-
8/9/2019 Infect. Immun.-1993-China-3129-36.pdf
1/8
V o l .
6 1 , N o .
8N F E C T I O N
AND I M M U N I T Y , A u g . 1 9 9 3 ,
p .
3 1 2 9 - 3 1 3 6
0 0 1 9 - 9 5 6 7 / 9 3 / 0 8 3 1 2 9 - 0 8 0 2 . 0 0 / 0
C o p y r i g h t
©
1 9 9 3 ,
A m e r i c a n S o c i e t y f o r
M i c r o b i o l o g y
R o l e o f t h e YadA P r o t e i n i n P r e v e n t i o n
o f
O p s o n i z a t i o n
o f
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a
b y C3b M o l e c u l e s
BERNARD
CHINA,1
MARIE-PAULE
S O R Y , 1
BAO
THO
N GUYEN,2
MARC DE BRUYERE,2 AND GUY R .
C O R N E L I S *
M i cr o b i a l P a t h o g en e s i s U n i t ,
I n t e r n a t i o n a l I n s t i t u t e
o f
C e l l u l a r a n d M o l e c u l a r
P a t h o l o g y ,
1
a n d
F a c u l t e , d e M W d e c i n e '
a n d
U n i t e
S a n g , 2
U n i v e r s i t e 6
C a t h o l i q u e d e L o u v a i n , B - 1 2 0 0
B r u s s e l s ,
B e l g i u m
R e c e i v e d
2 8 J a n u a r y 1 9 9 3 / A c c e p t e d 2 7 A p r i l 1 9 9
3
When
m i x e d w i t h n o r m a l human s e r u m ,
w i l d - t y p e
p a t h o g e n i c Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a
,
p r e v i o u s l y
i n c u b a t e d
a t
3 7 ° C ,
f i x e d l e s s C 3 b t h a n i t s v a r i a n t c u r e d o
f t h e v i r u l e n c e
p l a s m i d
p Y V . M u t a n t s
u n a b l e
t o s e c r e t e t h e Yo p
p r o t e i n s
w e r e
s t i l l
p r o t e c t e d
a g a i n s t C 3 b d e p o s i t i o n . B y c o n t r a s t ,
m u t a n t s d e f i c i e n t
i n
t h e
p r o d u c t i o n
o f o u t e r
m e m b r a n e
p r o t e i n YadA
f i x e d m o r e C 3 b t h a n
t h e i r YadA+
p a r e n t . G e n e y a d A 4 , c l o n e d a s a m i n i m a
l
p o l y m e r a s e
c h a i n r e a c t i o n f r a g m e n t
a n d
i n t r o d u c e d
i n
t r a n s , c o m p l e m e n t e d t h e m u t a t i o n s
.
P r o d u ct i o n o f
YadA b y
r e c o m b i n a n t E s c h e r i c h i a
c o l i L K 1 1 1
a l s o r e s u l t e d
i n a
r e d u c t i o n
o f t h e a m o u n t o f C3b d e p o s i t e d o n
t h e b a c t e r i a l
s u r f a c e . T h e
r e d u c t i o n
o f C3b a t t h e s u r f a c e o f
Y .
e n t e r o c o l i t i c a
YadA+ c o m p a r e d
w i t h
YadA-
c e l l s
c o r r e l a t e d
w i t h a n
i n c r e a s e
o f t h e a m o u n t o f
f a c t o r H f i x e d
a t t h e b a c t e r i a l s u r f a c e .
T h e YadA monomer
s e p a r a t e d
b y
s o d i u m
d o d e c y l
s u l f a t e - p o l y a c r y l a m i d e
g e l
e l e c t r o p h o r e s i s
a n d
t r a n s f e r r e d
t o
a
n i t r o c e l l u l o s e
m e m b r a n e w a s a b l e t o b i n d
f a c t o r
H . W e
c o n c l u d e
t h a t f a c t o r
b o u n d t o YadA r e d u c e s t h e C3b d e p o s i t i o
n
o n
t h e b a c t e r i a l s u r f a c e ,
p r o b a b l y
b y
a r ap i d i n a c t i v a t i o n o f C 3 b .
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a i s
a n e n t e r o b ac t e r i u m
f r e q u e n t l y
i n v o l v e d
i n
h u m a n e n t e r o c o l i t i s . T h e p r e d o m i n a n
t
c l i n i c a l
f e a t u r e s
a r e d i a r r h e a i n
y o u n g
c h i l d r e n
a n d m e s e n t e r i c
a d e n i t i s c h a r a c t e r i z e d
b y
a b d o m i n a l
p a i n
a n d
l e u k o c y t o s i s
i n
o l d e r
c h i l d r e n a n d a d o l e s c e n t s
( f o r
a
r e v i e w ,
s e e
r e f e r e n c e
1 1 ) .
B e c a u s e
o f
i t s p s y c h r o p h i l i c c h ar a ct e r a n d i t s h i
g h
p r e v a l e n c e
i n
t h e
human
p o p u l a t i o n ,
Y
e n t e r o c o l i t i c a i s
i n c r e a s i n g l y
i n v o l v e d i n
m a s s i v e c o n t a m i n a t i o n o f b l o o d
b a g s , l e a d i n g
t o
s e v e r e
t r a n s f u s i o n
a c c i d e n t s
( 4 1 ) .
P a t h o g e n i c
s t r a i n s
o f Y
e n t e r o c o l i t i c a
h a r b o r
a 7 0 - k b
p l a s m i d
c a l l e d
p YV
( 3 ,
2 0 ,
5 8 ) .
T h i s
p l a s m i d e n c o d e s
s e v e r a l
t h e r m o d e p e n d e n t p r o p e r t i e s ,
i n c l u d i n g t h e
s e c r e t i o n o f 1 1
p r o t e i n s
c a l l e d
Y o p s a n d
t h e
p r o d u c t i o n
o f a n
o u t e r mem-
b r a n e
p r o t e i n
c a l l e d YadA ( 6 ,
4 9 )
a n d
o f a n o u t e r
m e m b r a n e
l i p o p r o t e i n ,
r e l a t e d t o
T r a T ,
c a l l e d
Y l p A
9 ) .
T h e
s e c r e t i o n
o f
Y o p s
o c c u r s
o n l y
a t
3 7 ° C
i n
a
m e d i u m
d e p r i v e d
o f
C a 2 +
i o n s a n d
c o i n c i d e s
w i t h
a
s e v e r e
g r o w t h
r e s t r i c t i o n . B o t h
p h e n o m e n a d e p e n d
o n
a
2 0 - k b
r e g i o n
o f
t h e p YV p l a s m i d
c o n t a i n i n g
t h e
l o c i
v i r A ,
v i r B , v i r C ,
a n d
v i r F
( 1 2 - 1 4 ) .
T h e
v i r C
o p e r o n ,
c o m p o s e d
o f t h e 1 3
g e n e s
y s c A
t h r o u g h
y s c M ,
i s
i n v o l v e d i n
Yop
s e c r e t i o n
( 3 5 ) .
T h e
v i r F l o cu s e n c o d e s
a
D N A - b i n d i n g p r o t e i n
a c t i n g a s a t r a n s c r i p t i o n a l a c t i v a t o
r
o f
t h e
y o p ,
y s c ,
y a d A ,
a n d y l p A
g e n e s
( 9 ,
1 3 ,
1 4 ,
2 8 ) .
T h e
r o l e s
o f s o m e
Y o p s h a v e
b e e n e l u c i d a t e d . YopE
i s
a
c y t o t o x i n
( 4 4 ) ,
a n d
YopH
i s
a
p h o s p h o t y r o si n e p h o s p h a t a s e
t h a t
i n h i b i t s
p h a g o c y t o s i s 4 ,
2 1 ,
4 3 ) .
Yo pM
b i n d s t h e
t h r o m b i n a n d s o i n h i b i t s t h e
a g g r e g a t i o n
o f
p l a t e l e t s
a n d t h e
o n s e t o f i n f l a m m a t i o n
( 2 9 ,
3 0 , 4 2 ) .
Y o p O ,
no w
c a l l e d
Y p k A ,
i s
a
s e r i n e - t h r e o n i n e p r o t e i n k i n a s e
( 1 9 ) .
T h e
r o l e s o f t h e
o t h e r
Y o p s
r e m a i n e l u s i v e .
L i k e
Y o p s ,
YadA
i s s y n t h e s i z e d o n l y
a t
3 7 ° C ,
b u t u n l i k e
Y o p s ,
i t s
p r o d u c t i o n
i s
i n d e p e n d e n t
o f
C a 2 ' a n d i t d o e s
n o t
r e q u i r e
t h e
p r o d u c t s
o f t h e
v i r A
a n d v i r C l o c i
( 3 5 ) .
YadA i s
a
p o l y m e r
o f
a b o u t 2 0 0 kDa
c o m p o s e d
o f s u b u n i t s o f
4 5
t o
5 2 . 5
kDa
( 4 8 ,
4 9 ,
5 7 )
f o r m i n g
a
t i n y
f i b r i l l a r s t r u c t u r e a t t h e
*
C o r r e s p o n d i n g
a u t h o r .
s u r f a c e
o f
Y e n t e r o c o l i t i c a
( 2 5 ,
2 7 , 5 7 ) .
I n
e x p e r i m e n t a l o r a l
i n f e c t i o n o f t h e
m o u s e ,
YadA c o n t r i b u t e s
t o t h e
l o n g - t e r m
f e c a l e x c r e t i o n
o f
t h e
b a c t e r i a
( 2 5 ) .
I n
v i t r o ,
YadA
p l a y s
v a r i o u s
r o l e s i n r e l a t i o n t o i t s
s u r f a c e
l o c a t i o n . I t
i n c r e a s e s
t h e s u r f a ce h y d r o p h o b i c i t y ( 3 4 )
a n d
p r o m o t e s
a u t o a g g l u t i n a -
t i o n ( 4 8 ) .
I t
c o n f e r s a d h e r e n c e
t o
e p i t h e l i a l
c e l l s
( 2 2 )
a n d
t o
t h e e x t r a c e l l u l a r
m a t r i x b y
b i n d i n g c o l l a g e n
f i b e r s ( 1 7 ,
4 7 )
a n d
f i b r o n e c t i n
( 5 4 ) .
YadA
a l s o
i n h i b i t s
t h e
a n t i - i n v a s i v e
e f f e c t
o f
i n t e r f e r o n
7 ) .
F i n a l l y ,
YadA
c o n f e r s
r e s i s t a n c e
t o
t h e b a c t e r i c i d a l
a c t i v i t y
o f human s e r u m
( 2 )
b y i n h i b i t i n g t h e
f o r m a t i o n o f
t h e
membrane
a t t a c k c o m p l e x ( 4 0 ) . A l t h o u g h
o t h e r
f a c t o r s ,
l i k e t h e
A i l
p r o t e i n
( 5 )
a n d
l i p o p o l y s a c c h a r i d e
( 5 5 ) , p l a y
a
r o l e
i n t h i s
p h e n o t y p e ,
YadA
s e e m s t o b e
t h e
m a j o r
d e t e r m i n a n t s i n c e
Y a d A - d e f i c i e n t
m u t a n t s
b e c o m e
s e r u m s e n s i t i v e
2 ) .
T h e a l t e r n a t i v e
p a t h w a y
o f c o m p l e m e n t
a c t i v a t i o n c a n
b e
v i e w e d a s
a
m a j o r
r e c o g n i t i o n s y s t e m f o r n o n s p e c i f i c d
e -
f e n s e
m e c h a n i s m s .
