EPO - dpcweb.comhormone consisting of 165 amino acids, with four complex carbohydrate chains attached to the peptide at four linkage sites.1 It has a molecular weight of 36,000 daltons,

EPO

For use on the IMMULITE®

and IMMULITE® 1000 systems

IMMULITE® / IMMULITE® 1000 EPO

2 IMMULITE/IMMULITE 1000 EPO (PILKEP-5, 2005-08-02)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE and IMMULITE 1000Analyzers — for the quantitativemeasurement of erythropoietin (EPO) inserum or heparinized plasma, as an aid inthe diagnosis of anemias andpolycythemias.Catalog Number: LKEPZ (50 tests),LKEP1 (100 tests)Test Code: EPO Color: Light GreenCDC Analyte Identifier Code: 1611CDC Test System Identifier Code: 10159CLIA Complexity Category: Moderate

Summary and ExplanationErythropoietin (EPO) is a glycoproteinhormone consisting of 165 amino acids,with four complex carbohydrate chainsattached to the peptide at four linkagesites.1 It has a molecular weight of 36,000daltons, 40% of this attributed to thecarbohydrate chains. EPO is the primaryregulator of erythropoiesis, stimulating theproliferation and differentiation of erythroidprecursor cells in bone marrow. Inmammals, the fetal liver produces nearlyall of the hormone; in adults, hepaticproduction drops to under 10% and renalsecretion accounts for over 90%.2,3 Theproduction site is believed to be theproximal renal tubular cells or theperitubular capillary endothelial cells of therenal cortex and outer medulla. Theclearance of circulating EPO has not beenfully explained, but it is accomplished, insmall part, by urinary excretion, andpossibly also by hepatic elimination and byuptake into target cells in bone marrow.EPO adjusts red blood cell production tomeet the tissue oxygen demand.1 It exertsits effect in a complex feedback system, inwhich renal secretion of the hormone iscontrolled by an oxygen sensor in thekidney that responds to the partialpressure of oxygen in blood. Underconditions of increased peripheral oxygen,EPO levels diminish. This is seen aftercorrection of hypoxia in healthy subjects

(as in descent from a high elevation) andafter hypertransfusion.Anemias may be divided into twocategories with respect to EPO levels inblood: those that are primary to EPOlevels and those that are secondary.Primary anemias are characterized by anincrease of EPO in the blood to attempt torestore red blood cell production levels tonormal. Examples of anemias in whichEPO levels are elevated include irondeficiency anemia, reduction of blood flowto the kidney (as in blood loss) andhemoglobinopathies with increased affinityof hemoglobin for oxygen.1 The EPOproduction rate is seen to increaseexponentially with the decrease inavailable oxygen and with fallinghematocrit in nonrenal anemias; in thelatter, EPO levels 1,000 times normalhave been reported.2

Anemia can be secondary to inflammation,rheumatoid arthritis, neoplasm, andchronic renal disease. The "secondaryanemias" may, however, be at least partlyattributable to underproduction of EPO.4

A failure to produce sufficient EPOaccounts for the moderate to severeanemias observed in end-stage renaldisease. Decreased EPO production isattributed to destruction of renalproduction sites; the renal oxygen sensormay also be affected. Levels of thehormone slightly exceed the referencerange at most, and are inadequate tocounter the blood loss due to dialysis,shortened red blood cell life, iron andfolate deficiency, impaired iron transfer toerythyroid progenitor cells, and otherchallenges faced by such patients.Anephric patients demonstrate especiallylow EPO levels. A few patients withchronic kidney failure, however, exhibitnormal hematocrits or less seriousanemia, and elevated EPO. Some ofthese patients have cystic kidneys or viralhepatitis; in the latter, increased EPO mayhave resulted from enhanced hepaticproduction.Overproduction of red blood cells is calledpolycythemia. Polycythemias may also bedivided into two categories depending onwhether the condition is primary orsecondary to EPO levels. In polycythemia

IMMULITE/IMMULITE 1000 EPO (PILKEP-5, 2005-08-02) 3

vera, EPO levels are diminished, anderythropoiesis is primary to andindependent of stimulation by EPO.Variation in EPO values can be as muchas tenfold for different patients with thesame hematocrit.Certain other conditions may becharacterized by the loss of feedbackcontrol of oxygen concentration over EPOproduction, causing an increase in EPOlevels.3 These include renal cellcarcinomas, in which 2 percent of patientsdemonstrate erythrocytosis, and somebenign renal lesions, such as single ormultiple renal cysts, renal artery stenosisand microvascular abnormalities. Inaddition, approximately 10 percent ofrenal transplant patients developerythrocytosis, sometimes fromautologous diseased kidney.Secondary polycythemia is characterizedby elevated EPO levels which lead toincreased red blood cell mass. Thiscondition may result from a variety offactors, including defective hemoglobin,smoking, pulmonary fibrosis, cardiacdisease, tumors, and kidney stones.5

When assaying EPO for the differentialdiagnosis of polycythemias, the possibleoverlap of values for secondaryerythrocytosis or for polycythemia verawith those in the reference range must beconsidered.3

Principle of the ProcedureIMMULITE/IMMULITE 1000 EPO is asolid-phase, chemiluminescentimmunometric assay.Incubation Cycles: 2 × 30 minutes.

Specimen CollectionThere are several reports of diurnalvariation of erythropoietin in literaturereferences.7-9 It is important to collectsamples at a consistent time of day.Morning samples taken between 7:30 amand 12:00 noon have been recommended.

A variation in values may occur if thesample is not clotted at room temperature(15–28°C).Because EDTA would have a significanteffect on results, it should not be used asan anticoagulant.

The use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.

Hemolyzed or grossly contaminatedsamples may give erroneous results.Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.

Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE/IMMULITE 1000 EPO has notbeen tested with all possible variations oftube types. Consult the section onAlternate Sample Types for details ontubes that have been tested.

Volume Required: 100 µL serum orheparinized plasma. (Sample cup mustcontain at least 250 µL more than the totalvolume required.)

Storage: 7 days at 2–8°C or2 months at –20°C. Avoid repeatedfreeze/thaw cycles.

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.

Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)


Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Thebarcode labels are needed for the assay.

EPO Test Units (LEP1)Each barcode-labeled unit contains onebead coated with anti-ligand derived fromstreptavidin. Stable at 2–8°C untilexpiration date.LKEPZ: 50 units. LKEP1: 100 units.Allow the Test Unit bags to come to roomtemperature before opening. Open bycutting along the top edge, leaving theziplock ridge intact. Reseal the bags toprotect from moisture.

EPO Reagent Wedges (LEPA, LEPB)With barcodes. LEPA: 7.5 mL ligand-labeled murine monoclonal anti-EPOantibody, with preservative. LEPB: 7.5 mLalkaline phosphatase conjugated to goatpolyclonal anti-EPO antibody in a buffer,with preservative. Store capped andrefrigerated: stable at 2–8°C untilexpiration date. Recommended usage iswithin 30 days after opening when storedas indicated.LKEPZ: 1 set. LKEP1: 1 set.

EPO Adjustors (LEPL, LEPH)Two vials (Low and High) containinglyophilized human recombinant EPO in anonhuman serum matrix, withpreservative. At least 30 minutes beforeuse: Reconstitute each vial with 4.0 mLdistilled or deionized water. Mix by gentleswirling or inversion until the lyophilizedmaterial is fully dissolved. Stable at 2–8°Cfor 30 days after reconstitution, or for6 months (aliquotted) at –20°C.LKEPZ: 1 set. LKEP1: 1 set.

Kit ComponentsSupplied Separately

EPO Sample Diluent (LEPZ)For the manual dilution of patient samplesOne vial 25 mL EPO-free nonhumanserum matrix, with preservative. Stable at2–8°C for 30 days after opening, or for6 months (aliquotted) at –20°C.

LSUBX: Chemiluminescent SubstrateLPWS2: Probe Wash ModuleLKPM: Probe Cleaning Kit

LCHx-y: Sample Cup Holders (barcoded)LSCP: Sample Cups (disposable)LSCC: Sample Cup Caps (optional)LEPCM: Tri-level EPO Control ModuleAlso RequiredSample transfer pipets, distilled ordeionized water, controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE or IMMULITE 1000 Operator'sManual.

See the IMMULITE or IMMULITE 1000Operator's Manual for: preparation, setup,dilutions, adjustment, assay and qualitycontrol procedures.

Visually inspect each Test Unit for thepresence of a bead before loading it ontothe system.Note that both Reagent Wedges A and Bmust be loaded on the carousel to run thisassay.Each Sample cup holder can be followedby up to four test units.Recommended Adjustment Interval:2 weeks.

Quality Control Samples: Use controlsor sample pools with at least two levels(low and high) of EPO.

Expected ValuesA study performed with IMMULITE EPOon 167 apparently healthy laboratoryvolunteers yielded a median of10.5 mIU/mL, a 95th percentile of20.1 mIU/mL and an absolute range of 3.7to 29.5 mIU/mL.Caution should be exercised ininterpreting the EPO results for patientswith diseases other than anemia. Inpatients with erythrocytosis due touncompensated hypoxia, serumimmunoreactive EPO is elevated; in thosewith compensated hypoxia, the serumimmunoreactive EPO level is usuallywithin the range of normal, and in patientswith polycythemia vera, serumimmunoreactive EPO is either normal orlow. Thus, while an elevated serum EPOlevel suggests that erythrocytosis is asecondary phenomenon and a low EPO


level supports the possibility ofautonomous erythropoiesis, a normalserum EPO level excludes neither hypoxianor autonomous EPO production as thecause of erythrocytosis.

Consider these limits as guidelines only.Each laboratory should establish its ownreference ranges.

LimitationsVariations in EPO results have been seenin the presence of anti-species antibodies.

No drugs have been tested for assayinterference.

The results of this assay should be used inconjunction with information available fromclinical evaluations and other diagnosticprocedures.

Because results obtained with any EPOassay may differ significantly from anyother, it is recommended that any serialtesting performed on the same patientover time should be performed with thesame EPO test.Lower EPO levels than expected havebeen seen with anemias associated withthe following conditions: rheumatoidarthritis, acquired immunodeficiencysyndrome, cancer, ulcerative colitis, sicklecell disease, and in premature neonates.After allogeneic bone marrow transplant,impaired erythropoietin response maydelay erythropoietin recovery.

Patients with hypergammaglobulinemiaassociated with multiple myeloma orWaldenstrom's disease have impairedproduction of erythropoietin in relation tohemoglobin concentration, and this hasbeen linked to increased plasma viscosity.EPO levels of persons living at highaltitudes with erythrocytosis may rapidlyfall to normal after returning to lowaltitudes.Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing an

anomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in mIU/mL.Calibration Range: Up to 200 mIU/mL(WHO 2nd IRP 67/343).Analytical Sensitivity: 0.24 mIU/mL

High-dose Hook Effect:None up to 50,000 mIU/mL.Precision: Samples were assayed induplicate over the course of 20 days, tworuns per day, for a total of 40 runs and 80replicates. (See “Precision” table.)Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)

Recovery: Samples spiked 1 to 19 withtwo EPO solutions (85 and 777 mIU/mL)were assayed. (See "Recovery" table forrepresentative data.)

Specificity: The assay is highly specificfor EPO (see “Specificity” table).Alternate Sample Type: Samples (n =22) were collected into plain, heparinizedand EDTA vacutainer tubes.Concentration range: approximately 5.1 to196 mIU/mL. EDTA plasma is notrecommended for use.(Heparin) = 0.99 (Serum) + 0.7 mIU/mLr = 0.997

(EDTA) = 0.88 (Serum) – 3.4 mIU/mLr = 0.991

Means:77.7 mIU/mL (Serum)77.6 mIU/mL (Heparin)64.7 mIU/mL (EDTA)

Because EDTA would have a significanteffect on results, it should not be used asan anticoagulant.Bilirubin: Presence of conjugated andunconjugated bilirubin in concentrationsup to 200 mg/L has no effect on results,within the precision of the assay.


Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 384 mg/dL maycause a depression of values. (See“Hemolysis” table.)Lipemia: Presence of triglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Method Comparison: The assay wascompared to a commercially availableimmunoradiometric assay for EPO (Kit A)on 130 endogenous serum samples.(Concentration range: approximately 2.5to 200 mIU/mL. See graph.) By linearregression:(IML) = 0.85 (Kit A) + 3.8 mIU/mLr = 0.978

Means:41 mIU/mL (IMMULITE)44 mIU/mL (Kit A)

References1) Eckardt KU, Bauer C. Erythropoietin in healthand disease. Europ J Clin Invest 1989;19:117-27. 2) Eschbach J, Adamson J. Recombinanthuman erythropoietin: implications fornephrology. Am J Kidney Dis 1988;11:203-9. 3)Koch KM, Kuhn K, Nonnast-Daniel B, Scigalla P,volume editors. Treatment of renal anemia withrecombinant human erythropoietin. In: BerlyneGM, Giovannetti S, series editors. Contributionsto Nephrology. New York: Karger, 1988; 66:1-15and 54-61. 4) Mengel et al. Hematology:principles and practice. Chicago: Year BookMedical Publishers Inc., 1973. 5) Braunwald E,Isselbacher KJ, Petersdorf RG, Wilson JD,Martin JB, Fanci AS, editors. Harrison'sprinciples of internal medicine. 11th ed. NewYork: McGraw-Hill, 1987:149,1599. 6) RaineAEG. Hypertension, blood viscosity, andcardiovascular morbidity in renal failure:implications of erythropoietin therapy. Lancet1988;1:97-9. 7) Miller ME, Garcia JF, Cohen RA,Cronkite EP, Moccia G, Acevado J. Diurnallevels of immunoreactive erythropoietin innormal subjects and subjects with chronic lungdisease. Br J Haematol 1981;49:189-200. 8)Wide L, Bengtsson C, Birgegard G. CircadianRhythm of erythropoietin in human serum. Br JHaematol 1989;72:85-90. 9) Cahan C, DeckerMJ, Arnold JL, Washington LH, Veldhuis JD,Goldwasser E, Strohl DP. Diurnal Variations inserum erythropoietin levels in healthy subjectsand sleep apnea patients. J Appl Physiol1992;72:2112-7. 10) National Committee forClinical Laboratory Standards. Procedures forthe collection of diagnostic blood specimens byvenipuncture; approved standard. 4th ed.NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS,1998.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (mIU/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 CV4 CV

1 6.8 6.3% 6.1%

2 18 8.1% 8.6%

3 37 7.2% 7.5%

4 72 6.3% 6.6%

5 148 5.1% 5.4%

Linearity (mIU/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 8 92.5 — —

4 in 8 46.7 46.3 101%

2 in 8 23.4 23.1 101%

1 in 8 12.0 11.6 104%

2 8 in 8 149 — —

4 in 8 70.6 74.5 95%

2 in 8 35.3 37.3 95%

1 in 8 18.1 18.6 97%

3 16 in 16 174 — —

8 in 16 89.9 87.0 103%

4 in 16 48.4 43.5 111%

2 in 16 22.1 21.8 102%

1 in 16 11.8 10.9 109%

4 8 in 8 181 — —

4 in 8 87.3 90.5 96%

2 in 8 43.1 45.3 95%

1 in 8 21.8 22.6 96%

5 4 in 4 186 — —

2 in 4 95.6 93.0 103%

1 in 4 48.5 46.5 104%


Recovery (mIU/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 24 — —

A 30 27 111%

B 65 62 105%

2 — 46 — —

A 43 48 90%

B 83 83 100%

3 — 71 — —

A 70 72 97%

B 110 106 104%

4 — 136 — —

A 139 133 105%

B 175 168 104%

Specificity

Compound1Added2

(µg/mL)

ApparentConc. EPO3

mIU/mL

%Cross-

reactivity3

EPO — — 100%

α-2-Macroglobulin

600 ND ND

γ-Globulin 60,000 ND ND

Human SerumAlbumin

60,000 ND ND

HumanAnti-Trypsin

100 ND ND

α-AcidGlycoprotein

100 ND ND

Human α-Globulin

100 ND ND

HumanTransferrin(iron-saturated)

100 ND ND

HumanTransferrin(nonsaturated)

100 ND ND

ND: not detectable.5

Hemolysis

Unspiked1 128 mg/dL 192 mg/dL 384 mg/dL

1 26 24 22 22

2 48 43 41 37

3 49 43 44 42

4 72 70 66 54

5 125 124 107 118

6 146 149 158 137

Method Comparison

Kit A, mU/mL0 50 100 150 200 250

IMM

ULI

TE E

PO

0

50

100

150

200

(IML) = 0.85 (Kit A) + 3.8 mIU/mLr = 0.978

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4CV (Variationskoeffizient).Linearity: 1Verdünnung, 2Beobachtet (B),3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8. Recovery:1Probe, 2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E.Specificity: 1Verbindung, 2zugesetzte Menge, 3Gemessene Konzentration, 4% Kreuzreaktivität,5NN: Nicht nachweisbar. Bilirubin: 1ohneZugabe. Hemolysis: 1ohne Zugabe.

Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,3Media, 4CV. Linearity: 1Dilución, 2Observado(O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8. Recovery:1Solución, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E. Specificity: 1Compuesto, 2Cantidadañadida, 3Concentración aparente, 4% Reaccióncruzada, 5ND: no detectable. Bilirubin: 1Sinañadir. Hemolysis: 1Sin añadir.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4CV. Linearity: 1Dilution, 2Observé(O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8. Recovery:1Solution, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A.Specificity: 1Composé, 2ajouté, 3 Concentrationapparente, 4Réaction croisée%. 5ND: nondétectable. Bilirubin: 1Non chargés.Hemolysis: 1Non chargés.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4CV (Coefficiente di Variazione). Linearity:1Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A,58 in 8. Recovery: 1Soluzione, 2Osservato (O),3Atteso (A), 4%O/A. Specificity: 1Composto,


2quantità aggiunta, 3 Concentrazione apparente,4Percentuale di Crossreattività, 5ND: nondeterminabile. Bilirubin: 1Semplice, senzaaggiunte. Hemolysis: 1Semplice, senzaaggiunte.

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Coeficiente de variação. Linearity:1Diluição, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E, 58 em 8. Recovery: 1Solução,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E.Specificity: 1Composto, 2Quantidadeadicionada, 3Apparent Concentration,4Percentagem de reacção cruzada, 5ND: nãodetectável. Bilirubin: 1Não adicionada.Hemolysis: 1Não adicionada.

Deutsch

IMMULITE EPOAnwendung: Zur in vitro-Diagnostikunter Verwendung der IMMULITE undIMMULITE 1000 Systeme – für diequantitative Bestimmung vonErythropoietin (EPO) im Serum oderHeparin-Plasma, als Hilfestellung bei derDiagnose einer Anämie und Polyzythämie.Artikelnummern:LKEPZ (50 Tests)LKEP1 (100 Tests)Testcode: EPO Farbe: hellgrün

Klinische RelevanzDas Erythropoietin (EPO) ist ein mitkomplexen Kohlenhydratkettenglykosyliertes Protein mit 165Aminosäuren.1 Es hat einMolekulargewicht von 36 kDa mit einenKohlenhydratanteil von 40%. Das EPO istein wichtiger Faktor in der Proliferationund Differenzierung derErythrozytenvorläuferzellen imKnochenmark. Bei Säugetieren wird derGrossteil des fetalen EPO in der Leberproduziert, während bei Erwachsenen90% der Synthese in der Niere erfolgt.2,3

In der Leber wird dann noch etwa 10%produziert. Der EPO Abbau ist noch nichtvollständig geklärt. Ein kleiner Teil wirdüber den Urin ausgeschieden, weiterhinerfolgt der Abbau wahrscheinlich in derLeber und über die Aufnahmen in dieZielzellen im Knochenmark.Das EPO reguliert abhängig vomSauerstoffbedarf des Gewebes die

Synthese der roten Blutzellen.1 DieRegulation erfolgt über einen komplexenFeedbackmechanismus, bei dem übereinen Sauerstoffsensor der Niere derSauerstoffpartialdruck im Blut dieSekretion des Hormons steuert. Eineerhöhte Sauerstoffkonzentration führt zueiner Erniedrigung der EPO-Konzentration. Diese Beobachtung wirdbei der erfolgreichen Therapie derHypoxie Gesunder (nach vorherigerstarker Erhöhung der EPO-Spiegel) undHypertransfusion gemacht.Anhand der EPO-Spiegel im Blut werdendie Anämien in zwei Gruppen unterteilt. inprimäre und sekundäre. Bei primärenAnämien kommt es zu einem Anstieg derEPO-Konzentration, um die Syntheseroter Blutzellen sicherzustellen. Beispielefür Anämien bei denen erhöhte EPO-Spiegel gefunden werden sind:Eisenmangelanämien, erniedrigteBlutzirkulation der Leber (nach Blutverlust)und Hämoglobinpathologien mit einererhöhten Sauerstoffbindungskapazität desHämoglobins.1 Bei Anämien nicht renalenUrsprungs steigt anscheinend die EPO-Synthese proportional zu Abnahme derSauerstoffkonzentration und demabfallenden Hämatokrit. In diesen Fällenwurden bis zu 1 000fach erhöhte Wertegefunden.2

Sekundäre Anämien werden inZusammenhang mit Entzündungen,rheumatoider Arthritis, Neoplasien undchronischen Nierenerkrankungbeobachtet. Verantwortlich für diesesekundären Anämien ist unter anderemeine zu geringe EPO-Synthese.4

Die Schwierigkeit, genügend EPO zusynthetisieren, führt zu verschieden starkausgeprägten Anämien. SchwereAnämien werden bei Nierenerkrankungenim Endstadium beobachtet. Eine Ursachefür die erniedrigte Syntheserate ist dieZerstörung des Gewebes in dem das EPOgebildet wird. Allerdings kann auch derSauerstoffsensor beeinflusst sein. EPO-Spiegel im unteren Referenzbereich sindnicht ausreichend, um den Blutverlustwährend der Dialyse zu ersetzten. DieFolgen für die Patienten sind unteranderem: verkürzte Lebenszeit der rotenBlutzellen, Eisen- und Folsäuremangelund ein verschlechterter Eisentransport zuder Erythrozytenvorläuferzellen.Besonders Patienten mit eingeschränkter


Nierenfunktion zeigen erniedrigte EPO-Spiegel. Dennoch zeigen einige Patientenmit chronischem Nierenversagen normaleHämatokritwerte oder wenigerschwerwiegende Anämien und erhöhteEPO-Spiegel. Einige dieser Patientenhaben zystische Nieren oder eine viraleHepatitis. Die Ursache der erhöhten EPO-Spiegel bei der zuletzt genanntenPatientengruppe ist die gesteigerteProduktion in der Leber.

Die pathologisch erhöhte Synthese roterBlutzellen wird als Polycythaemiebezeichnet. Sie wird in Bezug auf dieEPO-Spiegel in zwei Gruppen (primäreund sekundäre) unterteilt. Bei derPolycythaemia vera erfolgt dieErythropoese unabhängig vom EPO. Eswerden erniedrigte EPO-Konzentrationenbestimmt.Bei Patienten mit gleichem Hämatokritwertkann der EPO-Spiegel um einen Faktorzehn variieren. Auch bei anderenErkrankungen kann die Feedback-Regulation der EPO-Konzentration durchdie Sauerstoffmenge verloren gehen, waszu einem erhöhten EPO-Spiegel führt.3Dazu zählen Nierenzellkarzinome, beiwelchen 2% der Patienten eineErythrozytose zeigen, einige benigneNierenerkrankungen wie Zysten, Stenosender Nierenarterien und mikrovaskuläreAbnormalitäten. Zusätzlich zeigenungefähr 10% der Patienten einerNierentransplantation eine Erythrozytose.

Die sekundäre Polycythaemie ist durcheinen erhöhten EPO-Spiegel sowie eineerhöhte Menge an roten Blutzellengekennzeichnet. Die Ursache könnenfolgende Faktoren sein: defektesHämoglobin, Lungenfibrose, kardialeErkrankungen, Tumore und Nierensteine.5

Bei der Bestimmung der EPO-Konzentration zur Differentialdiagnose derPolycythaemie muss die Überschneidungder Werte für die Erythrozytose oder fürdie Polycythaemia vera mit demReferenzbereich beachtet werden.3

MethodikIMMULITE/IMMULITE 1000 EPO ist einFestphasen, Chemilumineszenzimmunometrischer Assay.Inkubationszyklen: 2 × 30 min.

