Desinfeccion en Una Indsutri Cosmetica

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VERIFICACION COMPARATIVA POR METODO DE BIOLUMINISCENCIA Y METODO TRADICIONAL DE LA LIMPIEZA Y

DESINFECCION EN UNA INDUSTRIA COSMETICA

ANDREA XIMENA CASTIBLANCO SIERRA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS

CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Bogot, D.C.

31 de Julio de 2008




TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial

para optar al titulo de

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS

CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Bogot, D.C.

31 de Julio de 2008

NOTA DE ADVERTENCIA

La universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velara porque no se publique nada contrario al dogma y la moral catlica y porque las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien, se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia

Articulo 23 de la resolucin N 13 de Julio de 1946




APROBADO:

DANILO VANEGAS JANETH ARIAS

C MICROBIOLOGO BACTERIOLOGA M.Sc.

DIRECTOR ASESORA

LUIS DAVID GOMEZ CAROLINA BARON MICROBIOLOGO M.Sc. MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

JURADO 1 JURADO 2




APROBADO:

INGRID SCHULER JANETH ARIAS

BIOLOGA Ph.D. BACTERIOLOGA M.Sc. DECANA ACADEMICA DIRECTORA DE CARRERA

Dedicatoria

A mi madre que a pesar de no estar presente fsicamente me acompaa con su espritu y sus recuerdos, a mi padre que siempre me dio valor durante tanto tiempo y me dio su apoyo en los momentos que ms lo necesite, a mis abuelos que me ensearon las cosas ms importantes de la vida, A mi familia que siempre crey en m al amor de mi vida, a mis amigos con quienes disfrute mis estudios.

Agradecimientos

A TECSER laboratorios S.A. por permitirme desarrollar este trabajo, al Doctor Gonzalo Cardozo gerente general por admitirme y darme su respaldo, al departamento de Control de Calidad por su apoyo permanente, y especialmente a Carolina Barn jefe de control de calidad por creer en mi, darme su confianza y ser promotora continua de enseanza con sus palabras. A Danilo Vanegas mi director de tesis y Janeth Arias mi asesora por su colaboracin, ayuda y compromiso permanente en la elaboracin de este trabajo.

TABLA DE CONTENIDO

Pgina 1. INTRODUCCION 1 2. MARCO TEORICO 3 2.1 HISTORIA DE LOS COSMETICOS 3 2.2 SISTEMA DE ANLISIS DE PELIGROS Y PUNTOS DE 3 CONTROL CRTICO (HACCP) 2.2.1 Principios del Sistema HACCP 4

2.3 BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA (BPM) 5 2.3.1 Buenas Prcticas de Manufactura en Cosmticos 5 2.4 BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO (BPL) 6 2.4.1 Especificaciones de las BPL 7

2.5 LIMPIEZA, DESINFECCION, HIGIENE Y SANITIZACION 7 2.5.1 Limpieza 7 2.5.2 Higiene 8 2.5.3 Sanitizacin 8 2.5.4 Desinfeccin 9 2.6 CONTROL MICROBIOLOGICO DE SUPERFICIES 11 2.6.1 Mtodo del Hisopo 11 2.6.2 Mtodo de Bioluminiscencia 11 2.6.2.1 Adenosin Trifosfato (ATP) 11 2.7 VERIFICACION 14 2.7.1 Parmetros analticos para la verificacin de una tcnica o mtodo 14

2.7.1.1 Selectividad 14 2.7.1.2 Especificidad 14

2.7.1.3 Linealidad 15 2.7.1.4 Precisin 15 2.7.1.5 Exactitud 15

2.7.1.6 Estabilidad 15 2.7.1.7 Limite de Deteccin 15 2.7.1.8 Limite de Cuantificacin 16 2.7.2 Importancia de la verificacin 16 2.7.2.1 Regulaciones y Legislacin que rige la industria cosmtica 16 2.7.2.1.1 BPM Informe 32 OMS 16 2.7.2.1.2 Legislacin Colombiana 17 2.7.2.2 Optimizacin de Procesos 17 2.7.2.3 Reduccin de Costos 17

2.8 HY-LiTE 2 (HYGIENE MONITORING SYSTEM) 18 2.8.1 Procedimiento del HY-LITE 2 19 2.8.1.1 Preparacin del hisopo 19 2.8.1.2 Muestreo 19 2.8.1.3 Tratamiento de la muestra 19 2.8.1.4 Lectura 19