I n
t h i s
p a t h w a y ,
t h e i n i t i a l s t e p i s
t h e
d e p o s i t i o n
o f
C 3 b ,
t h e
l a r g e r
f r a g m e n t
o f
t h e s e r u m
p r o t e i n
C 3 . C 3 b
c a n f i x
e i t h e r f a c t o r
B
o r f a c t o r
H . On
a c t i v a t i n g
s u r f a c e s ,
C 3 b
b i n d s f a c t o r
B , f o r m i n g
t h e C 3 bB
c o m p l e x ,
w h i c h i s
p r o c e s s e d
t o
C 3 b B b ,
t h e a l t e r n a t i v e C 3 c o n v e r t a s e .
T h i s c o n v e r t a s e t h e n
a m p l i f i e s
t h e a c t i v a t i o n
p r o c e s s
a n d
i n i t i a t e s
a s s e m b l y
o f
t h e
membrane a t t a c k
c o m p l e x .
By
c o n t r a s t ,
o n
n o n a c t i v a t i n g
s u r f a c e s ,
C 3 b
b i n d s
f a c t o r H
a n d
b e c o m e s a c c e s s i b l e t o
f a c t o r
I ,
w h i c h
c l e a v e s C 3 b i n t o
i t s
i n a c t i v a t e d
f o r m ,
C 3 b i
( f o r
a r e v i e w s e e r e f e r e n c e
3 7 ) .
One o f t h e
m a j o r
e f f e c t s
o f
c o m p l e m e n t
a c t i v a t i o n
i s
o p s o n i z a t i o n
b y
t h e
d e p o s i t i o n
o f
l a r g e
a m o u n t s o f
C3b
m o l e c u l e s o n
t h e s u r f a c e
o f t h e
a c t i v a t o r
c e l l .
T h e
t a r g e t
c e l l
t h e n
b e c o m e s a c c e s s i b l e t o
u p t a k e b y p r o f e s s i o n a l
p h a g o -
c y t e s
c a r r y i n g
C 3
r e c e p t o r s .
Some b a c t e r i a l
p a t h o g e n s
h a v e
d e v e l o p e d
m e c h a n i s m s t h a t
p r e v e n t
t h i s
o p s o n i z a t i o n ( f o r
a
r e v i e w ,
s e e
r e f e r e n c e
2 3 ) .
F o r
e x a m p l e ,
t h e
c a p s u l e
o f
g r o u p
B
s t r e p t o c o c c i
c o n t a i n s s i a l i c
a c i d ,
w h i c h c a n
f a v o r t h e
b i n d i n g
o f
f a c t o r H t o C3b
( 1 6 ) .
P r o t e i n
M
o f
g r o u p
A
3 1 2 9
-
8/9/2019 Infect. Immun.-1993-China-3129-36.pdf
2/8
3 1 3 0
C H I N A ET AL.
TABLE 1 . P l a s m i d s u s e d i n t h i s
s t u d y
P l a s m i d
G e n o t y p e
R e f e r e n c e ( s )
o r s o ur c e
pBC7
p Y V e 2 2 7 y a d A 4 : : p B C 9
T h i s
w o r k
pBC 9 pGCS82
+ i n t e r n a l f r a g m e n t
P v u I I
o f
T h i s w o r k
y a d A 4
( a d A
m u t a t o r )
p G B 0 8 p Y L 4 y a d A - G B 0 8 : : T n 8 1 3 - R 3 8 8
2
p G B 6 3
p Y L 4 - G B 6 3 : : T n 8 1 3 - R 3 8 8
2
p G B 9 1 0
p Y L 4 y a d A - G B 9 1 0 : : T n 8 1 3 - R 3 8 8
2
p G C 2 1 7
p G B 6 3 y s c C - G C 2 1 7 : : m i n i - M u d l a c
y a d A + 1 3 ,
3 5
p G C 4 0 3 p G B 6 3 y s c D - G C 4 0 3 : : m i n i - M u d l
a c
y a d A 4
1 3 ,
3 5
pGCS82 p G P 7 0 4
+ a a d B
f r o m
T n 7 3 2
2 8
p I C 2 0 H
b l a +
l a c Z ,
m u l t i p l e c l o n i n g
s i t e
3 3
pKNG78
P t c
l a c
q
b l a
T e t 2 4 a
pMS150
p I C 2 0 H - y a d A
T h i s w o r k
p M S 1 5 1
p K N G 7 8 - y a d 4
T h i s
w o r k
p M S 1 5 3
p S e l e c t - 1
P , a c - y a d A ,
o r i T f r o m p T J S 8 2
T h i s
w o r k
p S e l e c t - 1
l a c Z o r i F l T e t r
P r o m e g a
p T J S 8 2 pUC7
+
o n i T f r o m RK 2
4 6
p Y V 2 2 7
V i r u l e n c e
p l a s m i d
o f Y e n t e r o c o l i t i c a
1 0
W 2 2 7 0 3 , y a d A +
s t r e p t o c o c c i
a l s o f i x e s f a c t o r H ,
w h i c h
a g a i n
c o r r e l a t e s
w i t h
a f a s t e r i n a c t i v a t i o n o f C3b ( 2 4 ) .
T e r t t i e t a l . ( 5 3 )
a s s a y e d
t o t a l C3b d e p o s i t e d
a t t h e s u r f a c e
o f
s e r o t y p e 0 : 3 Y
e n t e r o c o l i t i c a
c e l l s i n c u b a t e d
w i t h n o r m a l
human serum ( N H S ) . They
d e t e c t e d
more C3b on t h e
s u r f a c e o f
pYV-
c e l l s t h a n
on t h e s u r f a c e
o f
pYV+ b a c t e r i a
grown
a t
3 7 ° C .
More r e c e n t l y ,
P i l z
e t
a l .
( 4 0 )
showed
t h a t
pYV+
s t r a i n s
r a p i d l y
i n a c t i v a t e
C3b
i n t o
C 3 b i a n d t h a t
t h i s
proce ss
r e q u i r e s
YadA.
I n t h i s
paper,
we
c o n f i r m
a n d
e x t e n d
t h e s e
o b s e r v a t i o n s
on t h e
r e s i s t a n c e o f
pW
Y
e n t e r o c o l i t i c a
t o c o m p l e m e n t ,
u s i n g
o u r
s e r o t y p e 0 : 9
m o d e l s t r a i n
W 2 2 7 0 3 . We
c o n f i r m
t h a t
YadA r e d u c e s t h e
d e p o s i t i o n
o f C3 b
on t h e
b a c t e r i a l c e l l
s u r f a c e ,
a n d
we show
t h a t t h i s r e d u c t i o n
i s c o r r e l a t e d w i t h a
Y a d A - m e d i a t e d
f i x a t i o n
o f
f a c t o r
H ,
p r o b a b l y
l e a d i n g
t o
a
f a s t e r
d e g r a d a t i o n
o f C 3 b .
MATERIALS
AND
METHODS
B a c t e r i a l s t r a i n s
a n d p l a s m i d s .
Y
e n t e r o c o l i t i c a
W22703
( n a l i d i x i c
a c i d r e s i s t a n t )
a n d
W22708 ( s t r e p t o m y c i n
r e s i s -
t a n t )
ar e two r e s t r i c t i o n
mutants
( R e s - M o d ' )
o f
t h e
w i l d -
t y p e s e r o t y p e
0 : 9 s t r a i n
W227
( 1 0 ) .
Y
e n t e r o c o l i t i c a
W1024
( s e r o t y p e
0 : 9 )
was
i s o l a t e d
i n
1 9 8 8
b y
G .
W a u t e r s
( B r u s s e l s ,
B e l g i u m )
f r o m
human
s t o o l s . E s c h e r i c h i a
c o l i
s t r a i n s u s e d
ar e E .
c o l i
LK111
( C 6 0 0
Res- Mod
l a c Y +
l a c Z A M 1 5
l a c I )
( r e c e i v e d
f r o m M. Z a b e a u , G h e n t ,
B e l g i u m ) ,
J M 1 0 1
( l a c Z A M 1 5
l a c l I )
( 5 6 ) ,
a n d
SmlO l a m b d a
p i r + .
T h e l a s t
s t r a i n ,
c o n s t r u c t e d
by
M i l l e r a n d
M e k a l a n o s
( 3 6 ) ,
a l l o w s
t h e
r e p l i c a t i o n
o f
p i r
mutants o f
R6K
a n d
m o b i l i z e s p l a s m i d s
c o n t a i n i n g
t h e
o r i g i n
o f
t r a n s f e r
o f
RK2. P l a s m i d s
u s e d
ar e
l i s t e d
i n T a b l e 1 .
B a c t e r i a l
g r o w t h
f o r
p r o d u c t i o n
o f YadA a n d SDS-PAGE
o f
YadA.
Y
e n t e r o c o l i t i c a
was i n o c u l a t e d
a t an o p t i c a l
d e n s i t y
a t 6 0 0 nm o f 0 . 1 i n a
c o n i c a l
f l a s k c o n t a i n i n g 5
m l
o f b r a i n
h e a r t i nf u s i o n
( D i f c o , D e t r o i t , M i c h . )
s u p p l e m e n t e d w i t h
0 . 4 %
g l u c o s e ,
2 0 mM M g C l 2 ,
a n d 2 0
mM
s o d i u m o x a l a t e
a n d
c o n t a i n i n g
t h e
a p p r o p r i a t e
a n t i b i o t i c s
( n a l i d i x i c
a c i d ,
3 5
, u g / m l ;
t e t r a c y c l i n e , 1 0
p , g / m l ;
k a n a m y c i n ,
5 0
p , g / m l ;
g e n t a -
m i c i n , 2 0
p , g / m l ;
a n d m e r b r o m i n e ,
2 0
p , g / m l ) .
A l l a n t i b i o t i c s
were
p u r c h a s e d
f r o m
B o e h r i n g e r ( M a n n h e i m ,
G e r m a n y ) .
The c u l t u r e s were s h a k e n
f o r
2 h a t room
t e m p e r a t u r e a n d
t h e n
s h i f t e d f o r
3
h
a t
3 7 ° C .
E . c o l i
w a s i n o c u l a t e d
a t
a n o p t i c a l
d e n s i t y
a t 6 0 0 nm o f 0 . 1
i n
u n i v e r s a l
b o t t l e s
c o n t a i n i n g
5
m l
o f
t r y p t i c
s o y
b r o t h
( G i b c o ,
P a i s l e y , S c o t l a n d )
a n d t h e a p p r o p r i a t e a n t i b i o t i c s .
T h e
c u l t u r e s
w e r e s h a k e n
f o r 5 h
a t
3 7 ° C . I f
n e c e s s a r y , 1 mM
i s o p r o p y l - 1 3 - D - t h i o g a l a c t o s i d e
( I P T G )
w a s a d d e d
a f t e r
2
h o f
c u l t u r e .
B a c t e r i a f r o m
1
m l
o f
c u l t u r e
w e r e h a r v e s t e d
b y c e n t r i f u -
g a t i o n
i n a
m i c r o c e n t r i f u g e t u b e , a n d t h e p e l l e t
w a s d i s s o l v e d
i n 2 0 0
, u o f e l e c t r o p h o r e s i s s a m p l e b u f f e
r
( 6 . 5 mM T r i s - H C l
[ p H
6 . 8 ] ,
3
s o d i u m d o d e c y l
s u l f a t e , 5 3 - m e r c a p t o e t h a -
n o l , 1 0 % g l y c e r o l ,
0 . 0 3 % b r o m o p h e n o l b l u e ) .
T h e w h o l e
c e l l
l y s a t e
m i x t u r e c o n t a i n i n g
t h e
e q u i v a l e n t o f
3
x
1 0 8
b a c t e r i a
w a s s u b j e c t e d t o s o d i u m
d o d e c y l s u l f a t e - p o l y a c r y l a m i d e
( 1 0 % ,
w t / v o l ) g e l e l e c t r o p h o r e s i s
( S D S - P A G E ) .
