Isolation and Characterization ofIsolation and Characterization of

Bacteria which Tolerate High pH Bacteria which Tolerate High pH

(( ＞＞ 10) and Produce Protease10) and Produce Protease 報告學生： 林沛穎、 譚皓仁報告學生： 林沛穎、 譚皓仁 報告日期：報告日期： 2003.2003.12.2912.29

前言前言 Alkaliphile Alkaliphile ：：能生長在能生長在 pHpH 值＞值＞ 99 ，但無法生長於，但無法生長於 pHpH 值值

＜ ＜ 6.56.5 的微生物 的微生物 包括： 包括： (1)(1) BacillusBacillus species , species , Micrococcus Micrococcus species, species,

PseudomonasPseudomonas species, species, Streptomyces Streptomyces speciesspecies

(2) (2) 酵母菌酵母菌

(3)(3) 真菌真菌

AlkaliphileAlkaliphile 較容易從鹼性環境中分離出來，但也可從一般 較容易從鹼性環境中分離出來，但也可從一般

土壤中找到 土壤中找到

AlkaliphilesAlkaliphiles 的應用：的應用：

大多用於應用工業大多用於應用工業

其所產生的 其所產生的 alkaline cellulase alkaline cellulase 或 或 alkaline protease alkaline protease 可作可作

為生物清潔劑為生物清潔劑

細菌的 細菌的 alkaline protease alkaline protease 的特質為：的特質為：

(1) (1) 在高在高 pHpH 值（值（ e.g,10e.g,10 ）具有高度活性）具有高度活性

(2) (2) 廣泛的受質專一性廣泛的受質專一性

(3) (3) 最佳的作用溫度為最佳的作用溫度為 60℃60℃

實驗目的實驗目的

從環境中分離出耐鹼且會產生 從環境中分離出耐鹼且會產生 protease protease 的微生物的微生物

實 驗 步 驟實 驗 步 驟

分離耐鹼菌分離耐鹼菌

以鹼性培養基作分離以鹼性培養基作分離

檢測是否會產 檢測是否會產 proteaseprotease

以 以 skim milk agar skim milk agar 培養 觀察菌落周圍有無透明環培養 觀察菌落周圍有無透明環

將 將 skim milk agar skim milk agar 上的菌落再接到鹼性培養基作確認上的菌落再接到鹼性培養基作確認

Alkaline mediumAlkaline medium 的成分的成分 (g / L)(g / L) ：： Glucose / Soluble starch………………………….10g Glucose / Soluble starch………………………….10g

Yeast extract……………………………………….5g Yeast extract……………………………………….5g

Peptone……………………………………………..5gPeptone……………………………………………..5g

KK22HPOHPO44…………………………………………….1g…………………………………………….1g

MgSOMgSO44 · 7H · 7H22O…………………………………...0.2gO…………………………………...0.2g

NaNa22COCO33 ……………………………………………10g ……………………………………………10g

Agar………………………………………………..20gAgar………………………………………………..20g

Skim milk agarSkim milk agar 的成分的成分 (g / L)(g / L) ：：

Skim milk powder………………………………..10gSkim milk powder………………………………..10g

Yeast extract…………………………….…………1gYeast extract…………………………….…………1g

Agar……………………………………………….15gAgar……………………………………………….15g

結果結果

分離純化耐鹼菌分離純化耐鹼菌

檢測是否產生 檢測是否產生 proteaseprotease

菌株菌株 (1)(1) 、、 (3)(3) 菌落周圍有透明環菌落周圍有透明環

菌株菌株 (K)(K) 菌落周圍有透明環菌落周圍有透明環

真菌菌落周圍有透明環真菌菌落周圍有透明環

革蘭氏染色革蘭氏染色

菌株菌株 (1)(1)

菌株菌株 (3)(3)

菌株菌株 (K)(K)

革蘭氏染色結果革蘭氏染色結果 (1)(3)(K)(1)(3)(K) 菌皆為菌皆為 G(+)G(+) 球菌球菌

推測其皆為推測其皆為 Micrococcus Micrococcus spp.spp.

討論討論

要篩耐鹼的細菌並非一定要在很鹼的環境中要篩耐鹼的細菌並非一定要在很鹼的環境中

細菌在鹼性的環境下生長較慢細菌在鹼性的環境下生長較慢

有些菌產生的有些菌產生的 proteaseprotease 量可能較少，如量可能較少，如 KK 菌菌

參考文獻參考文獻

Koki Horikoshi, Alkaliphiles: Some Applications of Their Products for Koki Horikoshi, Alkaliphiles: Some Applications of Their Products for

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