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DIRECTORIO
DR. JUAN EULOGIO GUERRA LIERA RECTOR
M.C. JESÚS MADUEÑA MOLINA SECRETARIO GENERAL
DR. VÍCTOR HUGO AGUILAR GAXIOLA DIRECTOR GENERAL DE SERVICIO SOCIAL.
M.C. SANTIAGO ELENES BUELNA SUBDIRECTOR ACADÉMICO DE SERVICIO SOCIAL.
MSIA. GLADYS AZUCENA BERNAL SALGUEIRO SUBDIRECTOR(A) DE UNIDAD REGIONAL CENTRO DGSS
DR. JORGE MILÁN CARRILLO DIRECTOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS
DR. SALOME SOTO LEON NOMBRE DEL COORDINADOR DE SERVICIO SOCIAL.
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ÍNDICE
INTRODUCCIÓN 1
I.INFORMACIÓN BÁSICA SOBRE LA UNIDAD RECEPTORA
1.1 Aspecto Histórico 2
1.2 Aspecto Organizacional 3
1.2.1 Misión 4
1.2.2 Visión 4
1.3 Aspecto Geográfico 4
II. ACCIONES Y RESULTADOS DEL PROYECTO REGISTRADO DE SERVICIO SOCIAL
a. Problemática detectada y jerarquizada 6
b. . Proyecto de intervención 7
c. Las actividades realizadas 24
d. La Contribución de la práctica del Servicio Social en la
formación del Brigadista 29
III. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA DEL SERVICIO SOCIAL
a. Conclusiones y Sugerencias 34
b. Evaluación de la Unidad Receptora, por parte del
Brigadista de servicio social 35
c. Evaluación de la Unidad Receptora, por parte del
Asesor de servicio social 38
ANEXOS
1. Documentos probatorios y evidencias de actividades realizadas
a) Carta de Asignación 41
b) Constancia de aprobación al Seminario para el Compromiso Ético
Universitario y la Inclusión Social 42
c) Constancia de Terminación satisfactoria de las
actividades del proyecto de Servicio Social 43
d) Constancia de Culminación de Informe Final de Resultados 44
e) Evidencia de reportes mensuales y actividades realizadas 45
1
INTRODUCCIÓN
Este informe final de Servicio Social se realizará como requisito para que la
pasante de la licenciatura en Químico Farmacéutico Biólogo, GÉNESIS SARAI
BARRAZA libere su servicio social y continúe con su proceso de titulación.
El trabajo que se presenta a continuación está basado en una investigación
científica que se realizará en el Laboratorio de Biomedicina Molecular de la Facultad
de Ciencias Químico Biológicas, Universidad Autónoma de Sinaloa.
Se analizarán 378 muestras séricas de pacientes que acudieron al Laboratorio
de Análisis Clínicos “Héctor Melesio Cuén Ojeda” de nuestra facultad, a realizarse el
certificado médico, el cual consiste en una prueba de VDRL. 23 sueros
correspondientes al mismo número de pacientes serán analizados mediante la
reacción de Widal, como prueba tamiz para la presencia de anticuerpos anti-
Salmonella. Posteriormente de los sueros positivos a Widal, se evaluará su
inmunoreactividad mediante Western blot empleando como Antígeno las proteínas de
membrana externa OmpC y OmpF (conocidas también como porinas), de Salmonella
enterica serovar Typhi. Es de gran relevancia destacar que fue será observar
inmunoreactividad en 23 sueros de individuos, considerando que ellos tenían ausencia
de signos y/o síntomas de la enfermedad en el momento de la toma de muestra sérica.
La Salmonelosis es una enfermedad causada por bacterias Gram-negativas
pertenecientes al género Salmonella, del cual se han identificado más de 2500
serovares (o serotipos), de la especie S. enterica, y muchos de ellos pueden infectar
a los seres humanos. La Salmonelosis es una enfermedad de distribución mundial,
causada principalmente por S. enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium), el cual
es uno de los serotipos más prevalentes en el mundo, así como en México. Los
reservorios animales de la Salmonelosis son variados, aves, animales de granja,
perros, gatos, además especies salvajes incluidos los reptiles. (Rincón-Reyes y col.,
2008).
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I.INFORMACIÓN BÁSICA SOBRE LA UNIDAD RECEPTORA
1.1 Aspecto histórico
Las instalaciones físicas del Laboratorio de Biomedicina Molecular fueron creadas
durante la gestión de la Dra. Sylvia Paz Díaz Camacho, quien fungía como directora
de la Facultad de Ciencias Químico Biológicas de la UAS.
En un principio el espacio físico actual era empleado esporádicamente para
prácticas de la materia de bioquímica de alimentos, con el firme propósito de su
fortalecimiento e impulso a dicho programa, como parte de la creación de la Maestría
en Ciencias Biomédicas y por disposición del director (2010), el Dr. José de Jesús
Zazueta Morales, el espacio físico fue asignado al Dr. Héctor Samuel López Moreno,
quien compartía las instalaciones del Laboratorio de Inmunología con la Dra. Elsa
Maribel Aguilar Medina.
Por lo que desde el año 2009, surge formalmente el Laboratorio de Biomedicina
Molecular, a cargo del Dr. Héctor Samuel López Moreno. Desde sus inicios este
laboratorio tiene el objetivo de generar conocimientos científicos mediante la
investigación y divulgación de resultados en el área de la biomedicina de bacterias y
parásitos, además de servir en la formación académico-científica de estudiantes de
licenciatura y posgrado.
La cobertura de los gastos operativos del laboratorio son compartidos por la
Facultad de Ciencias Químico - Biológicas, pero principalmente por el financiamiento
externo otorgado por CONACYT y CECYT a proyectos de investigación que se
desarrollan en este laboratorio. El Dr. Héctor Samuel López Moreno se encuentra a
cargo del laboratorio desde que éste fue creado en 2009.
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1.2 Aspecto organizacional
A continuación se muestra en el siguiente diagrama la estructura organizacional en
que se encuentra la Facultad de Ciencias Químico Biológicas:
Los objetivos que se propone la Facultad de Ciencias Químico Biológicas (FCQB) son
muy claros y se encuentran establecidos en su misión y visión.