ProbengewinnungEs gibt mehrere Berichte in der Literaturüber tageszeitliche Schwankungen beiErythropoietin.7-9 Es ist wichtig, die Probenjeweils zu einem festgesetzten Zeitpunktabzunehmen. Es wird empfohlen, dieProben morgens zwischen 7:30 undmittags 12:00 zu gewinnen.Schwankungen in den Werten könnenauftreten, sofern die Proben nicht beiRaumtemperatur (15–28°C) gerinnenkonnten.EDTA würde die Resultate erheblichverfälschen und sollte daher nicht alsAntikoagulans verwerdet werden.

Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.Hämolytische oder grob kontaminierteProben können zu fehlerhaftenErgebnissen führen.Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab.IMMULITE/IMMULITE 1000 EPO sindnicht mit allen möglichenRöhrchenvariationen ausgetestet worden.Details der getesteten Röhrchenarten sinddem Kapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Erforderliche Menge: 100 µl Serum oderHeparin-Plasma. (Inhalt der Probenschalemuss mindestens 250 µl über dererforderlichen Gesamtmenge liegen.)Lagerung: 7 Tage bei 2–8°C haltbar oder2 Monate bei –20°C. WiederholtesEinfrieren/Auftauen vermeiden.


Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.

Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mitgroßen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Im Lieferumfang enthaltenDie Komponenten sind aufeinanderabgestimmt. Die Barcode-Etikettenwerden für den Assay benötigt.

EPO-Testeinheiten (LEP1)Jede mit Barcode-Etikette verseheneEinheit enthält eine mit Anti-ligand(Streptavidin-Derivat) beschichtete KugelBei 2–8°C bis zum Ablaufdatum haltbar.LKEPZ: 50 Testeinheiten.LKEP1: 100 Testeinheiten.Verpackte Testeinheiten vor dem Öffnenstehen lassen, bis sie Zimmertemperaturerreicht haben. Oben entlang der Kanteaufschneiden, ohne den Plastikverschlusszu beschädigen. Verpackungen wiederdicht verschließen, damit der Inhalttrocken bleibt.

EPO-Reagenzbehälter (LEPA)Mit Barcode. LEPA: 7,5 ml ligandmarkiertemonoklonale anti-EPO-Mausantikörper(mit Konservierungsmittel). LEPB: 7,5 ml

mit alkalischer Phosphatase(Rinderkalbsdarm) konjugierte polyklonaleanti-EPO-Ziegenantikörper in Pufferlösung(mit Konservierungsmittel). Verschlossenund gekühlt aufbewahren: Bei 2–8°C biszum Ablaufdatum haltbar. Beientsprechender Lagerung beträgt dieempfohlene Aufbrauchsfrist nach demÖffnen 30 Tage.LKEPZ: 1 Set. LKEP1: 1 Set.

EPO-Kalibratoren (LEPL, LEPH)Zwei Fläschchen (niedrig und hoch) mitlyophilisiertem human rekombinantenEPO in nichthumaner Serummatrix. (mitKonservierungsmittel). Mindestens 30 min.vor dem Gebrauch: Fläschchen mit je4,0 ml destilliertem oder deionisiertemWasser rekonstituieren. Zum Mischenleicht schwenken oder umdrehen, bis daslyophilisierte Material vollständig aufgelöstist. Nach Rekonstituierung 30 Tage bei2–8°C, sonst 6 Monate (aliquotiert) bei–20°C haltbar.LKEPZ: 1 Set. LKEP1: 1 Set.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten

EPO Verdünnungspuffer (LEPZ)Zur manuellen Verdünnung vonPatientenproben. Ein Fläschchen (25 ml)EPO-freie nichthumane Serummatrix (mitKonservierungsmittel). 30 Tage nach demÖffnen bei 2–8°C haltbar oder 6 Monatebei –20°C (aliquotiert).LSUBX: Chemilumineszenz-SubstratLPWS2: PipettenwaschlösungLKPM: PipettenreinigungssetLCHx-y: Halterungen für dieProbenschalen (mit Barcodierung)LSCP: Probenschalen (Einwegartikel)LSCC: Verschlüsse für die Probenschalen(optional)LEPCM: EPO Kontrollmodul in dreiKonzentrationen.Ebenfalls benötigtTransferpipetten für die Proben;destilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Kontrollen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE oder


IMMULITE 1000-Handbuch beschrieben,regelmäßig durchgeführt werden.

Das Handbuch für das IMMULITE bzw.IMMULITE 1000 enthält die Anweisungenfür: Vorbereitung, Geräteeinstellungen,Verdünnungen, Kalibrierung,Testdurchführung und Qualitätskontrollen.Überprüfen Sie jedes Testeinheit auf dasVorhandensein der Polystyrol-Kugel vordem Einsetzen in das Gerät.

Beachten Sie, dass zur Durchführungdieses Tests beide Reagenzbehälter(A und B) auf das Karussell geladenwerden müssen.Hinter jedem Probenaufnahmegefäßkönnen bis zu 4 Testeinheiten nachfolgen.

Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Proben zur Qualitätskontrolle:Kontrollen oder Poolseren mit EPO inmindestens zwei Konzentrationen (niedrigund hoch) verwenden.

ReferenzwerteEine Studie des Herstellers mit demIMMULITE EPO mit 167 gesundenLaborfreiwilligen zeigte einen Median von10,5 mIU/ml, eine 95% Percentile von20,1 mIU/ml und einen Absolutbereich von3,7 mIU/ml bis 29,5 mIU/ml.

Bei der Interpretation von EPO-Wertenvon Patienten mit nicht anämischenErkrankungen ist besondere Vorsichtgeboten. Bei Patienten mit Eryzytose,bedingt durch nicht-kompensierte Hypoxieist immunreaktives Serum-EPO erhöht;bei solchen mit kompensierter Hypoxie istder Serumspiegel des ImmunraktivenEPO gewöhnlich im Normalbereich, beiPatienten mit Polycytaemia vera ist derEPO Spiegel normal oder erniedrigt.Während erhöhte Serum-EPO-Spiegelerklären, dass es sich bei einerErythrozythose um ein sekundäresPhänomen handelt und ein niedriger EPO-Spiegel die Möglichkeit einer autonomenErythropiese einräumt, schliesst einnormaler EPO Serumspiegel weder eineHypoxie noch eine autonome EPO-Produktion als Grund für eineErythrozytose aus.Diese Grenzwerte sind lediglich alsRichtlinien aufzufassen. Jedes Labor

sollte seine eigenen Referenzbereicheetablieren.

Grenzen der MethodeBei Vorliegen von Antikörpern gegenandere Spezies wurden Schwankungenbei den EPO Werten festgestellt.Beinflussungen des Tests durchArzneimittel wurden nicht überprüft.

Die Ergebnisse dieses Tests sollten immerin Verbindung mit klinischen Informationenund anderen diagnostischen Verfahrenbewertet werden.Da sich die Ergebnisse verschiedenerEPO Testverfahren sich signifikant voneinander unterscheiden können, wirdempfohlen, serielle Untersuchungen einesPatienten über einen bestimmten Zeitraumimmmer mit dem gleichen EPO Testdurchzuführen.Bei Anämien bedingt durch dienachfolgend aufgeführten Erkrankungenwurden erniedrigte Werte beobachtet:Rheumatoide Arthritis, AIDS,Tumorerkrankungen, Colitis ulcerosa,Sichelzellanämie, Frühgeborene.Nach allogener Knochenmarks-transplantation kann ein beeinträchtigterErythropoietin-Response dasWiederauftreten von Erythropoietinverzögern.Patienten mit Hypergammaglobulinämieverbunden mit multiplen Myelom oderMorbus Waldenström haben einebeinträchtigte Erythropoietin-Produktion inRelation zur ihrerHämoglobinkonzentration. Dies ist miteiner erhöhten Plasma-Viskositätverknüpft.In großer Höhe lebende Personen mitErythrocytose können nach Rückkehr ingemäßtige Höhenlagen schnell zumNormalzustand zurückfinden.Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind so


konzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als mIU/mL ausgedrückt.

Messbereich: Bis 200 mIU/ml(WHO 2nd IRP 67/343).Analytische Sensitivität: 0,24 mIU/ml.High-Dose-Hook-Effect:Bis 50 000 mIU/ml keiner.Präzision: Proben wurden innerhalb von20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen inDoppelbestimmung gemessen (insgesamt40 Bestimmungen und 80Einzelmessungen; siehe Tabelle„Präzision“).Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Linearität“.)Wiederfindung: Die getesteten Probenwaren mit zwei EPO-Lösungen (85 und777 mIU/ml) 1:19 versetzt.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Recovery“.)Spezifität: Hochspezifischer Anti-EPO-Antikörper (siehe Tabelle „Spezifität“).

Alternativer Probentyp: Die Probenwurden in unbehandelte, heparinisierteund EDTA-behandelte Vacutainer-Röhrchen gefüllt. Konzentrationsbereichca. 5,1–196 mIU/ml. Die Verwendung vonEDTA-Plasma ist nicht empfehlenswert.(Heparin) = 0,99 (Serum) + 0,7 mIU/mlr = 0,997

(EDTA) = 0,88 (Serum) – 3,4 mIU/mlr = 0,991

Mittelwert:77,7 mIU/ml (Serum)77,6 mIU/ml (Heparin)64,7 mIU/ml (EDTA)

EDTA würde die Resultate erheblichverfälschen und sollte daher nicht alsAntikoagulans verwerdet werden.Bilirubin: Konjugiertes undunkonjugiertes Bilirubin hat inKonzentrationen bis zu 200 mg/l keinenEinfluss auf die Messung, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Hämolyse: Hemoglobin inKonzentrationen bis zu 384 mg/dl kann zueiner Erniedrigung der Werte führen(Siehe Tabelle “Hemolysis”).Lipämie: Triglyceride haben inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Ergebnisse, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.Methodenvergleich: Der Assay wurdeunter Verwendung von 130 endogenenSerumproben mit einem kommerziellerhältlichen immunoradiometrischenAssay (Kit A) für EPO verglichen.Konzentrationsbereich ca. 2,5–200 mIU/ml. Siehe Grafik.) Durch lineareRegression:(IML) = 0,85 (Kit A) + 3,8 mIU/mlr = 0,978

Mittelwert:41 mIU/mL (IMMULITE)44 mIU/mL (Kit A)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

EPOUtilidad del análisis: Para su uso en eldiagnóstico in vitro con los analizadoresIMMULITE e IMMULITE 1000 — para lamedición cuantitativa de eritropoyetina(EPO) en suero o plasma heparinizado,como una ayuda en el diagnóstico deanemias y policitemias.Números de Catálogo: LKEPZ (50 tests),LKEP1 (100 tests)Código del Test: EPO Color: Verde claro


Resumen y Explicacióndel TestLa eritropoyetina (EPO) es una hormonaglucoproteica que consta de 165aminoácidos, con cuatro cadenas decarbohidratos complejos unidas al péptidoen cuatro puntos de anclaje.1 Tiene unpeso molecular de 36 000 daltons, 40%del cual se atribuye a las cadenas decarbohidratos. EPO es la reguladoraprimaria de la eritropoyesis; estimula laproliferación y diferenciación de célulasprecursoras eritroides en la médula ósea.En los mamíferos, el hígado fetal producecasi todas las hormonas; en los adultos, laproducción hepática cae por debajo del10% y la secreción renal supone más del90%.2,3 Se cree que el punto deproducción son las células tubularesrenales proximales o las célulasendoteliales capilares peritubulares de lacorteza renal y de la médula exterior. Elaclaramiento de EPO circulante no se haexplicado por completo pero se alcanza,en una pequeña parte, a través de laexcreción urinaria y, probablemente,también por eliminación hepática ycaptura por parte de las células de destinoen la médula ósea.EPO ajusta la producción de eritrocitospara que satisfaga la demanda tisular deoxígeno.1 Ejerce su efecto en un sistemade retroalimentación complejo, en el cualla secreción renal de la hormona estácontrolada por un sensor de oxígeno en elriñón, sensor que responde a la presiónparcial de oxígeno en la sangre. Encondiciones de aumento del oxígenoperiférico, los niveles de EPO se reducen.Esto puede verse tras la corrección de lahipoxia en individuos sanos (por ejemplotras descender de grandes alturas) ydespués de una hipertransfusión.Las anemias pueden dividirse en doscategorías con respecto a los niveles deEPO en sangre: aquéllas que sonprimarias respecto a los niveles de EPO yaquéllas que son secundarias. Lasanemias se caracterizan por un aumentode EPO en sangre para intentar restaurarla producción normal de célulassanguíneas. Entre los ejemplos deanemias, en las cuales se elevan losniveles de EPO, se encuentran la anemiapor deficiencia de hierro, la reducción deflujo sanguíneo al riñón (como ocurre enlas pérdidas de sangre) y las

hemoglobinopatías con afinidadaumentada de la hemoglobina por eloxígeno.1 Se ha observado que la tasa deproducción de EPO aumentaexponencialmente con el descenso deloxígeno disponible, y con la caída delhematocrito en anemias no renales; enestas últimas se han observado niveles deEPO 1 000 veces mayores de losnormales.2