D i s r u p t i o n o f y a d A 4
b y h o m o l o g o u s
r e c o m b i n a t i o n . A
2 7 0 - b p
i n t e r n a l P v u I I
f r a g m e n t o f t h e y a d A g e n e
f r o m
Y
e n t e r o -
c o l i t i c a
w a s e x t r a c t e d
f r o m p l a s m i d pACYC184-E4
( 2 ) . T h i s
f r a g m e n t , w h i c h
c o r r e s p o n d s t o n u c l e o t i d e s
9 5 3 t o 1 2 2 2 i n
t h e Y
e n t e r o c o l i t i c a s e r o t y p e 0 : 3 s e q u e n c
e p u b l i s h e d
b y
S k u r n i k
a n d
W o l f - W a t z ( 4 9 ) ,
w a s
c l o n e d i n t o
t h e s u i c i d e
p l a s m i d pGCS82
( 2 8 ) ,
g i v i n g p B C 9 . W e
m u t a g e n i z e d y a d A
b y
c r o s s i n g
E .
c o l i SmlO
l a m b d a p i r + ( p B C 9 )
w i t h
Y e n t e r o -
c o l i t i c a
W 2 2 7 0 3 ( p Y V e 2 2 7 ) . T h e
i n t e g r a t i o n
o f
pBC9
i n t o
p Y V e 2 2 7
was s e l e c t e d
o n
t h e
g e n t a m i c i n
r e s i s t a n c e
m a r k e r
o f
p B C 9 .
T h e
r e c o m b i n a n t p l a s m i d p Y V e 2 2 7 y a d A : : p
B C 9
w a s
c a l l e d
p B C 7 .
A m p l i f i c a t i o n a n d
c l o n i n g o f y a d 4 .
T h e
p o l y m e r a s e
c h a i n
r e a c t i o n
( 3 8 )
w a s
u s e d a s
d es c r i b ed p r e v i o us l y
( 1 5 )
w i t h t h e
f o l l o w i n g c y c l e s :
c y c l e 1 ,
5
m i n a t 9 3 ° C ,
1 0 m i n a t 4 0 ° C ,
5
m i n
a t
7 0 ° C ;
c y c l e s 2 t o
2 9 ,
1 m i n
a t 9 3 ° C , 2 m i n a t
5 5 ° C , 2
m i n a t
7 0 ° C ;
c y c l e
3 0 ,
1
m i n
a t 9 3 ° C , 2 m i n
a t
5 5 ° C ,
1 0 m i n a t
7 0 ° C .
T h e
a m p l i f i c a t i o n
p r i m e r s w e r e
MIPA 1 2 5 ( 5 ' - G G G T
C G A C G T I l T l f l A T T C A C G G G A A - 3 ' )
a n d
MIPA 1 2 6
( 5 ' - G G
TCTAGATAAATGACATTACCACTG-3 ).
MIPA 1 2 5 a n d
MIPA
1 2 6
c o n t a i n
a
S a l l a n d a n X b a I s i t e ,
r e s p e c t i v e l y . T h e
1 . 6 - k b p o l y m e r a s e
c h a i n
r e a c t i o n
p r o d u c t w a s d i g e s t e d
b y
S a l I a n d
X b a I
a n d c l o n e d
i n t h e
c o r r e s p o n d i n g
s i t e s
o f
p l a s m i d
p I C 2 0 H . T h e
r e s u l t i n g
p l a s m i d
w a s
c a l l e d
p M S 1 5 0 .
I n t h i s
c o n s t r u c t i o n ,
t h e
y a d A
g e n e
i s u n d e r t h e c o n t r o l
o f
t h e l a c
p r o m o t e r .
T h e 1 . 6 - k b X b a I - S a l I
f r a g m e n t
w a s
a l s o
c l o n e d
i n t h e s a m e
r e s t r i c t i o n s i t e s o f
p l a s m i d s pKNG78
a n d
p S e l e c t - 1 , g e n e r a t i n g p l a s m i d s
p M S 1 5 1
a n d p M S 1 5 2 , r e s p e c -
t i v e l y .
I n
p l a s m i d
p M S 1 5 1 ,
t h e
y a d A
g e n e
i s u n d e r
t h e
c o n t r o l o f
t h e t a c
p r o m o t e r ,
w h e r e a s
i n
p l a s m i d
p M S 1 5 2 ,
t h e
y a d A
g e n e
i s d o w n s t r e a m f r o m
t h e
l a c p r o m o t e r .
P l a s m i d
p M S 1 5 2
was
m a d e m o b i l i z a b l e
b y
c l o n i n g
t h e
o r i g i n
o f
t r a n s f e r ( o n i T )
o f RK 2 e x t r a c t e d a s a
BamHI
f r a g m e n t
f r o m
p T J S 8 2 .
T h e
m o b i l e p l a s m i d
w a s c a l l e d p M S 1 5 3 .
S e r a .
NHS
( S i g m a ,
S t .
L o u i s ,
M o . )
was
d e v o i d o f a n t i -
Yo p
a n t i b o d i e s a s c h e c k e d b y
i m m u n o b l o t . F l u o r e s c e i n
i s o t h i o c y a n a t e ( F I T C ) - c o n j u g a t e
d
r a b b i t
a n t i b o d i e s
t o
h u -
m an
C 3 c ,
F I T C - c o n j u g a t e d
r a b b i t a n t i b o d i e s
t o
g o a t
i m m u -
n o g l o b u l i n s ,
h o r s e r a d i s h
p e r o x i d a s e
( H R P ) - c o n j u g a t e d
r a b -
b i t
a n t i b o d i e s
t o
g o a t
i m m u n o g l o b u l i n s ,
a n d
HRP-
c o n j u g a t e d
s w i n e a n t i b o d i e s t o r a b b i t
i m m u n o g l o b u l i n s
w e r e
f r o m D A K O - I m m u n o g l o b u l i n s
a / s ( G l o s t r u p ,
D e n m a r k ) .
G o a t
a n t i - H
s e r u m
was
r e c e i v e d f r o m P . L .
M a s s o n
( E x p e r -
i m e n t a l M e d i c i n e
U n i t ,
U n i v e r s i t y
o f
L o u v a i n , B r u s s e l s ,
B e l g i u m ) .
T h e
s p e c i f i c i t y
o f
t h e s e r u m was
c h e c k e d
b y
i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s
a n d
O u c h t e r l o n y
i m m u n o d i f u s i o n ,
u s i n g
a s
a r e f e r e n c e
a
c o m m e r c i a l
c h i c k e n
a n t i - H
s e r u m
( S e r a - L a b ,
C r a w l e y T o w n ,
E n g l a n d ) .
B o t h s e r a s h o w e d
t h e
s a m e
p r e c i p i t a t i o n
a r c
i n
i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s
o f N S
a n d
i d e n t i t y
r e s p o n s e
b y O u c h t e r l o n y
a n a l y s i s .
T h e g o a t
a n t i b o d i e s
s p e c i f i c
t o f a c t o r H w e r e p u r i f i e d
f r o m
n i t r o c e l l u l o s e a s
d e s c r i b e d
p r e v i o u s l y ( 5 0 ) .
R a b b i t
p o l y -
I N F E C T . IMMUN.
-
8/9/2019 Infect. Immun.-1993-China-3129-36.pdf
3/8
Y a d A AND OPSONIZATION
3 1 3 1
c l o n a l
s e r u m
a g a i n s t
YadA
w a s o b t a i n e d a s d e s c r i b e d
b y
S o r y
e t
a l .
( 5 2 ) .
F l u o r o m e t r y .
B a c t e r i a
f r o m
1 m l o f c u l t u r e w e r e h a r -
v e s t e d ,
w a s h e d t w i c e
i n
p h o s p h a t e - b u f f e r e d
s a l i n e
( P B S )
( 1 3
mM s o d i u m h y d r o g e n o p h o s p h a t e , 2 . 8
mM p o t a s s i u m
d i h y d r o g e n o p h o s p h a t e ,
1 3 5 mM n a t r i u m c h l o r i d e , p H 7 . 4 )
a n d
r e s u s p e n d e d
i n
PBS
s u p p l e m e n t e d
w i t h 1 0
mM
e t h y l e n e -
g l y c o l - b i s O - a m i n o e t h y l
e t h e r ) - N , N , N - t e t r a a c e t i c
a c i d
( E G T A )
a n d
5
mM M g C l 2 a t a n o p t i c a l d e n s i t y
a t 6 0 0
nm o f
1 . 0 .
T h e
b a c t e r i a l
s u s p e n s i o n ( 9 0
, u l ) w a s i n c u b a t e d f o r 3 0
m i n a t
3 7 ° C
w i t h 1 0
o f
NHS.
T h e m i c r o c e n t r i f u g e t u b e w a s
t h e n c e n t r i f u g e d
f o r
1
m i n , a n d
t h e p e l l e t w a s
w a s h e d
o n c e
w i t h
P B S .
To m o n i t o r
C 3 b ,
we
a d d e d
F I T C - l a b e l e d
a n t i - C 3 c
a n t i b o d i e s
( f i n a l d i l u t i o n ,
1 / 2 0 0 ) a n d
i n c u b a t e d
t h e m i x t u r e
f o r 3 0
m i n
a t r o o m t e m p e r a t u r e i n t h e d a r k .
T o
m o n i t o r
f a c t o r
H , we a d d e d
g o at a nt i - H
s e r u m a t a
f i n a l
d i l u t i o n
o f
1 / 1 0 0
a n d
i n c u b a t e d
t h e m i x t u r e f o r 3 0 m i n a t
r o o m t e m p e r -
a t u r e .
T h e m i x t u r e
w a s
t h e n c e n t r i f u g e d , a n d
t h e b a c t e r i a
w e r e
w a s h e d
t w i c e w i t h P B S . F I T C - l a b e l e d r a b b i
t
a n t i b o d -
i e s t o
g o a t
i m m u n o g l o b u l i n s
w e r e
a d d e d
a t t h e f i n a l d i l u t i o n
o f 1 / 2 0 0 ,
i n c u b a t e d ,
a n d w a s h e d a s
d e s c r i b e d
a b o v e . I n
a l l
c a s e s ,
a f t e r
t h e l a s t
w a s h i n g , t h e
b a c t e r i a
w e r e r e s u s p e n d e d
i n
a
f i n a l
v o l u m e
o f
1
m l
o f
PBS a n d
a p p l i e d
t o a
f l u o r e s -
c e n c e - a c t i v a t e d
c e l l
s o r t e r
( F A C S ) ( E p i c s E l i t e ; C o u l t e r ,
H i a l e a h ,
F l a . ) .
To
c i r c u m v e n t
t h e
p r o b l e m
o f
Y a d A - m e d i -
a t e d
a u t o a g g l u t i n a t i o n ,
we s e l e c t e d
c o n s t a n t s i z e
p a r a m e t e r s
( l o w
s c a t t e r i n g
a n g l e
a n d s i d e
s c a t t e r ) .
T h e
n u m b e r o f e v e n t s
c o u n t e d
r a n g e d
f r o m 1 , 0 0 0 t o
2 , 0 0 0 .
B l o t t i n g
e x p e r i m e n t .
T h e
b a c t e r i a l m e m b r a n e
p r o t e i n s
w e r e
p r e p a r e d
a s d e s c r i b e d
b y A c h t m a n
e t
a l .
1 ) .
P r o t e i n s
w e r e
s e p a r a t e d
b y
SDS-PAGE
a n d
b l o t t e d
t o a
n i t r o c e l l u l o s e
m e m b r a n e
( 5 1 ) .