Dr. José de Jesús Zazueta Morales
Director
MC. María Luisa Torres Duarte
Secretaria Académica
IQ. Juan Bernardo Castañeda Sánchez
Coordinador del departamento de Servicio Social
MC. Esperanza Ponce Torrecillas
Jefe de Carrera de Químico
Farmacéutico Biólogo
I.B.Q. Guadalupe de Jesús Valdez Zazueta
Jefe de Carrera de Ingeniería Bioquímica
Dra. Ana María López Beltran
Jefe de Carrera de Ingeniería Química
QFB. José Luis Meza Arana
Secretario Administrativo
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1.2.1 Misión FCQB
Formar profesionales en el área de las Ciencias Químico Biológicas capaces de
generar, aplicar y divulgar conocimientos que contribuyan al desarrollo sustentable de
la región y del país, portadores a la vez, de una visión humanista y de un alto sentido
ético.
1.2.2 Visión FCQB
Ser una Facultad en donde todas las personas que le dan vida pueden recrear el
lenguaje científico tecnológico, teniendo como referente la posibilidad de construir
nuevas formas de vinculación social.
1.3 Aspecto geográfico
La unidad receptora en la que se realizó el servicio social se encuentra localizada
en el domicilio Av. Las Américas y Blvd. Universitarios S/N. Ciudad Universitaria,
Culiacán, Sinaloa. Específicamente en el Laboratorio de Biomedicina Molecular que
pertenece a la Facultad de Ciencias Químico Biológicas de la Universidad Autónoma
de Sinaloa.
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Fotografía Satelital de Ciudad Universitaria. Laboratorio de biomedicina
molecular señalado con una flecha.
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II.ACERCA DE LA REALIZACION DEL SERVICIO SOCIAL
2.1 PROBLEMÁTICA DETECTADA Y JERARQUIZADA
En Sinaloa la fiebre tifoidea, paratifoideas y otras salmonelosis en 2009
representaron un total de 18, 728 casos siendo este el 13.55% (n= 138,141) de los
casos a nivel nacional aumentando en comparación del año anterior en 2, 832
(n=15,896) (SSA, 2009) teniendo en ambos periodos, el primer lugar a nivel nacional
en casos registrados de estas enfermedades, esto sugiere que es imperante
incrementar nuestro conocimiento sobre la epidemiología de esta enfermedad en
Sinaloa, lo cual puede contribuir a la toma de decisiones de salud pública. Dicho
conocimiento puede obtenerse mediante estudios como la evaluación de la
inmunoreactividad, que permita valorar el contacto entre la población estudiada y el
microorganismo, para obtener una visión complementaria a la información reportada
por la Secretaria de Salud sobre esta enfermedad que afecta a miles de sinaloenses
cada año.
Realizar una evaluación de la inmunoreatividad de antígenos de S. Typhimurium
en pacientes que acudan al laboratorio “Héctor Melesio Cuén Ojeda” de la Facultad de
Ciencias Químico - Biológicas de la UAS de febrero a junio de 2010.
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2.2 “EVALUACIÓN DE LA INMUNOREACTIVIDAD DE ANTÍGENOS DE
SALMONELLA TYPHIMURIUM EN PACIENTES QUE ACUDIERON AL
LABORATORIO “HÉCTOR MELESIO CUÉN OJEDA” DE LA FCQB-UAS DE
FEBRERO A JUNIO DE 2010”
2.2.1. Antecedentes
La Salmonelosis es una enfermedad zoonótica que es causada bacterias
Gram-negativas pertenecientes al género Salmonella (Rincón y Figueroa, 2008). John
Huxham, describió en el año de 1739, las manifestaciones de la fiebre entérica: la que
denominó fiebre pútrida maligna y que hoy en día se conoce como tifus y la citada
como fiebre tifoidea. La palabra tifus deriva del griego que se encuentra asociada al
concepto de fiebre entérica fue introducida por Sauvages en el año 1759. las
denominaciones tifus y tifoidea y en consecuencia los diagnósticos ligados a las
manifestaciones clínicas de estos procesos se mantuvieron confusos hasta que
William Gerhard, de Filadelfia, en el 1837 y el medico inglés Sir William Jenner, en
1849, escribieron dos monografías en las que aportaban sus experiencias con el fin de
poder separar las características clínicas de las dos enfermedades y en consecuencia,
definirlas como dos entidades diferenciadas (Adelantado y cols., 2008), William Budd
en 1856 llega a la conclusión de que la fiebre tifoidea es difundida con la leche o en el
agua contaminada (Green, 2008). Anthon Gaerther (1888), describió por primera vez,
una bacteria capaz de provocar una intoxicación de forma alimentaria y que después
identificó como la Salmonella (Green, 2008).
Las infecciones por Salmonella son comunes, pueden resultar en
manifestaciones clínicas que van desde un estado asintomático hasta enfermedades
severas que pueden ser mortales (Jones y cols., 2008). Los serotipos de Salmonella
más representativos a nivel mundial son S. enteriditis y S. Typhimurium (24.1% y 6.6%
de los brotes atribuidos a estos serovares respectivamente); ubicándose así como el
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principal microorganismo bacteriano implicado en el 46.9% de los casos, dentro del
espectro de las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA), gracias a su
extraordinaria capacidad de colonización y adaptación a diversos hospederos
animales, donde las aves cumplen un papel protagónico (Méndez y cols., 2011).
Salmonella tiene distribución mundial, tanto en seres humanos como en
animales, con gran capacidad de adaptación a diversos nichos ecológicos. Adquieren
particular importancia, porque se ha descrito que más del 90% de los serotipos
reportados corresponden a Salmonella no Typhi, con incremento importante en los
últimos años, siendo las mayores tasas de infección en menores de 20 años, sobre
todo en niños. La mortalidad es baja, aunque en neonatos puede alcanzar hasta 7%.
Su transmisión se asocia a alimentos y bebidas contaminadas con orina o heces de
un enfermo o portador. Los alimentos involucrados pueden ser mariscos, frutas o
verduras, leche o productos lácteos. Las moscas pueden funcionar como vectores,
contaminando los alimentos (Frías, 2009).
De los antígenos inmunodominantes de Salmonella, destacan las proteínas de
membrana externa OmpC y OmpF, las cuales han sido evaluadas como candidatas al
desarrollo de una vacuna contra la fiebre tifoidea, por lo que son excelentes antígenos
para ser considerados en metodologías que evalúen la inmunoreactividad específica
sérica contra esta (Secundino y cols., 2006).
