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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA
BRENO NOGUEIRA SILVA
INFLUÊNCIA DA INTERFACE E DA PERFURAÇÃO DO LEITO RECEPTOR NA INCORPORAÇÃO DE ENXERTOS
AUTÓGENOS. AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA EM CÃES.
INFLUENCE OF THE INTERFACE AND THE PERFORATION OF THE RECIPIENT BED ON THE INCORPORATION OF
AUTOGENOUS GRAFTS. HISTOLOGICAL EVALUATION IN DOGS.
PIRACICABA 2017
BRENO NOGUEIRA SILVA
INFLUÊNCIA DA INTERFACE E DA PERFURAÇÃO DO
LEITO RECEPTOR NA INCORPORAÇÃO DE ENXERTOS AUTÓGENOS. AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA EM CÃES.
INFLUENCE OF THE INTERFACE AND THE PERFORATION OF THE RECIPIENT BED ON THE INCORPORATION OF
AUTOGENOUS GRAFTS. HISTOLOGICAL EVALUATION IN DOGS.
Tese apresentada à Faculdade de Odontologia de Piracicaba da Universidade Estadual de Campinas como parte dos requisitos exigidos para a obtenção do título de Doutor em Clínica Odontológica - Área de Concentração em Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Faciais
Thesis presented to the Piracicaba Dental School of the University of Campinas in partial fulfillment of the requirements for the degree of Doctor in Dental clinic, in Oral and Maxillofacial Surgery area.
Orientador: PROF. DR. JOSÉ RICARDO DE ALBERGARIA BARBOSA
ESTE EXEMPLAR CORRESPONDE À VERSÃO FINAL DA TESE DEFENDIDA PELO ALUNO BRENO NOGUEIRA SILVA, E ORIENTADA PELO PROF. DR. JOSÉ RICARDO DE ALBERGARIA BARBOSA
PIRACICABA 2017
DEDICATÓRIA
Aos meus pais, JOSÉ CARLOS FERREIRA DA SILVA e MARIA LÚCIA
NOGUEIRA FERREIRA, que me dão educação, carinho e amor incondicionais.
Vocês foram os melhores exemplos de caráter, honestidade, dedicação e
persistência que eu tive.
À minha irmã, ALINNE NOGUEIRA SILVA COPPUS , pelo carinho,
confiança, pelo incentivo e por estar por perto sempre que preciso. Você sempre
será um exemplo a ser seguido.
Aos meus sobrinhos, JOÃO PEDRO NOGUEIRA SILVA COPPUS E
LUCAS NOGUEIRA SILVA COPPUS , por sempre me trazerem alegrias,
esperanças e me lembrar de que a felicidade está nas coisas mais simples da vida.
AGRADECIMENTOS
Agradeço primeiramente a Deus , ao meu Anjo da Guarda, Orixás e
Entidades protetoras, por me guiarem, por iluminarem meus caminhos, por estarem
sempre ao meu lado, nas conquistas e nas dificuldades de minha vida.
À Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) , pela oportunidade
de desenvolvimento das minhas atividades de pós-graduação na Faculdade de
Odontologia de Piracicaba.
Ao Prof. Dr. Guilherme Elias Pessanha Henrique , Diretor desta
instituição, muito obrigado.
À Profa. Dra. Karina Gonçalves, Coordenadora do Programa de Pós-
Graduação em Clínica Odontológica, meus sinceros agradecimentos.
Ao meu orientador Prof. Dr. José Ricardo de Albergaria Barbosa, pela
convivência, pela amizade e pelo modo descontraído como o senhor conduz as
atividades diárias. Hoje tenho certeza que o senhor cruzou meu caminho por um
motivo muito especial. Seus ensinamentos vão muito além das técnicas cirúrgicas e
talvez isso seja o mais importante na formação de um professor.
Ao Prof. Dr. Márcio de Moraes, Chefe do Departamento de Diagnóstico
Oral. Obrigado pelos ensinamentos e pela orientação durante meu curso de
mestrado.
À Profa. Dra. Luciana Asprino, pela amizade, pelos ensinamentos, pelo
exemplo de profissional, pelo modo atencioso como lida com os pacientes e nos
orienta durante o planejamento dos casos. Obrigado pela confiança depositada em
mim.
Ao Prof. Dr. Alexander Tadeu Sverzut, pela amizade, respeito, pelos
ensinamentos e por estar sempre disponível para nos atender, discutir os casos e
sanar nossas dúvidas.
Aos Prof. Dr. Joao Sarmento, Prof. Dr. Cláudio Ferreira Nóia e Prof.
Dr. Rafael Ortega Lopes , por terem participado da banca de qualificação, fazendo
correções e sugestões que resultaram na melhora deste trabalho.
Aos meus colegas de pós-graduação: Erick Alpaca, Vitor Fonseca,
Renata Sagnori, Luide Michael, Christopher Cadete, Rodrigo Chenu, Carolina
Ventura, Antônio Lanata, Heitor Fontes, Andrés Cáce res, Gustavo Souza,
Zarina das Neves , Pauline Magalhães, Éder Sigua, Renato Ribeiro, Fabi ano
Menegat, Clarice Maia, Danillo Rodrigues, Douglas G oulart, Milton Cougo,
Andrezza Lauria, Raquel Medeiros, Leandro Pozzer, E vandro Portela, Valdir
Cabral, Castelo Cidade, Marcelo Breno e Darklilson Santos. Obrigado pelos
momentos que passamos juntos e pelo aprendizado compartilhado.
Às funcionárias do Centro Cirúrgico da FOP-UNICAMP, Edilaine Cristina
Mendes Felipe, Patrícia Cristina Camargo e Nathalia Lopes Tobaldini, obrigado
pela ajuda de vocês em toda logística que envolve o atendimento de pacientes na
Área de Cirurgia da FOP-UNICAMP. Estendo meus agradecimentos aos demais
funcionários da Faculdade de Odontologia de Piracicaba.
À Faculdade de Odontologia da Universidade Federal de Juiz de Fora
(UFJF), instituição onde me formei Cirurgião-Dentista, local onde tudo começou,
onde me despertou o interesse sobre a área da cirurgia, onde tive exemplos de
profissionais dedicados que me fizeram sair da zona de conforto e buscar novos
horizontes.
Aos Prof. Renato Francisco Visconti Filho, Prof. Lucas Nardelli
Monteiro de Castro e à Profa. Neuza Maria Souza Pic orelli Assis , professores da
Área de Cirurgia da Faculdade de Odontologia da Universidade Federal de Juiz de
Fora, pelo aprendizado durante minha graduação e pelo incentivo de seguir a
carreira na área de cirurgia.