T h e
m e m b r a n e s
w e r e
i n c u b a t e d
o v e r n i g h t
w i t h
10
NHS.
A f t e r
t h r e e 5 - m i n w a s h e s i n
PBS c o n t a i n i n g
0 . 1 %
Tween
2 0 ,
t h e m e m b r a n e s w e r e i n c u b a t e d f o r 1
h w i t h
1 0 %
a n t i - f a c t o r
H
s e r u m .
A f t e r
b e i n g w a s h e d ,
t h e mem-
b r a n e s
w e r e
i n c u b a t e d
w i t h
H R P - l a b e l e d r a b b i t
a n t i b o d i e s
d i r e c t e d
a g a i n s t g o a t
i m m u n o g l o b u l i n s ,
w a s h e d, a n d
s t a i n e d
a s
d e s c r i b e d
p r e v i o u s l y
( 5 1 ) .
RESULTS
D e p o s i t s
o f
C 3 b o n
t h e s u r f a c e o f Y . e n t e r o c o l i t i c a .
V a r i a n t s ,
pYV+
a n d
pYV-,
o f
Y
e n t e r o c o l i t i c a
W 2 2 7 0 3
w e r e
i n c u -
b a t e d u n d e r
c o n d i t i o n s
o f e x p r e s s i o n o f t h e y o p
r e g u l o n .
A f t e r
h a r v e s t ,
t h e
b a c t e r i a
w e r e i n c u b a t e d w i t h 10
NHS,
a n d
t h e
a m o u n t
o f
C 3 b f i x e d
w a s r e v e a l e d b y
f l u o r o m e t r y
w i t h a n
F I T C - l a b e l e d
a n t i s e r u m r a i s e d a g a i n s t f r a g m e n t
C 3 c .
T h i s
s e r u m
r e c o g n i z e s
b o t h
C 3 b a n d C 3 b i .
T h e
a m o u n t o f
t o t a l
C 3 b
d e t e c t e d
o n
pYV+ c e l l s
( F i g .
1 B , p a n e l 1 ) w a s
l o w e r
t h a n
t h e
a m o u n t
d e t e c t e d o n pYV- c e l l s ( F i g .
1 B ,
p a n e l
2 ) .
T h i s r e s u l t
c o n f i r m e d
t h e
o b s e r v a t i o n
m a d e
b y
T e r t t i
e t
a l .
( 5 3 )
w i t h
a
Y
e n t e r o c o l i t i c a
s t r a i n o f s e r o t y p e
0 : 3 .
Y o p s
a n d
C 3 b
d e p o s i t i o n .
T o
d e t e r m i n e
w h e t h e r
a
Yo p
p r o t e i n
i s
i n v o l v e d
i n
t h e
i n h i b i t i o n
o f C 3 b d e p o s i t i o n ,
we
t e s t e d
o u r
m i n i - M u d l a c
i n s e r t i o n
m u t a n t s
W 2 2 7 0 3 ( p G C 2 1 7 )
a n d
W 2 2 7 0 3 ( p G C 4 0 3 ) ,
w h i c h
a r e
a f f e c t e d
i n t h e v i r C o p e r o n
( 1 3 ) .
T h e s e
m u t a n t s
a r e
u n a b l e t o
s e c r e t e t h e
Y o p s ,
b u t
t h e y
s t i l l p r e s e n t
YadA
o n
t h e i r s u r f a c e s
( 3 5 )
( F i g .
L A ) .
T h e t w o
m u t a n t s
f i x e d
t h e
s a m e
a m o u n t
o f
C 3 b
a s t h e i r p a r e n t a l
s t r a i n
( F i g .
1 B ,
p a n e l s
3
a n d
4 ) .
We c o n c l u d e d t h a t
t h e
s e c r e t i o n
o f Y o p s
w a s
n o t i n v o l v e d
i n t h e r e d u c t i o n o f
f i x a t i o n
o f
C 3 b
b y Y
e n t e r o c o l i t i c a .
YadA a n d
C 3 b d e p o s i t s .
Tw o
y a d A
i n s e r t i o n
m u t a n t s ,
W 2 2 7 0 8 ( p G B 0 8 )
a n d
W 2 2 7 0 8 ( p G B 9 1 0 ) ,
f i x e d m o r e
C 3 b
t h a n
t h e
w i l d
t y p e
( F i g . 1 B ,
p a n e l s
5
a n d
6 ) ,
s u g g e s t i n g t h a t YadA
w a s
i n v o l v e d
i n t h e
r e d u c t i o n o f C 3 b
d e p o s i t i o n . H o w e v e r ,
m u t a n t s
c a r r y i n g p G B O 8
a n d
p G B 9 1 0
a r e a l s o a f f e c t e d i n
t h e
u n l i n k e d y l p A g e n e b e c au s e
o f
a p r e v i o u s
T n 3 i n s e r t i o n
m u t a t i o n
2 , 9 ) . H e n c e ,
we c o n s t r u c t e d a p YV p l a s m i d
t h a t
w a s m u t a t e d o n l y
i n y a d A .
T h e y a d A g e n e
w a s
d i s r u p t e d
b y
h o m o l o g o u s
r e c o m b i n a t i o n b e t w e e n
t h e
p YV
p l a s m i d
a n d a
s u i c i d e
p l a s m i d
( 3 6 )
c a r r y i n g
a n
i n t e r n a l
p o r t i o n
o f t h e
y a d A
g e n e . T h e
r e c o m b i n a n t
s t r a i n , W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) , n o
l o n g e r
p r o d u c e d YadA ( F i g .
1 A ) , a n d we o b s e r v e d t h a t a g a i n
t h e
l o s s
o f YadA c o r r e l a t e d w i t h a n i n c r e a s e
o f t h e
a m o u n t
o f
C 3 b o n
t h e b a c t e r i a ( F i g .
1 B ,
p a n e l 7 ) .
T o a v o i d
a n y
b i a s
d u e
t o t h e
r o u g h
c h a r a c t e r o f W 2 2 7 0 3 , we
m u t a g e n i z e d
y a d 4 i n
W 1 0 2 4 ,
a
s m o o t h
s t r a i n
o f t h e s a m e
s e r o t y p e . We
o b t a i n e d
t h e s a m e
r e s u l t
( n o t
s h o w n )
a s w i t h W 2 2 7 0 3 , i n d i c a t i n g
t h a t
t h e a c t i o n o f
YadA o n
C 3 b
d e p o s i t i o n i s i n d e p e n d e n t
o f
t h e
l e n g t h
o f t h e l i p o p o l y s a c c h a r i d e .
S i n c e
o u r
y a d A
m u t a t i o n s
c o u l d
b e
p o l a r
a n d a f f e c t t h e
e x p r e s s i o n
o f
u n c h a r a c t e r i z e d
d o w n s t r e a m g e n e s ,
we
c o m -
p l e m e n t e d
t h e
m u t a t i o n w i t h a
p l a s m i d c o n t a i n i n g
o n l y y a d A
a n d n o o t h e r p YV s e q u e n c e . P l a s m i d
p M S 1 5 3 c o n t a i n s a
p o l y m e r a s e
c h a i n
r e a c t i o n - t a i l o r e d
y a d A
g e n e
d e v o i d
o f
i t s p r o m o t e r , c l o n ed d o w n s t r e a m f r o
m
t h e
l a c
p r o m o t e r o f
v e c t o r
p S e l e c t - 1 .
T h e
u s e
o f t h e l a c
p r o m o t e r
a l l o w e d
u s t o b y p a s s t h e n e e d f o r V i r F a n d h e n c e
t o p r o d u c e
YadA
i n a pYV- s t r a i n . T h e
t h r e e
s t r a i n s
W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ,
W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( p M S 1 5 3 ) ,
a n d W 2 2 7 0 3 ( p M S 1 5 3 ) w e r e
t h e n
t e s t e d
f o r t h e i r
c a p a c i t i e s t o f i x C 3 b . C o m p l e m e n t e d s
t r a i n
W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( p M S 1 5 3 ) f i x e d l e s s
C 3 b
t h a n W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) .
I n t e r e s t i n g l y , W 2 2 7 0 3
c a r r y i n g o n l y p M S 1 5 3 a n d n o
p YV
p l a s m i d
f i x e d
a s
l i t t l e C 3 b
a s W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( p M S 1 5 3 )
( F i g .
1 B , p a n e l s
7 ,
8 ,
a n d 9 ) . We
c o n c l u d e d
f r o m
a l l
o f t h e s e
e x p e r i m e n t s
t h a t
YadA w a s i n v o l v e d i n t h e r e d u c t i o n o f
t h e
a m o u n t o f
C 3 b o b s e r v e d
o n t h e p Y V + Y e n t e r o c o l i t i c a
c e l l s .
M o r e o v e r ,
YadA
i s p r e s u m a b l y
t h e o n l y
p Y V - e n c o d e d
f a c t o r
i n v o l v e d i n
t h e
p r o t e c t i o n
a g a i n s t G 3 b .
T o c o n f i r m t h e r o l e
o f
YadA
i n t h e r e d u c t i o n o f
C 3 b
f i x a t i o n ,
we
m o n i t o r e d
t h e r e s p o n s e
o f
E .
c o l i
c e l l s
p r o d u c -
i n g
Y a d A .
F o r
t h i s
a n a l y s i s ,
we
u s e d
p l a s m i d
p M S 1 5 1 ,
w h i c h
c o n t a i n s t h e
yadA g e n e
c l o n e d d o w n s t r e a m
f r o m
t h e
t a c
p r o m o t e r
o f
v e c t o r pKNG78. T h i s
p l a s m i d
d i r e c t s
t h e
p r o d u c t i o n
o f
YadA
a t t h e c e l l
s u r f a c e
u p o n i n d u c t i o n
b y
IPTG ( F i g .
2 A ) .
F o r u n k n o w n r e a s o n s ,
t h e a m o u n t o f
YadA
v a r i e d
f r o m o n e
c u l t u r e
t o a n o t h e r ( F i g .
2 A ) . W e m o n i t o r e d
t h e
d e p o s i t i o n o f C 3 b i n
t w o s e p a r a t e c u l t u r e s o f
E .
c o l i
J M 1 O 1 ( p M S 1 5 1 )
a n d i n o n e
c u l t u r e o f
J M 1 O 1 ( p K N G 7 8 )
t a k e n
a s
a n e g a t i v e c o n t r o l . We f o u n d t h a t
t h e Y a d A -
p r o d u c i n g
b a c t e r i a
f i x e d l e s s C 3 b t h a n
t h e p a r e n t a l
b a c t e r i a
( F i g .
2 B ) .
M o r e o v e r ,
t h e
r e d u c t i o n o f
C 3 b
d e p o s i t i o n
c o r r e -
l a t e d w i t h t h e
a m o u n t o f YadA p r e s e n t a t t h e c e l l s u r f a c
e .
F i x a t i o n
o f f a c t o r H .
I n
v i e w o f
t h e
p r e c e d i n g r e s u l t s ,
we
h y p o t h e s i z e d
t h a t YadA c o u l d
l e a d
t o
t h e
f i x a t i o n
o f
f a c t o r
o n t h e
b a c t e r i a l
s u r f a c e a n d s o a l l o w f a c t o r I t o
c l e a v e
C 3 b
i n C 3 b i
a n d
f u r t h e r i n C 3 dg , C 3 c,
a n d
C 3 d . We
t h u s
m o n i t o r e d
t h e
b i n d i n g
o f
f a c t o r
H a t
t h e
c e l l
s u r f a c e .