2.2.2. Etiología
El género Salmonella es representativo de la familia Enterobacteriaceae, está
constituido por bacilos cortos Gram-negativos. Su tamaño oscila de 0.3 m a 1m x
1.0 a 6.0 m, no esporoformadores, anaerobios facultativos (Gutiérrez y cols., 2008),
son móviles debido a la presencia de los flagelos periticos, a excepción de S.
gallinarum y S. pullorum (Gutiérrez y cols., 2008). Estos microorganismos crecen en
un amplio rango de temperaturas (7-48°C) a un pH entre 4 y 8 (Uribe y Suarez, 2006).
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Producen ácido y a menudo gas durante la fermentación de la glucosa, son
catalasa positiva y oxidasa negativos, reducen los nitratos a nitritos, utilizan citrato
como única fuente de carbono, producen H2S, son ureasas negativas u son tetrationato
reductasas (Parra y Durango, 2002). La Salmonella es relativamente resistente a
varios factores ambientales como a un pH de 7.0, no sobrevive a temperaturas
superiores a los 70° C, es resistente a la deshidratación por años, sobre todo en heces,
el polvo y otros materiales secos como algunos alimentos para consumo humano y
animal (Gutiérrez y cols., 2008). Se comporta como patógenos intracelulares
facultativos su hábitat es el aparato gastrointestinal de los animales y el hombre
(Pérez, 2008; Figueroa y Verdugo, 2005; Rincón y Figueroa, 2008), La Salmonella en
particular presenta tres tipos de antígenos que poseen varios factores de virulencia,
antígenos somático O, flagelar H, y capsular Vi (Concha y cols., 2004; Figueroa y
Verdugo, 2005)
2.2.3. Taxonomía
La nomenclatura para salmonella se encuentra aún en evolución mientras tanto
de acuerdo al CDC en colaboración con el centro WHO se adecua a los requerimientos
de salud pública. De acuerdo a estos el género salmonella consiste de dos especies,
que han sido denominadas Salmonella entérica y Salmonella bongori, y recientemente
(2005) ha sido anexada al esquema Kauffman-White, una tercera especie, salmonella
subterránea. La primer especie se divide a su vez en subespecies (I, S. entérica subsp.
entérica; II, S. entérica subsp. salamae; IIIa, S. entérica subsp. arizonae; IIIb, S.
entérica subsp.diarizonae; IV, S. entérica subsp. houtenae; and V, S. entérica subsp.
indica) (Cuadro 1) cada una de estas en serovares o serotipo, que han sido clasificadas
en más de 2,500 de acuerdo al tipo de antígeno H (flagelar), antígeno O (somático),
o capsular (Vi).
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Cuadro 1. Taxonomía de Salmonella spp. (Brenner y cols., 2000)
Familia Enterobacteriaceae
Género Salmonella
Especie y Subespecie
1) entérica
entérica (I)
salamae (II)
arizonae(IIIa)
diarizonae (IIIb)
houtenae(IV)
indica (V)
2) bongori Sin importancia clínica
2.2.4. Genética
La secuencia completa del ADN bacteriano consta de 4 500 genes y una región
cromosómica conservada en las diferentes especies (70 a 80% del genoma), se
observan dispersos a lo largo del núcleo conservado, y diez islotes de patogenicidad
de Salmonella (IPS). Los IPS 1y 2 facilitan la invasión intracelular del hospedero; el
IPS 7 codifica la producción del polisacárido Vi (factor inhibidor de la fagocitosis).
Existen también los plásmidos extracromosómicos: el PHCM-1 y el PHCM-2 (Carrada,
2007). Los plásmidos de virulencia varían en tamaño dependiendo del serotipo, pero
todos tienen una región altamente conservada de 8kbp involucrada con la virulencia.
esta región de 8kbp contiene un grupo de cuatro genes estructurales, spvA, spvB,
spvC, spv y un gen regular spvR, que son transcritos como un operón y son regulados
“in vitro” durante la fase estacionaria de crecimiento por medio ambiente intracelular.
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Además, se ha mostrado que incrementa la tasa de crecimiento de la bacteria dentro
de las celular hospederas en las primeras semanas de infección sistémica en ratones
(Concha y cols., 2004)
2.2.5. Estructura antigénica de Salmonella
2.2.5.1 Antígenos de la membrana
El antígeno somático O, nombrado así del alemán “ohne hauch”, que significa
sin movimiento, está conformado por una cadena repetida de polisacáridos (Katime,
2006; Cardona, 2009)
El antígeno O es un polisacárido resistente al calor que tiene un estructura
central, compuesta de complejos fosfolípidos y polisacáridos son cadenas laterales
de polisacáridos del lipopolisacárido de pared celular (LPS), que es común en todas
las entero bacterias que determinan la especificidad del antígeno O. Se utilizan para
subdividir las salmonelas en grupos de A-I, por lo general, el antígeno O no es único
(Katime, 2006; Warren, 2006), la variación del antígeno O de Salmonella sp., es
consecuencia de la diversidad genética del grupo de genes rfb, los cuales codifican
enzimas involucradas en la biosíntesis y el ensamble de este antígeno. Por otra parte,
la proteína WZX es una característica del grupo de antígenos O y es codificada por el
gen WZX; esta proteína es una flipasa utilizada para la translocación de la unidad O
fuera de la membrana. La detección de estos antígenos es la base de la serotipificación
con sueros específicos, de los cuales derivan las formulas antigénicas que
caracterizan a cada serogrupo (Cardona, 2009).