À Faculdade de Odontologia de Araraquara, FoAr-UNESP , instituição
onde tive a oportunidade de cursar minha Residência em Cirurgia e Traumatologia
Buco-Maxilo-Facial. Estendo meus agradecimentos a todos os funcionários dessa
instituição, em especial aos funcionários do Departamento de Cirurgia.
Ao Prof. Dr. Mário Francisco Real Gabrielli e à Profa. Dra. Marisa
Aparecida Cabrini Gabrielli por terem me formado um Cirurgião Buco-Maxilo-
Facial, por todos os ensinamentos e por todos os momentos de convivência juntos.
Saibam que vocês foram e sempre serão exemplos a serem seguidos. Exemplos de
pessoa, de profissional e de professor. O caráter, a dedicação, o cuidado com os
pacientes, o compromisso com o aprendizado do aluno, a busca pelo aprimoramento
constante e a simplicidade no tratamento das pessoas, foram coisas que eu só
presenciei quando visitei outro serviço de Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-
Facial fora do Brasil. Enquanto fazemos parte de uma especialidade repleta de
vaidades, egocentrismo e individualidades, eu olho para vocês e vejo isso tudo não
reflete competência e reconhecimento. Eu me sinto um privilegiado por ter tido vocês
como professores. Agradeço muito a Deus por ter me colocado próximo de vocês,
sempre disponíveis, sempre dispostos a me ouvir, sempre dando conselhos e me
orientando. Eu tenho uma enorme dívida com vocês e sempre estarei disponível
para o que precisarem. Obrigado por terem sido meus professores, pelo respeito e
pela amizade. Muito obrigado!
Aos Prof. Dr. Eduardo Hochuli Vieira, Prof. Dr. Valfrid o Ântonio
Pereira Filho, Prof. Dr. José Scarso Filho e Prof. Dr. Marcelo Silva Monnazzi,
por terem me formado um Cirurgião Buco-Maxilo-Facial, pela amizade, pelo carinho,
pelos ensinamentos, pelos conselhos, por terem sido minha família enquanto estive
em Araraquara. Vocês também são exemplos onde me espelho diariamente. Vocês
me ensinaram que existe uma grande diferença entre ser cirurgião e simplesmente
operar um paciente. Vocês foram mestres e são amigos que poderei sempre contar
Muito obrigado!
À minha família, José Carlos Ferreira da Silva , Maria Lúcia Nogueira
Ferreira , Alinne Nogueira Silva, Ricardo Dezze Coppus, João P edro Nogueira
Silva Coppus e Lucas Nogueira Silva Coppus . Vocês são a base de tudo o que
eu construí. Obrigado pelos conselhos nas tomadas de decisões, por aceitarem e
entenderem minhas escolhas, pelo incentivo no crescimento profissional, pelo apoio
nos momentos difíceis e por compartilhar os momentos de alegria.
À Juliana Schiavon Teixeira Soares e sua princesinha Sofia Soares
Cataldo . Sou muito grato a Deus por ter colocado vocês duas em minha vida e ter
me permitido conviver com vocês. Você, Juliana, me ensinou que em nossa vida
devemos dar valor ao que realmente importa: amizade, carinho, confiança, amor e
família. Enquanto a Sofia me mostrou o amor puro, baseado nos pequenos gestos,
num sorriso, num abraço e em diversas outras demonstrações de afeto.
Aos meus tios, também Cirurgiões-Dentistas, Ubaldo Nogueira Silva e
Paulo Nogueira , pelo incentivo na profissão, por torcerem por mim e por estarem
sempre dispostos a ajudar nos momentos que precisei.
Aos meus primos, em especial Guilherme de Paula Nogueira e Tiago de
Paula Nogueira , pela amizade, carinho e incentivo. Apesar da distância, vocês são
muito importantes para mim e podem contar sempre comigo.
Aos meus amigos de infância Thiago Moura Henriques Mendonça,
Hugo Moura Henriques Mendonça, Horácio Moreira Dias , André Luiz Rodrigues
Miranda, João Bosco Cardoso, Bruno Fagundes Muniz, Danilo Bignoto
Gouvea, Adriano Domith e Emmerson Badaró , obrigado pela amizade sincera,
pela convivência e pelas alegrias. Desculpem-me pelas ausências e pelas faltas.
Saibam que com vocês eu passei grande parte dos melhores momentos de minha
vida! Espero que em breve seja possível reencontrá-los e desfrutar novamente de
momentos assim.
Aos meus amigos Waldner Ricardo Souza de Carvalho, Henrique do
Couto de Oliveira, Ruy de Oliveira Veras Filho, Mar cos Vinícius Mendes
Dantas, Francesco Salvatore Mannarino, Sérgio Alves de Oliveira Filho, Adonai
Peixoto Cheim Junior, Everson Raphael Watanabe e Vi tor Augusto Leite ,
companheiros de residência. Agradeço pela amizade, pelos ensinamentos, pelos
conselhos e ajuda durante minha formação.
Aos amigos Cirurgiões-Dentistas, Francisco Cerdeira Filho, Thiago
Borges Mattos, Pedro André Alves, Estevão Carvalho, Glauco Siqueira e
Ramiro Beato , pelas oportunidades que me deram, pelos conselhos profissionais e
pela amizade sincera. Sem o incentivo de vocês eu não teria chegado até aqui.
A todos aqueles que de forma indireta contribuíram para a realização
dessa conquista, meu muito obrigado!
