c i a en e l mercado de instrumentos cada vez -- m8s p r e c i s o s .
- as v e n t a j a s i n h e r e n t e s a l m6todo.
Generalmente e s t a t é c n i c a de a n b l i s i s e s muy rápida , una
vez que se ha e s t a b l e c i d o is1 mhtodo, a no ser que se r e q u i e r a
un t ra tamiento previo para e l iminar i n t e r f e r e n c i a s . E s p o r lo
t a n t o u n método muy cbmodo para medidas r e p e t i d a s de u n mismo
c o n s t i t u y e n t e , como sucede en l a r u t i n a del a n á l i s i s de con--
t r o l . Además e l método e s , en g e n e r a l , a p l i c a b l e a l a detarmi
nación e x a c t a de cant idades de c o n s t i t u y e n t e s mucho menores -- que con los métodos gravim8tr icos 6 v o l u m k t r i c o s .
-
Se c r e e p o r lo g e n e r a l , equivocadamente, que los métodos
e s p e c t r o f o t o m é t r i c o s son a p l i c a b l e s s 6 i 0 a pequeñas’ cant idades
del c o n s t i t u y e n t e , p e r o nada más l e j o s de l a rea l idad .
con f r e c u e n c i a es u n ia6todo no d e s t r u c t i v o de l a muestra,
-22-
I:
r L.
l o que puede ser muy importante cuando e l c o n s t i t u y e n t e es muy
v a l i o s o , tial como sucede en l o s t r a b a j o s de i n v e s t i g a c i ó n con
c i er t as s u s t a n c i a s
Los métodos e s p e c t r o f o t o m é t r i c o s t i e n e n t a l importanc ia , -
que s o n los más u t i l i z a d o s en c a s i t o d o s los l a b o r a t o r i o s i n - -
d u s t r i a l e s , c l í n i c o s , de i n v e s t i g a c i ó n 6 de enseñanza.
E ner g í a R 19 d i a n t e .
1: I
I :
~a energfa r a d i a n t e SEI d e f i n e como la energ ía t r a n s m i t i d a
en forma ids r a d i a c i ó n elect .romagn6tica. Puede ser emit ida p o r
s u s t a n c i a s b a j o condic iones de gran e x i t a c i ó n , t a l e s como l a s
producidas p o r l a s a l t a s t m p e r a t u r a s Ó bien por l a 8 descargas
e l é c t r i c a c . E s t a e n e r g f a puede ser a b s o r b i d a , t r a n s m i t i d a , re-
f l e j a d a o r e f r a c t a d a p q r muchas s u s t a n c i a s en d i f e r e n t e estado
de aqreoaiz ión, s i l a radiac:iÓn i n c i d e n t e t i e n e una l n n g i t u d de
apropiada.
La r a d i e c i ó n e l e c t r o m a g n ~ t i c a e s una forma d e energ ía r a -
d i a n t e quiz posee n a t u r a l e z a doble:
1.- Coino f u n c i ó n de onda con .Lo cual e s t á n r e l a c i o n a d o s los
métodos de r e f l e x i ó n , r e f r a c c i 6 n e i n t e r f e r e n c i a cons--
t r iuc t iva y d e s t r u c t i v a .
2.- Coino pequeñas p a r t f c x l a s de e n e r g f a que r e c i b e n e l nom-
brle de f o t o n e s , que i n t e g r a n eL e s p e c t r o e lec t romagnét i - co con r a d i a c i o n e s tie d i f e r e n t e e n e r g í a y l o n g i t u d de -
-23-
I. onda.
F
I
Propiedades de l a s ondas.
I. 1 ['. . ,.
Y. A'" ..
['1
,.., I L..
Una onda e lect romagnét ica, como su nombre lo i n d i c a , e s t á
formada por u n componente e l é c t r i c o y uno magnético, que o s c i -
l a n en do!; p lanos p e r p e n d i c u l j t e s e n t r e sf y perpend icu la res a
l a d i r e c c i ó n de propagación de l a onda. L a s propiedades de l a s
ondas es tdn r e l a c i o n a d a s cain l a v e l o c i d a d de la l u z mediante - ia expres ión
c = h v = 3 x 1010 cm/s (
donde:
A = long- ,ud _ _ onda, que es -?I d is tanc-?I e n t r e dos pun-os co-
r r e p o n d i e n t e s en la onda.
u = f recuencia, es el número de ondas que pasan por un punto - f i j o en l a u n i d a d de tiempo, o sea en un segundo,
Propiedades de l a Energfa corno P a r t f e u l a .
