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5/17/2018 fta-abs - slidepdf.com

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MS 10310030079 Imuno-Con

FTA ·AbsKit para determineceo de anticorpos

anti- Treponema pal/idum

no sora humano por

lmunottuorescencie indireta.

COD. 15060-/: 60 determinecoes

COD. 15100-/: 100 determinecoes

WAMA Diagn6stica

Rua Aldo Germano Klein, 100 - CEAT

CEP 13560-971 - Sao Carlos - SP

Fone (16) 3377.9977 / Fax (16) 3377.997

www.wamadiagnostica.com.br

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IMPORTANCIA CLiNICA

A sffilis e uma doenca infecciosa humanaproduzida por um espiroqueta, 0 Treponempallidum. Ela e principalmente uma doenca

transmitida sexual mente. Outras possfveis vias dtransrnissao sao a transfusao de sangue infectado

hoje praticamente eliminada atraves de triagemsorol6gica de rotina, e a perinatal (sffilis conqenitatransmitida in Utero, pelos treponemas

procedentes da mae infectada para0

feto emdesenvolvimento.Clinicamente, ap6s um perfodo de incubacao qu

varia de 10 a 90 dias, pois e inversamenterelacionado com a quantidade do inoculadoocorre, em 85% dos pacientes, 0surgimento de um

cancro, que e uma lesao solitaria e indolocaracterizando a sffilis prirnaria. Aproximadamente

4 a 10 semanas ap6s 0 aparecimento do cancrosurgem freqi.ientemente sintomas como perda dpeso, cefaleia, anorexia, mialgia, artralgia, ma

estar, febre baixa, linfadenopatia generalizadaexantema (presente em 75 a 100% dos casos),

que caracteriza a sffilis secundaria. Podem ocorretarnbern neste estaqlo manttestacoes dcomprometimento do sistema nervoso centraAp6s as rnanifestacoes prirnarias ou secundarias


















































ocorre 0 perfodo conhecido como sffilis latente,

caracterizado por testes sorol6gicos positives

ausencia de achados clfnicos. Pode ter curacao de

1 a 2 anos. Sem tratamento, cerca de um terce dos

pacientes apresenta sffilis terciaria, que pode

manifestar-se como goma (15%), sffilis

cardiovascular (10%) ou neurossffilis (8 a 10%).

Os testes sorol6gicos para sffilis sao classificados

como nao-treponernlcos, usados mais comumente

para a triagem, como0

VORL (Veneral DiseaseResearch Laboratory) e 0 RPR (Rapid Plasma

Reagin), e treponernicos, usados como testes

confirmat6rios para os soros reativos nos testes de

triagem, como 0 TPHA (Treponema pal/idumHemagglutination), FTA-Abs (Fluorescent

Treponemal Antibody Absorption) e ELISA(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay).o FTA-Abs e um dos mais sensfveis e especfficos

testes empregados na sorologia da sffilis.

Entretanto, podem ocorrer reacoes falso-positivas

em cirrose, herpes genital, lupus eritematososisternico e, muito raramente, em mulheres

gravidas.

PRINciPia DO METODa

Os anticorpos anti-treponema presentes no soro















































ligam-se ao antfgeno fixado na lamina e sa

revelados por uma antigamaglobulina humanamarcada com isotiocianato de fluorescefna.

APRESENTACAo DO KITCOD. 15060-1 (60 determina~oes)

1. Laminas com 5 areas reativas com suspensaode Treponema pal/idum (12Iaminas)2. Antigamaglobulina G humana marcada com

isotiocianato de fluorescefna (3ml)3. Tarnpao fosfato-salino (PBS) (2 x 50ml)

4. Glicerina tamponada (4ml)5. Solucao absorvente (Treponema cepa Reiter(3ml)6. Soro controle positive (1ml)

7. Soro controle negativo (1ml)8. Lamfnulas (12 unidades)9. lnstrucoes para usoCOD. 15100-1 (100determina~oes)

1. Laminas com 5 areas reativas com suspensao

de Treponema pal/idum (20 laminas)2. Antigamaglobulina G humana marcada com

isotiocianato de fluorescefna (5ml)3. Tarnpao fosfato-salino (PBS) (3 x 50ml)4. Glicerina tamponada (4ml)5. Solucao absorvente (Treponema cepa Reiter



































(5ml)

6. Soro controle positive (1ml)

7. Soro controle negativo (1ml)

8. Lamfnulas (20 unidades)

9. lnstrucoes para uso

PREPARACAo E ESTABILIDADE DOSREAGENTES• LAMINAS COM SUSPENSAo DE

TREPONEMA (1): deixa-las em temperaturaambiente por 15 minutos antes de retira-Ias d

envelope. Estaveis em freezer (-20°C) ate a data

do vencimento.

