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DESCRIPCIÓN BIOLOGÍA MOLECULAR
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR CIENCIAS QUIMICAS BIOQUIMICA CLINICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA CLINICA I
Escherichia coli enteropatógena INTEGRANTES: Cacarin KarinaOntaneda Yessenia Quishpe JosuéRemache Angie
Índice 1. INTRODUCCION 2. PATOGENESIS MOLECULAR• Adherencia inicial• Inyección de factores y
transducción de señales• Contacto intimo y formación
de pedestales 3. DIAGNOSTICO DE L A EPEC4.CASOS CLINICOS
DEFINICIÓN:
Bacteria comensal del intestino grueso ,asociado a una gran diversidad de síndromes clínicos que van desde septicemia, gastroenteritis, meningitis e infección de vías urinarias
EPIDEMIOLOGIATransmisión fecal –oralAlimentos y agua contaminados
AGENTE CAUSAL • Bacilos Gram negativos • Móviles• Anaerobios, Aerobios facultativos • Antígeno somático O • Antígeno capsular K• Antígeno flagelar H
• Fermentan glucosa• Fermentan lactosa
(colonias acidas ,rosadas)• Reducen nitratos a
nitritos• Oxidasa negativa• Producción de gas FACTORES DE VIRULENCIA
INTRODUCCIÓN
• Pilis o fimbrias • Pilis tipo 1: se fija a manosa
en cualquier CE• Pili P : se une a
digalactósido de células uretrales y eritrocitos
• AFC: se fija al enterocito• PFH: se fija a enterocitos
PATOGENESIS MOLECULAR EPEC ALTERACION HISTOPATOLOGICA
INTESTINO A/E
EL MODELO DE PATOGENESIS EPEC 1. Adherencia Inicial ( fundamental en la patogénesis )2. Inyección de factores y traducción de señales 3. Contacto intimo
Fase1: adherencia inicial• Entre las mismas
bacterias Fase 2: adherencia de las bacterias a la célula huésped
Intestino del huésped
2.Inyeccion de factores y transducción de señales
Locus de la eliminación del enterocito o LEE(LEE1-LEE5)
LEE: Estos operones forman 3 dominios de virulencia que codifican:1. Los operones LEE1,2 Y 3
que codifican las proteínas del SSTT las cuales forman un complejo de aguja CA.
LEE4: Genes de proteínas EspLEE5: codificadas las adhesinas bacteriana intimina y su receptor llamado Tir
Proteínas EscN --ATP
LESIÓN A/E
DIAGNOSTICO EPEC Aislar muestra de heces en medios selectivos y diferenciales Agar MacConkey o el agar de eosina y azul de metileno EMB. Sospecha de brote epidémico diferenciar EPEC de las E. coli de flora normal
METODOLOGIAS
Serotipificacion Ensayo de adherencia en células HEp-
2 Pruebas FAS (tinción fluorescente para
actina) Técnicas de biología molecular
(amplifica genes que codifican a proteínas de virulencia)
SEROTIPIFICACION Método que logro reconocer a tipos
específicos de E. coli (esquema kauffman)
Diarrea infantil Etapas de EPEC aisladas de heces de
niños con diarrea (75%) Recuperación de entero patógenos a
partir de heces
Ensayo de adherencia en células HEp-2 Prueba fenotípica de diagnostico Estándar de oro para la
identificación de EPEC Identifica EPEC dado que
bacterias se agrupan en cúmulos o microcolonias sobre las células epiteliales en cultivo.
reconocer EAEC, se agrupan y forman empalizadas que se adhieren a las células y al cristal}
PRUEBAS DE FAS
Se emplea con amplitud en estudios epidemiológico y la investigación básica
Se observa la acumulación de actina del citoesqueleto en forma de puntos fluorescentes
Se encuentran pedestales y bacterias adheridas
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA FAS Modo directo, biopsias intestinales en niños con
enfermedad diarreica Cultivos de células HEp-2, HeLa o Caco-2
infectadas con la cepa aislada de las heces del paciente
Se usa faloidina que une constitutiva a la actina intracelular
Se acopla algún fluorocromo (rodamina) se observa citoesqueleto de actina de CE no infectadas “fibras de estrés”
PRUEBAS DE FAS
Puntos de acumulación de actina sobre células infectadas por EPEC: PRUEBAS DE FAS POSITIVA
Los ensayos de adherencia y prueba de fas deben ir acompañada de técnicas de biología molecular
Detecta genéticamente los factores de virulencia
BIOLOGIA MOLECULAR Estudios moleculares Mediante la reacción de PCR y con sondas
genéticas Blancos genéticos o secuencia del plásmido EAF que se emplea
como sonda o Amplificación por PCR de la subunidad
estructural de los BFP (bfp A) o Gen que codifica la intimina (eae)
BIOLOGIA MOLECULAR
PCR para identificar EPEC se realiza en un tiempo menor a 5 horas
Manera rápida y especifica de diagnostico Se ha probado cepas provenientes de
muestras clínicas y alimentos
Ensayo que utiliza la tecnología de microarreglos de DNA
Sondas con genes específicos de serotipos de E. coli
1. O552. O1113. O1144. O1285. O157 Extender la detección de antígenos
somáticos así como antígenos flagelares
BIBLIOGRAFIA :
Vidal J., Canizález A., Gutierrez J., Navarro F., (septiembre-octubre de 2007), PATOGENESIS MOLUCULAR, epidemiologia y diagnostico de Escherichia coli enteropatógena, salud publica de mexico/ vol.49, No.5, recuperado el 17 de Dic 2015