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2.2.5.2 Antígenos Vi
El antígeno Vi es un polisacárido capsular que confiere mayor virulencia u puede
presentarse en solo tres serotipos de salmonella, entre ellos destaca, S. typhi (17), el
agente causal de fiebre tifoidea. Los antígenos Vi también se utilizan para el serotipado
de S. typhi en el laboratorio (Warren, 2006), denominado así por ser el determinante
en la virulencia de esta bacteria, ya que se le confiere la resistencia contra la respuesta
inmune celular y humoral del hospedero. El único de este tipo que se conoce en
Salmonella es el existente en S. Typhi, S. parathypi C y S. dubli. La presencia de este
antígeno hace imposible la aglutinación de sueros anti- O. la expresión de este factor
depende de al menos dos genes (ViA + ViB); deben existir ambos en la bacteria para
que dicha expresión tenga lugar (Parra y Durango, 2002; Katime, 2006)
2.2.5.3 Antígeno H
El antígeno flagelar H deriva su nombre del alemán “hauch”, por el halo
producido en un medio de cultivo a raíz del movimiento, con antígenos constituidos por
una proteína, la flagelina, cuya composición en aminoácidos es constante para un
antígeno determinado, esta proteína es termolábil a diferencia del antígeno O, la
Salmonella puede ser monofásica, cuando tiene siempre el mismo antígeno flagelar
puede presentarse alternativamente en fase especifica o menos especifica (Parra y
Durango, 2002; Katime, 2006), pero solo una de las dos proteínas se sintetiza
dependiendo en que secuencia genética el alineamiento es correcto para trascribir a
mRNA (Warren, 2006)
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2.2.6 Patogénesis
Salmonella entérica infecta a sus hospederos vía oral y principalmente causa
dos tipos de enfermedades: gastroenteritis; caracterizada por el desarrollo de la
bacteria en el tracto intestinal y fiebre tifoidea que resulta en una infección sistémica
(Dieye y cols., 2009).
Esta bacteria es sensible al acido estomacal, de modo que es necesario ingerir
una dosis de 106 a 107 microorganismos para que la infección se establezca, así las
personas que toman antiácidos u otros fármacos que reducen la acidez del estómago
son más susceptibles a una dosis infecciosa menor de Salmonella (Stuart, 2003).
La cantidad de inoculo adquirido se relaciona con oros factores de riesgo, entre
estos se encuentra el tipo de cepa, la fuente de alimento que es consumida con la
bacteria y el estado fisiológico del hospedero, también favorecen o no el desarrollo de
la enfermedad (Sánchez y cols., 2003)
Salmonella typhimurium tiene la habilidad de invadir las células huésped por la
expresión de tres tipos de sistema de secreción (TTSS) codificada dentro de la isla de
patogenicidad 1 (SPI-1) que inyecta los factores de virulencia.(Martinolli, 2007)
La envoltura celular de salmonella y otras entero bacterias Gram negativas es
una compleja estructura compuesta de 3 capas morfológicamente distintas, están
cubiertas por la membrana externa, una estructura membranosa adicional presente
fuera de la membrana citoplásmica y la capa del peptidoglicano. La mayor
funcionalidad de la membrana externa es actuar como una barrea que excluye muchos
de las moléculas nocivas que existen en el medio externo.
La cuales están expuestas a muchos peptidoglicanos enzimáticos líticos
encontrados en el ambiente, elaboran muchos diferentes tipos de peptidoglicanos
aparentemente resistentes a la hidrólisis de dichas enzimas
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Las porinas son proteínas de la membrana externa que actúan como receptores
para bacteriófagos y están incluidas en una gran variedad de funciones, como
transportación de solutos, patogénesis e inmunidad. Juegan un rol en la fisiología de
las bacterias permitiendo a las moléculas hidrofílicas pequeñas pasar a través de este
canal. OmpF y OmpC son las porinas más inmunogénicas en la membrana.
Estas proteínas son resistentes a altas temperaturas y agentes
desnaturalizantes. Las porinas pueden tener un uso potencial en el uso del desarrollo
de vacunas orales, biosensores y nanoreactores.
A largo plazo la afinidad de anticuerpos son persistentes después de una
inmunización o infección por antígenos con la habilidad de inducir la neutralización
Por esta razón la caracterización de nuevos antígenos con la habilidad para
inducir una respuesta neutralizante o bactericida constituye un esfuerzo para el
entendimiento de la memoria inmunológica, las respuestas de anticuerpo son
importantes para lograr protección contra infecciones causadas por Salmonella.
La inmunidad protectora hacia Salmonella typhimurium depende de la acción
combinada de anticuerpos específicos, debido a la habilidad de la porinas para obtener
una respuesta inmune del hospedero y por lo tanto protección de este las porinas han
sido estudiadas para una vacuna en contra fiebre tifoidea. Se han mostrado diferentes
estudios en el que OmpC es la principal responsable de la respuesta de memoria de
respuesta mediada por anticuerpos bactericidas.
Las porinas de bacterias Gram negativas son candidatos muy atractivos para la
elaboración de vacunas contra patógenos de estas características
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2.2.7 Mecanismos de invasión
La ruta d entrada de Salmonella al organismo comienza después de la ingesta
de alimento o agua contaminada con Salmonella, así la bacteria inicia su ciclo de
infección invadiendo al hospedero a través del tejido linfoide, (Raffaellu y cols., 2008)
Salmonella invade las células del hospedero por un mecanismo conocido como
disparo “trigger” (Figueroa y Verdugo, 2005) y establece un contacto estrecho con el
borde en cepillo del epitelio intestinal antes del contacto inicial, el borde permanece
intacto, sin embargo cuando la bacteria se acerca a la superficie epitelial, las
microvellosidades circundantes empiezan a degenerarse con elongación, edema y
crecimiento en un proceso llamado rizado “ruffling” (Sánchez y Cardona, 2003)
Muchos microorganismos y son capaces de entrar y sobrevivir dentro de las
células eucarióticas, Salmonella dirige su arribo a celular hospederas que no son
normalmente fagocíticas como la superficie de la capa mucosa de las células
epiteliales. Presumiblemente esta técnica de invasión asegura un nicho celular
protegido para que el microbio se replique o persista (Figueroa y Verdugo, 2005)
2.2.8 Internalización de Salmonella a la célula hospedera.
la internalización de Salmonella a la célula hospedera se puede dar por lo
menos por dos procesos distintos, ya sea que las células fagocíticas profesionales
como los macrófagos utilizan la fagocitosis para reconocer e internalizar a la bacteria,
Salmonella también tiene la capacidad de invadir tanto las células fagocíticas como no
fagocíticas usando el T3SS. La fagocitosis de la bacteria es un mecanismo complejo
que involucra múltiples receptores, algunos de los cuales aumentan la efectividad de
la captura y otros que activan diferentes vías de señalización (Ibarra y Steele-Mortimer,
2009). Mientras la fagocitosis es una función esencial de la inmunidad innata; el T#SS
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que media la invasión de Salmonella es un proceso de alta especificidad que depende
de la expresión de un numero de factores bacterianos (Takaya y cols., 2005). Es un
proceso coordinado por pequeño grupo de proteínas efectoras: SipA, SipC,
SopB/SigD, SopD, SopE2 y SptP indicen el reordenamiento del citoesqueleto de
actina, resultando con esto un gran número de “ruffles” en la membrana favoreciendo
con ello la internalización de la bacteria a la célula hospedera (Ibarra y Steele-
Mortimer, 2009).