La anemia puede ser secundaria respectoa la inflamación, artritis reumatoide,neoplasia y enfermedad renal crónica. Las"anemias secundarias" pueden sinembargo atribuirse, al menos en parte, aun déficit en la producción de EPO.4

La incapacidad para producir suficienteEPO es responsable de anemias demoderadas a graves, observadas en lasetapas finales de enfermedades renales.La disminución en la producción de EPOse atribuye a la destrucción de los centrosde producción renal; también puede verseafectado el sensor de oxígeno renal. Losniveles de hormona sólo puedensobrepasar ligeramente el intervalo dereferencia, y resultan inadecuados paracontrarrestar la pérdida de sangre debidaa la diálisis, al acortamiento de la vida delas células sanguíneas, a la deficiencia dehierro y folato, a dificultades en latransferencia de hierro a las célulaseritroides progenitoras y a otrasdificultades que deben afrontar talespacientes. Los pacientes anefríticospresentan niveles de EPO especialmentebajos. Unos pocos pacientes coninsuficiencia renal crónica exhibenhematocritos normales o anemias menosgraves, y niveles elevados de EPO.Algunos de estos pacientes tienen riñonescísticos o hepatitis viral; en este últimocaso, los niveles elevados de EPOpueden ser resultado de un aumento de laproducción hepática.

La superproducción de eritrocitos sedenomina policitemia. Las policitemias sedividen también en dos categorías,dependiendo de si la condición esprimaria o secundaria respecto a losniveles de EPO. En la policitemia vera, losniveles de EPO se reducen y laeritropoyesis es primaria e independientede la estimulación por EPO. La variaciónde los valores de EPO puede ser de hastadiez veces para diferentes pacientes conel mismo hematocrito.


Algunas condiciones puedencaracterizarse por la pérdida del controlpor retroalimentación del nivel de oxígenosobre la producción de EPO, lo queprovoca un aumento de los niveles deEP.3 Entre ellas se incluyen loscarcinomas celulares renales, en loscuales el 2 por ciento de los pacientespresentan eritrocitosis y algunas lesionesrenales benignas, tales como quistesrenales sencillos o múltiples, estenosisarterial renal y anormalidadesmicrovasculares. Además,aproximadamente un 10 por ciento de lospacientes con trasplantes renalesdesarrollan eritrocitosis, a veces a partirde un riñón autodañado.La policitemia secundaria se caracterizapor elevados niveles de EPO, queconducen al aumento de la cantidad deeritrocitos. Esta condición puede estarprovocada por diversos factores, entre losque se incluyen la hemoglobinadefectuosa, el consumo de tabaco, lafibrosis pulmonar, enfermedadescardiacas, tumores y cálculos renales.5

Cuando se examina la EPO para eldiagnóstico diferencial de policitemias,debe considerarse la posibilidad desolapamiento entre los valores paraeritrocitosis secundaria o policitemia veray los valores del intervalo de referencia.3

Principio del análisisIMMULITE/IMMULITE 1000 EPO es unensayo inmunométrico quimioluminiscenteen fase sólida.Ciclos de incubación: 2 × 30 minutos.

Recogida de la muestraHay varios informes de variacionesdiurnas de eritropoyetina en lasreferencias de la literatura.7-9 Esimportante recoger siempre las muestrasa la misma hora del día. Es recomendabletomar las muestras matutinas entre las7:30 a.m y las 12:00 del mediodía.Puede darse una variación de los valoressi la muestra no se coagula a temperaturaambiente (15 a 28°C).

Como EDTA tendría un efecto significativoen los resultados, no debe usarse comoanticoagulante.

Se recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.Las muestras hemolizadas o ampliamentecontaminadas pueden dar resultadoserróneos.

La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erroneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.

Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El EPOIMMULITE/IMMULITE 1000 no ha sidoanalizado con todos los distintos tipos detubos. Para obtener detalles sobre lostipos tubos que se han analizado,consulte la sección de Tipos de MuestrasAlternativos.

Volumen requerido: 100 µl suero yplasma heparinizado. (El recipiente de lamuestre debe contener, como mínimo,250 µl más que el volumen totalrequerido).Conservación: 7 días a 2–8°C, o2 meses a –20°C. Evitar lascongelaciones y descongelacionesrepetidas.

Advertencias y precaucionesPara uso diagnóstico in vitro.

Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.


Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerias de cobre yplomo.

Sustrato quimioluminiscente: evite lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto.)Agua: Use agua destilada o desionizada.

Materiales SuministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Unidades de análisis de EPO (LEP1)Cada unidad etiquetada con código debarras contiene una bola recubierta deanti-ligando derivado de estreptavidina.Estable a 2–8°C hasta la fecha decaducidad.LKEPZ: 50 unidades.LKEP1: 100 unidades.Espere a que las bolsas de las unidadesde análisis alcancen la temperaturaambiente antes de abrirlas. Ábralascortando por el extremo superior, dejandoel borde del cierre de cremallera intacto.Vuelva a cerrar las bolsasherméticamente para protegerlas de lahumedad.

Viales de reactivos de EPO (LEPA,LEPB)Con códigos de barras. LEPA: 7,5 mlanticuerpo monoclonal murino anti-EPOmarcado con ligando, con conservante.LEPB: 7,5 ml fosfatasa alcalina conjugadacon anticuerpo policlonal anti-EPO decabra en solución tampón, conconservante. Guardar tapado yrefrigerado: estable a 2–8°C hasta lafecha de caducidad. Se recomiendautilizarlo antes de que pasen 30 díasdespués de abrirlo cuando se guardasegún lo indicado.LKEPZ: 1 juego. LKEP1: 1 juego.

Ajustadores de EPO (LEPL, LEPH)Dos viales (bajo y alto) que contienenEPO humana recombinante liofilizada enuna matriz de suero no humano, conconservante. 30 minutos, como mínimo,

antes de su uso: Reconstituya cada vialcon 4,0 ml de agua destilada odesionizada. Mezcle por agitación oinversión suave hasta que se hayadisuelto completamente el materialliofilizado. Estable a 2–8°C durante30 días después de la reconstitución, ohasta 6 meses (alicuotados) a –20°C.LKEPZ: 1 juego. LKEP1: 1 juego.

Componentes del kit que sesuministran por separado

Diluyente de EPO (LEPZ)Para la dilución manual de las muestrasde los pacientes. Un vial (25 ml) de matrizde suero no humano, libre de EPO, conconservante. Estable a 2–8°C durante30 días después de abrise, o hasta6 meses (alicuotados) a –20°C.LSUBX: Sustrato quimioluminiscenteLPWS2: Lavado de sondaLKPM: Kit de limpieza de sondaLCHx-y: Soportes de recipientes demuestras (con códigos de barras)LSCP: Recipientes de muestras(desechables)LSCC: Tapas para los recipientes demuestras (opcionales)LEPCM: Módulo de control EPO de tresnivelesTambién necesarioPipetas de transferencia de muestras;agua destilada o desionizada; controles.

EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE o IMMULITE1000.Ver el Manual del Operador delIMMULITE o IMMULITE 1000 para:preparación, procesamiento, diluciones,ajuste, procedimientos de ensayo ycontrol de calidad.

Inspeccionar visulamente cada unidad derección para asegurarse de que hay unabola antes de introducirla en el Sistema.Tenga en cuenta que hay que cargar losviales de reactivos A y B en el carruselpara ejecutar este ensayo.


Cada soporte de recipientes de muestraspuede acompanarse de cuatro unidadesde reaccion como maximo.Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.Muestras de Control de Calidad: Utilizarcontroles o pooles de sueros con almenos dos niveles diferentes de EPO(bajo y alto).

Valores EsperadosUn estudio con el kit EPO IMMULITErealizado en 167 voluntarios delaboratorio aparentemente sanos dio unamediana de 10,5 mIU/ml, un 95% percentilde 20,1 mIU/ml y un intervalo absoluto de3,7 mIU/ml a 29,5 mIU/ml.

Los resultados de EPO para pacientescon enfermedades diferentes a la anemia,deben interpretarse con precaución. Enpacientes con eritrocitosis debida ahipoxia no compensada se eleva la EPOinmunorreactiva en el suero; en pacientescon hipoxia compensada, el nivel de EPOinmunorreactiva en suero se encuentrahabitualmente en el intervalo normal; laEPO inmunorreactiva en suero es normalo baja en los pacientes con policitemiavera. Así, mientras que un nivel elevadode EPO en suero sugiere que laeritrocitosis es un fenómeno secundario yun nivel bajo de EPO apoya la posibilidadde una eritropoyesis autónoma, un nivelnormal de EPO en suero no excluye lahipoxia ni la producción autónoma deEPO como causa de la eritrocitosis.

Estos límites han de considerarse sólocomo una guía. Cada laboratorio deberáestablecer sus propios intervalos dereferencia.

LimitacionesSe han observado variaciones en losresultados de EPO en presencia deanticuerpos antiespecie.No se ha analizado la interferencia deninguna droga con el ensayo.Los resultados de este ensayo debenutilizarse junto con la informacióndisponible de evaluaciones clínicas y otrosprocedimientos de diagnóstico.Dado que los resultados que se obtengancon cualquier ensayo de EPO pueden sersignificativamente diferentes de los

demás, es recomendable que cualquierserie de análisis que se realice sobre unmismo paciente a lo largo del tiempo sehaga con el mismo análisis de EPO.Se han observado niveles de EPOmenores de los esperados en anemiasasociadas a las condiciones siguientes:artritis reumatoide, síndrome deinmunodeficiencia adquirida, cáncer,colitis ulcerosa, anemia falciforme yneonatos prematuros.Después de un trasplante de médula óseaalogénica, el trastorno de la respuesta dela eritropoyetina puede retrasar surecuperación.Los pacientes con hipergammaglobulin-emia asociada a mieloma múltiple oenfermedad de Waldenstrom presentantrastornos en la producción deeritropoyetina en relación con el nivel dehemoglobina; esto se ha vinculado alaumento de viscosidad del plasma.Los niveles de EPO de personas queviven a grandes altitudes con eritrocitosispueden caer rápidamente a valoresnormales después de volver a una altitudnormal.Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características AnalíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo ver las tablas y los


gráficos. Los resultados se expresanen mIU/ml.

Rango de Calibración: Hasta 200 mIU/ml(WHO 2nd IRP 67/343).Sensibilidad: 0,24 mIU/ml.Efecto de gancho a altas dosis:Ninguno hasta 50 000 mIU/ml.Precisión: Las muestras fueronprocesadas por duplicado durante 20 días,en dos tandas de trabajo por día, para untotal de 40 tandas y 80 replicados. (Véasela tabla "Precisión").Linealidad: las muestras fueronanalizadas con varias diluciones. (Véasela tabla "Linealidad" para resultadosrepresentativos).Recuperación: Se han analizado lasmuestras cargadas 1 en 19 con dossoluciones de EPO (85 y 777 mIU/ml).(Véase la tabla "Recuperación" pararesultados representativos).

Especificidad: El anticuerpo es altamenteespecífico para EPO. (Véase la tabla"Especificidad").Tipo de Muestra Alternativa: Se hanrecogido muestras (n = 22) en tubosVacutainers sin anticoagulante yheparinizados y en tubos Vacutainers conEDTA. Intervalo de concentración:aproximadamente 5,1 a 196 mIU/ml. Elplasma EDTA no se recomienda en elprocedimiento.(Heparin) = 0,99 (Suero) + 0,7 mIU/mlr = 0,997

(EDTA) = 0,88 (Suero) – 3,4 mIU/mlr = 0,991

Medias:77,7 mIU/ml (Suero)77,6 mIU/ml (Heparin)64,7 mIU/ml (EDTA)

Como EDTA tendría un efecto significativoen los resultados, no debe usarse comoanticoagulante.Bilirrubina: La presencia de bilirrubinaconjugada y libre en concentracioneshasta 200 mg/l no tiene efecto en elensayo, en lo concerniente a la precisióndel ensayo.