B a c t e r i a o f
s t r a i n s
W 2 2 7 0 3 ( p Y V 2 2 7 ) ,
W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ,
W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( p S e l e c t - 1 ) , a n d
W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( p M S 1 5 3 )
w e r e i n c u b a t e d
f i r s t
w i t h 1 0 % NHS, c o l l e c t e d , a n d
i n c u -
b a t e d w i t h a n o n p u r i f i e d g o a t a n t i - H s
e r u m . B a c t e r i a
w e r e
t h e n t r e a t e d w i t h a n
F I T C - l a b e l e d
a n t i s e r u m
d i r e c t e d a g a i n s t
g o a t
i m m u n o g l o b u l i n G
( I g G )
a n d a n a l y z e d
i n
a F A C S .
A s
h y p o t h e s i z e d ,
t h e b a c t e r i a s y n t h e s i z i n g
YadA
f i x e d
m o r e
f a c t o r H
t h a n
t h e m u t a n t s ( F i g . 3 ) .
We t h e n s t u d i e d
t h e
i n t e r a c t i o n b e t w e e n YadA a n d
f a c t o r
H
i n
a n a f f i n i t y
b l o t e x p e r i m e n t .
T o t a l
m e m b r a n e p r o t e i n s
w e r e e x t r a c t e d f r o m E . c o l i
L K 1 1 1 ( p M S 1 5 3 )
a n d
L K 1 1 1 ( p S e l e c t - 1 ) ,
s e p a r a t e d b y SDS-PAGE, a n d
t r a n s -
VOL.
6 1 ,
1 9 9 3
-
8/9/2019 Infect. Immun.-1993-China-3129-36.pdf
4/8
3 1 3 2 C H I NA ET AL.
1
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Dau
,
- , . .
I o o o
1
1000~~~~~
1. -1 0
1 N o oA
-A
T TY
F L U O R E S C
E N I C E I N T E N S f S T . Y
F I G .
1 .
( A )
C o o m a s s i e b l u e - s t a i n e d
SDS-PAGE
g e l
o f t o t a l Y e n t e r o c o l i t i c a p r o t e i n s . L
a n e s : 1 , W 2 2 7 0 3 ( p Y V 2 2 7 ) ( Y a d A + Y o p s + ) ;
2 ,
W 2 2 7 0 3 ( p Y V - ) ( Y a d A -
Y o p s - ) ;
3 , W 2 2 7 0 3 ( p GC 4 0 3 ) ( Y a d A +
Y o p s - ) ;
4 ,
W 2 2 7 0 3 ( p G C 2 1 7 ) ( Y a d A +
Y o p s - ) ;
5 ,
W 2 2 7 0 8 ( p G B 0 8 )
( Y a d A -
Y o p s + ) ;
6 , W 2 2 7 0 8 ( p G B 9 1 0 ) ( Y a d A -
Y o p s + ) ;
7 , W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( Y a d A -
Y o p s + ) ;
8 , W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( p M S 1 5 3 ) ( Y a d A +
Y o p s + ) ; 8 ,
W 2 2 7 0 3 ( p B C 7 ) ( p S e l e c t - 1 ) ( Y a d A -
Y o p s + ) ; 9 ,
W 2 2 7 0 3 ( p M S 1 5 3 )
( Y a d A + Y o p s - ) .
T h e u p pe r a r ro w p o i n t s t o t h e YadA p o l y m e r
. T h e
l o w e r
a r r o w i n d i c a t e s
t h e p o s i t i o n
o f
t h e m o l e c u l a r w e i g h t m a r k e r . ( B ) F l u o
r o m e t r i c
assay
o f
C 3 b
d e p o s i t e d
on t h e b a c t e r i a l s u r f a c e .
T h e
same
s t r a i n s
as
i n
t h e r e s p e c t i v e
l a n e s
i n
p a n e l A
were
u s e d .
T h e
mean
f l u o r e s c e n c e
i n t e n s i t y
( X )
i s
i n d i c a t e d
a b o v e
e a c h p e a k .
T h e
n u m b e r
o f
e v e n t s c o u n t e d f o r e a c h s t r a i n was 1 , 5 0
0 .
T h e
means
were a n a l y z e d b y
a
h i e r a r c h i c
F
s t a t i s t i c
a n a l y s i s .
T h e
d i f f e r e n c e
b e t w e e n
v a l u e s
f o r
YadA+
a n d
YadA- s t r a i n s was
s i g n i f i c a n t
( P
<
0 . 0 1 ) .
f er r e d o n t o
a
n i t r o c e l l u l o s e m e m b r a n e .
T h i s
membrane was
i n c u b a t e d
f i r s t
w i t h 1 0 NHS
a n d t h en w i t h a
s p e c i f i c
g o a t
a n t i - H s e r u m . F a c t o r H was v i s u a l i z e
d
by
H R P - l a b e l e d
a n t i - g o a t
i m m u n o g l o b u l i n s .
The
monomer o f YadA ex -
t r a c t e d f r o m E .
c o l i
membranes f i x ed f a c to r H
( F i g . 4 B ) .
H o w e v e r ,
t h e p o l y m e r d i d
n o t
r e a c t , p r e s u m a b l y
b e c a u s e
o f
t h e
p o o r
t r a n s f e r
o f
t h i s
l a r g e
m o l e c u l e .
To
c o n f i r m
t h i s l a c k
o f
t r a n s f e r o f t h e
p o l y m e r ,
we c a r r i e d
o u t a
W e s t e r n b l o t
( i m m u n o b l o t ) b y
u s i n g
a
p o l y c l o n a l
r a b b i t a n t i - Y a d A s e r u m
p r e v i o u s l y
shown
t o
r e c o g n i z e
b o t h
t h e
p o l y m e r
a n d t h e
monomer
o f
YadA
( 5 2 ) .
We o b s e r v e d t h a t t h i s serum
r e a c t e d
o n l y
w i t h
t h e
monomer
i n t h i s
i m m u n o b l o t
( F i g .
4 D ) .
A
s t r o n g
b i n d i n g
o f
f a c t o r
H
t o a
3 7 - k D a b a n d
was a l s o
o b s e r v e d ;
t h i s b a n d c o u l d
c o r r e s p o n d
t o E .
c o l i
p o r i n s . S u c h
a r e a c t i o n
c o u l d
b e
e x p l a i n e d
by
t h e
pre sence o f a n t i - E .
c o l i
a n t i b o d i e s
i n
t h e
g o a t a n t i - H
s e r u m .
When
t h e a n t i - H a n t i -
b o d i e s were
p u r i f i e d ,
b i n d i n g
was
r e s t r i c t e d
t o
t h e
YadA
monomer
( F i g . 4 C ) .
We c o n c l u d e d
f r o m t h e s e e x p e r i m e n t s
t h a t YadA f i x e d
f a c t o r
H
by
a
p r o t e i n - p r o t e i n
i n t e r a c t i o n .
DISCUSSION
N o n s p e c i f i c
d e f e n s e
m e c h a n i s m s
s u c h as
c o m p l e m e n t
a c t i v a t i o n
a n d
p h a g o c y t o s i s
p l a y
an
i m p o r t a n t
r o l e
i n
t h e
d e s t r u c t i o n
a n d
e l i m i n a t i o n
o f
i n v a d i n g m i c r o o r g a n i s m s .
P a t h o g e n i c
b a c t e r i a h a v e t h u s
d e v e l o p e d s p e c i f i c
s y s t e m s
a l l o w i n g
them
t o a v o i d r e c o g n i t i o n
by
t h e
n o n s p e c i f i c
d e -
f e n s e
s y s t e m s
o f
t h e i r
h o s t
( f o r
a
r e v i e w ,
s ee r e f e r e n c e
2 3 ) .
F o r
g r a m - n e g a t i v e
b a c t e r i a ,
a c t i v a t i o n o f
c o m p l e m e n t
h a s
tw o
consequences:
an
o p s o n i c
e f f e c t
r e s u l t i n g
f r o m t h e
f i x a t i o n o f
C 3 b
on
t h e
b a c t e r i a l
s u r f a c e
a n d a
l y t i c
e f f e c t
du e
t o
t h e f o r m a t i o n o f t h e membrane a t t a c k
c o m p l e x . O p s o n i z a -
t i o n l e a d s t o
p h a g o c y t o s i s b y
p o l y m o r p h o n u c l e a r
l e u k o c y t e s
v i a t h e i n t e r a c t i o n
b e t w e e n t h e c e l l s u r f a c e
r e c e p t o r
C R1
o r
C R3 a n d
C 3b
o r
C 3 b i d e p o s i t e d
on
t h e t a r g e t b a c t e r i a .
B a c t e r i a can t h u s a v o i d
p h a g o c y t o s i s b y r e d u c i n g
t h e f i x a -
t i o n o f
C 3 .
I n s e v e r a l
i n s t a n c e s ,
t h i s r e d u c t i o n r e s u l t s
from
t h e
f i x a t i o n o f
f a c t o r
H ,
which l e a d s
t o t h e
i n a c t i v a t i o n
o f
C 3 b
b y
f a c t o r
I
a n d
p r e v e n t s
t h e f o r m a t i o n o f t h e a l t e r n a t i v e
C 3
c o n v e r t a s e
( C 3 B b ) . P a t h o g e n i c
b a c t e r i a
a d o p t e d
d i f f e r e n t
s t r a t e g i e s
t o b i n d f a c t o r
H.
So me
o f them cove r t h e i r
s u r f a c e
w i t h
s i a l i c
a c i d
r e s i d u e s ,
t h u s
m i m i c k i n g
h o s t
c e l l
s u r f a c e s :
g r o u p
B
s t r a i n s
o f S t r e p t o c o c c u s
p y o g e n e s
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c e l l
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( 1 6 ) ,
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N e i s s e r i a
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N e i s s e r i a
g o n o r r h o e a e
s i a l y l a t e
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i n
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n e u r a m i n i c
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( 1 8 ) .
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b a c t e r i a
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p r o t e i n s
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A
-
8/9/2019 Infect. Immun.-1993-China-3129-36.pdf
5/8
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2 .
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1 , J M 1 0 1 ( p K N G 7 8 ) ( Y a d A - ) ;
2 , J M 1 0 1 ( p M S 1 5 1 ) ( Y a d A + )
c u l t u r e 1 ; 3 ,
J M 1 0 1 ( p M S 1 5 1 )
( Y a d A + )
c u l t u r e
2 .
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p o l y m e r
i s i n d i c a t e d
b y
t h e
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t h e l o w e r
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t h e
p o s i t i o n
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t h e
m o l e c u l a r
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( B )
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t h e b a c t e r i a l s u r f a c e .
T h e
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i n d i c a t e d
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T h e n u m b e r o f e v e n t s
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2 , 0 0 0 .
A
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b y
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c o n t r a s t s
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p e r f o r m e d
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mean
f o r
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s i g n i f i c a n t l y
d i f f e r e n t
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2
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p a n e l
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s t r a i n s
p r o d u c i n g
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p r o t e i n ( 2 4 ) .
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l o n g
t i m e
t h a t
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e n t e r o c o l i t i c a
s t r a i n s
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t h e
b a c t e r i c i d a l
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man
serum
( 2 7 )
a n d
t h a t
YadA i s i n v o l v e d
i n t h i s r e s i s t a n c e
( 2 ) .
T e r t t i
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( 5 3 )
showed
t h a t
pYV+
s t r a i n s d o
i n d e e d f i x
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t h a n t h e i r
pYV-
i s o g e n i c v a r i a n t s ,
c o n f i r m i n g
t h a t
t h e
p YV p l a s m i d
e n c o d e s
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mechanism
p r e v e n t i n g
t h e
a c t i v a t i o n
o f
c o m p l e m e n t by
t h e a l t e r n a t i v e
p a t h w a y .