• ANTIGAMAGLOBULINA HUMANA (lgGMARCADA (2): pronta para uso. Estavel em

geladeira (2-8°C) ate a data de vencimento.Proteger da luz. Contern azida s6dica 0,1 %.

• TAMPAo FOSFATO-SALINO (PBS) (3): diluirPBS (0,01M; pH7,2 ± 0,2) concentrado 1/20 (Ex.

10ml de PBS + 190ml de aqua destilada o

deionizada). Conservar em geladeira em

recipiente limpo e bem vedado. Desprezar

SOlUg80 se ocorrer rnudanca do pH ou turvacao.

Estavel ate a data do vencimento. Obs.: Caso

ocorra cristalizacao do PBS antes da sua diluicao,

colocar em banho-maria 37°C ate a completa

































dissolucao dos crista is.

• GLiCERINA TAMPONADA (4): pronta para uso

Estavel em geladeira (2-8°C) ate a data do

vencimento.

•sourczo ABSORVENTE (5): para rernocao deanticorpos anti-treponema inespecfficos. Pronta

para uso. Agitar antes de usar. Os soros

desconhecidos deverao ser dilufdos em SOlUg8

absorvente na proporcao 1/5 (sugere-se 1 O ! - !1 do

soro +4 0 ! - ! 1

da SOlUg80 absorvente). Estavel atedata de vencimento.

• SORO CONTROlE POSITIVO (6): pronto para

uso. Estavel ate a data do vencimento.

• SORO CONTROlE NEGATIVO (7): pronto para

uso. Estavel ate a data do vencimento.

AMOSTRAS

Soro livre de hem6lise, lipemia e contarninacao. O

soros podem ser conservados em geladeira

(2-8°C) ate 72 horas. Para um tempo maior, devem

serguardados em freezer, a -20°C. Evitar repetidoscongelamentos e descongelamentos.

MATERIAL NECESsARIO,

FORNECIDO

• Microsc6pio de fluorescencia

MAS NAo












































• Tubos de ensaio

• Pipetas sorol6gicas

• Jarra de Coplin ou similar

• Tubos 13X75 mm e rack

• Agua destilada ou deionizada

• Frasco para 1 litro

• Camara de incubacao

• Papel absorvente

PROCEDIMENTO1.lnativarosoropor30 minutos, a 56°C.

2. Diluiros soros desconhecidos 1/5 com a SOlUg8

absorvente (ver PREPARACAO DOS

REAGENTES). Deixar 15 minutos em temperatura

ambiente.

3. Deixar a(s) larninafs) atingir(em) a temperatura

ambiente por 15 minutos antes de retira-lats) d

envelope. Remove-lars) sem tocar no substrato,

rotula-Iats) e coloca-Iats) em carnara umida.

4. Pingar 1 gota dos controles positive e negativo

nas areas 1 e 2 da(s) larninafs), respectivamentedo(s) soro(s) desconhecido(s), nas areas

restantes, evitando transbordar as areas.

5.lncubar na carnara urnida por 30 minutos, em

temperatura ambiente.

6. Remover a(s) larninais) da carnara umida




























Sequra-lals) por uma extremidade e lava-tats) comaproximadamente 10ml de tarnpao fosfato-salino(PBS) (3). Usando uma pipeta dirigir 0 PBS pelborda longitudinal da lamina, tendo 0 cuidado d

nao atingirdiretamente as areas reativas, evitandocom isso, prejudicar 0 substrato. Colocar a(slarnlnats) em uma jarra de Coplin ou similar e lavala(s) 3 vezes com PBS, 5 minutos cada vezagitando suavemente 0 Coplin algumas veze

durante cada lavagem.7. Remover a(s) laminats) do Coplin, uma de cadvez. Tirar 0excesso de PBS, sacudindo-a(s) sobrpapel absorvente. Secar em torno das areareativas e ir IMEDIATAMENTE para a etapa 8 parnao secar 0 local da reacao.