RESUMO
Um dos aspectos mais importantes para o sucesso dos implantes dentários é a presença de osso vital em quantidade suficiente nos maxilares. Isso envolve não somente altura óssea, como também espessura adequada na crista alveolar. A busca pelo correto posicionamento tridimensional dos implantes dentários tem aumentado a necessidade de reconstrução dos maxilares por meio de enxertos ósseos. Dentre os fatores que estão relacionados ao sucesso dos enxertos ósseos, podem ser destacados: orientação do enxerto, condições do leito receptor e revascularização. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da interface dos enxertos cortico-medulares autógenos (interface cortical-cortical e interface medular-cortical) e a influência da perfuração do leito receptor na incorporação dos blocos ósseos. Para o presente estudo, foram utilizados 6 cães com raça indefinida, machos, sem distinção de raça, provenientes do biotério da Unicamp. Após tricotomia e anti-sepsia com polivinilpirrolidona iodo a 10% foram obtidos 4 enxertos cortico-medulares de 8mm de diâmetro da calota craniana de cada animal (região parietal). Os enxertos foram fixados com parafusos na região frontal sendo distribuídos aleatoriamente em 4 grupos: Grupo I – face cortical do enxerto em contato com o leito íntegro, Grupo II – face cortical do enxerto em contato com leito perfurado, Grupo III – face medular do enxerto em contato com leito íntegro e Grupo IV – face medular do enxerto em contato com leito perfurado. Os períodos de sacrifício foram de 3 e 6 semanas, sendo removidas as peças e obtidas lâminas histológicas para análise descritiva. Na avaliação em 3 semanas houve predominância de tecido conjuntivo com pouca quantidade de tecido osteóide na interface enxerto-leito receptor para os Grupos I e II. Os Grupos III e IV apresentaram tecido osteóide e osso neoformado. A perfuração do leito induziu à maior formação óssea nos Grupos II e IV. Na avaliação com 6 semanas, a região de interface nos Grupos I e II apresentou grande quantidade de osso neoformado e pouca quantidade de tecido conjuntivo. Nos Grupos III e IV, o enxerto ósseo estava incorporado ao leito por meio de osso maduro, sem presença de tecido conjuntivo. Ao final de 6 semanas, a perfuração do leito receptor não influenciou na formação óssea em ambas as orientações do bloco ósseo. Este estudo concluiu que o tratamento do leito acelera o processo de incorporação dos enxertos e que a orientação dos blocos com a face medular em contato com o leito resulta em incorporação do enxerto com maior qualidade (osso maduro), sugerindo condição clínica mais segura para instalação de implantes dentários.
Palavras-chaves: Transplante ósseo. Osso compacto. Osso esponjoso.
ABSTRACT
One of the most important aspects for the success of the dental implants is the presence of vital bone in sufficient volume in the jaws. This involves not only height, but also adequate width in the alveolar crest. The pursuit for correct three-dimensional positioning of dental implants has increased the need for reconstruction of the jaws with bone grafts. Among the factors that are related to the success of the grafts, we can highlight the orientation of the graft, recipient bed and revascularization. The purpose of this study was to evaluate the influence of the graft interface and the perforation of the host bed on the incorporation of autogenous blocks grafts based on histologic analysis. 6 adult mongrel dogs, males, without distinction of race, were included in the study. Under general anesthesia, after trichotomy and antisepsis, blocks bone grafts with 8 mm diameter were obtained from parietal bone of each animal. The grafts were fixed with screws in the frontal bone being randomly distributed into 4 groups: Group I - the cortical face of graft in contact with the intact bed recipient, Group II - the cortical face of graft in contact with perforated bed, Group III – the medullar face of graft in contact with intact bed recipient and Group IV – the medullar face of graft in contact with perforated bed. 3-week and 6-week euthanized period were chosen for histological evaluation. Hematoxylin-eosin was used in a histologic routine technique. The evaluation in 3 weeks showed a predominance of connective tissue with little amount of osteoid tissue in the graft-bed interface for Groups I and II. The Groups III and IV presented osteoid tissue and newly formed bone. The perforation of the bed resulted in bone formation more prominent in Groups II and IV. In the evaluation at 6 weeks, the region of interface in Group I and II showed a great amount of newly formed bone and a small amount of connective tissue. In groups III and IV, the bone graft was incorporated to the bed through mature bone, without the presence of connective tissue. At the end of this period, the drilling of the recipient bed did not exert any influence on bone formation in both orientations of the bone block. This study concluded that the treatment of the bed can accelerate the process of graft incorporation and the orientation of the blocks with the medullar face in contact with the bed resulted in integration of the graft with better quality (mature bone), suggesting clinical situation with greater security for installation of dental implants.
Key-words: Bone graft. Cortical bone. Cancellous bone.
LISTA DE ILUSTRAÇÕES
Figura 1 - Análise histológica (hematoxilina e eosina - 5X) em 3 semanas.
A: Grupo I – porção cortical com leito não perfurado. B: Grupo II
– porção cortical com leito perfurado. 22
Figura 2 - Análise histológica (hematoxilina e eosina - 5X) em 3 semanas.
A: Grupo III – porção medular com leito não perfurado. B: Grupo
IV – porção medular com leito perfurado. 22
Figura 3 - Análise histológica (hematoxilina e eosina - 5X) em 6 semanas.
A: Grupo I – porção cortical com leito não perfurado. B: Grupo II
– porção cortical com leito perfurado. 23
Figura 4 - Análise histológica (hematoxilina e eosina - 5X) em 6 semanas.
A: Grupo III – porção medular com leito não perfurado. B: Grupo
IV – porção medular com leito perfurado. 23
Figura 5 - Vista superior da cabeça do animal: tricotomia, desinfecção e
aposição de campo cirúrgico estéril. 34
Figura 6 - Procedimento de infiltração anestésica para promover
hemostasia. 35
Figura 7 - Após infiltração com anestésico local, procedeu-se com a
incisão linear em pele (A-B) e subcutâneo (C). 36
Figura 8 - Regiões parietais da calota craniana expostas 36
Figura 9 - Broca trefina de 8 mm de diâmetro utilizada para demarcação
dos defeitos. 37
Figura 10 - Demarcações dos defeitos 38
Figura 11 - Obtenção dos enxertos com 8 mm de diâmetro. 38
Figura 12 - Fixação dos enxertos na região frontal com parafusos 1,5 mm. 39
Figura 13 - Aspecto pós-operatório imediato, apos realização de suturas por
planos. 39
SUMÁRIO
1 – INTRODUÇÃO
14
2 – ARTIGO: Influence of the interface of bone block and the perforation of
the recipient bed on the incorporation of autogenous grafts in dogs: histologic
analysis
17
3 – CONCLUSÃO
31
REFERÊNCIAS
32
APÊNDICE 1 - Descrição detalhada da metodologia empregada
34
ANEXOS
42
Anexo 1 – Comprovação de submissão do artigo científico
42
Anexo 2 - Protocolo CEEA/UNICAMP número 1343-1
43
Anexo 3 - Autorização do CEUA/UNICAMP para uso das lâminas
histológicas
44
14
1 INTRODUÇÃO
Baseado nos estudos científicos iniciados por Branemark et al. (1969), os
implantes dentários foram amplamente aceito na Odontologia para reabilitação de
pacientes desdentados parciais e totais. Um dos aspectos mais importantes para o
sucesso dos implantes osseointegráveis é a presença de osso vital em quantidade
suficiente nos maxilares. Isso envolve não somente altura óssea, como também
espessura adequada na crista alveolar (Buser et al., 1994).