More
r e c e n t l y ,
P i l z e t a l .
( 4 0 )
showed t h a t YadA
p r e v e n t s
t h e
f i x a t i o n o f
t h e membrane
a t t a c k
c o m p l e x
a n d i n c r e a s e s
t h e
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C 3 b
i n a c t i v a t i o n . Our
d a t a
c o n f i r m e d t h a t t h e
p YV
p l a s m i d
i n d e e d e n c o d e s
a f u n c t i o n
r e d u c i n g
C 3 b
d e p o s i t i o n ,
a n d
t h e y
d e m o n s t r a t e d
t h a t
YadA
i s
r e s p o n s i b l e
f o r t h i s
p h e n o t y p e .
T h e y
a l s o
s h o w e d t h a t t h e r e d u c t i o n o f
o p -
s o n i z a t i o n i s a s s o c i a t e d
w i t h t h e f i x a t i o n
o f
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H . T h e r e
i s
t h u s
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f u n c t i o n a l
p a r a l l e l
b e t w e e n
YadA o f Y e n t e r o c o l i t -
i c a
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p r o t e i n
M
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S .
p y o g e n e s
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s p i t e
o f
t h e f a c t t h a t we
h a v e
f o u n d
n o
s e q u e n c e h o m o l o g y
b e t w e e n
t h e s e t w o
p r o -
t e i n s .
By
r e f e r e n c e
t o t h e known
a n t i p h a g o c y t i c
a c t i v i t y
o f
p r o t e i n M,
we c a n
h y p o t h e s i z e
t h a t t h e
r e s i s t a n c e
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Y
e n t e r o c o l i t i c a
t o
p h a g o c y t o s i s
b y p o l y m o r p h o n u c l e a r
l e u k o -
c y t e s ( 3 1 , 3 2 )
i s m e d i a t e d
b y
YadA.
The
m u l t i p l i c i t y
o f t h e
f u n c t i o n s
a t t r i b u t e d
s o f a r t o YadA
V O L .
6 1 ,
1 9 9 3
-
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t h e
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o f t h e
b a c t e r i a
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i n f e c t e d
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( 2 5 ) .
H o w e v e r ,
we
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t h i s
p e r s i s t e n c e
r e s u l t s
f r o m a d h e r e n c e t o t h e mouse
e n t e r o c y t e s
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f r o m a
p r o l o n g e d
i n f e c t i o n o f t h e
P e y e r ' s
p a t c h e s .
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p r o t e i n s
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( Y a d A + ) ; 2 , L K 1 1 1 ( p S e l e c t - 1 )
( Y a d A - ) .
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p o l y m e r
( P )
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( M )
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N i t r o c e l l u l o s e m e m b r a n e
a f t e r
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t r a n s f e r ,
i n c ub a t e d w i t h
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r e v e a l e d
b y a n t i - H a n t i b o d i e s . T h e
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b y
t h e a r r o w . L a n e s
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p a n e l
A .
( C )
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p a n e l
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g o a t a n t i - H a n t i b o d i e s .
( D ) A f t e r SDS-PAGE, t h e p r o t e i n s
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b e e n t r a n s f e r e d o n t o
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n i t r o c e l l u l o s e
m e m b r a n e ,
i n c u b a t e d w i t h
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s e r u m ,
a n d
r e v e a l e d b y
H R P - l a b e l e d
a n t i r a b b i t a n t i b o d i e s .
T h e
a r r o w
i n d i c a t e s t h e
monomer o f Y a d A .
L a n e s
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i n
p a n e l
A .
I N F E C T . IMMUN.
1
-
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YadA
AND OPSONIZATION
3 1 3 5
s p e c i f i c
e n t e r o c y t e
r e c e p t o r
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b e e n
d e s c r i b e d
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b e
r e m e m b e r e d
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YadA
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d i f f e r e n t f r o m t h a t
o f
t h e
m a j o r i t y
o f t h e a d h e s i n s i n v o l v e d
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m u c o s a l c o l o n i z a t i o n . T h e f o l l o w i n
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o t h e r
p r o p e r t i e s
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YadA
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t o
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p h a s e i n t h e
i n v a s i o n
p r o c e s s . i )
YadA a d h e r e s t o
c o m p o n e n t s
o f t h e
e x t r a c e l l u l a r
m a t r i x ,
s u c h a s
c o l l a g e n
( 1 7 , 4 7 )
a n d
f i b r o n e c t i n
( 5 4 ) . H o w
t h e s e
a d h e s i o n
p r o p e r t i e s
c o n t r i b u t e t o
t h e
t i s s u e i n v a s i o n
i s
n o t
v e r y
c l e a r
y e t ,
b e c a u s e
Y e r s i n i a
p e s t i s g a i n s
i n i n v a s i v e -
n e s s
w h i l e
l o o s i n g
YadA ( 4 4 ) . i i )
YadA i n t e r f e r e s w i t h
t h e
a l t e r n a t i v e
c o m p l e m e n t
p a t h w a y
a c t i v a t i o n ,
i . e . , k i l l i n g
b y
c o m p l e m e n t ( 2 )
a n d o p s o n i z a t i o n ( 5 3 )
l e a d i n g
t o
p h a g o c y t o -
s i s
b y
p o l y m o r p h o n u c l e a r
l e u k o c y t e s ( 3 1 ) . T h i s p r o p e r t y ,
w h i c h i s a c h i e v e d
b y
b i n d i n g
f a c t o r
H , a s
s h o w n i n
t h i s
p a p e r ,
i s
c l e a r l y
r e l e v a n t
t o t h e
p a t h o g e n e s i s
o f Y
e n t e r o -
c o l i t i c a .
One c o u l d w o n d e r why a Y e r s i n i a
f u n c t i o n f a v o r i n g
t h e b a c t e r i a l i n v a s i o n i s m i s s i n g
i n
Y
p e s t i s . I t
s h o u l d b e
r e m e m b e r e d
t h a t
Y
p e s t i s
p r o d u c e s
a c a p s u l e , c a l l e d
f r a c -
t i o n I
a n t i g e n ,
w h i c h h a s a n a n t i p h a g o c y t i c
a c t i v i t y ( 8 ) .
YadA
i s
t h u s
d i s p e n s a b l e ,
i n t h i s
r e g a r d ,
f o r Y
p e s t i s ,
w h i c h
m i g h t e x p l a i n
i t s l o s s b y
a
p o i n t
m u t a t i o n ( 4 5 ) .
ACKNOWLEDGMENTS
W e t h a n k
P . M a s s o n f o r k i n d l y s h a r i n g
h i s e r u d i t i o n
i n t h e
c o m p l e m e n t
f i e l d a n d f o r
p r o v i d i n g
t h e a n t i - f a c t o r H s e r u m . We
a l s o
t h a n k C h a n t a l
D e b a n d e f o r d r a w i n g t h e
f i g u r e s .
T h i s w o r k was
s u p p o r t e d
b y g r a n t s
f r o m
t h e B e l g i a n
FRSM
( F o n d s
N at i o na l d e
l a
R e c h e r c h e
S c i e n t i f i q u e M e d i c a l e ,
c o n v e n t i o n
3 . 4 5 1 4 . 9 3 )
a n d
b y
t h e
B e l g i a n
p r o g r a m o n
I n t e r u n i v e r s i t y
P o l e s
o f
A t t r a c t i o n
i n i t i a t e d
b y
t h e B e l g i a n S t a t e ,
P r i m e
M i n i s t e r s
O f f i c e ,
S c i e n c e
P o l i c y
P r o g r a m m i n g .
B . C . w a s
t h e
r e c i p i e n t
o f
a
f e l l o w s h i p
f r o m t h e
B e l g i a n
I . R . S . I . A .
( I n s t i t u t
p o u r
l ' E n c o u r a g e m e n t
d e
l a
R e c h e r c h e
S c i e n t i f i q u e
d a n s l I n d u s t r i e
e t
l A g r i c u l t u r e ) . M . - P . S .
i s
S e n i o r
R e s e a r c h
A s s i s t a n t o f t h e F o n d s d e
D e v e l o p p e m e n t
S c i e n -
t i f i q u e
o f
t h e
U n i v e r s i t y
o f L o u v a i n
( F D S ) .
REFERENCES
1 .
A c h t m a n ,
M . ,
S .
S c h w u c h o w ,
R .
H e l m u t h ,
G .
M o r e l l i , a n d
A .
M a n n i n g .
1 9 7 8 .
C e l l - c e l l i n t e r a c t i o n s
i n
c o n j u g a t i n g
E s c h e r i c h i a
c o l i :
C o n - m u t a n t s a n d
s t a b i l i z a t i o n
o f m a t i n g
a g g r e g a t e s .
M o l .
G e n . G e n e t .
1 6 4 : 1 7 1 - 1 8 3 .
2 .
B a l l i g a n d ,
G . ,
Y . L a r o c h e , a n d
G . C o r n e i s .
1 9 8 5 .
G e n e t i c
a n a l y s i s
o f v i r u l e n c e
p l a s m i d f r o m
s e r o g r o u p
9
Y e r s i n i a
e n t e r o -
c o l i t i c a s t r a i n :
r o l e o f o u t e r m e m b r a n e
p r o t e i n
P 1
i n r e s i s t a n c e
t o human
s e r u m
a n d a u t o a g g l u t i n a t i o n .
I n f e c t .
I m m u n . 4 8 : 7 8 2 -
7 8 6 .
3 .
B i o t , T . ,
a n d G . R . C o r n e l i s .
1 9 8 8 . T h e r e p l i c a t i o n ,
p a r t i t i o n
a n d
yo p
r e g u l a t i o n
o f t h e
pYV
p l a s m i d s
a r e
h i g h l y
c o n s e r v e d
i n
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a
a n d
Y p s e u d o t u b e r c u l o s i s .
J .
G e n .
M i -
c r o b i o l . 1 3 4 : 1 5 2 5 - 1 5 3 4 .
4 .
B l i s k a , J . B . , J .
C . C l e m e n s , J .
E . D i x o n ,
a n d
S .
F a l k o w .
1 9 9 2 .
T h e
Y e r s i n i a
t y r o s i n e
p h o s p h a t a s e :
s p e c i f i c i t y
o f a b a c t e r i a l
v i r u l e n c e d e t e r m i n a n t f o r p h o s p h o p r
o t e i n s
i n J 7 7 4 A . 1
m a c r o -
p h a g e .
J .
E x p .
M e d .
1 7 6 : 1 6 2 5 - 1 6 3 0 .
5 .
B l i s k a ,
J . B . ,
a n d
S .
F a l k o w .
1 9 9 2 .
B a c t e r i a l
r e s i s t a n c e
t o
c o m p l e m e n t
k i l l i n g
m e d i a t e d
b y
t h e
A i l p r o t e i n
o f Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a .
P r o c .
N a t l . A c a d .
S c i . USA 8 9 : 3 5 6 1 - 3 5 6 5 .
6 .
B o l i n ,
I . ,
L .
N o r l a n d e r ,
a n d H . W o l f - W a t z . 1 9 8 2 .
T e m p e r a t u r e -
i n d u c i b l e o u t e r
m e m b r a n e p r o t e i n
o f Y e r s i n i a
p s e u d o t u b e r c u l o -
s i s a n d
Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a
i s
a s s o c i a t e d
w i t h
t h e
v i r u l e n c e
p l a s m i d .
I n f e c t . I m m u n . 3 7 : 5 0 6 - 5 1 2 .
7 .
B u k h o l m , G . ,
G .
K a p p e r u d , a n d
M.
S k u r n i k .