El riiyo de l u z puede cons ide ra rse como una sucesión de f o
tones cuya energfa es p r o p o r c i o n a l a l a f r e c u e n c i a de l a r a d i a
c ión, y e s t á dada po r l a r e l a c i ó n :
- -
E = t ih
-24-
*, ,
F '
donde:
E = energfa ( e rg ios )
h = constante de Planck s 6 . 6 2 x erg S
= frecuencia en seg-1
S i despejamos v en ( 1 ) y sustituimos en ( 2 ) tenemos:
p e r o como l/l e s l a frecuencia en cm'l = 9 que se def i -
ne como ell número de ondas cuyas dimensiones son los recíprocos
de centfmetros.
Unidades Ida medición EmpLecidas en Espectroscopfa.
~ , , .
....
1 ... I.,I I
~ ...
I '
..,. I
. , .,
*< ).
.,. . ". .
Las iJnidades de medición que se emplean en espectroscopfa
soni
- L o n q i t u i d de onda: se exprese en centímetros y subdivisionas:
fimstrongs = 10" cm
Nanómetras = cm
micrómetros = cm
- Frecuencia: l a un idad de frecuencia es el H e r t z (c iclos/seg)
Ó bien Il/>
en cm-1
que es e l nfniero de onda o Kayser que est6 dado
- Energía! Las unidades de energía se dan en:
eleutrón-volts ( ev ). erg ios ( e r g )
ca lor ías ( cal. )
-25-
c 1 1
P '
*
r * I .
I '
t-. I
. .. .
Regiones clei Espectro Eiectromagnfitico.
un haz de energfa luminosa está formado por radiaciones - de d i ferente longitud de onda y frecuencia que abarcan e l es--
p e ct r o e l EI c t r oma g n fi t i co
De ac:uerdo con l a longitud de onda de l a s radiaciones se
forman l a s s iguientes regiones del espectro electromagnético.
1.- Rayos cdsmicos y rayos 8 . Son los rayos de menor longitud
de onda, pero con l a mayor energía y dan lugar a reaccio--
nes nucleares. ( O - 10-2 A 1,
2.- Rayos X. Su energía es elevada y producen transiciones de
e lectrones cercanos a i núcleo. ( 3 x - lo2 K 1. 3.- u l t rav io l e ta le jano, Corresponde a una energía suf ic iente
para oxci tar un e lectrón de u n i ó n 0 de su estado basal a l
orbital de antiunión aCx ( 1 0 - 200 nm. ).
4.- U l t rav io le ta cercano. Excita l o s e l e c t r onesT y l o s de no
u n i ó n n. ( 200 - 40C nm.).
5.- Visiblte. Como en e l caso del u l t rav io l e ta cercano, exc i ta
e lec trones i íy n. Las sustancias que se analizan son co l o r i
das. ( 400 - 750 nm. ). -
6.- In f rar ro jo cercano. En esta región se observan picos debi-
das a vibraciones de estiramiento entre e l hidrógeno y o--
t r o s Lkomos, asf como bandas de sobretono y bandas combina
das. Oebido a l a b a j a intensidad de las bandas, esta parte
del espectro es de poca u t i l i d a d . ( 0.75 - 2.5 urn.),
-
-26-
r "
L .
t .
~ ii"' ' i. i
I :
I " "
I , .
I -'
7.- I n f r a r r o j o medio o fundamental. Comprende e l e s p e c t r o si--
t u a d o e n t r e 2 .5 y 50 urn. Se observan v i b r a c i o n e s fundamen-
t a l e s . Entre 2.5 y 1 5 im e s t a regidn se emplea mucho en l a
determinacidn de g r u p o i j f u n c i o n a l e s orgánicos y p o r lo t a n - t o , e s i a p a r t e que t i e n e más a p l i c a c i o n e s en a n á l i s i s t a n - c u a l i t a t i v o s como c u a n t i t a t i v o s . Las absorc iones e n t r e 15
y 5 0 um se deben a f l e x i o n e s de átomos de peso re lat ivamen - t e a l t o 6 compuestos c f l c i o o s . E s t e e s p e c t r o no t i e n e mu--
cha a p l i c a c i ó n en qufmica a n a l f t i c a .
8 . - I n f r a r r o j o l e j a n o . La . longitud de onda de e s t a p a r t e del - e s p e c t r o se encuentra e n t r e 50 y 1000 um. En e l l a se obser
van v i b r a c i o n e s y r o t a c i o n e s de b a j a f recuenc ia . No t i e n e
actualmente a p l i c a c i o n e s en qufmica a n a l í t i c a .
-
9.- Microondas. Comprenden l a reg ión del e s p e c t r o e n t r e 0.1 y
1 0 0 cm. E n e s t a r e g i ó n , a l i g u a l que en e l i n f r a r r o j o l e j a
n o , s e observan v i b r a c i o n e s y r o t a c i o n e s de b a j a frecuen-
c i a .
-
10.- Radioondas. L a reg ión de l o n g i t u d de onda e n t r e 1 y 1000
cm r e g i s t r a l a s o r i e n t a c i o n e s de los e s p i n e s , fenómeno en
e l clue se basa l a resonanc ia magnetica nuclear y la de es - p f n e l e c t r ó n i c o .