Hemolisis: La presencia de hemoglobinaen concentraciones de hasta 384 mg/dlpuede ocasionar una bajada de losvalores. (Ver la tabla de “Hemolysis”.)

Lipemia: La presencia de triglicéridos enconcentraciones hasta 3 000 mg/dl notiene efecto alguno en los resultados, enlo correspondiente a la precisión delensayo.

Comparación del Método: El ensayo secomparó con un ensayoinmunorradiométrico para EPO disponibleen el mercado (Kit A), en 130 muestras desuero endógeno. (Rango deConcentración: aproximadamente 2,5 a200 mIU/ml. Ver el gráfico.) Por regresiónlinear:(IML) = 0,85 (Kit A) + 3,8 mIU/mlr = 0,978

Medias:41 mIU/ml (IMMULITE)44 mIU/ml (Kit A)

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Français

IMMULITE EPODomaine d'utilisation : dosage quantitatifde l'EPO dans le sérum ou le plasmahépariné. Ce test est réservé à un usagediagnostic in vitro avec l'AnalyseurIMMULITE et de IMMULITE 1000, etconstitue une aide au diagnostic desanémies et polyglobulies.Référence catalogue : LKEPZ (50 tests),LKEP1 (100 tests)

Code produit : EPOCode color : vert clair

IntroductionL'érythropoïétine (EPO) est une hormoneglycoprotéïque composée de 165 acidesaminés avec 4 chaînes carbohydratescomplexes attachées au peptide par 4sites de liaison.1 Son poids moléculaireest de 36 000 Daltons, 40% de ce poidsétant celui des chaînes carbohydrates.L'EPO est le régulateur primaire del'érythropoïèse, il stimule la prolifération etla différenciation des cellules précurseursde la lignée érythrocytaire dans la moelleosseuse. Chez les mammifères, le foie du


fœtus produit presque la totalité de cettehormone. Chez l'adulte, la productionhépatique est de moins de 10% et lasécrétion rénale de plus de 90%.2,3 Onpense que le site de production se trouvedans les cellules du tube proximal rénal ouau niveau des cellules endothélialescapillaires péritubulaires du cortex rénal etde la medulla externe. La clairance del'EPO circulante n'a pas été complètementélucidée, elle se fait pour une petite partiepar excrétion urinaire et probablementégalement par élimination hépatique etpar assimilation dans les cellules cibles dela moelle osseuse.

L'EPO contrôle la production de globulesrouges afin de répondre à la demande enoxygène des tissus.1 Elle exerce son effetpar un système complexe de rétrocontrôledans lequel la sécrétion rénale del'hormone est contrôlée par un capteurd'oxygène dans le rein qui répond à lapression partielle en oxygène du sang.Dans le cas où l'oxygène périphériqueaugmente, le taux d'EPO diminue. Cela aété constaté en cas de correction del'hypoxie chez des sujets sains (commeredescendre d'une haute altitude) et aprèsune hypertransfusionLes anémies peuvent être divisées endeux catégories selon les taux d'EPOdans le sang : les primaires et lessecondaires. Les anémies primaires sontcaractérisées par une augmentation del'EPO dans le sang pour tenter deramener à la normale la production desglobules rouges. L'anémie par carencemartiale, la réduction du flux sanguin versle rein (comme lors d'une perte de sang)et les hémoglobinopathies avec uneaffinité augmentée de l'hémoglobine pourl'oxygène1 sont des exemples d'anémiesdans lesquelles les taux d'EPO sontélevés. On observe une augmentationexponentielle du taux de production del'EPO avec la diminution de l'oxygènedisponible et la chute de l'hématocrite encas d'anémies non rénales ; dans cedernier cas, des taux d'EPO 1 000 foissupérieurs à la normale ont été observés.2

L'anémie peut être secondaire à uneinflammation, à une arthrite rhumatoïde, àun cancer et aux maladies rénaleschroniques. Les « anémies secondaires »peuvent toutefois être attribuées, aumoins en partie, à une sous-productiond'EPO.4

L'incapacité à produire suffisammentd'EPO est responsable d'anémiesmodérées à sévères observées au stadeterminal des maladies rénales. Ladiminution de la production d'EPO estattribuée à la destruction des sites deproduction du rein ; le capteur d'oxygènedans le rein peut également être atteint.Les taux d'hormones sont légèrementsupérieurs au domaine de référence et nesont pas adaptés pour répondre à uneperte de sang due à la dialyse, à unedurée de vie des globules rougesraccourcie, à un déficit en fer ou folate, àune diminution du fer absorbé par lescellules précurseurs de la lignéeérythrocytaire et autres situationsauxquelles font face de tels patients. Lespatients anéphriques ont des taux d'EPOspécialement bas. Quelques patientsayant des insuffisances rénaleschroniques présentent toutefois unhématocrite normal ou une anémie moinssérieuse avec des taux d'EPO élevés.Certains de ces patients ont des reinskystiques ou une hépatite virale ; dans cedernier cas, une augmentation d'EPO peuts'expliquer par une production hépatiqueaugmentée.La surproduction de globules rouges estappelée polyglobulie. Les polyglobuliespeuvent également être divisées en deuxcatégories selon que leur apparition estprimaire ou secondaire au taux d'EPO.Dans le cas de polyglobulie vraie, le tauxd'EPO est diminué et l'érythropoïèse estprimaire et indépendante de la stimulationpar l'EPO. Les concentrations d'EPOpeuvent être multipliées par 10 pourdifférents patients avec le mêmehématocrite.

Certains états sont caractérisés par laperte du rétrocontrôle des concentrationsd'oxygène sur la production d'EPO,provoquant une augmentation des tauxd'EPO.3 C'est observé au cours descarcinomes rénaux, 2% des patientsprésentent une polyglobulie, et au coursde lésions rénales bénignes comme leskystes rénaux simples ou multiples, lessténoses artérielles rénales et lesanomalies microvasculaires. De plusenviron 10% des transplantés du reindéveloppent une polyglobulie provenantparfois d'une maladie autologue du rein.La polyglobulie secondaire estcaractérisée par une concentration élevée


d'EPO qui conduit à une augmentation dela masse des cellules rouges. Cettecondition peut provenir de divers facteurs,incluant une hémoglobine déficiente, letabac, une fibrose pulmonaire, unemaladie cardiaque, des tumeurs et descalculs rénaux.5

Lors du dosage de l'EPO dans lediagnostic étiologique des polyglobulies, ilpeut y avoir chevauchement entre lesvaleurs des polyglobulies secondaires ouvraies et les valeurs de référence.3

Principe du testIMMULITE/IMMULITE 1000 EPO est undosage chimiluminescentimmunométrique, en phase solide.Cycles d'incubation : 2 × 30 minutes.

Recueil des échantillonsDes variations diurnes de l'érythropoïétinesont rapportées dans la littérature7-9. Il estimportant que les échantillons soientprélevés à un moment précis de lajournée. Des prélèvements matinaux entre7h30 et 12h00 sont recommandés.

Il est possible que les valeurs varient sil'échantillon n'est pas coagulé àtempérature ambiante (+15°C/+28°C).L'EDTA étant susceptible d'avoir unimpact significatif sur les résultats, il nedevrait pas être utilisé comme anti-coagulant.Il est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés ou fortementcontaminés peuvent donner des résultatsérronés.La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.

Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y compris

gels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret EPO IMMULITE/IMMULITE 1000n'a pas été testé sur tous les types detubes possibles. Veuillez consulter lechapitre intitulé Autres Typesd'Échantillons pour plus derenseignements sur les tubes qui ont étéévalués.Volume nécessaire : 100 µl de sérum oude plasma hépariné. (Le godet échantillondoit pouvoir contenir au moins 250 µl deplus que le volume total nécessaire.)

Conservation : 7 jours à +2°C/+8°C ou 2mois à –20°C. Eviter de multiplier lescycles congélation/ décongélation.

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : conserver les réactifs à +2°/+8 °C. Eliminer les déchets conformémentà la réglementation en vigueur.Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : éviter toutecontamination et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).Eau : utiliser uniquement de l'eau distilléeou désionisée.

Materiel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à code-barre sont nécessairesau dosage.

Tests unitaires EPO (LEP1)Chaque unité à code-barre contient unebille revêtue d'anti-ligand dérivé de la


streptavidine. Stable à +2°/ +8 °C jusqu'àla date de péremption.LKEPZ: 50 unités.LKEP1: 100 unités.Porter les sachets à température ambianteavant d'ouvrir. Ouvrir le sachet avec desciseaux en préservant le dispositif defermeture. Refermer les sachets pour lesprotéger de l'humidité.

Cartouches de réactif EPO (LEPA,LEPB)Avec code-barre. LEPA : 7,5 ml d'unanticorps monoclonal murin anti-EPOmarqué par un ligand avec conservateur.LEPB : 7,5 ml d'un anticorps polyclonal dechèvre anti-EPO conjugué à de laphosphatase alcaline dans un tamponavec conservateur. Conserver bouché etréfrigéré : stable à +2°/ +8 °C jusqu'à ladate de péremption. A utiliser depréférence dans les 30 jours qui suiventl'ouverture, si les recommandations destockage sont respectées.LKEPZ: 1 jeu. LKEP1: 1 jeu.

Ajusteurs EPO (LEPL, LEPH)2 flacons d'ajusteurs (« bas » et « haut »)contenant de l'EPO recombinantehumaine lyophilisée dans une matrice desérum non humain avec conservateur. 30minutes au minimum avant l'emploi :Reconstituer chaque flacon avec 4,0 mld'eau distillée ou désionisée. Mélanger enimprimant un léger mouvement circulaireou en retournant délicatement jusqu'àcomplète dissolution de la substancelyophilisée. Stable à +2°/ +8 °C pendant30 jours après reconstitution, ou 6 mois(aliquotés) à –20 °C.LKEPZ: 1 jeu. LKEP1: 1 jeu.

Composants du coffret fournisséparément

Diluant EPO (LEPZ) Pour la dilution manuelle des échantillonscliniques. Un flacon (25 ml) contenant unematrice sérique non humaine exempted'EPO, avec conservateur. Stable à +2°/+8 °C pendant 30 jours après ouverture,ou 6 mois (aliquoté) à –20 °C.LSUBX : Substrat chimiluminescentLPWS2 : Solution de lavageLKPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLCHx-y : Supports pour godets

échantillons (avec code-barre)LSCP : Godets échantillons (à usageunique)LSCC : Bouchons pour godetséchantillons (optionnel)

LEPCM : Contrôle EPO, à trois niveauxde concentration.Egalement requisPipettes pour le transfert d'échantillon ;eau distillée ou désionisée ; Contrôles.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation de l'IMMULITE ou del'IMMULITE 1000.Voir le manuel d'utilisation de l'IMMULITEou de l'IMMULITE 1000 pour lapréparation, le démarrage du système, lesajustements, le dosage et les procéduresde contrôle de qualité.Vérifier visuellement que chaque Unité-Test contient bien une bille avant de lacharger dans l'automate.Noter que les deux cartouches de réactif Aet B doivent être placées sur le carrouselpour réaliser ce dosage.

Chaque unité-échantillon peut être suiviepar jusqu'à quatre unités-tests.Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.Echantillons pour le contrôle dequalité : utiliser des Contrôle ou des poolsd'échantillons avec au moins deuxniveaux de concentration (faible ou élevé)d'EPO.

Valeurs de référenceUne étude réalisée avec le coffret EPOIMMULITE de DPC sur 167 volontaires delaboratoire sains donna une médiane de10,5 mUI/ml, de 20,1 mUI/ml au 95ème

percentile et un domaine absolu allant de3,7 mUI/ml à 29,5 mUI/ml.Il faut faire attention lors de l'interprétationdes résultats d' EPO de patients atteintsd'autres maladies que l'anémie. En effetchez les patients ayant une polyglobuliedue à une hypoxie non compensée, letaux sérique d'EPO est élevé ; chez ceuxdont l'hypoxie est compensée, la


concentration en EPO sérique estgénéralement dans la zone normale etchez les patients atteints de polyglobulievraie, le niveau d'EPO sérique est soitnormal soit bas. Ainsi, un taux élevéd'EPO sérique suggère que la polyglobulieest un phénomène secondaire et un tauxabaissé d'EPO sérique laisse supposerune érythropoïèse autonome, un tauxnormal d'EPO sérique n'exclut quant à luini l'hypoxie ni la production autonomed'EPO comme cause de polyglobulie.Utiliser ces valeurs à titre indicatifuniquement. Chaque laboratoire devraétablir ses propres valeurs de référence.