1 9 9 0 . G e n e t i c
e v i d e n c e t h a t
y o p A
g e n e - e n c o d e d
Y e r s i n i a
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p r o t e i n
Y o p l
m e d i a t e s i n h i b i t i o n o f
a n t i - i n v a s i v e
e f f e c t o f
i n t e r f e r o n . I n f e c t . I m m u n .
5 8 : 2 2 4 5 - 2 2 5 1 .
8 .
C a v a n a u g h ,
D .
C . ,
a n d R . R a n d a l l . 1 9 5 9 .
The r o l e
o f m u l t i p l i -
c a t i o n o f P a st e ur e l l a
p e s t i s
i n m o n o n u c l e a r
p h a g o c y t e s
i n
t h e
p a t h o g e n e s i s
o f f l e a - b o r n e
p l a g u e . J .
I m m u n o l . 8 3 : 3 4 8 - 3 6 3 .
9 .
C h i n a , B . ,
T .
M i c h i e l s , a n d
G .
R . C o r n e l i s .
1 9 9 0 .
T h e p YV
p l a s m i d
o f Y er s i ni a
e n c o d e s
a l i p o p r o t e i n ,
Y l p A , r e l a t e d t o
T r a T. M o l .
M i c r o b i o l .
4 : 1 5 8 5 - 1 5 9 3 .
1 0 .
C o r n e f i s , G . , a n d
C .
C o l s o n . 1 9 7 5 . R e s t r i c t i o n o f
DNA
i n
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a
d e t e c t e d
b y
r e c i p i e n t
a b i l i t y f o r a
d e r e -
p r e s s e d
R
f a c t o r f r o m E s c h e r i c h i a c o l i . J . G e n
.
M i c r o b i o l .
8 7 : 2 8 5 - 2 9 1 .
1 1 .
C o r n e l i s ,
G . ,
Y .
L a r o c h e ,
G .
B a l l i g a n d , M . - P .
S o r y ,
a n d
G .
W a u t e r s .
1 9 8 7 .
Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a , a
p r i m a r y
m o d e l
f o r
b a c t e r i a l
i n v a s i v e n e s s .
R e v .
I n f e c t .
D i s .
9 : 6 4 - 8 7 .
1 2 . C o r n e l i s ,
G . ,
C .
S l u i t e r s , C . L a m b e r t
d e R o u v r o i t , a n d
T .
M i c h i e l s . 1 9 8 9 .
H o m o l o g y b e t w e e n
V i r F ,
t h e
t r a n s c r i p t i o n a l
a c t i v a t o r
o f t h e Y e r s i n i a
v i r u l e n c e r e g u l o n , a n d
A r a C ,
t h e
E s c h e r i c h i a c o l i a r a b i n o s e o p e r o n r e
g u l a t o r .
J . B a c t e r i o l .
1 7 1 :
2 5 4 - 2 6 2 .
1 3 .
C o r n e l i s , G . , M . - P .
S o r y ,
Y . L a r o c h e , a n d
I .
D e r c l a y e .
1 9 8 6 .
G e n e t i c
a n a l y s i s
o f
t h e p l a s m i d r e g i o n c o n t r o l l i n g
v i r u l e n c e
i n
Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a 0 : 9
b y
m i n i - M u
i n s e r t i o n s
a n d
l a c
g e n e
f u s i o n s .
M i c r o b . P a t h o g . 1 : 3 4 9 - 3 5 9 .
1 4 . C o r n e l i s ,
G . ,
J . - C . V a n o o t e g h e m , a n d
C . S l u i t e r s . 1 9 8 7 .
T r a n -
s c r i p t i o n o f t h e y o p r e g u l o n
f r o m Y
e n t e r o c o l i t i c a
r e q u i r e s
t r a n s
a c t i n g p YV
a n d
c h r o m o s o m a l g e n e s .
M i c r o b .
P a t h o g .
2 : 3 6 7 -
3 7 9 .
1 5 . C o r n e l i s ,
G . R . , C . S l u i t e r s ,
I .
D e l o r , D . G e i b ,
K . K a n i g a ,
C .
L a m b e r t
d e
R o u v r o i t , M . - P .
S o r y ,
J . - C .
V a n o o t e g h e m ,
a n d
T .
M i c h i e l s . 1 9 9 1 .
ymoA, a Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a
c h r o m o s o m a l
g e n e m o du l at i n g
t h e
e x p r e s s i o n
o f
v i r u l e n c e
f u n c t i o n s .
M o l .
M i c r o b i o l .
5 : 1 0 2 3 - 1 0 3 4 .
1 6 .
E d w a r d s ,
M.
S . , D .
L . K a s p e r ,
H . J . J e n n i n g s , C . J .
B a k e r ,
a n d
A .
N i c h o l s o n - W e l l e r . 1 9 8 2 . C a p s u l a r s i
a l i c
a c i d p r e v e n t s
a c t i v a -
t i o n o f t h e
a l t e r n a t i v e
c o m p l e m e n t p a t h w a y
b y
t y p e I I I ,
g r o u p
B
s t r e p t o c o c c i .
J . I m m u n o l .
1 2 8 : 1 2 7 8 - 1 2 8 3 .
1 7 . E m 6 d y , L . ,
J .
H e e s e m a n n , H .
W o l f - W a t z ,
M . S k u r n i k ,
G .
K a p p e r u d , P .
O T o o l e , a n d
T .
W a d s t r 6 m .
1 9 8 9 . B i n d i n g
t o
c o l l a g e n b y Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a
a n d Y e r s i n i a
p s e u d o t u b e r -
c u l o s i s :
e v i d e n c e
f o r y o p A - m e d i a t e d
a n d c h r o m o s o m a l l y
e n -
c o d e d m e c h a n i s m s .
J . B a c t e r i o l .
1 7 1 : 6 6 7 4 - 6 6 7 9 .
1 8 .
F o x ,
A . J . , A .
C u r r y ,
D .
M. J o n e s ,
R .
D .
H o r m a e c h e , N .
J .
P a r s o n s , J . A . C o l e , a n d
H . S m i t h .
1 9 9 1 .
T h e s u r f a c e
s t r u c t u r e
s e e n
o n
g o n o c o c c i a f t e r t r e a t m e n t
w i t h CMP-NANA
i s d u e t o
s i a l y l a t i o n
o f
s u r f a c e
l i p o p o l y s a c c h a r i d e
p r e v i o u s l y d e s c r i b e d
a s
a c a p s u l e . M i c r o b . P a t h o g .
1 1 : 1 9 9 - 2 1 0 .
1 9 .
G a l y o v ,
E . E . , S . H a k a ns o n , A .
F o r s b e r g ,
a n d H .
W o l f - W a t z .
1 9 9 3 .
A
s e c r e t e d
p r o t e i n
k i n a s e
o f Y e r s i n i a
p s e u d o t u b e r c u l o s i s
i s a n i n d i s p e n s a b l e
v i r u l e n c e d e t e r m i n a n t . N a t u r e
( L o n d o n )
3 6 1 : 7 3 0 - 7 3 2 .
2 0 . G e m s k i ,
P . , J .
R . L a z e r e , a n d
T .
C a s e y .
1 9 8 0 .
P l a s m i d
a s s o c i -
a t e d w i t h p a t h o g e n i c i t y a n d c a l c i u m d
e p e n d e n c y
o f
Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a . I n f e c t . I m m u n .
2 7 : 6 8 2 - 6 8 5 .
2 1 . G u a n ,
K . ,
a n d
J . E .
D i x o n .
1 9 9 0 . P r o t e i n t y r o s i n e
p h o s p h a t a s e
a c t i v i t y o f a n e s s e n t i a l v i r u l e n c e d e
t e r m i n a n t i n
Y e r s i n i a .
S c i -
e n c e
2 4 9 : 5 5 3 - 5 5 6 .
2 2 . H e e s e m a n n , J . ,
a n d L .
G r u i t e r .
1 9 8 7 . G e ne t i c e v i de n ce t h a t
t h e
o u t e r m e m b r a n e
p r o t e i n YOP1 o f Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c
a
m e d i -
a t e s a d h e r e n c e a n d p h a g o c y t o s i s
r e s i s t a n c e
t o h u m a n
e p i t h e l i a l
c e l l s .
FEMS M i c r o b i o l .
L e t t .
4 0 : 3 7 - 4 1 .
2 3 .
H o r s t m a n n ,
R
D .
1 9 9 2 . T a r g e t r e c o g n i t i o n
f a i l u r e
b y
n o n s p e -
c i f i c
d e f e n s e s y s t e m : s u r f a c e c o n s t i t u e n t
s o f p a t h o g e n s
i n t e r f e r e
w i t h
t h e a l t e r n a t i v e p a t h w a y
o f
c o m p l e m e n t a c t i v a t i o n .
I n f e c t .
I m m u n .
6 0 : 7 2 1 - 7 2 7 .
2 4 . H o r s t m a n n , R . D . , H .
J .
S i v e r t s e n ,
J . K n o b l o c h ,
a n d
V .
A .
F i s c h e t t i .
1 9 8 8 .
A n t i p h a g o c y t i c
a c t i v i t y
o f s t r e p t o c o c c a l M
p r o -
t e i n : s e l e c t i v e
b i n d i n g
o f
c o m p l e m e n t c o n t r o l p r o t e i n
f a c t o r H .
P r o c . N a t l .
A c a d .
S c i . US A
8 5 : 1 6 5 7 - 1 6 6 1 .
2 4 a . K a n i g a ,
K .
U n p u b l i s h e d
d a t a .
2 5 .
K a p p e r u d ,
G . ,
E . N a m o r k , M.
S k u r n i k ,
a n d
T .
N e s b a k k e n .
1 9 8 7 .
P l a s m i d - m e d i a t e d s u r f a c e
f i b r i l l a e
o f
Y e r s i n i a
p s e u d o t u b e r c u l o -
s i s a n d
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a :
r e l a t i o n s h i p
t o t h e
o u t e r
mem-
b r a n e YOP1 a n d p o s s i b l e i m p o r t a n c e f o r p
a t h o g e n e s i s .
I n f e c t .
I m m u n .
5 5 : 2 2 4 7 - 2 2 5 4 .
2 6 .
K a p p e m u d ,
G . ,
H . - J .
S k ar p ei d, R .
S o l b e r g ,
a n d T . B e r g an .
1 9 8 5 .
O u t e r m e m b r a n e p r o t e i n s
a n d p l a s m i d s i n d i f f e r e n t
Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a
s e r o g r o u p s i s o l a t e d f r o m
man a n d a n i m a l s .
A c t a
P a t h o l .
M i c r o b i o l . I m m u n o l . S c a n d . S e c t . B
9 3 : 2 7 - 3 5 .
2 7 . L a c h i c a ,
R . V . , D . L . Z i nk , a n d
W.
R .
F e r r i s .
1 9 8 4 .
A s s o c i a t i o n
V O L .
6 1 ,
1 9 9 3
-
8/9/2019 Infect. Immun.-1993-China-3129-36.pdf
8/8
3 1 3 6
C H INA ET A L .
o f
f i b r i l
s t r u c t u r e f o r m a t i o n
w i t h c e l l
s u r f a c e
p r o p e r t i e s
o f
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a . I n f e c t . I m
m u n . 4 6 : 2 7 2 - 2 7 5 .
2 8 . L a m b e r t
d e R o u v r o i t , C . ,
C .
S l u i t e r s ,
a n d G . R . C o r n e l i s .
1 9 9 2 .
R o l e o f t h e
t r a n s c r i p t i o n a l
a c t i v a t o r , V i r F ,
a n d t e m p e r a t u r e i n
t h e e x p r e s s i o n
o f
t h e
p YV p l a s m i d g en e s o f
Y e r s i n i a e n t e r o -
c o l i t i c a .