Visando o sucesso funcional e estético das reabilitações, a busca pelo
correto posicionamento tridimensional dos implantes dentários tem aumentado a
necessidade de reconstrução dos maxilares com enxertos ósseos (Buser et al.,
1994). Com o avanço nas práticas de antissepsia, desenvolvimento de novas
técnicas cirúrgicas e surgimento de novos materiais, a realização de enxertos
ósseos tornou-se uma prática segura e eficaz (Lynch et al., 1999).
O objetivo dos procedimentos de enxertia é estimular ou facilitar a
formação óssea em determinada região e isto pode ser obtido por meio da utilização
de enxertos autógenos, enxertos homógenos, heterógenos, biomateriais ou ainda,
uma associação destes (Jensen et al., 2006). O enxerto autógeno é considerado o
“padrão-ouro” para reconstrução dos maxilares, apresentando propriedades de
osteogênese, osteoindução e osteocondução (Kübler et al., 2004; Jensen et al.,
2006; Marx, 2007).
O tecido ósseo possui a capacidade de regenerar sem a formação de
cicatriz, ou seja, ao término deste processo o tecido apresenta as mesmas
características presentes previamente à lesão (Nunamaker, 1998; Marx, 2007). A
reparação ocorre por remodelação óssea, envolvendo os processos de reabsorção e
neoformação (Nunamaker, 1998).
Os enxertos ósseos podem ser utilizados na forma de blocos ou na forma
particulada, sendo que esta escolha vai depender do tipo de defeito apresentado
pelo paciente bem como a preferência do cirurgião. Quando indicada a utilização de
blocos, é necessária uma boa adaptação dos mesmos ao leito ósseo e imobilização
do enxerto até sua incorporação. A movimentação compromete a vascularização
podendo levar a interposição de tecido fibroso entre o enxerto e o leito receptor, o
que resultará em falha da técnica (Pikos, 1999).
15
Durante seu processo de incorporação, os enxertos ósseos autógenos
podem sofrer alterações em seu volume. Frequentemente ocorre diminuição deste
volume durante a remodelação óssea. Esta imprevisibilidade representa uma das
maiores dificuldades encontrada pelo cirurgião ao optar por esta técnica (Klüppel,
2008).
Diversos fatores estão relacionados ao sucesso dos enxertos ósseos,
incluindo: a posição do enxerto (inlay ou onlay), porção do bloco ósseo voltada para
o leito receptor, microarquitetura (cortical ou medular), condições do leito receptor,
método de fixação, presença ou ausência de periósteo, revascularização e atuação
de forças mecânicas (Tong e Buchman, 2000).
Embora a origem embriológica do osso doador tenha sido apontada como
um fator determinante na remodelação do enxerto, a microarquitetura óssea (relação
osso cortical-osso medular) apresenta maior importância na manutenção do volume
ósseo (Hardesty e Marsh, 1990). O osso medular apresenta taxas de
revascularização e atividade osteoclástica maiores que o osso cortical, o que pode
resultar em maior alteração de volume (Chen et al., 1994).
A incorporação dos enxertos ósseos é um processo complexo que
envolve inflamação, revascularização, osteogênese, osteoindução e osteocondução,
tendo a revascularização um papel primordial. A interação entre o leito receptor e o
enxerto está diretamente relacionada aos resultados clínicos (Tong e Buchman,
2000).
A revascularização de enxertos medulares ocorre de forma mais rápida
quando comparados aos enxertos corticais. A característica estrutural dos enxertos
corticais pode dificultar a angiogênese o que justificaria a diferença com relação ao
tempo necessário para reestabelecer a nutrição (Nunamaker, 1998).
Perfurações ou decorticalização na área do leito receptor têm sido
sugeridas com o objetivo de estimular a revascularização dos enxertos, acelerar o
processo de incorporação e reduzir a perda de volume (Alberius et al., 1996; Gordh
et al., 1997; de Carvalho et al., 2000; Cha et al., 2012). Embora alguns estudos
defendam esses procedimentos, não há consenso na literatura quanto ao seu efeito
benéfico na neoformação óssea (Adeyemo et al., 2008).
Outro fator que poderia influenciar na incorporação dos enxertos córtico-
medulares em bloco seria qual a porção do enxerto em bloco, medular ou cortical,
16
está voltado ao leito receptor (Thompson e Casson, 1970; Caneva et al., 2017).
Devido à maior facilidade de revascularização do osso medular e maior quantidade
de células osteogênicas disponíveis (Marx, 2007), a fixação do bloco com sua face
medular voltado ao osso hospedeiro resultaria em melhor integração.
O presente trabalho apresenta uma pesquisa utilizando cães como
modelo animal, com objetivo de avaliar a influência da interface dos enxertos córtico-
medulares autógenos (interface cortical-cortical e interface medular-cortical) e a
influência da perfuração do leito receptor na integração dos blocos ósseos.
17
2 ARTIGO
Influence of the interface of bone block and the pe rforation of the
recipient bed on the incorporation of autogenous gr afts in dogs:
histologic analysis
(Artigo submetido ao periódico Journal of Oral and Maxillofacial Surgery - Anexo 1)
Authors:
Breno Nogueira Silva, DDS, MS, PhD1, Henrique Duque Netto, DDS, MS, PhD1,
Sergio Olate, DDS, MS, PhD2, Carolina Santos Ventura de Souza, DDS, MS3, José
Ricardo de Albergaria Barbosa, DDS, MS, PhD4
1 Professor, Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Dental School, Federal
University of Juiz de Fora, Juiz de Fora, Brazil 2 Professor, Division of Oral and Maxillofacial Surgery, Universidad de La Frontera,
Temuco, Chile; and Associated Research, Center for Biomedical Research,
Universidad Autonoma de Chile, Temuco, Chile 3 PhD Student, Department of Oral Diagnosis - Oral and Maxillofacial Surgery
Division, Piracicaba Dental School, State University of Campinas, Brazil 4 Professor, Department of Oral Diagnosis - Oral and Maxillofacial Surgery Division,
Piracicaba Dental School, State University of Campinas, Brazil
Abstract
Purpose: To evaluate the influence of the graft interface (cortical-cortical or
medullary-cortical) and the perforation of the host bed on the incorporation of
autogenous grafts.