LimitesDes variations de résultats en EPO ont étéobservées en présence d'anticorps anti-espèce.Aucun médicament n'a été testé pour uneéventuelle réaction croisée avec ledosage.

Les résultats de ce dosage doivent êtreinterprétés en tenant compte des donnéescliniques et des autres méthodesdiagnostiques.

Etant donné que les résultats obtenuspeuvent varier significativement suivant laméthode de dosage de l'EPO utilisée, ilest recommandé de conserver la mêmeméthode pour tout suivi de patient.Des taux d'EPO abaissés peuvent êtrerencontrés dans le cas d'anémiesassociées à de l'arthrite rhumatoïde, unsyndrome d'immunodéficience acquise, uncancer, une colite ulcérante, unedrépanocytose et chez les nouveau-nésprématurés.Après une transplantation allogénique demoelle osseuse, une réponse altérée del'érythropoïétine peut retarder le retour àla normale de l'érythropoïétine.

Les patients atteints d'hypergamma-globulinémie associée à un myélomemultiple ou à la maladie de Waldenstromont une production inadaptéed'érythropoïétine en relation avec laconcentration en hémoglobine, ceci est liéà une viscosité plasmatique augmentée.

Les taux d'EPO des personnes qui viventen altitude avec une polyglobulie peuventrapidement descendre à des valeurs

normales quand ces personnesreviennent à des altitudes plus basses.

Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums exceptionnels et lescomposants du test peuvent se produire.Dans un but diagnostique, les résultatsobtenus avec ce dosage doivent toujoursêtre utilisés en association avec unexamen clinique, l'histoire médicale dupatient et d'autres résultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances de ce test. Les résultatssont donnés en mUI/ml.

Intervalle de linéarité : jusqu'à200 mUI/ml (WHO 2nd IRP 67/343).Sensibilité analytique : 0,24 mUI/ml.Accoutumance aux doses élevées :aucune jusqu'à 50 000 mUI/ml.Précision : les échantillons sont dosés enduplicata sur une période qui s'étend sur20 jours, avec deux séries par jours, soit40 séries et 80 replicata au total. (Voir letableau « Precision ».)Test de dilution : des échantillons ont étédosés à différentes concentrations. (Voirle tableau « Linearity » pour des donnéesreprésentatives.)Test de récupération : des échantillonsdosés ont été chargés dans uneproportion de 1 à 19 avec deux solutionsd'EPO (85 et 777 mUI/ml). (Voir le tableau« Recovery » pour des donnéesreprésentatives.)Spécificité : l'anticorps utilisé esthautement spécifique de l'EPO. (Voir letableau « Specificity ».)


Autres types d'échantillons: leséchantillons (n = 22) ont été recueillis surtubes secs, vacutainer héparinés oucontenant de l'EDTA. Intervalle deconcentrations : 5,1 à 196 mUI/ml. Leplasma EDTA est déconseillé.(Héparine) = 0,99 (Sérum) + 0,7 mUI/mlr = 0,997

(EDTA) = 0,88 (Sérum) – 3,4 mUI/mlr = 0,991

Moyennes :77,7 mUI/ml (Sérum)77,6 mUI/ml (Héparine)64,7 mUI/ml (EDTA)

L'EDTA étant susceptible d'avoir unimpact significatif sur les résultats, il nedevrait pas être utilisé comme anti-coagulant.Bilirubine : La présence de bilirubine,conjuguée ou non, n'a aucun effet sur ledosage ni sur sa précision si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/lHémolyse: La présence d'hémoglobine, àdes concentrations allant jusqu'à384 mg/dl, peut entrainer une baisse desvaleurs. (voir le tableau “Hémolyse”.)Lipémie : La présence de triglycéridesjusqu'à une concentration de 3 000 mg/dln'interfère ni sur la précision du dosage, nisur les résultats.Comparaison de méthodes : Le dosagea été comparé à un testimmunoradiométrique disponible dans lecommerce (Coffret A) sur 130 échantillonssériques endogènes (intervalle deconcentrations : 2,5 à 200 mUI/ml environ.Voir graphique). Par régression linéaire :(IML) = 0,85 (Trousse A) + 3,8 mUI/mlr = 0,978

Moyennes :41 mUI/ml (IMMULITE)44 mUI/ml (Trousse A)

Assistance techniqueEn France distribué par DPC France 90bd National 92257 La Garenne-Colombes.Fabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadred’un Système Qualité enregistré sous ISO13485:2003.

Italiano

EPOUso: Ad uso diagnostico in vitro con gliAnalizzatori IMMULITE ed IMMULITE1000 — per la misurazione quantitativadell'Eritropoietina (EPO) nel siero o nelplasma eparinizzato, quale ausilio nelladiagnosi delle anemie e delle policitemie.Numero di Codice: LKEPZ (50 test),LKEP1 (100 test)Codice del Test: EPOColore: verde chiaro

Riassunto e Spiegazione delTestL'Eritropoietina (EPO) è un ormonegliproteico composto da 165 aminoacidi,con quattro catene di carboidraticomplessi attaccate al peptide in quattrositi di collegamento.1 Ha un pesomolecolare di 36 000 dalton, 40% delquale attribuito alle catene dei carboidrati.L'EPO è il regolatore principaledell'eritropoiesi, stimolando laproliferazione e la differenziazione dellecellule precursori degli eritroidi nel midolloosseo. Nei mammiferi, il fegato del fetoproduce quasi tutto l'ormone; negli adulti,la produzione epatica diminuisce ad unlivello inferiore al 10% e la secrezionerenale raggiunge un livello superiore al90%.2,3 Si pensa che il sito di produzionesiano le cellule tubulari renali proximali ole cellule endoteliali capillari peritubularidella corteccia renale e la medullaesterna. Non è stata ancoracompletamente spiegata l'eliminazionedell'EPO circolante, ma la stessa vieneeffettuata, almeno parzialmente,attraverso le urine, ed anche attraverso ilfegato ed attraverso “uptake” nelle cellulebersaglio del midollo osseo.

L'EPO regola la produzione di globuli rossinel sangue per soddisfare le esigenze diossigenazione delle cellule.1 Esercita ilproprio effetto in un sistema complesso difeedback, nel quale la secrezione renaledell'ormone viene controllata da unsensore dell'ossigeno nei reni cherisponde alla pressione parzialedell'ossigeno nel sangue. In condizioni dilivelli elevati di ossigeno periferico, i livelli


di EPO diminuiscono. Questa situazioneviene riscontrata dopo correzionedell'ipossia in soggetti normali (come nelladiscesa dall'alta quota) e dopoipertrasfusione.

E' possibile dividere le anemie in duecategorie rispetto ai livelli di EPO nelsangue: quelle primarie rispetto ai livelli diEPO e quelle secondarie. Le anemieprimarie sono caratterizzate da unaumento dell'EPO nel sangue in untentativo di riportare alla normalità i livellidi produzione dei globuli rossi nel sangue.Alcuni esempi di anemie nelle quali i livellidi EPO sono elevati sono l'anemia dovutaa carenza di ferro, nella riduzione delflusso di sangue ai reni (come nel caso diperdite di sangue) e nelle emoglobinopatiecon un'affinità maggiore dell'emoglobinaper l'ossigeno.1 Il tasso di produzione diEPO aumenta in modo esponenziale conla diminuzione dell'ossigeno disponibile ela diminuzione dell'ematocrito in anemienon renali; nell'ultimo caso, sono statiregistrati livelli di EPO 1 000 voltesuperiori al normale.2

L'anemia può essere secondaria dovutaad un'infiammazione, all'artritereumatoide, al neoplasma, e a malattierenali croniche. Comunque, le “anemiesecondarie” possono contribuire, almenoparzialmente, alla sottoproduzione diEPO.4

L'incapacità di produrre quantità di EPOsufficienti giustifica la presenza di anemieda moderate a gravi osservate nelle ultimefasi della malattia renale. La produzionediminuita di EPO viene attribuita alladistruzione dei siti renali di produzione. Ilsensore renale dell'ossigeno può esserneinfluenzato. I livelli dell'ormone sonosuperiori al range di riferimento e nonsono idonei per compensare la perdita disangue dovuta a dialisi, all'emivitaabbreviata dei globuli rossi, alla carenza diferro e di folati, ed al trasferimentoostacolato del ferro alle cellule eritiroideeprogenitrici, e ad altri problemi fronteggiatida questi pazienti. I pazienti anefricimostrano livelli di EPO particolarmentebassi. Alcuni pazienti con blocco cronicodei reni, comunque, mostrano ematocritonormale o anemia meno seria, ed unlivello elevato di EPO. Alcuni di questipazienti hanno reni cistici o epatite virale;negli ultimi, è possibile che i livelli elevati

di EPO siano stati causati da unaproduzione epatica migliorata.

La sovraproduzione di globuli rossi delsangue si chiama policitemia. E' possibiledividere le policitemie in due categorierispetto ai livelli di EPO nel sangue: quelleprimarie rispetto ai livelli di EPO e quellesecondarie. Nella policitemia vera, i livellidi EPO sono diminuiti, e l'eritropoiesi èprimaria rispetto ad essi ed indipendentedalla stimolazione dell'EPO. Le variazioninei valori di EPO possono arrivare fino adieci volte per pazienti diversi con lostesso ematocrito.Altre condizioni possono esserecaratterizzate dalla perdita del controllodelle concentrazioni di ossigeno nellaproduzione di EPO, causando un aumentonei livelli della stessa.3 Questi includono icarcinomi delle cellule renali, in cui il 2%dei pazienti mostrano eritrocitosi, edalcune lesioni renali benigne, come cistirenali individuali o molteplici, stenosidell'arteria renale ed anomaliemicrovascolari. Inoltre, circa il 10% deipazienti che hanno subito trapianto renalesviluppano eritrocitosi, a volte dai reniautologhi malati.La policitemia secondaria è caratterizzatada livelli elevati di EPO che portanoall'aumento della massa dei globuli rossinel sangue. Questa condizione puòessere causata da diversi fattori, inclusaemoglobina diffettosa, fumo, fibrosipolmonare, malattie cardiache, tumori ecalcoli renali.5

Durante il dosaggio dell'EPO per ladiagnosi differenziale delle policitemie, ènecessario considerare l'eventualesovrapposizione dei valori perl'eritrocistosi secondaria o per lapolicitemia vera con quelli nel range diriferimento.3

Principio del DosaggioIMMULITE/IMMULITE 1000 EPO è undosaggio immunometrico inchemiluminescenza in fase solida.Cicli d'incubazione: 2 × 30 minuti.

Prelievo dei CampioniIn letteratura sono state riscontratediverse manifestazioni di una variazionegiornaliera dell'eritropoietina.7-9 E'importante prelevare i campioni ad un'ora


significativa durante il giorno. Si consigliadi prelevare i campioni della mattina tra le7,30 e le 12,00.Può esserci una variazione nei valori se ilcampione non è coagulato a temperaturaambiente (15–28°C).

Perchè l'EDTA avrebbe un effettosignificativo sui risultati, non dovrebbeessere utilizzato come un anticoagulante.Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.

I campioni emolizzati o grossolamentecontaminati possono produrre risultatierrati.La centrifugazione dei campioni del sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE/IMMULITE 1000 EPO non éstato verificato con tutte le possibilivariazioni di tipi di provette. Consultare lasezione riguardante Campioni Alternativiper dettagli sulle provette testate.Volume richiesto: 100 µL di siero oplasma eparinizzato. (Il porta campionideve contenere almeno 250 µL più delvolume totale richiesto).Conservazione: 7 giorni a 2–8°C o2 mesi a –20°C. Evitare cicli dicongelo/scongelo ripetuti.

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.

Reagenti: Conservare i reagenti a 2–8°C.Eliminare in conformità alle leggi vigenti.Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come sefossero potenzialmente infetti. I materialiderivati dal sangue umano sono statitestati con esito negativo per la sifilide, glianticorpi anti-HIV 1 e 2, l'Antigene di

Superficie dell'Epatite B e gli anticorpiAnti-Epatite C.

E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.