2.2.9 Diagnóstico
El diagnostico se establece por el estudio clínico epidemiológico y los
parámetros del laboratorio los cuales se conforma por el aislamiento de Salmonella del
paciente, con frecuencia, de la sangre, pero también de la orina, las heces o la medula
ósea (Carrada, 2007; Chang, 2009). existen diferentes técnicas las cuales han
apoyado al diagnóstico de Salmonella, incluso la de aislamiento de la bacteria como
hemocultivo , cultivo de medula ósea Salmonella y prueba indirecta que detectan
anticuerpos contra antígenos de la bacteria como la prueba de Widal, pruebas
inmunoenzimáticas ELISA (Margot y Cardona, 2004), y actualmente las técnicas
moleculares (Urrutia y Reyes, 2006).
Los métodos de identificación tradicional detectan una pequeña fracción de las
clases de salmonelosis. La baja sensibilidad de los métodos tradicionales es debido a
la competición de los otros organismos comensales, como también a usos
inapropiados, cambios en la temperatura del medio ambiente y pH durante el trasporte
del espécimen (Urrutia y Reyes, 2006)
17
2.2.9.1 Exámenes inmunológicos o serológicos.
La ventaja de los exámenes serológicos es que se detecta la persistencia de los
anticuerpos IgG circulantes, aunque el principal inconveniente es que las
concentraciones séricas de los IgG pueden ser bajas al principio de la infección y por
ende indetectables (Velilla y cols., 2006).
2.2.9.1.1 Reacción de Widal
Es un test basado en el principio de la aglutinación antígeno – anticuerpo, donde
se determina la presencia de anticuerpos contra el antígeno O y H de la Salmonella
typhi para el serodiagnóstico de la fiebre tifoidea (Katime, 2006). Esta aprueba es muy
utilizada por los clínicos, es muy accesible, no – estandariza, pero ha limitado su valor
diagnóstico, ya que se observan reacciones cruzadas con otras especies de
Salmonella y una sensibilidad del 78% y especificidad del 78% (Carrada, 2006), otra
gran limitante es que solo apoya el diagnostico especifico de anticuerpos de S. typhi y
S. paratyphi, solo si los títulos de los antígenos O y H son 1:160 o mayores (Carrada,
2007).
2.2.9.1.2 ELISA
Se han desarrollado pruebas serológicas para la detección de anticuerpos IgG
e IgM como las pruebas de ELISA y ‘dot blot’, las cuales son alternativas para usarlas
como indicador indirecto de infección por Salmonella spp especialmente cuando no se
puede aislar la bacteria por tratamiento parcial con antibióticos y el estado tardío de la
infección (Cardona y cols., 2004)
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la prueba de enzimoinmunoanálisis de absorción o radioinmunoanálisis de
sándwich desarrolló el uso de anticuerpos monoclonales (AcMo) como una alternativa
rápida y económica a los procedimientos de aislamiento para la detección de
Salmonella, pues detecta todos los serovares de Salmonella estudiados, estas
incluyen serovares representados de los serogrupos B, C, D y E, por lo tanto ELISA
tiene potencial para ser utilizado en el análisis de riesgo y puntos críticos de control en
zonas endémicas así como en laboratorios clínicos (Valdivieso y cols., 2001)
2.2.9.2 Técnicas moleculares
2.2.9.2.1 PCR
El método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha sido recientemente
explorado, y reporta una excelente sensibilidad y especificidad comparado con testigos
positivos (cultivo en sangre) y testigos negativos (Zhou- Pollard, 2010)
Dentro de los ensayos realizado por PCR para lograr un rápida identificación de
los aislamientos de Salmonella spp recuperados de muestra clínicas, de alimentos o
ambientales, se ha empezado la amplificación del gen invA, el gen de hila y las
secuencias de inserción IS200, específicos en este género, los cuales están
involucrados en el proceso de invasión de células epiteliales (Sánchez y cols., 2007).
Este método puede tener una sensibilidad del 95% y puede ser usado para
determinar serovares de Salmonella a través de colonias aisladas de cultivo en sangre
de pacientes o de su materia fecal, junto con pruebas bioquímicas y de aglutinación.
La identificación del serovar es importante para predecir el curso d la enfermedad y la
determinación del tratamiento (Nagarajan y cols., 2009)
En estudios recientes PCR se amplificado el gen de la flagelina y de todos los
casos sospechosos de fiebre tifoidea, la PCR fue capaz de detectar S. typhi en 43 de
52 muestras de sangre y orina (Ambati y cols., 2007)
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2.2.10 Tratamiento
Actualmente no existe un tratamiento 100% efectivo contra Salmonella (Landa
y cols., 2009). Pero los antibióticos empleados en la actualidad sirven para acelerar la
curación, prevenir las complicaciones y abatir las defunciones (Carrada, 2007). El
tratamiento con antibióticos habitualmente produce una mejora después de varios
días. No obstante, si no se trata la enfermedad, los síntomas pueden persistir durante
semanas o meses, y el 20% muera a causa de la enfermedad. El resiente desarrollo
de la resistencia a los antibióticos en distintas partes del mundo es motivo de
preocupación (Chang, 2009).
El tratamiento de elección para las fiebres entéricas como la fiebre tifoidea y la
septicemia con infección metastásica, es tanto la ceftriaxona como el ciproflloxacino.
Puede ser necesario realizar una colecistectomía para eliminar el estado de portador
crónico. Cuando sea posible, deben drenarse quirúrgicamente los abscesos focales
(Warren, 2006).la elección del antibiótico se fundamente en el análisis de los patrones
de sensibilizas-resistencia de las cepas de (Warren, 2006). S. typhi aisladas en el
laboratorio, medidos con técnicas estandarizadas. Se reconocen tres patrones
principales:
a) Cepas sensibles al cloranfenicol, ampicilina y otros antibióticos de primera
línea.
b) Resistentes a fármacos múltiples, pero sensibles al ácido nalidixico, y
c) Resistentes al ácido nalidixico y a menudo también a otros fármacos. estas
últimas son de tratamiento difícil.
