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ELISA
Enzyme
ELISA
LinkedEnzyme
ELISA
ImmunoSorbentEnzyme Linked
ELISA
AssayEnzyme Linked ImmunoSorbent
ELISA
Anticorps Antigène
ELISA
Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
EE
Principe du test ELISA (1)
Coating de l ’Ag ou de l’Ac
Saturation
SupportTampon de coating
Saturation
Lavages
Lavages
Substrat incolore
Produit coloré
Addition du ligand marqué avec l’enzyme
Principe du test ELISA (2)
E
E
E
E
Lavages: PBS-Tween
Addition du substrat de l ’enzyme
E
E
Enzymes
Substrats
Les différents types d’ELISA
- Phase homogène
- Phase hétérogène
- ELISA direct
- ELISA indirect
- ELISA Sandwich
- ELISA par compétition
Les ELISA en phase homogène
E
E
Antigène présent dans l’échantillon
Antigène absent de l’échantillon
S P
S
P
Les ELISA en phase hétérogène (1)
ELISA directAnticorps marqué Antigène marqué
ELISA indirect
Recherche d’anticorps dans le plasma
E
S
PE
S
P
E
S
P
Les ELISA en phase hétérogène (2)
ELISA sandwich (1)
Sandwich direct
-Symétrique-Asymétrique
Sandwich indirect
E
S
P
ES
P
Les ELISA en phase hétérogène (3)
ELISA sandwich (2)
Immunocapture : détection d’anticorps spécifiques
E
S
P
E
S
P
Les ELISA en phase hétérogène (4)
DO
[antigène ou anticorps]Limite de détection
Zone linéaire
Phase plateau
ELISA non compétitif
Les ELISA en phase hétérogène (5)
ELISA par compétition (1)
Compétition au niveau de l’anticorps
Anticorps à doser
Compétition au niveau de l’antigène
Antigène à doser
E
Élimination par lavage
EES
P
S
P
DO
[antigène ou anticorps]
Les ELISA en phase hétérogène (6)
ELISA par compétition (2)
Choix du test
- Quel est le but du test?
- Quels réactifs sont disponibles?
- Quel va être l’utilisation de ce test?
Cupule Coatée
avec anticorps
spécifique
Présence d’antigène
Absence d’antigène
Distribution des
témoins et des
échantillons
S
P
S
P
Addition du mélange
substrat-chromogèneDistribution du
conjugué HRP
Principe du kit utilisé pendant la partie pratique
Coating de l’antigène
(IgG de lapin)
Addition de l’anticorps
marqué avec la PAL
Addition de l’anticorps
marqué à la biotine
S
P
S
P
Addition du mélange
Chromogène-Substrat
Addition de l’avidine
recouverte de la PAL
Addition du mélange
Chromogène-Substrat
Dosage d’IgG de lapins par un test ELISA direct
Les techniques apparentées (1)
ELISPOT
Cellules
Nitrocellulose
Culture cellulaire Lavages
E E
Révélation
Addition d’un substrat précipitantApparition de spots
Les techniques apparentées (2)
- Western blot
- immunocytochimie ou immunohistochimie
Beaucoup plus loin………...
- Immunofluorescence
- Cytométrie en flux
Refracted light1
2
Incident light
Gold film
Prism
Ligand flow
time
Light refraction
1
2Association
Dissociation
Principles of BiacoreTM analysis