体外診断用医薬品VENTANA PD-L1（SP142） Rabbit Monoclonal Antibody

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）

使用目的ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）は、ホルマリン固定パラフィン包埋標本において、免疫組織化学染色法によりがん組織又は細胞中のPD-L1発現率の測定を行う体外診断用医薬品として承認を受けています。

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）によるPD-L1発現率の測定は、扁平上皮非小細胞肺癌患者におけるアテゾリズマブ（遺伝子組換え）の投与可否を判断するにあたって、実施することが望ましいとされています。ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）を用いてPD-L1発現率を測定することができない場合には、アテゾリズマブの添付文書等を参照の上、投与の可否を適切に判断してください。

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）の特徴免疫療法を含む治療の選択を検討する際に、PD-L1の発現を確認 する場合には、適切な検査法によって検査を実施することが重要です。ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）は、アテゾリズマブの臨床試験において開発当初から使用されている検査法です。腫瘍細胞への染まりのみを評価する他の一般的な免疫染色とは 異なり、腫瘍細胞（TC）に加えて、腫瘍浸潤免疫細胞（IC）についてもPD-L1の発現を評価します。ウサギモノクローナル抗体であるクローンSP142と、高感度のベンタナ OptiView DAB ユニバーサルキットに加えてタイラマイドの増感法を原理とするベンタナ OptiView 増感試薬を組み合わせることで、視覚的なコントラストを高め、腫瘍微小環境内の免疫細胞への染まりが観察しやすくなるよう設計されています。

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2 ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）

PD-L1とはPD-L1（プログラム細胞死リガンド1）は別名B7-H1およびCD274としても知られている45-55kDaのⅠ型膜貫通タンパクで、CD274 遺伝子によってコードされています。一方、PD-1（プログラム細胞死受容体1）は、活性化T細胞上などに発現する受容体で、過剰な免疫反応や正常細胞への攻撃を防ぐための免疫抑制機構である免疫チェックポイント分子の一つです1。PD-L1は、PD-1やB7-1といった受容体と結合することにより、 活性化T細胞を不活化し、免疫応答を抑制に導きます2。PD-L1は抗原提示細胞（ADC）などの免疫細胞のみならず、腫瘍細胞にも発現し、腫瘍が免疫機構から逃れるための役割を果たします3。PD-L1とPD-1の結合を阻害することで、活性化T細胞の不活化を 防ぎ、腫瘍免疫を維持させることができます。

肺癌について日本においても、毎年、約11万人が新たに肺癌と診断されています。また、肺癌は死亡率が高く、がん対策情報センターのデータによると、10年相対生存率は、乳癌が79.3%であるのに対し、肺癌では女性は約31%、男性ではわずか18%であると報告されています。組織型としては、非小細胞肺癌（NSCLC）が肺癌全体の約80～85%を占め ますが、その中でも腺癌が最も割合が多く、肺癌全体の約40%を 占めています5, 6。分子標的治療薬などの登場により、診断や治療の選択肢が広がっていますが、すべてのステージで生存率が低く、過去30年間で、肺癌は他のがんと比較して、最も生存率が改善していないことが示されて います7。

新たにNSCLCと診断された患者の半数以上が、転移巣を伴って おり、生存期間が短くなっています。遠隔転移を有するNSCLCの5年相対生存率は、4.7％と報告されています8。

NSCLCの多くは、切除不能なステージ ⅢB～Ⅳで見つかることが 多いと言われています。切除不能な肺癌症例において、病因となる分子的変異への理解を深めることや、新しいバイオマーカーの特定および新しい治療を開発することが、生存率や生存期間を改善するかもしれません。

PD-L1の働き

腫瘍細胞は免疫介在性の異物排除機構から逃れるためにPD-L1の発現を増加させる

腫瘍細胞上のPD-L1発現は、発癌シグナルによって発現が増加される

T細胞受容体（TCR）へのMHC抗原複合体の結合はT細胞シグナル伝達を誘発する

腫瘍浸潤免疫細胞上のPD-L1は、活性化T細胞の抑制を引き起こすことができる

PD-L1はT細胞表面上のB7-1およびPD-1受容体と結合する

MHC

TCR

B7-1（CD80）

PD-L1

PD-L1

PD-1

B7-1（CD80）

PD-L1

PD-1

PD-L1

腫瘍細胞

腫瘍浸潤免疫細胞PD-L2

PD-1

T細胞

PD-L1がPD-1受容体に結合することにより、T細胞が不活化される

PD-1はPD-L1とPD-L2の両方に結合する

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142） 3

腫瘍微小環境腫瘍の生存・増殖における役割

肥満細胞マクロファージ

樹状細胞制御性T細胞

細胞傷害性T細胞

顆粒球 B細胞骨髄由来免疫抑制細胞

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）による染色で免疫細胞のPD-L1発現の多様性が強調されます。大部分はリンパ球、マクロファージ、樹状細胞および顆粒球です。