La r e g i ó n del e s p e c t r o v i s i b l e r e p r e s e n t a e l c o l o r que ab - sorbe u n compuesto a determinada l o n g i t u d de onda. El color -- que se observa en e l compuesto es e l complementario de l que se
absorbió .
-27-
Leyes de l.a ESpectrofotometrfa.
L.
r '
"-
I
t :
I '
Cuando un haz de enerqfa radiante monocromático Po pasa - a través #de una solucibn, parte de esta energía se absorbe y - e l restn lec transmitida. ( En real idad, también una pequeña -- parte es re f le jada, por l o que Cuando se diseña un aparato pa-
ra hacer ostas mediciones se toma en cuenta este factor , de -- t a l forma que se elimine su intervención ).
S i l a energía radiante incidente t i ene longitudes de onda
en l a región v i s i b l e del espectro y e l medio a través del cual
t i ene que pasar, absorbe selectivamente c i e r tas longitudes de
onda, el color observado, corresponderá a l a s longitudes de on __ da de l a energía t.ransmitida.
La re lación entre el :rayo que sa le y e l incidente se deno
m ina transmitancia ( T ). -
P (1 ) 'r = ..-..-_
PO
La cantidád de l u z abisorbida es proporcional a l número de
moléculas capaces de absorber energfa: por l o tanto T disminu-
-28-
ye a medida que l a c o n c e n t r ~ c i ó n aumenta.
Si s e divide l a solucii6n en pequeñas s e c c i o n e s , en cada - s e c c i ó n SE' absorber6 una pequeña cant idad de r a d i a c i ó n F , que
e s proporcional a [U, l a cual est& dada por l a r e l a c i ó n : L
hP = - K P A V
I"
i: f ' i L .
, L. <I
,.. ."
donde:
K = constante de proporcional idad
P = energfa r a d i a n t e
E l s i g n o negat ivo se debe a que l a r a d i a c i ó n disminuye.
Si l < S S s e c c i o n e s s e haicen i n f i n i t a m e n t e pequeñas, l a ecua - cidn a n t e r i o r se puede dar en forma d i f e r e n c i a l ;
dP = -0 K dN P ( 4 )
5% i'ntegrarnos e n t r e los l f m i t e s Po Y P i Y cero y N Para
el niimero de moi6culas p r e s e n t e s en l a so iuc ión tenemos:
r eso1 v i en do 1 a i n t egr a1 t e nemo s :
como h] es proporcional a l a concentración y a l a l o n g i t u d
-29-
d e l a celda por donde atrauiesa e l r a y o t e n e m o s $
N = K ' b c
donde:
b = l o n g i t u d de l a ce lda
c = c o n c e n t r a c i á n de l a c i o l u c i b n
K' = c o n s t a n t e de p r o p o r c i o n a l l d a d
S u s t i t u y e n d o l a e c u a c i ó n ( 7 ) e n l a ( 6 ) y c o m b i n a n d o k,
K' y l a c o n v e r s i ó n d e l 1 o g : i r i t m o n a t u r a l a base decimal, se o b - t i e n e una c o n s t a n t e l l a m a d a a b s o t i v i d a d a ,
P l o g ---- = - a b c
Po
cambiandci d e s i g n o :
de l a e c u a c i ó n ( 1 ) .
P
i g u a l a n d o con ( 8 )
- l o g T = a b c
- l o g T = /I -30-
donde ñ = a b s o r b a n c i a = a b c
La ecuac ión ( 1 2 ) s e conoce como l e y de Lambert di Beer: el
v a l o r de ].a a b s o r t i v i d a d es c a r a c t e r í s t i c o de cada s u s t a n c i a y
se emplea cuando l a c o n c e n t r a c i ó n de l a s o l u c i ó n en e s t u d i o es - t 6 dada e n p a r t a s p o r m i i i 6 n ( ppm ) o en m i l i g ramos : p e r o s i
l a c o n c e n t r a c i ó n es molar , l a a se s u s t i t u y e po r E y ia cons - t a n t e se denomina a b s o r t i v i d s d molar.
En l o s a p a r a t o s más s e n c i l l o s l a e s c a l a e s t 6 dada en por-
c i e n t o de t r a n s m i t a n c i a :
$ T = ( T ) ( 1 0 0 ) (14)
para pasar de porc ient ,o de t r a n s m i t a n c i a a absorbanc ia se
emplea l a r e l a c i ó n :
En los a p a r a t o s más modernos, las l e c t u r a s se pueden o b t e I
n e r t a n t o en a b s o r b a n c i a como en t r a n s m i t a n c i a .
-31-
In-
Normalmente s e emplea como comprobante de - con l a Ley de Beer 6 como prueba de l a ' @ d e s v i a c i 6 n @ @ , una g r á f i - ca de A Ó de l o g T en función de l a concentrac ión , que s i r v e - también cctmo curva de c a l i b r a c i ó n para e l a n á l i s i s de d i s o l u - -
c ionec .