Materials and Methods: Six adult mongrel dogs were included in the study. Bone
blocks with 8 mm diameter were obtained from parietal bone of each animal. The
grafts were fixed with screws in the frontal bone being randomly distributed into 4
groups: Group I - the cortical region of graft in contact to unperforated bed, Group II -
the cortical region of graft in contact to perforated bed, Group III – the medullary
region of graft in contact to unperforated bed and Group IV – the medullary region of
graft in contact to perforated bed. 3-week and 6-week euthanized period were
18
chosen for histological evaluation. Hematoxylin-eosin stain was used in a histologic
routine technique.
Results: In the period of 3 weeks there was a predominance of connective tissue
with little amount of osteoid tissue in the graft-bed interface for Groups I and II. The
Groups III and IV presented osteoid tissue and newly formed bone, with the
perforation of the bed favoring bone formation. In the period of 6 weeks, the region of
interface in Group I and II showed a great amount of newly formed bone and a small
amount of connective tissue. In groups III and IV, the bone graft was incorporated to
the bed through mature bone, without the presence of connective tissue. There was
no difference between groups with unperforated and perforated bed.
Conclusion: This study concluded that the treatment of the bed can accelerate the
process of graft incorporation and the orientation of the blocks with the medullar face
in contact with the bed resulted in integration of the graft with better quality (mature
bone).
Key words: animal experiments, bone regeneration, cortical bone perforation,
histologic analysis
Introduction
Based on scientific studies started by Branemark et al. (1969)1, dental
implants became a treatment widely accepted in dentistry for rehabilitation of totally
or partially edentulous patients. One of the most important aspects for the success of
the osseointegrated implants is the presence of healthy bone in sufficient volume in
the jaws. This involves not only height, but also adequate width of the alveolar crest.2
Bone tissue has the ability to repair itself without the formation of scar, i.e.,
at the end of this process the tissue has the same characteristics previously
presented to the lesion.3,4 The repair occurs through bone remodeling, involving
resorption and new bone formation.3
The aim of the grafting procedures is to improve or facilitate the bone
formation in a region with bone loss and it can be achieved through the use of
autografts, allografts, xenografts, biomaterials or an association of these.5 The
19
autogenous graft is considered the "gold standard" for the reconstruction of the jaws,
having osteogenic, osteoinduction and osteoconduction properties.4–6
The unpredictability of the volumetric maintenance of autogenous graft is a
fundamental issue for oral and maxillofacial surgeons.7,8 Several factors are related
to the success of the grafts, including graft orientation, microarchitecture (cortical or
cancellous bone), receptor sites handling, graft fixation, presence or absence of the
periosteum, revascularization and mechanical stress.9
Although the embryonic origin (membranous or endochondral) of the bone
donor has been identified as a risk factor for graft resorb, the cortical to cancellous
ratio has greater importance in the maintenance of bone volume.10 The cancellous
bone presents greater osteoclastic activity and faster revascularization than cortical
bone, which can result in considerable volume alteration.11
The incorporation of bone grafts is a complex process that includes
inflammation, revascularization, osteogenesis, osteoinduction and osteoconduction.
The mechanisms involved on graft integration are universal and does not depend on
the donor site.4 The interaction between recipient bed and graft, and the
revascularization are directly related to the clinical outcomes.9
Bone marrow plays an essential role in the incorporation of the graft. The
perforation of the cortical bone allow the migration of cells, improve bone apposition,
promote graft incorporation and result in earlier onset of bone remodeling.7,8,12,13
However, there is no consensus in the literature about the real benefit of the bed
preparation in graft outcomes.14 Some studies support drilling or removing the cortex
of the recipient bed to achieve better integration of the graft when compared to cases
without bed preparation.12,15,16 On the other hand, some authors found no positive
effect.14,17,18
Another important consideration in this process is the orientation of the
graft over the recipient bed: interface cortical-cortical or medullary-cortical.9 The
cancelous bone presents more endosteal osteoblasts and marrow stem cells, and
shows faster revascularization.4 An intact bi-cortical layer at grafts interface can delay
the revascularization.17 It is not clear whether procedures that favor revascularization
also favor graft healing.19
20
The purpose of this study was to evaluate the influence of the graft
interface and the perforation of the host bed on the incorporation of autogenous
blocks grafts based on histologic analysis.
Materials and Methods
A descriptive research in an animal model was designed for histological
analyses. This research was approved by the Ethic Commission for Animal
Experimentation of Campinas State University under protocol number 1343-1. Six
adult mongrel dogs (15 kg approximately) in good systemic health were selected for
the study. The animals were kept under adequate veterinary care and nutritional
support (food and water ad libitum) in individual cages during the whole experimental
period.
Preoperative
Thirty minutes before the procedure the animals received intramuscular
benzathine benzylpenicillin (0.1 ml/kg) and dexamethasone (0.5 mg/kg). Prior to
surgery, the animals were sedated with ketamine chlorohydrate (0.15 mL/kg) and
underwent general anesthesia receiving a 3% pentobarbital sodium (30 mg/kg)
intravenous.
Surgical procedure
A vertical incision was made on calvaria and full-thickness flap was
elevated. The bone grafts were harvested from parietal bone with a trephine of 8 mm
diameter. With a hand piece (30.000 rpm) under copious irrigation, two cortical-
cancellous grafts (from each side of parietal bone) measuring 5 mm high (2 mm
cortical and 3 mm cancellous bone) and 8 mm diameter were obtained.
Bone fragments were fixed on the frontal bone region using 12 mm
titanium screws (1.5 mm system - Conexão® Sistemas de Próteses, São Paulo,
Brazil) with “lag screw” technique. In groups with bed preparation, the area limited by
the graft was perforated using 1-mm-diameter drill.
Blocks fixtures were randomly divided into 4 groups: Group I - the cortical
region of graft in contact with unperforated bed, Group II - the cortical region of graft
in contact with perforated bed, Group III – the medullary region of graft in contact with
intact bed recipient and Group IV – the medullary region of graft in contact with
21
perforated bed. In each animal, we performed one graft of each group. After bone
grafts stabilization and fixation (Fig 2), periosteum and temporal muscles were
approximated with sutures by using 4-0 absorbable stitch (polyglactin 910). Skin
plane was sutured with monofilament 4-0 nylon stitch.
Animals were randomly divided into two groups corresponding to the two
euthanasia periods: the first group consisted of 3 animals which were euthanized 3
weeks after surgical procedure; the second group consisted of 3 animals which were
euthanized 6 weeks after surgical procedure. Euthanasia took place with a 19.1%
potassium chloride intravenous overdose until cardiorespiratory arrest. Following this
stage, access to the animal’s skull was created and the grafted region exposed.