Sottostrato chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucedel sole diretta. (Vedere l'inserimento).Acqua: Utilizzare acqua distillata odeionizzata.

Materiali FornitiI componenti sono un gruppo accoppiato.Le etichette del codice a barra sononecessarie per la prova.

Test Unit EPO (LEP1)Ogni test unit con codice a barra contieneuna biglie coattata con un anti-ligandoderivato dalla streptavidina. Stabile a 2–8°C fino alla data di scadenza.LKEPZ: 50 unit. LKEP1: 100 unit.

Le buste delle test unit devono essere atemperatura ambientale prima di aprire.Aprire tagliando lungo il bordo superiore,lasciando intatto la chiusura ermetica.Risigillare le buste per proteggere controumidità.

Porta Reagente EPO (LEPA, LEPB)Con codice a barre. LEPA: 7,5 mL di unanticorpo monoclonale murino anti-EPOmarcato con enzima, con conservanti.LEPB: 7,5 mL di fosfatasi alcalinaconiugata con un anticorpo policlonale dicapra anti-EPO in un tampone, conconservanti. Conservare chiuso nelfrigorifero: stabile a 2–8°C fino alla data discadenza. Si consiglia di utilizzare ilprodotto entro 30 giorni dall'apertura seconservato nella maniera indicata.LKEPZ: 1 set. LKEP1: 1 set.

Calibratori EPO (LEPL, LEPH)Due flaconi (Basso ed Alto), contenentiEPO ricombinante umana liofila in unamatrice di siero non umano conconservanti. Almeno 30 minuti primadell'uso: ricostituire ogni flacone con4,0 mL di acqua distillata o deionizzata.Mescolare agitando delicatamente oinvertendo la miscela finchè il materiale


liofilo sia completamente dissolto. Stabilea 2–8°C per 30 giorni dopo laricostituzione, o per 6 mesi (aliquotato) a–20°C.LKEPZ: 1 set. LKEP1: 1 set.

Componenti del kit fornitiseparatamente

Diluente dell'EPO (LEPZ)Per la diluzione manuale dei campioni deipazienti. Una fiala (25 mL) di siero nonumano privo di EPO, con conservanti.Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopol'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a–20°C.LSUBX: Substrato ChemiluminescenteLPWS2: Tampone di lavaggio dell'AgoLKPM: Kit di Pulizia dell'AgoLCHx-y: Tubi porta campioni (con codicea barre)LSCP: Porta Campioni (monouso)LSCC: Coperchi per Porta Campioni(opzionali)LEPCM: Controllo EPO a tre livelliMateriali richiestiPipette per la dispensazione dei campioni;acqua distillata o deionizzata; controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per avere prestazioni ottimali,è importante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinito nel Manuale dell'OperatoreIMMULITE o IMMULITE 1000.Vedi il Manuale dell'Operatore IMMULITEo IMMULITE 1000 per: preparazione,setup, diluizione, calibrazione, dosaggio econtrollo di qualità.Controllate ogni test unit verificando lapresenza della sferetta prima di caricarlasullo strumento.

E' importante notare che i due cuneireagenti A e B devono essere caricati sulcarosello per eseguire questa prova.Ogni tubo porta campioni può essereseguito da quattro test unit.

Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.Controllo di Qualità: Utilizzare controlli opool di sieri con almeno due livelli (alto ebasso) di EPO.

I valori attesiUno studio effettuato con il kit DPCIMMULITE EPO su 167 volontari dilaboratorio in apparente buono stato disalute ha prodotto una media di10,5 mIU/ml, un 95° percentile di20,1 mIU/ml ed un range assoluto da3,7 mIU/ml a 29,5 mIU/ml.Si consiglia di essere prudentinell'interpretazione dei risultati di EPO perpazienti con malattie diverse dall'anemia.In pazienti con eritrocitosi dovuta adepossia non compensata, il sieroimmunoreattivo all'EPO è elevato; inpazienti con ipossia compensata, il livellodell'EPO immunoreattiva rientra nel rangedi normalità, ed in pazienti con policitemiavera, il livello di EPO immunoreattiva ènormale o basso. Per questo motivo,mentre livelli di EPO elevati suggerisconoche l'eritrocitosi è un fenomenosecondario e livelli di EPO bassisuggeriscono la possibilità di eritropoiesiautonoma, livelli di EPO normali nonescludono l'ipossia o la produzioneautonoma di EPO come causa dieritrocitosi.Considerare questi limiti soltanto comelinee guida. Ogni laboratorio dovrebbestabilire le proprie gamme di riferimento.

LimitiSono state riscontrate variazioni neirisultati di EPO nella presenza deglianticorpi anti-specie.Nessun farmaco è stato analizzato per leinterferenze nel dosaggio.

I risultati di questo dosaggio devonoessere utilizzati in combinazione con leinformazoni disponibili dalle analisicliniche e da altre procedure diagnostici.Poichè i risultati ottenuti con unqualsivoglia dosaggio dell'EPO possonovariare in maniera significativa rispetto airisultati ottenuti con altri dosaggi, siconsiglia di effettuare i dosaggi in seriesullo stesso paziente nel tempoutilizzando sempre lo stesso dosaggio.Sono stati riscontrati livelli di EPO inferioriai livelli attesi nelle anemie associate aiseguenti stati clinici: artrite reumatoide,sindrome da immunodeficienza acquisita,cancro, colite ulcerosa, anemia falciforme,ed in neonati prematuri.


Dopo trapianto allogenico del midolloosseo, la risposta eritropoietina ostacolatapuò ritardare il recupero dell'eritropoietina.In pazienti con ipergammaglobulinemiaassociata con mieloma multiplo o conmalattia di Waldenstrom si ha unaproduzione ostacolata dell'eritropoietinarispetto alla concentrazionedell'emoglobina, e questo è stato collegatoalla viscosità elevata del plasma.I livelli di EPO di persone che abitano adaltitudini elevate con eritrocitosi possonodiminuire rapidamente a livelli normalidopo essere tornati a livello del mare.

Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenutida questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioVedi tavole e grafici per i datirappresentativi. I risultati sono indicatiin mIU/mL.Range di calibrazione: Fino a200 mIU/mL (WHO 2nd IRP 67-343).Sensibilità analitica: 0,24 mIU/mL.Effetto Aggancio per Dosi Elevate:Nessuno fino a 50 000 mIU/mL.

Precisione: I campioni sono stati elaboratiin doppio da 20 giorni, due esecuzioni algiorno, per un totale di 40 esecuzioni e 80ripetizioni. (Vedere la tabella “Precisione”)

Linearità: I campioni sono stati provatisotto varie diluzioni (Vedere la tabella“Linearità per i dati rappresentativi).

Ricupero: Sono stati analizzati i campionietichettati da 1 a 19 con due soluzioni (85e 777 mIU/mL ) di EPO (Vedere la tabella“Ricupero per i dati rappresentativi).Specificità: L'anticorpo è molto specificoper EPO. (Vedere la tabella "Specificità".)

Tipo di campione alternativo: I campioni(n = 22) sono stati prelevati in provettesemplici, eparinizzate o vacutainer EDTA.Gamma di concentrazione: da 5,1 a196 mIU/mL. Il plasma EDTA non èraccomandato nel procedimento.(Heparin) = 0,99 (Siero) + 0,7 mIU/mLr = 0,997

(EDTA) = 0,88 (Siero) – 3,4 mIU/mLr = 0,991

Valore medio:77,7 mIU/mL (Siero)77,6 mIU/mL (Heparin)64,7 mIU/mL (EDTA)

Perchè l'EDTA avrebbe un effettosignificativo sui risultati, non dovrebbeessere utilizzato come un anticoagulante.Bilirubina: La presenza di bilirubinaconiugata e non coniugata inconcentrazioni fino a 200 mg/L non hanessun effetto entro il range di precisionedel dosaggio.Emolisi: La presenza di emoglobina inconcentrazioni fino a 384 mg/dL puòcausare un decremento dei valori (Veditabella “Hemolysis”).Lipemia: La presenza di trigliceridi inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Confronto di Metodi: Il dosaggio è statocomparato ad un'immunodosaggio perl'EPO disponibile sul mercato (Kit A) in130 campioni di siero endogeni. (Range diconcentrazione: da 2,5 fino a 200 mIU/ml.Vedi grafico.) Con regressione lineare:(IML) = 0,85 (Kit A) + 3,8 mIU/mLr = 0,978

Valor medio:41 mIU/mL (IMMULITE)44 mIU/mL (Kit A)

Assistenza TecnicaAll'estero: Si prega di contattare il proprioDistributore DPC Nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell’ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.


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EPOUtilização: Para uso diagnóstico in vitronos analisadores IMMULITE e IMMULITE1000 — para o doseamento quantitativoda eritropoietina (EPO) em soro ouplasma heparinizado, como auxiliar nodiagnóstico de anemias e policitémias.Números de catálogo: LKEPZ (50 testes),LKEP1 (100 testes)Código do teste: EPOCor: Verde claro

Sumário e explicação do testeA eritropoietina (EPO) é uma hormonaglicoproteica que consiste em 165aminoácidos, com 4 cadeias complexasde hidratos de carbono ligados ao péptidoem quatro locais de ligação. Tem um pesomolecular de 36 000 daltons, 40% desteatribuído às cadeias de hidratos decarbono. A EPO é o principal regulador daeritropoiese, estimulando a proliferação ediferenciação de células precursoraseritróides na medula óssea. Emmamíferos, o fígado fetal produz quase atotalidade da hormona; em adultos, aprodução hepática baixa para menos de10% e a secreção renal é responsável pormais de 90%.2,3 Acredita-se que o local deprodução seja nas células tubularesrenais proximais ou nas célulasendoteliais capilares peritubulares docórtex renal e medula externa. A“clearance” de EPO circulante não temsido totalmente explicada, mas érealizada, numa pequena parte, pelaexcreção urinária, e possivelmentetambém pela eliminação hepática e pelacaptação em células alvo na medulaóssea.A EPO ajusta a produção de célulasvermelhas para poder satisfazer asexigências de oxigénio do tecido.1 Exerceo seu efeito através dum sistemacomplexo de “feedback “, no qual asecreção renal da hormona é controladapor um sensor de oxigénio no rim queresponde à pressão parcial de oxigénio nosangue. Sob condições de aumento deoxigénio periférico, os níveis de EPOdiminuem. Isto é observado após a

correcção de hipóxia em indivíduossaudáveis (como uma descida de umaelevação alta) e após a hipertransfusão.As anemias podem ser divididas em duascategorias relativamente a níveis de EPOno sangue: Aquelas que sãoprincipalmente para níveis de EPO eaquelas que são secundárias. As anemiasprimárias são caracterizadas por umaumento de EPO no sangue para tentarnormalizar os níveis de produção decélulas vermelhas. Exemplos de anemiasno qual os níveis de EPO são elevadosincluem anemias de deficiência de ferro,redução do fluxo sanguíneo nos rins(como perda de sangue) ehemoglobinopatias com maior afinidadede hemoglobina para oxigénio.1 Tem-severificado um aumento da taxa deprodução de EPO exponencialmente àdiminuição de oxigénio disponível e com aqueda de hematócrito em anemias nãorenais; nesta última, níveis de EPO 1 000vezes o normal foram reportados.2

A anemia pode ser secundária àinflamação, artrite reumatóide,neoplasmas, e doença renal crónica. As“anemias secundárias” podem ser,contudo, pelo menos parcialmente,atribuíveis à subprodução de EPO.4

A não produção de EPO suficiente éresponsável pelas anemias moderadas aseveras observadas na doença renal emfase terminal. A produção de EPOdiminuída é atribuída à destruição delocais de produção renal; o sensor deoxigénio renal pode também ser afectado.Os níveis de hormona excedemligeiramente a faixa de referência, e sãoinadequados para corrigir a perdasanguínea devido à diálise, vida maiscurta das células vermelhas, deficiênciade folato e ferro, transferência debilitadade ferro para as células progenitoraseritróides, e outras dificuldades que essesdoentes enfrentam. Os doentes anéfricosdemonstram especialmente baixos níveisde EPO. Alguns doentes com insuficiênciarenal crónica, contudo, apresentamhematócritos normais ou anemias menosgraves e EPO elevada. Alguns dessesdoentes têm rins císticos ou hepatite viral;no último, o aumento de EPO pode serresultado da produção hepáticaaumentada.