Algurias veces no s o n l i n e a l e s l o s g r á f i c o s de l a transmi-
t a n c i a Ó absorbancia en función de l a concentrac ián y e s t o pro - bablemente se debe a que no se cumple con algunas de l a s si---
guientes condic iones :
1.- La luz debe ser preferentemente monocromática Ó l a l o n g i -
t u d de onda debe e s t a r e n t r e l í m i t e s muy e s t r e c h o s .
2.- L a l o n g i t u d de onda de l a l u z empleada debe c o i n c i d i r c o n
e l m6ximo d e absorc ión de l a s o l u c i ó n . E s t o permite tam---
b ién conseguir l a s e n s i b i l i d a d Óptima.
3.- ~n debe haber i o n i z a c i h n , a s o c i a c i ó n , d i s o c i a c i d n o so lva-
t a c i 6 n del s o l u t o con :respecto a l a concentración 6 a l --- t i e m p o .
4.- ~a s o l u c i ó n e s muy concentrada, originando u n c o l o r muy i n - t e n s o , La l e y sólo se cumple h a s t a c ier to l í m i t e rn6ximo de
concentrac ión , c a r a c t e r í s t i c o para cada s u s t a n c i a .
-32-
Determinación de E s t e r o l e s .
Y ' i i.
I. "
I
.
I. I
.. " c x
*
2 .
Para determinar e l cointenido de e s t e r o l e s en l a f r a c c i ó n
i n s a p o n i f i c a b l e de los a c e i t e s obtenidos , se u t i l i z ó e l método
de Liebermann-Burchard que es ampliamente u t i l i z a d o en l a de--
terminación de c o l e s t e r o l .
fundament,^ de l método.- Con e l anhfdrido ac&.ico y e l h c i d o -- sulfúricci concentrado, e l c o l e s t e r o l forma compuestos de c o l o r
verde-parduzco i n t e n s o a temperatura ambiente. E n e s t e método
se ha pr«scindido de l a desprote in izec ibn .
Reactivo!; y a p a r a t o s n e c e s a r i o s :
- Reaiztivo del c o l e s t e r o l ; anhfdrido a c é t i c o 6.33fl en ác ido
a c é , t i c o g l a c i a l .
- A c i d o s u l f ú r i c o concentrado 98% de pureza.
- Soluc ión patrón de c o l e c t e r o l 300 mg/100 m l .
- S o l u c i ó n problema de cada f r a c c i ó n i n s a p o n i f i c a b l e 300 mg/
100 ml. ! - espec t rofotómetro .
Fuentes de error: La r e a c c i ó n e s muy s e n s i b l e a l a humedad por
l o que s610 h a n de u t i l i z a r s e p i p e t a s y t u b o s de ensaye l impios
y perfectamente secos . I PRECAUCION:
E v i t a r €11 c o n t a c t o del r e a e t i v o de c o l e s t e r o l c o n l a Diel .
-33-
Pro ce d i m i $2 n t o :
Para l a p r e p a r a c i ó n de l a c u r v a de c a l i b r a c i ó n , se p i p e t e a en
t u b o s de ensaye l o s i g u i e n t e :
t u b o sol. t i p o c l o r o f o r m o ( m l . 1 ( m l - )
1 O
2 o. 2
3 O. 4
4 O. 6
5 O. 8
6 1.0
1
O. 8
O. 6
0.4
o. 2
D. O
r e a c t i v o de c o l e s t e r o l
( m l . 1 4
4
4
4
4
4
n i cabo de 1 0 m i n u t o s se p i p e t e a en l a p a r e d de cada t u b o d i - -
r e c t a m e n t e sobre l a s u p e r f i c i e d e l l i q u i d o 1 m l . de B c i d o sul-
f l i r i c o concent rado. P o s t e r i o r m e n t e se co locan l o s t u b o s de en-
sayo p o r separado en un baño de agua a t e m p e r a t u r a ambien te y
se a g i t a . Despufis de 5 m i n u t o s como mínimo, se sacan los t u b o s
d e l baño de agua y a g i t a n d o v igorosamente se desprenden l a s -- p r o t e í n a s que p u d i e r a n haberse a d h e r i d o a l a p a r e d de los tu--
bos. Finei lmente se procede a l e e r l a s absorbanc ias , de jando re - posar a n t e s 30 m i n u t o s como mínimo p a r a que se d e s a r r o l l e y es - t a b i l i c e e l c o l o r . Se a j u s t a e l a p a r a t o con e l t u b o número uno
( a l loo$ de t r a n s m i t a n c i a ).
-34-
r ' i.