Bone blocks were obtained by cross and coronal sectioning of the bone
with a 702 tapered drill in high-speed turbine under constant saline solution irrigation
with a 5 mm to 10 mm safety margin for the previously operated areas. Specimens
were immersed in 4% buffered formalin. Posteriorly, the specimens were
subsequently dehydrated in an ascending series of ethyl alcohols and infiltrated with
methylmethacrylate.
The hardened blocks were positioned in a microtome (Microslice 2, Ultra
Tec, Santa Ana, CA) and sectioned perpendicularly to interface recipient-graft to
obtain sections of about 30 µm; then were stained using hematoxylin-eosinophile for
light microscopy analysis. Finally, were obtained 4 slices by each graft area.
Histological analysis was done using a light microscope (DMLB, Leica, Bensheim,
Germany) at Department of Morphology, Piracicaba Dental School, State University
of Campinas, and the types of tissue (connective tissue, blood vessel and new bone
formation) were described.
Results
3 weeks
Descriptive analyses noted on the interface for Groups I - the cortical
region of graft in contact to unperforated bed - and Group II - the cortical region of
graft in contact to perforated bed, the presence of connective tissue fulfilling the
interface between the graft and recipient bone. There were presence of blood
22
vessels, osteoblast and small quantity of newly formed bone. The bed perforation
favored the newly bone formation (Figure 1 A-B).
Figure 1. A, B: Histological analysis (hematoxylin and eosin stain - 5x) in a 3 week period. A: Group I
– cortical region of graft in contact to unperforated bed. B: Group II – cortical region of graft in contact
to perforated bed. BGft: bone graft; RB: intact recipient bed; RBp: perforated recipient bed; BV: blood
vessel; MTF: mineralized tissue formation; CT: connective tissue.
In groups with medullary portion in contact to recipient bed (Group III and
Group IV), we noted connective tissue, blood vessels and immature bone at region
closest to host bone. The perforation of bed (Group IV) also favored the bone
formation and some holes were already obliterated (Figure 2 A-B).
Figure 2. A, B: Histological analysis (hematoxylin and eosin stain - 5x) in a 3 week period. A: Group
III – medullary region of graft in contact to unperforated bed. B: Group IV – medullary region of graft in
contact to perforated bed. BGft: bone graft; RB: intact recipient bed; RBp: perforated recipient bed;
BV: blood vessel; MTF: mineralized tissue formation; CT: connective tissue.
6 weeks
A B BGft BGft
RB RBp
CT CT
MTF
MTF
BV
BV
A
BGft
RB
CT
MTF
BV
B
BGft
RBp
CT
MTF
BV
23
The Group I and Group II, with cortical region of graft in contact to host
bone, we noted small areas with connective tissue, presence of blood vessels,
mineralized tissue formation and immature bone. The bone formation was similar
between the groups, with the perforation of the bed losing their positive effect (Figure
3 A-B).
Figure 3. A, B: Histological analysis (hematoxylin and eosin stain - 5x) in a 6 week period. A: Group I
– cortical region of graft in contact to unperforated bed. B: Group II – cortical region of graft in contact
to perforated bed. BGft: bone graft; RB: intact recipient bed; RBp: perforated recipient bed; BV: blood
vessel; IB: immature bone; CT: connective tissue.
At the sites with medullary region of graft in contact to host bone, we noted
the interface fulfilling with bone tissue. The presence of blood vessels, small quantity
of connective tissue, immature bone and mature bone was similar between the
groups. Again, at 6 weeks, we did not notice a positive effect of bed perforation
(Figure 4 A-B).
A BGft
RB
CT
IB
BV
B BGft
BV IB
RBp
CT
A BGft
RB
CT MB
BV
IB
BGft
RBp
MB
IB
CT
BV
B
24
Figure 4. A, B: Histological analysis (hematoxylin and eosin stain - 5x) in a 6 week period. A: Group
III – medullary region of graft in contact to unperforated bed. B: Group IV – medullary region of graft in
contact to perforated bed. BGft: bone graft; RB: recipient bed intact; RBp: recipient bed perforated;
BV: blood vessel; IB: immature bone; MB: mature bone; CT: connective tissue.
Discussion
Several clinical situations demand procedures of bone reconstruction in
the maxillofacial region.4,20 Although the autogenous bone is still considered the gold
standard for the majority of bone reconstructions, their loss of volume during the
remodeling process is still a concern for most surgeons. Furthermore, in some
reconstructed areas, the stability of graft seems not sufficient and loss of graft may
occur during implant installation.
There is no doubt that the vascularity of host bed is an important factor in
the success of autogenous block bone grafts. Several ways of bed preparation have
been suggested to optimize the integration of grafts, including perforations and
decortication.13,15,16,21 The aim is to create a direct communication with the medullar
cavity resulting in prompt graft revascularization, faster incorporation and volume
maintenance.
On the other hand, the bed preparation also have some disadvantages
such as increase the operation time and heating damage induced by drilling bur.13
Another important factor is that one of the areas where more needs reconstruction
with bone blocks is the posterior region of the mandible. In the region of premolars,
perforations of the cortex can result in damage to the inferior alveolar nerve. Although
the procedure is widely adopted by many surgeons, there is not yet a consensus
about the benefits of bed preparation during autogenous bone graft.
A part of the literature concerning about the importance of cortical
perforation, deals with its effects on guided bone regeneration.2,22–26 The exposure of
the medullary bone facilitates the capillary sprouting, enables migration of angiogenic
and osteogenic cells and enhances the bone formation.25,27 In contrast, others
authors concluded that there is lack of significant effects of bed preparation on the
bone neoformation.22,26
Probably, the perforation or decortication of host bone improve
vascularization and access of cells involved in guided bone regeneration, but if this
25
maneuver is essential from the clinical point of view remain an important issue.
Beyond that, the use of membranes to isolate soft tissues and to maintain a space on
the recipient site creates a different environment from that present during
incorporation of bone blocks. This makes it difficult to translate the results from these
studies to the bone grafts healing.
In a study using dogs, Carvalho et al15 founded that perforated and
decorticated bed favor the integration and maintenance of the volume of the graft.
The interposition of connective tissue occurred more frequently in cases with intact
cortical recipient. Bed perforations increase the revascularization and results in
greater bone deposition.