腫瘍細胞

血管内皮細胞

周皮細胞

線維芽細胞

好酸球

NK細胞

血小板

腫瘍微小環境（TME）とは？近年の研究から、腫瘍細胞及びその周囲の微小環境（腫瘍微小環境；TME）には、種々の免疫抑制因子が関与し腫瘍に対する免疫反応を妨げる「がん免疫逃避機構」が存在すること、その中心的な経路の 一つとして、T細胞の免疫機能抑制に関わる免疫チェックポイントが存在することが明らかになってきました9,10。

TMEにおけるPD-L1の役割PD-1/PD-L1経路は免疫チェックポイントの一つであり、抗腫瘍 免疫反応の制御に重要な役割を果たしていると考えられています。 この機構は本来、自己に対する過剰な免疫反応を制御する機能と 考えられていますが、腫瘍細胞では、腫瘍細胞上に発現したPD-L1がT細胞上のPD-1又はB7-1と結合することで、免疫回避がもたらされると報告されています11。そのため、T細胞上の抑制性受容体であるPD-1やB7-1とPD-L1の結合を阻害することで、腫瘍特異的T細胞応答を再活性化できることが示唆されています。また、腫瘍微小環境における免疫細胞のPD-L1発現は、肺癌患者に おいて、抗PD-L1抗体薬であるアテゾリズマブが有効な患者群を 評価するための補助となりえます。

4 ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）

適切な染色結果を得るために適切な染色結果を得るためには、正しい試薬の組み合わせおよび染色条件で検査を実施することが重要です。ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）は一次抗体と検出キットの組み合わせにより体外診断用医薬品として承認されています。

必要な試薬などベンタナ OptiView PD-L1（SP142）の各構成試薬は、ベンタナ ベンチマークシリーズ用に最適化されています。

体外診断用医薬品製造販売承認番号：23000EZX00005000商品コード 製品番号 製品名 包装単位

一次抗体 518-114329 741-4860 ベンタナ PD-L1（SP142）RxDx 50テスト陰性コントロール試薬 518-111182 790-4795 陰性コントロール　ウサギモノクローナル抗体用 250テスト検出試薬 518-111427 760-700 ベンタナ OptiView DAB ユニバーサルキット 250テスト増感試薬 518-113742 760-099 ベンタナ OptiView 増感試薬 50テスト

推奨プロトコール■ベンチマーク ULTRA, XT, GX専用プロシージャによる染色が必要となります。

【プローシージャ名】ULTRA VENTANA PDL1（SP142） XT VENTANA PDL1（SP142） GX VENTANA PDL1（SP142）

プロトコールステップ 設定内容

Baking（ベーキング） 必要に応じて選択

Antibody（一次抗体）

VENTANA PD-L1（SP142）もしくは

Negative Controlを選択

Counterstain（核染色） Hematoxylin Ⅱ－4 min

Post Counterstain（色出し） Bluing Reagent－4 min

コントロールスライドベンタナ OptiView PD-L1（SP142）の染色を行う場合には、必ず同時に精度管理用コントロールスライドの染色を行い、染色操作が適切に行われていることを確認してください。

■自家製精度管理用コントロールスライド扁桃組織は陽性組織と陰性組織の両方を含んでいるため、ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）の特異的反応と非特異的反応を確認するためのコントロール組織として適しています。　　　－胚中心などに存在するマクロファージやリンパ球が陽性となります。　　　－表層扁平上皮や濾胞間域に存在する免疫細胞は陰性となります。

PD-L1発現率が既知の肺癌症例を用いることも可能です。

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142） 5

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）のスコアリングベンタナ OptiView PD-L1（SP142）による免疫染色は、図1に示す腫瘍細胞（TC）だけでなく、図2に示される腫瘍浸潤免疫細胞（IC）にも 染色性を示します。