I [':
De l a s o l u c i ó n problerna de cada f r a c c i ó n i n s a p o n i f i c a b l e
preparada previamente, se tomaron 0.2 m l y se co locaron en t u -
bos de ensaye perfectamento l i m p i o s y s e c o s , poster iormente s e
adic ionaron 0.8 m l . de cloroformo y 4 m l . del r e a c t i v o de co--
l e s t e r o l . Despues de lo a n t e r i o r se p i p e t e a a cada tubo y d i - -
rectamente sobre e l n i v e l i j e l l i q u i d o , 1 m l . de ác ido sul f tr i -
co concentrado.
ñl i g u a l que en l a preparación de l a curva de c a l i b r a c i ó n
los tubos se deben c o l o c a r en u n baño de agua a temperatura am
b i e n t e y agi tando, después de c inco minutos como mfnimo se sa-
can del baño y se a g i t a n vigorosamente para desprender l a s pro
t e f n a c que pudieran haberse adherido a l a pared de los t u b o s ,
Después de d e j a r los tubos en reposo unos 30 minutos, se
-
-
procedió a l e e r las absorbonc ias en e l espectrofotdmetro u t i l i
zando una l o n g i t u d de onda de 540 nm. , que es l a regidn del es
p e c t r o en donde se present6 l a mayor absorción.
- -
L o s r e s u l t a d o s obtenildos se muestran en l a s e c c i d n c o r r e s - pondiente.
I d. , , ,
"35-
r. I! ii. .
[ ' . .
-36-
R EC'UL T A DOC
r
E l r end im ien to de los a c e i t e s o b t e n i d o s en base a l a can-
t i d a d de t iar ina de f r i j o l t r a t a d a e s el s i g u i e n t e :
ha r ina de f r i j o l
A l u b i i s
ñyocote
Flor lde mayo
Negro
g cle a c e i t e % de a c e i t e en base oib t e n i do e l a har ina t r a t a d a
33.2
22.6
17.3
21.6
1.66
1.13
0.87
1.08
E l r end im ien to de c r i s t a l e s o b t e n i d o s de cada f r a c c i 6 n i n - ,".~ s a p o n i f f c a b l e es e l s i g u i e n t e s
I < .
t i p o de g ide c r i s t a l e s ,,,< I
..< . f r i j o l
ñ l u b i a
iiyoco t e
F l o r de mayo
Negro
1.98
8.99
6.02
3.49
-37-
% de c r i s t a l e s en base a l ace i t e ob t en ido . -
5.96
39.80
34.82
16.19
i .
1. .
Para mayor comodidad E!n l a i n t e r p r e t a c i ó n de los r e s u l t a -
dos que se obtuvieron en leis s i g u i e n t e s pruebas, u t i l i z a r e m o s
l a s i g u i e n t e notac ión para l a s f r a c c i o n e s i n s a p o n i f i c a b l e s :
E x t r a c t o c l o r o f ó r m i c o clel i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de -- a l u b i (3.
E x t r a c t o c lorofórmico c le l i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de -- ñyo cote .
E x t r a c t o c l o r o f ~ r m i c o clel i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de -- Ayocote.
E x t r a c t o e t 6 r e o del i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de Ayocote.
E x t r a c t o c lorofórmico clel i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de -- F l o r de Mayo.
E x t r a c t o c lorofórmico clel i n s a p o n i f i c a b l e de l a c e i t e de -- F l o r ije mayo.
E x t r a c t o obtenido en l a i n e u t r a l i z a c i ó n de l i n s a p o n i f i c a b l e
del a c e i t e de F l o r de riayo,
E x t r a c t o e t é r e o del i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de F l o r de
mayo.
E x t r a c t o e t é r e o del i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de F l o r de
mayo.
F10 E x t r a c t o e t é r e o de l i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de f r i j o l - negro.
Fll E x t r a c t o c lorof6rmico del i n s a p o n i f i c a b l e del a c e i t e de - f r i j o l . negro,
* ' 1 ".. -38-
1 ' . ,.
1'' 1. .
I
I ". " I . I
I. . ..,.. ... I
P'
,. ..
L o s ipuntos de fusión tie los c r i s t a l e s o b t e n i d o s de las -- f r a c c i o n e s i n s a p o n i f i c a b l e s son los s i g u i e n t e s :
Fr a c c i ó n Punto de Fusión ' C
110-115
95-110
170-1 8 O
135-140
115-120
105-110
145-150
115-120
105-11 C
150-155
140-150
-39-
Deter mina ci6n cual it a t i v a de e s t e r o1 es .
L O S resul tados de l o prueba de Hegger-Ceilkowsky p r a c t i c a - das a l a s f racc iones insaponif icables e s e l s iguiente :
Fracción
F1
f2
F3
F4
F5
F7
F8
F9
F1 o
F1 1
F6
resul tado
+++ ++
+
++
+++ ++
+ ++
+ +
+
Cimbologfa: +++ color i n t m s o ++ color intermedio
+ color teniue
-40-
i [ ' C a n t i d a d de cristales o b t e n i d o s en c a d a fracción:
Fr 8 c c i ó n C a n t i d a d ( q )
1.98
2.52
0.1048
3.55
O. 78
3.2333
O. 8074
0.859
0.3550
3.0553
O. 4420
-41-
Pruebas de solubi l idad.