A superprodução de células vermelhas échamada de policitémia. As policitémiaspodem também ser divididas em duascategorias dependendo se a condição éprimária ou secundária aos níveis deEPO. Na policitémia vera, os níveis deEPO são diminuídos e a eritropoiese éprimária para e independente daestimulação pela EPO. A variação nosvalores de EPO pode chegar a ser 10vezes superior em diferentes doentes como mesmo hematócrito.Algumas outras condições podem sercaracterizadas pela perda de controlo darealimentação de concentração deoxigénio sobre a produção de EPO,provocando um aumento de níveis deEPO.3 Estas incluem carcinomas dacélula renal, no qual 2% dos doentesapresentam eritrocitose, e algumas lesõesrenais benignas, como quistos renaismúltiplos ou simples, estenose arterialrenal e anormalidades microvasculares.Além disso, cerca de 10% de doentescom transplantes renais desenvolvemeritrocitose, algumas vezes do rim doenteautólogo.A policitémia secundária é caracterizadapor níveis elevados de EPO que levam aoaumento da massa das célulasvermelhas. Esta condição pode resultarde uma variedade de factores, incluindohemoglobina defeituosa, tabagismo,fibrose pulmonar, insuficiência cardíaca,tumores e cálculos renais.5

Ao avaliar a EPO para o diagnósticodiferencial de policitémias, a sobreposiçãopossível dos valores para a eritrocitosesecundária ou para a policitémia vera comaqueles na faixa de referência deve serconsiderada.3

Princípio do ProcedimentoA EPO IMMULITE/IMMULITE 1000 é umensaio imunométrico em fase sólidaquimioluminescente.Ciclos de incubação: 2 × 30 minutos.

ColheitaExistem vários relatórios de variaçãodiurna de eritropoietina nas referências deliteratura.7-9 É importante colher amostrasà mesma hora do dia. As amostrasmatinais colhidas entre 7:30 da manhã e12:00 (meio-dia) têm sido recomendadas.

Uma variação nos valores pode ocorrer sea amostra não for coagulada àtemperatura ambiente (15–28°C).Como EDTA teria um efeito significativonos resultados, não deve ser usado comoanticoagulante.

Recomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.Amostras hemolisadas ou totalmentecontaminadas podem causar resultadoserrados.A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados errados devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo foi completa antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentes querecebem terapia anticoagulante podemrequerer um maior tempo de formação docoágulo.Os tubos para colheita sanguínea dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti coagulantes. IMMULITE /IMMULITE 1000 EPO não foram aindatestados com todas as possiveisvariações originadas pelos tipos de tubos.Consultar a secção Tipos de AmostrasAlternativas para obter detalhes sobre ostubos que foram testados.

Volume de amostra: 100 µL de soro ouplasma heparinizado. (Cuvete de amostradeve conter um mínimo de 250 µL a maisque o volume total exigido.)Estabilidade: 7 dias a 2–8°C, ou2 meses a –20°C. Evite ciclos repetidosde congelamento/descongelamento.

PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8 °C. Elimine deacordo com as leis aplicáveis.Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primasobtidas de soro humano foram testadas,dando resultados negativos para a sífilis,para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;


para o antigénio de superfície da hepatiteB (HBsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.Azida de sódio foi adicionada comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas emcanalizações de cobre e chumbo, osreagentes devem ser rejeitados no esgotoapenas se estiverem diluídos e foremlavados com grandes volumes de água.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula do substrato).Água: Use água destilada oudesionizada.

Materiais fornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. Os códigos de barras nointerior das caixas são necessárias para oensaio.

Unidades de Teste de EPO (LEP1)Cada unidade rotulada por código debarras contém uma pérola revestida comanti-ligante derivado de estreptavidina.Estável até a data de validade a 2–8°C.LKEPZ: 50 unidades.LKEP1: 100 unidades.

Deixe que as saquetas de Unidade deTeste fiquem à temperatura ambienteantes de as abrir. Abra cortando pelaranhura superior, mantendo o fechointacto. Sele novamente as saquetas paraproteger contra a humidade.

Embalagens de reagentes de EPO(LEPA, LEPB)Com código de barras. LEPA: 7,5 mL deanticorpo monoclonal murino marcadocom ligando anti-EPO, com conservante.LEPB: 7,5 mL de fosfatase alcalinaconjugada a anticorpo policlonal de cabraanti-EPO em tampão, com conservante.Armazene tapado e refrigerado: Estávelaté à data de validade a 2–8° C.Recomenda-se a utilização até 30 diasapós aberto quando armazenado deacordo com as indicações.LKEPZ: 1 conjunto. LKEP1: 1 conjunto.

Ajustes EPO (LEPL, LEPH)Dois frascos (nível alto e baixo) de EPOde recombinante humano, liofilizado numamatriz de soro não humano, comconservante. Pelo menos 30 minutos

antes do uso: reconstitua cada frasco com4,0 mL de água destilada ou desionizada.Misture por inversão ou movimentoslentos até o material liofilizado dissolvercompletamente. Estável, após areconstituição, durante 30 dias a 2–8°C,ou por 6 meses (aliquotado) a –20° C.LKEPZ: 1 conjunto. LKEP1: 1 conjunto.

Componentes do kit fornecidosseparadamente

Diluente de amostra para EPO (LEPZ)Para a diluição manual de amostras dedoentes. Um frasco (25 mL) de matriz desoro de origem não humana, comconservante. Estável, após a abertura,durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses(aliquotado) a –20°C.LSUBX: Substrato quimioluminescenteLPWS2: Solução de lavagemLKPM: Kit de limpeza do pipetadorLCHx-y: Suportes de cuvetes de amostra(com código de barras)LSCP: Cuvetes de amostra (descartáveis)LSCC: Tampa de cuvetes de amostra(opcional)LEPCM: Módulo de Controlo de EPO detrês níveis

Também necessário :Pipetas de transferência de amostra; águadestilada ou desionizada; controlos.

Procedimento de doseamentoTêr em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos demanutenção de rotina conforme definidono Manual de Operador do IMMULITE ouIMMULITE 1000.Ver o Manual do Operador do IMMULITEou IMMULITE 1000 para: preparação,setup, diluições, ajustes, procedimento doensaio e controlo de qualidade.

Confirme a presença da esfera em cadaUnidade de Teste antes de a colocar nosistema.Repare que as Embalagens de ReagenteA e B devem ser colocadas no carrosseldos reagentes para executar estedoseamento.Cada suporte de cuvete de amostra podeser seguido por quatro unidades de teste.


Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.

Amostras de controlo de qualidade:utilize controlos ou "pools" com, pelomenos, dois níveis (alto e baixo) de EPO.

Valores de ReferênciaUm estudo executado com o kit de EPOIMMULITE da DPC em 167 voluntários delaboratório aparentemente saudáveisresultou num valor de média de10,5 mIU/ml, e um percentil de 95% de20,1 mIU/ml e uma faixa de variaçãoabsolutamentre 3,7 mIU/ml e 29,5 mIU/ml.Deve-se ter cuidado na interpretação dosresultados de EPO em doentes comdoenças para além da anemia. Emdoentes com eritrocitose devido a hipóxianão compensada, a EPO imunoreactivado soro é elevada; naqueles com hipóxiacompensada, o nível plasmático de EPOimunoreactivo situa-se, habitualmente,dentro da faixa do normal, e em doentescom policitémia vera, a EPOimunoreactiva plasmática é tanto normalcomo baixo. Assim, enquanto um nível deEPO plasmática elevada sugere que aeritrocitose é um fenómeno secundário eum nível de EPO baixo suporta apossibilidade de eritropoiese autónoma,um nível de EPO de soro normal nãoexclui nem a hipóxia nem a produção deEPO autónoma como a causa daeritrocitose.Considere estes limites apenas comodirectrizes. Cada laboratório deveestabelecer os seus próprios valores dereferência.

LimitaçõesVariações nos resultados de EPO têmsido observadas na presença deautoanticorpos.

Nenhuma droga tem testada apresentouinterferência no doseamento.Os resultados deste doseamento deverãoser usados juntamente com a informaçãodisponível das avaliações clínicas e outrosprocedimentos diagnósticos.Como os resultados obtidos com qualquerdoseamento de EPO podem diferirsignificativamente de qualquer outro,recomenda-se que qualquer teste emsérie realizado no mesmo doente no

decorrer do tempo, seja realizado com omesmo teste de EPO.

Níveis de EPO inferiores ao previsto têmsido observados com anemias associadascom as seguintes condições: artritereumatóide, síndrome da imunodeficiênciaadquirida, cancro, colite ulcerosa, doençadas células falciformes e em recém-nascidos prematuros.

Após o transplante da medula ósseaalogénica, uma resposta comprometida deeritropoietina pode retardar a recuperaçãoda eritropoietina.Doentes com hipergamaglobulinémiaassociada com mieloma múltiplo oudoença de Waldenstrom tem enfraquecidoa produção de eritropoietina em relação àconcentração de hemoglobina, e isto temsido associado ao aumento daviscosidade do plasma.Os níveis de EPO de pessoas que moramem altitudes elevadas, com eritrocitose,podem baixar rapidamente para o normalapós voltar à baixa altitude.Os anticorpos heterófilicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência com osimunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Amostras de doentesexpostas em rotina a produtos ou sorosde animais podem demonstrar este tipode interferência, potencial causador deresultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriade medicação do doente e outrosachados que possam correlacionar.

Características do EnsaioConsulte Tabelas e Gráficos para dadosrepresentativos do desempenho dodoseamento. Os resultados sãoapresentados em mIU/mL.

Calibração: Até 200 mIU/mL (WHO 2nd

IRP 67/343).Sensibilidade Analítica: 0,24 mIU/mL.


Efeito Hook de Alta Dose:Nenhum até 50 000 mIU/mL.

Precisão: As amostras foram processadasem duplicado num período de 20 dias, doisensaios por dia, perfazendo um total de 40ensaios e 80 réplicas. (Consulte a tabela“Precisão”.)Linearidade: As amostras foramdoseadas sob várias diluições. (Consultea tabela "Linearidade" para dadosrepresentativos.)Recuperação: As amostras foramadicionadas na relação de 1 para 19 comduas soluções EPO (85 e 777 mIU/ml)antes do doseamento. (Vêr tabela de"Recuperação" para dadosrepresentativos.)Especificidade: O doseamento éespecífico para EPO. (Vêr tabela de "Especificidade ".)Tipo de amostra alternativa As amostras(n = 22) foram extraídas para tubos decontenção a vácuo EDTA, heparinizadose simples. Zona de trabalho: deaproximadamente 5,1 a 196 mIU/mL . Oplasma EDTA não é recomendado noprocedimento.(Heparin) = 0,99 (Soro) + 0,7 mIU/mLr = 0,997

(EDTA) = 0,88 (Soro) – 3,4 mIU/mLr = 0,991

Médias:77,7 mIU/mL (Soro)77,6 mIU/mL (Heparin)64,7 mIU/mL (EDTA)

Como EDTA teria um efeito significativonos resultados, não deve ser usado comoanticoagulante.Bilirrubina: A presença de bilirubinaconjugada e não conjugada emconcentrações até 200 mg/L não temefeito no procedimento dentro da precisãodo ensaio.Hemolise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 384 mg/dL podecausar um decréscimo dos valores. (Vêrtabela de “Hemolysis”.)Lipemia: A presença de trigliceridos emconcentrações até 3 000 mg/dL não temefeito nos resultados, dentro da precisãodo ensaio.Comparação de métodos: Odoseamento foi comparado com umdoseamento imunoradiométrico disponível

comercialmente para EPO (Kit A) em 130amostras de soro endógeno (Zona deconcentração: de aproximadamente 2,5 a200 mIU/mL. Consulte o gráfico.)Regressão linear:(IML) = 0,85 (Kit A) + 3,8 mIU/mLr = 0,978

Médias:41 mIU/mL (IMMULITE)44 mIU/mL (Kit A)

Assistência Técnica:Por favor contacte o seu DistribuidorNacional.Fabricado pela EURO/DPC Ltd. de acordo como Sistema de Qualidade registado segundo anorma ISO 13485:2003.

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Diagnostic Products CorporationCorporate Offices5210 Pacific Concourse DriveLos Angeles, CA 90045-6900USA2005-08-02PILKEP – 5

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EPO - dpcweb.comhormone consisting of 165 amino acids, with four complex carbohydrate chains attached to the peptide at four linkage sites.1 It has a molecular weight of 36,000 daltons,