El antibiótico de elección en México es el cloranfenicol, a los niños deben
administrárseles 100 mg/kg de peso/día, repartidos cada seis horas, durante 12 días
y por vía oral. Para los adultos se prescriben 50 mg/k, con la misma distribución y sin
sobrepasar los tres gramos diarios. Si el enfermo vomita o esta inconsciente, la
administración debe ser por vía endovenosa, pero no intramuscular. Este tratamiento
es eficaz y de bajo costo. La fiebre se abate en tres o cinco días; pero solo es
20
bacteriostático, por lo que son frecuentes las recaídas y los portadores fecales. Se
estima que uno de 50 mil enfermos tratados llega a tener aplasia medular irreversible
y no dependiente de la dosis ni de la condición clínica del paciente (Carrada. 2007)
Las fluoroquinonas (ciprofloxacina, ofloxacina y perflozacina) tiene un taza de
curación clínica del 98%; la fiebre desaparece al cuarto día y la tasa de recaída y
portadores fecales es inferior al 2%. La ciprofloxacina oral se administra en adultos a
dosis entre 500 750 mg cada 12 horas, durante 10 a 14 días; no está indicada en
pacientes pediátricos ni en mujeres embarazadas. La concentración mínima inhibitoria,
in vitro, es de un miligramos por litro o más, pero al combinarla con amoxilina se
requieren solo entre 0.004 y 0.256 mg/L; es decir, la combinación potencia el efecto
antibacteriano, y reduce la toxicidad y previene la aparición de mutantes resistentes
(Carrada, 2007).
La ampicilina (100 a 200 mg/kg/día por vía intravenosa durante 14 días) está
indicada en niños y adultos, aunque es menos efectiva que el cloranfenicol. La fiebre
suele prolongarse dos o tres días más, pero la frecuencia de recaída y portadores es
semejante. la combinación trimetropim-sulfametoxasol (8mg/kg/día del TMP y 40
mg/kg/día de SMX, en dos tomas durante 14 días) es potencialmente nefrotóxica; no
debe aplicarse a los enfermos con creatina sanguínea superior a 2mg/100mL. Su
eficacia es semejante a la de amoxicilina; se indica en casos de alergia o resistencia
a otros fármacos. Con furazolidona (10 a 15 mg/kg, vía oral durante 12 a 14 días) la
fiebre se abate en seis a siete días; pero quedan 20% de portadores asintomáticos,
que dejaran de serlo si el tratamiento se prolonga dos semanas. El índice terapéutico
es semejante al de la amoxicilina-ampicilina. En cuanto a las cefalosporinas de tercera
generación, como ceftriaxona (100 mg/kg/día, vía intravenosa, cada 12 horas, sin
exceder 4g/día, durante dos semanas). Con cefixina (7.5 mg/kg dos veces al día
durante 14 días) y aztreonam (50 a 70 mg/kg, cada 8 horas durante 7 días) estos
fármacos deben reservarse para tratar a enfermos inmunocomprometidos o infectados
por cepas multiresistentes (Carrada, 2007)
Los enfermos más graves, con delirio, estupor, estado de choque o coma
progresivo se beneficiaran al prescribirles antimicrobianos mas dexametasona
21
(3mg/kg en infusión intravenosa por 30 minutos, seguida por un mg de
dexametasona/kg cada 6 horas, con ocho dosis adicionales). De esta manera, la
mortalidad se redujo 50%; pero la hidrocortisona a dosis más baja no tuvo efecto
protector. los portadores fecales se trataran con antimicrobianos por tiempo más
prolongado: amoxicilina-ácido clavulánico o probenecid, 100mg/kg/día durante tres
meses; dos tabletas de trimetropim-sulfametoxasol dos veces diarias por espacio de
tres meses, o 750 mg de ciprofloxacina, dos veces al día por 28 días, según la
susceptibilidad de la bacteria (Carrada, 2007)
El uso inapropiado de antibióticos, de manera profiláctica, terapéutica y como
promotores de crecimiento en granjas y alimentos de animales, es un factor importante
en el desarrollo de resistencia bacteriana por patógenos. El constante uso inapropiado
de antibióticos selecciona bacterias multiresistentes, así como productoras de beta-
lactamasas de espectro extendido, lo cual facilita su transmisión (Del pozo y cols.,
2006). Los enfermos inmunocomprometidos o muy mal nutridos deben ser tratados
por un médico experimentado (Carrada, 2007). La enterocolitis causada por
Salmonella normalmente es un enfermedad auto limitada que desaparece sin
tratamiento. Puede ser necesario rehidratarse u tomar electrolitos (Warren,
2006).aunque no es recomendable tratar con antibióticos las gastroenteritis producidas
por este microorganismo, la medicación tiene indicaciones específicas para las
complicación invasoras, tales como bacterianas, sepsis, meningitis y otras (Del pozo y
cols., 2006)
2.2.11 Vacunación
Las vacunas actualmente disponibles contra la fiebre tifoidea con: a) la vacuna
parenteral K (muerta por acetona) y vacuna parenteral L (muerta por calor-fenol). A
pesar de que estas vacunas inducen protección de 79-88% y de 51-77%
respectivamente, presentan fuertes efectos secundarios adversos lo cual las hace
impráctica. b) la vacuna oral contiene la cepa Ty21a viva y atenuada mediante muta
22
génesis química S. typhi está disponible en capsulas. Aunque esta vacuna ha
mostrado inducir protección del 67% al 96%, se requiere de 3-4 dosis para obtener
protección y de refuerzos cada 5 años, está recomendada para aquellos individuos
que viajan o residen en áreas de gran riesgo y para aquellos que por su ocupación
están en contacto con el microorganismo (Ramírez y cols., 2006; Warren, 2006, Zaidi
y cols., 2006). c) la vacuna parenteral a base del antígeno Vi (administrado
intramuscularmente). en estudios de campo, la vacuna indujo elevados títulos de
anticuerpos y confirió una protección del 64 al 72%, esta ha demostrado una
seguridad, inmunogenicidad y eficacia en estudios preclínicos que junto con las
incuestionables ventajas que presenta, han hecho de esta vacuna una de las
principales alternativas para el control y erradicación de la fiebre tifoidea a escala
mundial. Cabe mencionar, por otro lado que no hay actualmente una vacuna contra
las otras serovariedades de Salmonella capaces de producir infecciones sistémicas
(Ramírez y cols., 2006; Warren, 2006; Zaidi y cols., 2006; Crump y Mintz, 2009)
Existe un vacuna conjugada en fase de desarrollo que contiene el antígeno
polisacárido capsular Vi.-rEPA contra la fiebre tifoidea, incluye el antígeno Vi unido a
un toxico de proteínas recombinantes que es antigénicamente idéntico al
Pseudomonas aeruginosa exotoxina. Se ha demostrado que es segura e inmunogena
en los niños de 2-5 años proporcionando efectividad protectora de 91.5%, y está en
proceso de evaluación en los grupos de edad más jóvenes esta vacuna es segura e
inmunogénica, pero actualmente no está disponible en los Estados Unidos (Crump y
Mintz., 2009).