M o l .
M i c r o b i o l . 6 : 3 9 5 - 4 0 9 .
2 9 . L e u n g , K . Y . , B . S .
R e i s e r , a n d
S .
C . S t r a l e y .
1 9 9 0 .
Y o pM
i n h i b i t s p l a t e l e t a g g r e g a t i o n
a n d i s n e c e s s a r y
f o r
v i r u l e n c e
o f
Y e r s i n i a p e s t i s
i n
m i c e .
I n f e c t .
I m m u n .
5 8 : 3 2 6 2 - 3 2 7 1 .
3 0 . L e u n g ,
K .
Y . , a n d S .
C .
S t r a l e y .
1 9 8 9 .
T h e
y o p M
g e n e
o f
Y e r s i n i a p e s t i s e n c o d e s a r e l e a s e d p r
o t e i n
h a v i n g h o m o l o g y
w i t h t h e
human
p l a t e l e t s u r f a c e p r o t e i n
G P I b a . J .
B a c t e r i o l .
1 7 1 : 4 6 2 3 - 4 6 3 2 .
3 1 . L i a n , C . - J . , W. S .
H w a n g , a n d C . H . P a i .
1 9 8 7 .
P l a s m i d -
m e d i a t e d
r e s i s t a n c e t o p h a g o c y t o s i s i n
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a .
I n f e c t .
I m m u n .
5 5 : 1 1 7 6 - 1 1 8 3 .
3 2 . L i a n , C . - J . , a n d
C . H . P a i . 1 9 8 5 .
I n h i b i t i o n o f
h u m a n n e u t r o p h i l
c h e m i l u m i n e s c e n c e
b y
p l a s m i d - m e d i a t e d
o u t e r m e m b r a n e p r o -
t e i n s o f Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a .
I n f e c t . I m m u n . 4 9 : 1 4 5 - 1 5 1 .
3 3 .
M a r s h , J .
L . , M.
E r f l e ,
a n d
E .
J . W y k e s .
1 9 8 4 .
T h e p I C p l a s m i d
a n d
p h a g e
v e c t o r s
w i t h v e r s a t i l e
c l o n i n g
s i t e s
f o r
r e c o m b i n a n t
s e l e c t i o n b y i n s e r t i o n a l
i n a c t i v a t i o n .
G e n e
3 2 : 4 8 1 - 4 8 5 .
3 4 . M a r t i n e z ,
R .
J .
1 9 8 9 . T h e r m o r e g u l a t i o n - d e p e n d e n t e
x p r e s s i o n
o f Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a p r o t e i
n
1
i m p a r t s
s e r u m
r e s i s t a n c e
t o
E s c h e r i c h i a
c o l i K - 1 2 .
J .
B a c t e r i o l . 1 7 1 : 3 7 3 2 - 3 7 3 9 .
3 5 . M i c h i e l s , T . ,
J . - C .
V a n o o t e g h e m ,
C .
L a m b e r t
d e
R o u v r o i t , B .
C h i n a ,
A .
G u s t i n ,
P .
B o u d r y ,
a n d G . R . C o r n e l i s . 1 9 9 1 .
A n a l y s i s
o f
v i r C ,
a n o p e r o n i n v o l v e d
i n t h e s e c r e t i o n
o f
Yo p
p r o t e i n s
b y
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a . J . B a c t e r i
o l .
1 7 3 : 4 9 9 4 - 5 0 0 9 .
3 6 . M i l l e r ,
V . L . , a n d
J .
J . M e k a l a n o s . 1 9 8 8 .
A n o v e l
s u i c i d e
v e c t o r
a n d i t s
u s e
i n
c o n s t r u c t i o n
o f
i n s e r t i o n m u t a t i o n s : o s m o r e g u l a -
t i o n o f o u t e r
m e m b r a n e
p r o t e i n s
a n d v i r u l e n c e d e t e r m i n a n t s
i n
V i b r i o
c h o l e r a e
r e q u i r e s t o x R .
J . B a c t e r i o l . 1 7 0 : 2 5 7 5 - 2 5 8 3 .
3 7 . M u l l e r - E b e r h a r d ,
H .
J .
1 9 8 8 .
M o l e c u l a r
o r g a n i z a t i o n
a n d f u n c -
t i o n
o f
t h e
c o m p l e m e n t
s y s t e m .
A n n u . R e v .
B i o c h e m .
5 7 : 3 2 1 -
3 4 7 .
3 8 . M u l l i s , K . B . ,
a n d
F . A . F a l o o n a .
1 9 8 7 .
S p e c i f i c s y n t h e s i s
o f
DNA
i n v i t r o
v i a
a
p o l y m e r a s e - c a t a l y z e d
c h a i n r e a c t i o n . M e t h -
o d s
E n z y m o l .
1 5 5 : 3 3 5 - 3 5 1 .
3 9 . P a e r r e g a a r d ,
A . ,
F . E s p e r s e n ,
0 .
M. J e n s e n ,
a n d
M.
S k u r n i k .
1 9 9 1 . I n t e r a c t i o n s b e t w e e n
Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a
a n d r a b b i t
i l e a l m u c u s :
g r o w t h , a d h e s i o n , p e n e t r a t i o n ,
a n d s u b s e q u e n t
c h a n g e s
i n
s u r f a c e
h y d r o p h o b i c i t y
a n d
a b i l i t y
t o
a d h e r e
t o
i l e a l
b r us h b o r de r
m e m b r a n e
v e s i c l e s .
I n f e c t . I m m u n . 5 9 : 2 5 3 - 2 6 0 .
4 0 .
P i l z ,
D . ,
T . V o c k e ,
J .
H e e s e m a n n ,
a n d V .
B r a d e .
1 9 9 2 . M e c h a -
n i s m
o f
Y a d A - m e d i a t e d
s e r u m
r e s i s t a n c e o f Y er s i ni a e nt e r o -
c o l i t i c a
s e r o t y p e
0 3 .
I n f e c t . I m m u n . 6 0 : 1 8 9 - 1 9 5 .
4 1 . P r e n t i c e , M.
1 9 9 2 .
T r a n s f u s i n g Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a . R a r e b u t
d e a d l y .
B r . M e d . J . 3 0 5 : 6 6 3 - 6 6 4 .
4 2 .
R e i s n e r , B .
S . ,
a n d S . C .
S t r a l e y .
1 9 9 2 . Y e r s i n i a
p e s t i s YopM:
t h r o m b i n
b i n d i n g
a n d
o v e r e x p r e s s i o n .
I n f e c t . I m m u n .
6 0 : 5 2 4 2 -
5 2 5 2 .
4 3 . R o s q v i s t , R . , I . B o l i n ,
a n d H .
W o l f - W a t z .
1 9 8 8 . I n h i b i t i o n
o f
p h a g o c y t o s i s
i n Y e r s i n i a
p s e u d o t u b e r c u l o s i s :
a v i r u l e n c e p l a s -
m i d - e n c o d e d
a b i l i t y i n v o l v i n g
t h e
Y o p 2 b p r o t e i n .
I n f e c t . I m -
m u n .
5 6 : 2 1 3 9 - 2 1 4 3 .
4 4 .
R o s q v i s t ,
R . , A .
F o r s b e r g ,
M. R i m p i l a i n e n ,
T .
B e r g m a n ,
a n d
H .
W o l f - W a t z .
1 9 9 0
T h e
c y t o t o x i c
p r o t e i n YopE
o f
Y e r s i n i a
o b s t r u c t s t h e
p r i m a r y
h o s t d e f e n c e .
M o l .
M i c r o b i o l .
4 : 6 5 7 - 6 6 7 .
4 5 . R o s q v i s t , R . , M. S k u r n i k ,
a n d
H .
W o l f - W a t z . 1 9 8 8 . I n c r e a s e d
v i r u l e nc e o f
Y e r s i n i a p s e u d o t u b e r c u l o s i s b y t w
o
i n d e p e n d e n t
m u t a t i o n s .
N a t u r e
( L o n d o n ) 3 3 4 : 5 2 2 - 5 2 5 .
4 6 . S c h m i d h a u s e r ,
T .
J . , a n d D . R .
H e l i n s k i .
1 9 8 5 .
R e g i o n o f
b r o a d - h o s t - r a n g e
p l a s m i d
RK 2
i n v o l v e d
i n
r e p l i c a t i o n
a n d s t a -
b l e
m a i n t e n a n c e
i n
n i n e
s p e c i e s
o f
g r a m - n e g a t i v e
b a c t e r i a .
J .
B a c t e r i o l .
1 6 4 : 4 4 6 - 4 5 5 .
4 7 .
S c h u l z e - K o o p s ,
H . , H . B u r k h a r d t ,
J .
H e es e m a n n, K .
v o n
d e r
M a r k ,
a n d F . E m m r i c h .
1 9 9 2 .
P l a s m i d - e n c o d e d
o u t e r
m e m b r a n e
p r o t e i n YadA m e d i a t e s s p e c i f i c
b i nd i ng o f
e n t e r o p a t h o g e n i c
y e r s i n i a e
t o v a r i o us t y p es
o f
c o l l a g e n . I n f e c t .
I m m u n .
6 0 : 2 1 5 3 -
2 1 5 9 .
4 8 .
S k u r n i k ,
M . , I .
B o l i n ,
H . H e i k k i n e n , S .
P i h a , a n d
H . W o l f - W at z .
1 9 8 4 . V i r u l e n c e
p l a s m i d - a s s o c i a t e d
a g g l u t i n a t i o n
i n
Y e r s i n i a
s p p . J .
B a c t e r i o l .
1 5 8 : 1 0 3 3 - 1 0 3 6 .
4 9 .
S k u r n i k ,
M . ,
a n d H . W o l f - W a t z .
1 9 8 9 . A n a l y s i s
o f t h e
yopA
g e n e e n c o d i n g
t h e
Y o p l
v i r u l e n c e d et e r m i na n t s o f
Y e r s i n i a s p p .
M o l . M i c r o b i o l . 3 : 5 1 7 - 5 2 9 .
5 0 .
S m i t h ,
D . E . , a n d
P . A .
F i s h e r .
1 9 8 4 . I d e n t i f i c a t i o n ,
d e v e l o p -
m e n t a l
r e g u l a t i o n ,
a n d
r e s p o n s e
t o
h e a t
s h o c k o f t w o a n t i g e n i -
c a l l y
r e l a t e d
f o r m s o f
a m a j o r
n u c l e a r
e n v e l o p e p r o t e i n
i n
D r o s o p h i l a e m b r y o s :
a p p l i c a t i o n
o f
a n i m p r o v e d m e t h o d
f o r
a f f i n i t y
p u r i f i c a t i o n
o f
a n t i b o d i e s
u s i n g p o l y p e p t i d e s
i m m o b i -
l i z e d o n n i t r o c e l l u l o s e b l o t s . J .
C e l l B i o l .
9 9 : 2 0 - 2 8 .
5 1 .
S o r y ,
M . - P . ,
a n d G .
C o r n e l i s .
1 9 8 8 . Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t i c a 0 : 9
a s a
p o t e n t i a l
l i v e
o r a l
c a r r i e r f o r p r o t e c t i v e
a n t i g e n s .
M i c r o b .
P a t h o g .
4 : 4 3 1 - 4 4 2 .
5 2 .
S o r y ,
M . - P . ,
J .
T o l o l l e n a e r e , C . L a s z l o , T . B i o t , G
.
R .
C o r n e l i s ,
a n d G .
W a u t e r s .
1 9 9 0 . D et e ct i o n o f
pYV+
Y e r s i n i a
e n t e r o c o l i t -
i c a