S O L V E N T E
Fracción
"1 i. J
"-1
I. .,
*I(
, ... I
1 . - eicetato de e t i l o
2 . - acetona
3 . - agua
4 . - tienceno
4 5 6 7 0
- + +
- ++ ++ - - ++ ++ - ++ ++ +
+ - ++ ++ - - - ++ ++ - - - ++ ++ - - - ++ ++
++ ++ - + - ++ ++ - ++ ++ -
- + - + - + - ++ ++
5 . - cloroformo
6 . - etanol
7 . - é t e r de petrá ieo
8.- metano1
+ pocci soluble ++ soiubie - insoluble
-42-
L .
1
. .,
..
CR0MATO~;RAFIA DE L A S FRACCIONES INSAPONI F I C A B L E S .
L O ’ S valores de r f obtenidos para l a s fracciones t rabaja - -
das son l o s s iguientes .
F r a c ci6 ii
P.”
.,...
r“‘
,,.. ,
\....
y
... .
P.,”
..,..I
F1
F1
F2
F3
F 4
F5
FG
F7
Fa
F9
Fl o
Fl 1 col e s t erol
soya
soya
r f
0. 645
O. 838
o. 709
0 . 7 4 2
0. 645
O . 645
0 . 7 0 9
0. 709
0. 742
-- O . 612
0.645
0. 645
O. 643
0. 7 0 9
observacion con iodo,
:. +
+ + +
+
+ +
+
obser vacidn con 1 . u . v .
+
+
-43-
L .
i " ' L .
p' ', '1 1. ,
RESULThDOC DE Lh DETERMINACION FOTOflETRICh DE ESTEROLES.
Lecturas iobtenidas en l a curva de calibración:
t u b o concentración en concentración el t u b o ( in!) ) mg / m i .
O
0.1
o. 2
0.3
o. 4 0.5
O
0.016
O. 033
O. 050
O. 066
O. 083
absorbancia
ajustando l o s d a t o s por regresión l i n e a l se obtiene:
cor r e l a c i ó n = 0,9838
p 13 n d i en t e I 5.3736
i ii t er ce p t o = 0.0348
l a ecuncitin de l a r e c t a ya ajustada es :
Y = 5.373E1 X + 0.0348
O
0.125
0.240
0,337
0.397
o. 443
-44-
Las 1ectu:cus obtenidas p a r a l a s d i f e r e n t e s f r a c c i o n e s insapo-
n i f i c a b l e s y su correspondiente concentración de e s t e r o l e s es
l a s iguienter
Fr a i3 c i ó n Absorbancia
0.085
O. 45
O. 32
0.105
o. o9
O. 05
O. 48
Concentración w/ml
O. 0093
O. 077
O. 053
O. 013
0 . 0 1 0
O. 003
O. 083
-----
-45-
L .
1.: I' '.
i.
1.'" I.
I ':: i i'::
[ ' Y DISCUSION
-46-
~1 oorcentaje de ace i t e de l o s cuatro t i pos de phaseolus
trabajados no presenta u n a variación muy considerable, y a que
a l u b i a presento l a mayor cantidad (1.66%) y el f l o r de mayo l a
menor (O.€ l7$) . En comparación con l a soya ( 2 5 - 3 0 $ ) , estos por - centajes do ace i t e resultan demasiado bajos.
Con respecto a l porcentaje de c r i s t a l e s obtenidos de l a - f racción insaponif icable, el f r i j o l ayocote presenta e l mayor
contenido y a l u b i a e l menor.
L o s puntos de fwsión de l a mayorfa de l a s fracciones insapo - n i f i cab l e s osci lan entre 110 y 1 2 0 ° C asf como entre 145-155'c,
en comparüción con e l co l es te ro l (p.f. 149'C) y e l - s i toste-
rol ( p . f . 1 4 0 O C ) se puede establecer que aún no estando t o ta l - mente puri f icadas estas fracciones, se encuentran dentro de los
puntos de fusión de los estero les mhs importantes.
ñl practicar l a s pruebas de solubil idad, se observd que to -
das l a s fracciones obtenidas son solubles en benceno y cloro--
formo, esto t a m b i é n es acorde con l a so lubi l idad de los ester6 - l e s en l o s solventes mencionados.
De los resultados obtenidos por cromatograffa en placa, se
u t i l i z ó como patron a l co lestero l y también ace i t e de soya -- ( f racc ion insaponif icable de esta) pudiendo observarse que va-
r i a s de los fracciones muestran manchas caracter is t icas de es-
t o s compuesto s.