Pedrosa Jr et al21 evaluated the impact of bed preparation on graft
remodeling in rabbits. The histological findings showed that the perforations
contributed to higher bone deposition during the initial stages, accelerating the graft
incorporation process. Besides that, the bone volume of grafts is better maintained
with this maneuver. Beneficial effects of bed perforation were also found by Cha et
al13, in a study with bone blocks fixed onto maxillary premolar region in dogs.
On the other hand, according to Adeyemo et al14, onlay bone grafts
present similar integration independently of bed preparation. Faria et al17 claim that
the bed perforation may improve the revascularization in earlier stages of the graft
healing. However, at the end of 60 days, there was no difference in volume
maintenance between the groups. The absence of positive effects of perforation on
bone formation was advocated by other authors.18,28
In this study, the drilling bed increases the revascularization and
accelerated bone formation on evaluation at 3 weeks. In this way, the benefit was
present in the initial stage of graft integration. At 6 weeks, there was no difference
about bone deposition at interface. This may be an important aspect in clinical
situations where there are already known factors that may compromise the success
of the graft, such as smokers, diabetics, regions with more cortical bone and
compromised vascularization.
In patients who develop wound dehiscence, the faster revascularization
and faster integration will contribute to a better prognosis. In addition, there is a
tendency to accelerate the treatment in implant therapy, one desire presented by
26
most patients. The faster integration can reduce the waiting time required for
installation of dental implants.
Several methods to expose bone marrow at host bed have been used,
ranging from grinding and perforations7,8 until removal of the cortical bone.12,15 In this
study, perforations were used because although the decortication promotes a broad
access to the medullary cavity, the removal of the cortex will further decrease bone
quantity in an area where we aim to gain bone tissue.
The appropriate size of the drill holes was not defined in the literature.28 A
greater diameter can facilitate cell migration before obliteration by the new bone.
However, the risk of interholes fractures can result in graft´s collapse.7 1-mm-
diameter drill was used for perforations because this size is sufficient to vessels
access without risk of reducing the mechanical resistance of host bed and
compromise graft fixation.
The literature shows contradictory reports about the influence of
relationship between recipient bed and autogenous bone blocks during bone
reconstruction.10,16,29,30 Thompson and Casson30, in a study in dogs, found greater
bone formation and volumetric maintenance of unicortical grafts placed with their
cancellous surface in contact with the host bone.
Hardesty and Marsh10 evaluated the importance of cortex-to-bed
relationship in onlay bone grafts to the craniofacial skeleton and this orientation did
not affect graft success. Canto et al16 compared the graft orientation (cortical and
medullar interface) on rabbits vertebras. The graft orientation did not have relevance
on bone, cartilage and fiber neoformation in the region of the graft interface. This
result is in agreement with other studies.8,29
The histological findings in this study showed that although all grafts were
integrated, the quantity and quality of bone neoformation was higher in the groups
with medullar surface facing the bed. This is very important because suggests a
better incorporation and possibly a safer clinical condition for installation of dental
implants.
Most of animal studies about impact of bed alteration on bone formation
have used rats or rabbits model.7,17,21–23,25,28,31 The faster metabolism, higher healing
potential and robust osteogenic response are other aspects that should be
considered.13,24 Bone specimens from seven vertebrate animals (human, dog, pig,
27
sheep, cow, chicken and rat) were compared in terms of density, composition and
bone quality. The dog was the animal that was closest to the humans.32 Because of
these questions, we decided to use dog models in this study.
The cycle of bone remodeling was shown to be similar between dogs and
humans: 12 weeks in the dog corresponds to 17 weeks in humans.33 As we aimed to
evaluate differences in speed and quality of graft incorporation between the groups,
we choosed periods of 3 and 6 weeks in dogs, corresponding to around 4 and 8
weeks in humans.
A limitation of this study is the fact that the calvaria of dog does not
represent all recipient beds found in the jaws of the human. The morphological
characteristics of the maxilla and the mandible may result in differences in the
incorporation of the graft. In this way the results presented here would be more
compatible with clinical situations of bone reconstruction in areas with thicker cortical.
This study concluded that the treatment of the bed can accelerate the
process of graft incorporation and the orientation of the blocks with the medullar face
in contact with the bed resulted in integration of the graft with better quality (mature
bone), suggesting clinical condition with greater security for installation of dental
implants.
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30
3 CONCLUSÃO
De acordo com a metodologia empregada neste estudo, podemos
concluir:
1- A perfuração do leito receptor acelera o processo de incorporação dos
enxertos ósseos autógenos em bloco.
2- A orientação do bloco ósseo com a porção medular voltada para o leito
receptor, independente do tratamento do leito, resulta em melhor
qualidade na incorporação do enxerto.
3- A perfuração do leito e a interface medular-cortical otimizam o
procedimento de reconstrução óssea com enxertos autógenos em
bloco.
32
REFERÊNCIAS*
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34
APÊNDICE
Apêndice 1 – Descrição detalhada da metodologia emp regada
Previamente ao início da fase experimental, o projeto deste trabalho foi
aprovado pela Comissão de Ética em Experimentação Animal (CEEA)-IBUNICAMP
sob número de protocolo 1343-1 (Anexo 2 e 3). Para a realização deste estudo,
foram utilizados 06 cães adultos, machos, sem distinção de raça, com peso médio
de 15 Kg. Os cães, procedentes do biotério Central da Universidade Estadual de
Campinas – Unicamp, foram mantidos no Biotério da Faculdade de Odontologia de
Piracicaba – Unicamp, sob as mesmas condições ambientais durante todo o estudo,
em baias individuais e recebendo ração e água ad libitum.
Como profilaxia antibiótica os animais receberam, 30 minutos antes do
procedimento, injeção intramuscular de 0,1 mL/kg peso de benzilpenicilina benzatina
e dexametasona (0,5 mg/Kg). Previamente aos procedimentos cirúrgicos, os animais
foram sedados com o indutor anestésico Cloridrato de Ketamina (0,15 ml/Kg) - via
intramuscular - e submetidos à anestesia geral, com injeção intravenosa de
Pentobarbital Sódico 3% (30mg/Kg), ambos conforme recomendações do fabricante.
As intervenções cirúrgicas foram executadas dentro de condições
assépticas, respeitando as normas de biosseguranças preconizadas pela Comissão
Técnica Nacional de Biossegurança (CTNBio), subordinada ao Ministério da Ciência
e Tecnologia. Após indução anestésica, foi realizada tricotomia na cabeça dos cães
e anti-sepsia com solução aquosa de polivinilpirrolidona iodo a 10%. Para o
isolamento da área foram utilizados campos cirúrgicos estéreis descartáveis (Figura
5).