8. Retornar a carnara urnida. Pingar 1 gota dantigamaglobulina marcada em cada area da(slamlnats), tendo 0 cuidado de recobri-Ia(stotalmente.9. Incubar em carnara urnida por 30 minutos, em

temperatura ambiente, protegendo do excesso dluz.10. Repetir a etapa 6.11.Remover a(s) larninats) do Coplin, uma de cadvez. Tirar 0excesso de PBS, sacudindo-a(s) sobrpapel absorvente. Secar em torno das area















































reativas e ir IMEDIATAMENTE para a etapa 1

para nao secar 0 local da reacao,

12. Pingar 3 a 4 gotas de glicerina tamponada (4

entre as areas reativas. Cobrir a(s) laminats) com

lamfnula(s), evitando a formacao de bolhas. Secar

o excesso de glicerina com papel absorvente.

Limpar 0dorso da lamina.

13. Ler em microsc6pio de fluorescencia.

conveniente fazer a leitura no mesmo dia

Entretanto, no caso de nao ser possfvel, conserva-la(s) na geladeira (2-8°C), protegida(s) da luz e le

las no dia seguinte. A glicerina nao deve secar. S

isto ocorrer colocar mais glicerina.

RESULTADO DAS LEITURAS

Reacao Negativa: AUSENCIA de fluorescenciaamarelo-esverdeada no espiroqueta (T . pal/idum).

Geralmente nao se observa 0espiroqueta ou ve-se

muito tenuamente.

Reacao Positiva: PRESEN<;A de fluorescencia

amarelo-esverdeada caracterfstica no espiroqueta(T . pal/idum).

OBSERVACAo: Examinar sempre os controles

positive e negativo para controle da reacao.








































INTERPRETAC;Ao

Soros que dao reacao negativa sao informados

como NAo REAGENTES e significam indivfduos

nao infectados.

Soros que dao reacao positiva sao informadoscomo REAGENTES e significam indivfduos

infectados pelo Treponema pallidum ou infeccao

pregressa. Na maioria dos casos, mesmo apes

cura da doenca, 0 FTA-Abs persiste reagente po

varies anos.

PRECAUC;OES E ADVERTENCIAS1. Reagentes somente para uso diaqnostico ivitro.2. As laminas devem ser conservadas em freezer

-20°C, evitando 0 congelamentodescongelamento. 0 restante do kit devera se

conservado em geladeira entre 2 -8°C.

3. A conservacao das laminas pode ser feita

selando as bordas da lamfnula com esmalte d

unha e guardando-as no escuro, entre 2 -8°C po

no maximo 2 meses.

4. Como se emprega azida sodica a 0,1% como

conservante, 0 descarte dos reativos deve se

acompanhado de grandes volumes de aqua par

evitar 0 acurnulo de resfduos de azida no
















































encanamentos, pois esta pode reagir com chumboou cobre formando sais altamente explosivosAlern disso, a azida e toxica quando ingerida.5. Todos os materiais humanos usados n

preparacao dos controles foram testados, comresultados negativos para anticorpos anti-HIVanti-HCV e antfgeno de superffcie da hepatite B(HBsAg), porern, como nenhum metcdodiaqnostico oferece completa sequranca da

ausencia destes e de outros agentes infecciososrecomenda-se tratar os soros controles comomateria is potencial mente infecciosos.6. Seguir as Boas Praticas de l.aboratorlo (BPLsna conservacao, manuseio e descarte dos

materiais.

7. Nao substituir componentes deste kit com 0 deoutros fabricantes, nem usar componentes delotes e codiqos diferentes.8. Nao usarfora do prazo de validade.


























BIBLIOGRAFIA

1. Berg, R. N. et al.: Antigen analysis of cultivable Reiter an

Nichols treponemes. Brit. J. Vener. Dis., 48: 489-495, 1972.

2. Bos, J. D.: Fluorescent treponemal antibody-absorption (FTAABS) test.lnt. J. Dermatol., 21 (3): 125-130, 1982.

3. Bryant, N. J.: Sorological tests for syphilis. Laboratory

Immunology and Serology. W. B. Saunders Company, 1978.

v EDIC;Ao:01120

TERMO DE GARANTIA

A WAMA Diagnostica garante a traca deste conjunto diaqnostico

desde que 0mesmo esteja dentra do prazo de validade e que se

comprovado por sua assessoria tecnica que nao houve falhas n

execucao, manuseio e conservacao deste produto. A WAMA

seus distribuidores nao se responsabilizam por falhas n

desempenho do kit sob essas condicoes.




























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