De l a s pruebas cua l i ta t i vas paro estero les , practicadas a - l a s fracciones insaponif icables, l a s que dan colorociones más
intensas s80n l o s insaponif icables de a l u b i a y f l o r de mayo, -- sin embarqo, estas pruebas no cmncuerdan con l a s cuantitat ivas
-47-
L
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r" 1.
1'
3 : ~ I"'
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y o que en e s t o s Úl t imos , y u t i l i z a n d o u n método f o t o m é t r i c o en
l a d e t e r m i n a c i ó n de es te ro l e s , l a f r a c c i ó n en l a que se d e t e c t ó
u n mayor c o n t e n i d o de e s t e t i p o de compuestos fué l a f r a c c i ó n - i n c a p o n i f i c n b l e d e l a c e i t e de f r i j o l a y o c o t e y l e s i g u i ó l a de
f l o r de Mayo, s i e n d o l a f r a c c i ó n de a l u b i a la que c o n t e n í a e l
más b a j o p o r c e n t a j e de t o d o s .
-48-
CON CL US I ONES
-49-
Se puede establecer que las f racciones insaponi f icables - trabajadas contienen por l o menos dos compuestos ca rac t e r i s t i -
comente s imi lares, tomando como base l a s pruebas rea l i zadas , 'i
aunque l a cantidad de estas fracciones es bastante var iable , - como l o dernostrd el aná l i s i s cuant i tat ivo de estero les ,
Para confirmar esta situlación es necesario hacer un aná l i s i s
más detal l~ado, ya que en algunos casos l a l im i tac ión en el u s o '
de nlgunos reac t i vos adecuados no permitid l a purie icacisn de
determinados compuestos int,ermedios o bien formar c i e r t os com-
puestos di3 l o s que S i se di.spone de infarmacion en la l i t e r a t u
ra . -
-513-
RÍ: SUMEN
-51-
I .
K' ', Y *i. ,.
I"' ..
t :
I C :
Dpdo que e l e s t u d i o d e l f r i j o l s o l o se h a l i m i t a d o a los
a s p e c t o s i f í s i c o s d e l grano, as! como a c i e r t o s c o n s t i t u y e n t e s
t a l e s com(~ t aminoácidos, azúcares , p r o t e í n a s e t c . , en e l ore-
s e n t e t r a b a j o se h i z o un b r e v e e s t u d i o de l a f r a c c i ó n i n s a p o n i ..
f i c a b l e de dos t i p o s de - Pheiseolus v u l g a r i s - L y Phaseo lus c o c c i
neus L. - - En l o F r a c c i ó n i n s a p o n i f ' i c a b l e de l a s leguminosas ( s i e n d o
l a soya l a mas i m p o r t a n t e et1 r e s p e c t o ) se han encon t rado com-
p y e s t o s die n o m i n a do s e s t e r ai. e S e
L O S e s t e r o l e s son a l c o h o l e s s u p e r i o r r e s cuya e s t r u c t u r a
b á s i c a es e l e s q u e l e t o d e l c o l e s t e r o l , pueden e n c o n t r a r s e es-
t e r o l e s t a n t o en t e j i d o s a n i m a l e s como en v e g e t a l e s ( e s t o s Ú1 - t i m o t a m b i 6 n son l l a m a d o s f i t o s t e r o l e s ) , y e n t r e e l l o s solo
hay d i f e r e n c i a s en los s u s t i t u y e n t e s que poseen, o b i e n en l a
p o s i c i ó n y/o número de d o b l e s en laces . T a m b i h l o s e s t e r o l e s
pueden e n c o n t r a r s e en la n a t u r a l e z a e n fo rma l i b r e o e s t e r i f i - cada.
De los compuestos concic idos de e s t e t i p o , e l c o l e s t e r o l
es con mucho e l e s t e r o 1 m6t3 i m p o r t a n t e . E s t e compuesto s e en-
c u e n t r a en t e j i d o s an imales , e s p e c i a l m e n t e en e l c e r e b r o y en
los c á l c u l o s b i l i s z e s y su i m p o r t a n c i a es t a l , que una acumula
c iÓn de 61 en l a s a r t e r i a s p r o v o c a una enfermedad l l a m a d a a r t e
r o e s c l e r o s i s . También es i m p o r t a n t e s e ñ a l a r que e l c o l e s t e r o l
es p r e c u r s o r d e l que d e r i v a n muchos c o r t i c o i d e s , hormonas se-
x u a l e s y a n t i c o n c e p t i v o s y que t o d o s e s t o s compuestos t i e n e n
como e s t r u c t u r a c a r a c t e r í s t i c a a i ciclopentanoperhidrofenantre
no. misma que poseen los c»mpuestos denominados e s t e r o l e s .