2.2.12 prevención y control
Las infecciones por fiebre tifoidea se evitan principalmente con medidas de
salud pública y de higiene personal, es fundamental educar a los niños escolares u las
familias, también es importante un buen tratamiento de la aguas residuales, prohibir el
uso d aguas negras para riego de verduras, monitorizar el suministro de agua clorada
23
para detectar la contaminación de bacterias coliformes, un efectivo manejo de los
desechos, el consumo de alimentos limpios, pasteurizar la leche, lavarse las manos
antes de manipular alimentos, cocinar adecuadamente las aves de corral para
propiciar el diagnóstico temprano de los enfermos o portadores, el tratamiento rápido,
y aplicar la inmunización activa con vacuna (vía intravenosa conjugada), como
medidas efectivas para prevenir y combatir la tifoidea (Carrada, 2007); Ramírez y cols.,
2006; Warren, 2006)
La fiebre tifoidea puede prevenirse a través de la vacunación antes de viajar a
las áreas en las que esta enfermedad es común y tomando precaución al comer
mientras se encuentre en dicha zona. entre las recomendaciones de los CDC se
encuentran, beber uncamente agua embotellada o agua que ha sido hervida durante,
al menos , un minuto; evitar hielo; comer alimentos bien cocidos; evitar las verduras y
las frutas crudas que no pueden pelarse (Chang, 2009)
2.3 OBJETIVOS GENERALES Y ESPECIFICOS
Objetivo general
Evaluar la inmunoreactividad sérica hacia antígenos de Salmonella
Typhimurium en individuos que acudieron al laboratorio “Héctor Melesio Cuén Ojeda”
de la FCQB-UAS de febrero a junio de 2010”
Objetivos específicos
1. Realizar el tamizaje sérico anti-Salmonella a muestras de individuos que
acudieron al laboratorio “Héctor Melesio Cuén Ojeda” de la FCQB-UAS de
febrero a junio de 2010.
2. Realizar la confirmación sérica de la presencia de anticuerpos específicos
anti-Salmonella Typhimurium a muestras de individuos que acudieron al
24
laboratorio “Héctor Melesio Cuén Ojeda” de la FCQB-UAS de febrero a
junio de 2010.
3. Estimar la seroprevalencia de anticuerpos anti-Salmonella en individuos
que acudieron al laboratorio “Héctor Melesio Cuén Ojeda” de la FCQB-UAS
de febrero a junio de 2010.
2.4 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
Actividades Fecha
Capacitación y documentación previa al proyecto febrero
Apoyo en la elaboración de carteles y asistencia al XIX
Congreso Nacional de Inmunología marzo
Obtención de sueros abril
Tamizaje mayo
Western blot junio
Análisis de Resultados julio
25
2.5 METODOLOGIA
Población de estudio
Se incluirán 378 sueros de individuos, que se realizarán el certificado médico,
el cual consiste en la prueba de VDRL y que darán su consentimiento informado por
escrito para participar en este proyecto, de acuerdo al comité de ética de la FCQB.
Obtenidos entre 2009-2010 en el laboratorio “Héctor Melesio Cuén Ojeda” de la FCQB-
UAS
Obtención de sueros
Las muestras de sangre se obtuvieron de alguna de las venas centrales
ubicadas en la cara anterior del codo de alguno de los brazos del paciente mediante
el sistema de venopunción de Vacutainer, siguiendo protocolos estándar, el suero fue
separado por centrifugación de la sangre coagulada a 3000 xg durante diez minutos
en una centrífuga clínica, posteriormente fue separado en tubos Eppendorf de 1.5 mL
y almacenado a -20°C hasta su uso.
Tamizaje de sueros
Todos los sueros fueron analizados (tamizaje), por la técnica de Widal, la cual
consiste en tomar 10 µL de suero de un individuo, y mezclarlo con 1 gota de reactivo
de Widal (Bio-Rad) sobre una placa de vidrio con círculos de 1.5 cm de diámetro, se
Población de estudio
Obtención de sueros
Tamizaje de sueros
Western blot
26
favorece la reacción, colocando la placa de vidrio con los sueros y el reactivo, durante
2 min en agitación orbital. Observándolas posteriormente en un microscopio invertido
con el objetivo de 40x. Adicionalmente, todos los sueros también fueron analizados
con el reactivo tífico H se considera una muestra como positiva si desarrolla una
aglutinación a un título de 1:160.
Western blot
Se realizaron geles de poliacrilamida al 12% donde se cargaron 250
microgramos de la porinas de S. Typhimurium, las proteínas separadas se transfirió a
una membrana de nitrocelulosa de la cual se harán tiras aproximadamente de 3mm de
ancho. Estas se incubaron con sueros de pacientes positivos a la aglutinación de Widal
los cuales fueron utilizados como primer anticuerpo a una dilución de 1:400 en
agitación a temperatura ambiente, se lavaron las tiras y los anticuerpos unidos a la
membrana fueron detectados utilizando el anticuerpo anti IgG a una dilución de 1:3000,
esta reacción antígeno- anticuerpo se reveló con una solución de Agua oxigenada y
15 mg de diaminobencidina, observándose la reactividad esta se detuvo con agua.
En este ensayo se tomaron 10 µl de suero, al cual se le agregó 1 gota de
reactivo (Bio-Rad), se ayuda a la reacción, colocando la placa con los sueros y el
reactivo 2 minutos en agitación.