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）で染色された患者組織について、TCおよびICを評価します。TCは、腫瘍細胞全体に対して、染色強度にかかわらず細胞膜に茶褐色の染色が認められる腫瘍細胞の割合を算出します。また、ICは、腫瘍領域に対して、染色強度にかかわらず細胞膜に茶褐色の染色が認められる腫瘍浸潤免疫細胞（腫瘍組織内及び腫瘍組織の 辺縁部に局在する免疫細胞）の割合を算出します。なお、腫瘍領域以外の免疫細胞にもPD-L1陽性となる可能性がありますが、判定対象とはなりません。詳しくは、弊社が提供する添付文書および検査ガイドを参照ください。

図1 中程度～強い染まりの全周性TC染色（非小細胞肺癌、対物レンズ×20） 図2 暗褐色の点状・線状のIC染色（非小細胞肺癌、対物レンズ×20）

表1　肺癌におけるPD-L1発現率のスコアリングアルゴリズム腫瘍細胞におけるPD-L1発現率（TC） スコア染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍細胞の50%以上に認められる TC3染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍細胞の5%以上50%未満に認められる TC2染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍細胞の1%以上5%未満に認められる TC1PD-L1の陽性反応が認められない又は，染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍細胞の1%未満に認められる TC0

腫瘍浸潤免疫細胞におけるPD-L1発現率（IC） スコア染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍浸潤免疫細胞の10%以上に認められる IC3染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍浸潤免疫細胞の5%以上10%未満に認められる IC2染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍浸潤免疫細胞の1%以上5%未満に認められる IC1PD-L1の陽性反応が認められない又は，染色強度に関係なく，PD-L1による陽性反応が腫瘍浸潤免疫細胞の1%未満に認められる IC0

TC染色とIC染色の鑑別TC染色はIC染色と関連して観察される場合があります。高倍率で観察することに加え、HE染色スライドを確認することが、TCとICを鑑別するために有用です。図3、4にTCとICが混在する症例を示します。

図3 細胞膜への強い染色を示すTCと、間質（腫瘍細胞の間）に わずかに認められるIC（非小細胞肺癌、対物レンズ×20）

図4 細胞膜へ弱～中程度の染色を示すTCと、間質（腫瘍細胞の間）に多く認められるIC（非小細胞肺癌、対物レンズ×20）

間質におけるICの凝集 強い染まりのTC IC染色が腫瘍細胞の間に認められる 弱い染まりのTC

HE染色スライドにおいて、TCの間に多数のICが

認められる

6 ベンタナ OptiView PD-L1（SP142）

References

1. Blank, C and Mackensen, A, Contribution of the PD-L1/PD-1 pathway to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic infections and tumor evasion. Cancer Immunol Immunother, 2007. 56（5）: p.739-745.

2. Butte MJ, Keir ME, Phamduy TB, et al. Programmed death-1 ligand 1 interacts specifically with the B7-1costimulatory molecule to inhibit T cell responses. Immunity. 2007;27（1）:111-122.

3. Dong H, Zhu G, Tamada K, Chen L. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat Med. 1999;5（12）:1365-1369.

4. Herbst RS, Soria JC, Kowanetz M, et al. Predictive correlates of response to the anti-PD-L1 antibody MPDL3280A in cancer patients. Nature. 2014;515（7528）:563-567.

5. がん情報サービス, ganjoho.jp, 2012年データ

6. 全国がん（成人病）センター協議会, zangankyo.ncc.go.jp, 2017年データ

7. Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer Statistics, 2013. CA Cancer J Clin. 2013;63（1）:11-30.

8. Howlader N, Noone AM, Krapcho M,et al.（eds）. SEER Cancer Statistics Review （CSR）,1975-2012. National Cancer Institute. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2012/. Published 2015-04-23. Updated 2015-11-18. Accessed 2016-02-08.

9. NCI Dictionary of Cancer Terms. Tumor microenvironment. http://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms?cdrid=561725

10. AACR. The Function of Tumor Microenvironment in Cancer Progression. http://www.aacr.org/Meetings/Pages/MeetingDetail.aspx?EventItemID=73#.V6pCFPkrKaE

11. Blank, C and Mackensen, A, Contribution of the PD-L1/PD-1 pathway to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic infections and tumor evasion. Cancer Immunol Immunother, 2007. 56（5）: p.739-745）.

ベンタナ OptiView PD-L1（SP142） 7

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