Figura 5: Vista superior da cabeça do animal: tricotomia,
desinfecção e aposição de campo cirúrgico estéril.
35
Infiltrou-se anestésico local com vasoconstritor (Lidocaína 2% com
adrenalina 1:100.000) em dosagem de 5mg/Kg (Figura 6). Em seguida, utilizando-se
de lâmina de bisturi nº 15 realizou-se uma incisão linear de aproximadamente 05
centímetros na pele e subcutâneo, em um sentido ântero-posterior, estendendo-se
de fronte à região occipital (Figura 7). A porção óssea do crânio do animal foi
exposta após descolamento do pericrânio da região envolvendo os músculos
temporais (Figura 8).
Figura 6: Procedimento de infiltração anestésica para promover hemostasia.
36
Figura 7 A-C: Após infiltração com anestésico local, procedeu-se com a incisão linear em pele (A-B) e subcutâneo (C).
Figura 8: Regiões parietais da calota craniana expostas.
37
Em seguida foram trefinadas duas cavidades em regiões parietais direita
e esquerda, preservando-se a integridade da dura-máter, com auxílio de uma broca
trefina de 08 mm de diâmetro (Neodent®, Curitba, Brazil), acoplada a um contra-
ângulo 1:1, a 30000 rotações por minuto (Figura 9).
Figura 9: Broca trefina de 8 mm de diâmetro utilizada para demarcação dos defeitos.
A irrigação abundante da broca e do tecido ósseo durante o momento
da trefinagem com solução fisiológica a base de cloreto de sódio 0,9% foram
mantidas durante toda perfuração com intuito de não causar o
superaquecimento da região, e assim prejudicar a interpretação dos resultados.
Uma vez concluídas as osteotomias (Figura 10), a porção óssea delimitada pela
trefina foi removia com o auxílio de um descolador de periósteo tipo Molt,
obtendo 4 enxertos córtico-medulares (Figura 11).
38
Figura 10: Demarcações dos defeitos
Figura 11: Obtenção dos enxertos com 8 mm de diâmetro.
Os enxertos foram fixados com parafusos 1,5 mm (Conexão sistema
de Próteses, São Paulo, Brasil) na região frontal (Figura 12) sendo distribuídos
aleatoriamente em 4 grupos: Grupo I – face cortical do enxerto em contato com
o leito íntegro, Grupo II – face cortical do enxerto em contato com leito
perfurado, Grupo III – face medular do enxerto em contato com leito íntegro e
Grupo IV – face medular do enxerto em contato com leito perfurado. Nos
39
grupos com o leito perfurado, utilizou-se uma broca tronco-cônico de 1 mm de
diâmetro, sendo a área perfurada delimitada pelo enxerto.
Figura 12: Fixação dos enxertos na região frontal com parafusos.
Após fixação dos enxertos, os músculos temporais e periósteo foram
reaproximados com suturas utilizando fio absorvível (Poliglactina 910). Da mesma
forma, os planos superficiais foram suturados com fio de nylon monofilamentar 4-0
(Figura 13).
Figura 13: Aspecto pós-operatório imediato, apos realização de suturas por planos.
40
Após o ato cirúrgico os animais permaneceram em observação no período
inicial da recuperação anestésica e em seguida foram levados para suas baias, onde
permaneceram até o momento do sacrifício. Os animais foram aleatoriamente
divididos em dois grupos, correspondentes aos dois períodos de sacrifício: o primeiro
grupo, constituído de 3 animais, foi sacrificado ao completar o período de 3 semanas
do procedimento cirúrgico; o segundo grupo de 3 animais foi sacrificado 6 semanas
após o procedimento cirúrgico. O sacrifício foi realizado por meio de overdose
endovenosa de Cloreto de Potássio a 19,1%, até se obter a parada
cardiorrespiratória.
Posteriormente a esta etapa, foi realizado acesso ao crânio do animal
como descrito anteriormente com exposição da região enxertada. Os blocos ósseos
foram obtidos por seccionamento transversal e coronal do osso com broca tronco-
cônica 702 em turbina de alta rotação sob irrigação constante e abundante com
solução fisiológica de Cloreto de Sódio a 0,9% com uma margem de segurança para
as áreas operadas previamente de 5 mm e enviados para análise.
Os blocos ósseos obtidos foram imersos em solução de formaldeído 10%
e tampão fosfato por um período de trinta dias. Após esse período foram lavadas em
água corrente por 24 horas e descalcificados em solução de Citrato de sódio
(Na3C6H5O72H2O) a 20% e Ácido fórmico (HCOOH) a 50% em partes iguais
(Morse, 1945), durante um período de 62 dias. Ao final deste processo, a calota
craniana foi seccionada no sentido sagital, resultando em duas peças. Cada
fragmento ósseo contendo dois grupos foi seccionado ao meio.
A partir desta fase procedeu-se a realização das etapas de
processamento laboratorial, sendo cada defeito inserido em uma lâmina
isoladamente. Inicialmente foi feita a lavagem das peças em água corrente durante 5
horas, desidratação com álcool a 70% (12 horas), álcool a 80% (1 hora), álcool a
90% (1 hora), álcool absoluto (1 hora), diafanização com Xilol (C6H4(CH3)2) por
meio de três trocas a cada 20 minutos e infiltração em parafina (1 hora) em estufa a
70° Celsius realizando-se 3 trocas. Cortes seriados com 6µm de espessura foram
realizados e em seguida corados pela Hematoxilina de Carazzi e Eosina – Lison,
para posterior visualização em microscópio óptico comum.
Todo o processamento foi realizado por um profissional da Área de
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Histologia da FOP-UNICAMP. As regiões dos cortes para confecção das lâminas
foram orientadas pelo próprio autor, aluno de Pós-graduação, e por um professor da
Área de Cirurgia Buco-Maxilo-Facial da FOP-UNICAMP.
Na análise histológica descritiva foram avaliados padrões de incorporação
do enxerto tais como presença de necrose, hemorragia, atividades osteoclásticas e
osteoblásticas, presença de tecido conjuntivo e grau de maturação, presença de
remanescentes do material enxertado, assim como neoformação de tecido ósseo
maturo e/ou imaturo.
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ANEXOS
Anexo 1 – Comprovação de submissão do artigo cientí fico
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Anexo 2 - Protocolo original CEEA/UNICAMP número 13 43-1
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Anexo 3 – Autorização do CEUA/UNICAMP para uso das lâminas histológicas