Geles
Revelado de tiras de membrana de S. Typhimurium
Se utilizó una dilución 1:100 en PBSt20 como primer anticuerpo, se agregan 500
micro litros de esta dilución a cada tira correspondiente al suero asignado.
27
Se incubaron una hora en shaker a temperatura ambiente. Después se
realizaron tres lavados con PBSt20 en intervalos de cinco minutos cada uno en el
shaker para mejor resultado. Posteriormente se agrega el segundo anticuerpo, anti
IgG humana conjugada peroxidasa en una dilución 1:3000, para obtener esta dilución
se agregan 5 micro litros de antiIgG más 15 militros de PBSt20.
Se depositan 500 micro litros de la dilución a cada tira y se deja incubar en el
shaker. Se repiten los lavados en intervalos de cinco minutos cada uno en el shaker
para mejores resultados. Además de hacer un lavado con PBS1x. finalmente se
agrega solución reveladora., para dejar revelando en el shaker hasta notar un cambio
de color en las bandas, deteniendo la reacción con agua destilada.
2.5 ASESORIA Y SUPERVISION
La realización de servicio social se llevó a cabo bajo la asesoría del Dr. Héctor
Samuel López Moreno quien proporcionó a la brigadista todos los recursos para
finalizar correctamente las actividades asignadas.
La evaluación de la brigadista fue mediante los formatos de evaluación desde
la perspectiva del asesor y desde la perspectiva de la unidad receptora.
2.6 EVALUACION
De los 23 sueros analizados en Western blot α porina de S. Typhimurium, se
pueden identificar diferentes bandas (Cuadro 2)
Los resultados obtenidos después de analizar los sueros fueron los siguientes:
28
Sueros positivos a Widal
No. Tira Bandas observadas (kDa)
12583 1 35, 45, 75, 100
12872 2 35, 45, 75, 100
12895 3 35, 45, 75, 100
12907 4 35, 45, 75, 100
12910 5 5, 22, 35, 45, 75, 100
12941 6 35, 45, 75, 100
12995 7 35, 45, 75, 100
12996 8 35, 45, 75, 100
13108 9 35, 45, 75, 100
13205 10 35, 45, 75, 100
13360 11 35, 45, 75, 100
13463 12 35, 45, 75, 100
13559 13 10, 25, 35, 50, 100
13580 14 35, 45, 75, 100
13613 15 35, 45, 75, 100
13616 16 35, 45, 75, 100
13702 17 35, 45, 75, 100
13764 18 35, 45, 75, 100
13800 19 35, 45, 75, 100
14042 20 35, 45, 75, 100
14452 21 35, 45, 75, 100
14553 22 35, 45, 75, 100
14680 23 35, 45, 75, 100
12971 24 35, 45, 75, 100
12973 25 35, 45, 75, 100
12900 26 35, 45, 75, 100
13004 27 35
Cuadro 2. Análisis representativo de Western Blot Bandas observadas en el
análisis de gel analítico realizado con la técnica de Western blot conteniendo α porina
de S. Typhimurium
Para la realización de este análisis también se realizó un gel analítico de
poliacrilamida de antiporina de S. Typhimurium en el cual se utilizó un marcador
caleidoscópico de 250 kD (Bio-Rad) en el cual se pueden observar intensamente un
29
doblete de bandas de aproximadamente 35 y 38 kD y débilmente se observan 3
bandas de aproximadamente 50, 60 y 100 kD.
De esta manera es posible identificar que el 100% de los sueros presentan
reacción a los antígenos de S. Typhimurium, lo cual nos indica que por medio de esta
técnica es posible identificar a aquellos pacientes prospectos a un padecimiento
ocasionado por Salmonella, los cuales pueden variar según las descripciones antes
mencionadas en el texto.
2.7 RESULTADOS ESPERADOS
Los sueros analizados con el reactivo tífico H en la reacción de Widal se
consideraron como una muestra positiva si desarrollaban una aglutinación a un título
de 1:160. De los cuales en el 100% de ellos presentó una reacción a los antígenos de
S. Typhimurium, al realizar el análisis de estos sueros con Western blot que nos indica
esta técnica como un medio asertivo para la prevención de padecimientos
relacionados a Salmonella. Ya que ninguno de estos pacientes presentaba un cuadro
de síntomas visibles.
30
2.8 BIBLIOGRAFÍA
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34
III. EVALUACIÓN DE LA PRÁCTICA DEL SERVICIO SOCIAL.
3.1. CONCLUSIONES Y SUGERENCIAS
Durante el periodo de servicio social se logró realizar este proyecto de
investigación, la cual es una experiencia que ha dejado grandes conocimientos en mi
vida académica. Los resultados obtenidos no sean de mucha importancia ya que lograr
aportar conocimientos sobre las enfermedades causadas por enterobacterias como
Salmonella en Culiacán donde a pesar de los altos índices de casos no se cuanta con
datos recientes y asertivos sobre esta enfermedad y su agente causal.
Nuestro trabajo está destinado a contribuir con la mejora de los sistemas de
vigilancia e implementar campañas de información sobre la salmonelosis para
concientizar a la población sobre las medidas de prevención de la enfermedad
buscando de esta manera la disminución de la incidencia de esta enfermedad la cual
sigue afectando a miles de sinaloenses.
La estancia en este laboratorio fue muy satisfactoria, ya que se adquieren
nuevos conocimientos en el área de la investigación , tanto en lo experimental como
en la escritura de protocolos de investigación o de técnicas experimentales, por lo que
recomiendo ampliamente a las siguientes generaciones que exploren esta área del
conocimiento.
35
3.2. EVALUACIÓN DESDE LA PERSPECTIVA DEL PRESTADOR DEL SERVICIO
SOCIAL.
36
37
38
3.3. EVALUACIÓN DESDE LA PERSPECTIVA DEL ASESOR DEL SERVICIO
SOCIAL.
39
40
41
ANEXOS
A) Carta de asignación
42
B) Constancia de aprobación al Seminario para el Compromiso Ético
Universitario y la Inclusión Social
43
C) Constancia de Terminación satisfactoria de las actividades del proyecto
de Servicio Social
44
D) Constancia de Culminación de Informe Final de Resultados
45
E) Evidencia de reportes mensuales y actividades realizadas
46
47
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50
51