-
-
-52-
L
nunado al estudio de Xa fracción insaponif icable de l a s
leguminosas anteriormente mencionadas, en e l presente trabajo
t a m b i 6 n s e hace u n estudio ‘del contenido de es te ro l es en l o s
géneros de Pheseolus antes descritos, para poder tener una -c
ideo de su contenido en aquellos.
Para l a obtención de l a fracción insaponif icable s e sigui6
l a metodoloqfa que a continuación s e describe;
h a r i n a de f r i j o l
obtención del ace i t e
E: sapo n i f i ca c i ó n
r . 1’ I. .
obtenc 1
Ón de los jabones de calc
, extraccidn de l a fracción
insaponif icable
1 precipi tacidn con acetona
I
O
obtenci6n de l a fracci6n insaponif icable
1 pruebas cua l i ta t i vas y cuantitat ivas
-53-
p"
E': E: ': i :
[ *
LJna vez obtenidos los c r i s t a l e s de cada fracción insapo-
n i f i c ab l e , se l e s hic ieron pruebas de solubi l idad, puntos de
fusi6n y l a s pruebas cua l i ta t i vas para demostrar l a presencia
de estero les . Para esta determinación s e u t i l i z ó l a reacción
de Hegger-Cailkovsky.
Tambiéri l a s fracciones obtenidas se sometieron a un trata-
miento de cromatograffa en p l a c a asf como a un método fotomé-
t r i c o paral determinar l a presencia de es te ro l es cuantitat iva-
mente.
E1 método fotomhtrico ut i l i zado, es e l que se emplea co-
munmente para l a determinación de co l es te ro l en sangre, y a que
o f rece l a ventaja de que no es necesario prec ip i tar proteínas,
y a que estas no in t e r f i e r en en l a determinación.
De l o s resultados obtenidos, puede establecerse que el f r i - j o l a l u b i a contiene e l nibs a l t o porcentaje de ace i t e que l o s
demes t i p o s de f r i j o l con l o s que se trabajo. También se puede
establecer que l a cantidad de c r i s t a l e s obtenidos para cada - f racción no est6 en función de l a cantidad de ace i t e obtenido,
y a que e l f r i j o l ayocate a r r o j o el más s i t o porcentaje de c r i s
t a l e s , en base a l a csntidad de a c e i t e que de 61 se obtuvo.
-
A l determinar cuantitativamente l a presencia de estero les ,
l o s f r i j o l e s a l u b i a y f l o r de mayo resultaron ser los que más
intensamente daban 10 prueba, sin embargo e s t o no concordó con
l o s resultados obtenidas cuantitativamente por e l método f o t o -
mét r i co . n i r e a l i z e r l a s pruebas de solubi l idad, se puede establecer
que l a s fracciones obtenidas son bastante solubles en benceno
-54-
L.
c: i c: c ,,
.,
7 '
y cloroformo, esto concuerda con l a so lubi l idad indicada en i-c
l a 1iteraLura p a r a los esteroles. ñlgunas fracciones obtenidas
muestran poca solubi l idad en acetato de e t i l o y en é te r de pe-
t r ó l e o y presentan insolubi l idad en metanol, agua y acetona.
171 r ea l i z a r l a cromatografía en placa se u t i l i za ron como - estandares a l co l es te ro l y a l a f racción insaponif icable de l a
soya. En 1.0s resultados obtenidos de esta prueba se puso de ma
n i f i e s t o que algunas fracciones muestran manchas semejantes o
Ins mostradas por l o s estandares.
-
De 13 determinación cuanltitativa de estero les , ut i l i zando
un m6todo fohombtrico se l o g r ó establecer que l a s fracciones
F2 y F3 scin les que presentan e l mayor contenido de esteroles,
sin embargo en comparación con l a s o y a , esta cantidad sncontra
da pa ra l a s fracciones trabajadas resulta ins ign i f i cante , ya
que en 10 soyn se determinaron ocho veces m4s es te ro l es que en
l o fraccidn F2, que f u b l a que arro jó e l resultado más a l t o en
este t i p o de compuestos.
-
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i"' I. ,
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-55-
CON í1 US I ON
-56-
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Se puede e s t a b l e c e r que e l o b j e t i v o de e s t e t r a b a j o se -- cumplió aunque no t a n s a t i s f a c t o r i a m e n t e como s e hubiera desea - do, d e b i d o a que hubo condic iones que no e s t u v i e r o n a nuestro
a l c a n c e para l o g r a r l o .
S i n embargo, se puede e s t a b l e c e r que l a cant idad de a c e i t e ,
c r i s t a l e s y e s t e r o l e s contenidos en l o s cuatro t i p o s de Phaseo
lus t r a b a j a d o s es m u c h f s i m c i menor a l o s que e x i s t e n en l a s o y a
leguminosa que s i g u e s iendo mucho más importante en l o s aspec-
t o s estudiados .
-
t. ,.
-57-
F '
I .
* '
L
L. ,
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Io: -!5 9-