2.8.2 Ventajas y desventajas del HY-LITE 2 19 2.8.2.1 Ventajas 20 2.8.2.2 Desventajas 20 3. FORMULACION DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN 21 4. OBJETIVOS 22 4.1 OBJETIVO GENERAL 22 4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS 22 5. MATERIALES Y METODOS 24 5.1 MATERIALES 24 5.1.1 Material para el mtodo por Bioluminiscencia 24 5.1.2 Material para el mtodo Tradicional de siembra 25 5.2 METODOS 25 5.2.1 Muestreo por mtodo de Bioluminiscencia 25 5.2.2 Muestreo por mtodo Tradicional de siembra 27 5.3 RECOLECCION DE LA INFORMACION 28

5.4 ANALISIS DE LA INFORMACION 28 6. RESULTADOS 30 6.1 MUESTRAS INTERIOR CANECAS DE FABRICACIN 30 6.2 MUESTRAS TAPAS CANECAS DE FABRICACIN 33 6.3 MUESTRAS ENVASADORA TOLVA RAMALDO 36 7. DISCUSION DE RESULTADOS 39 8. CONCLUSIONES 42 9. RECOMENDACIONES 44 10. REFERENCIAS 45 11. ANEXOS 48 12. PRESUPUESTO 49

INDICE DE FIGURAS

Figura N 1. Esquema de una molcula de ATP 14

Figura N 2. Sistema HY-LiTE 2 18

Figura N 3. Partes sistema HY-LiTE 2 25 Figura N 4. Procesamiento de Muestra 27 Figura N 5. Imagen Canecas de Fabricacin 32 Figura N 6. Imagen Limpieza Canecas de Fabricacin 33 Figura N 7. Imagen de las Tapas de las Canecas de Fabricacin 35 Figura N 8. Imagen Envasadora Tolva Ramaldo 38 Figura N 9. Imagen Limpieza Envasadora Tolva Ramaldo 38

INDICE DE TABLAS

Tabla N 1. Datos de URL y UFC/25cm2 Interior Canecas Fabricacin 30 Tabla N 2. Datos de URL y UFC/25cm2 Tapas Canecas Fabricacin 33 Tabla N 3. Datos de URL y UFC/25cm2 Envasadora Tolva Ramaldo 36

INDICE DE GRAFICAS

Grafica N 1. Resultado Muestras Interior Canecas de Fabricacin 31 en URL Grafica N 2. Resultado Muestras Tapas Canecas de Fabricacin 34 en URL Grafica N 3. Resultado Muestras Envasadora Tolva Ramaldo 37 en URL

RESUMEN

El control de calidad ha ido evolucionando en las empresas, especialmente en la industria cosmtica, cobrando importancia el concepto de prevencin y as mismo la

correcta limpieza y desinfeccin llevadas a cabo en los materiales utilizados para lograr productos ptimos durante los procesos de fabricacin y as garantizar la confianza en el consumidor. Es por esto que actualmente existen mtodos que permiten mantener un control microbiolgico en las superficies de mayor contacto con los productos. Por lo tanto se realizo una verificacin comparativa por mtodo de bioluminiscencia y mtodo tradicional de la limpieza y desinfeccin en una industria cosmtica. para establecer con cual de los mtodos se logra optimizar el proceso de produccin, seleccionando el interior de las canecas de fabricacin, las tapas de las canecas de fabricacin y la tolva Ramaldo como puntos crticos de control, para determinar si se llevaba a cabo correctamente el proceso de limpieza y desinfeccin,

por parte de los empleados. El mtodo de bioluminiscencia, basado en la reaccin del Adenosin Trifosfato (ATP), como molcula energtica, presente en clulas y residuos orgnicos, junto con el complejo enzimtico formado entre luciferina y luciferasa permiti cuantificar en Unidades Relativas de Luz (URL) la cantidad de ATP presente.. Por mtodo tradicional de siembra con escobilln se trabajo con placas de Petrifilm de Plate Count determinando las Unidades Formadoras de Colonia (UFC) que pudieran estar presentes en las superficies de los tres puntos seleccionados. Se

establecieron valores de aceptacin, alerta y rechazo en los tres Puntos de Control Crticos (PCC) seleccionados que determinaron si se realizo una adecuada limpieza y desinfeccin; adems se estableci que por el mtodo tradicional de siembra con escobilln solo se logra establecer los microorganismos vivos que puedan estar

presentes, mientras el mtodo de bioluminiscencia con el sistema HY-LiTE 2 logra detectar el ATP tanto de microorganismos vivos como muertos para el control microbiolgico de las superficies. Con lo anterior se buscaba optimizar los procesos de fabricacin en una forma rpida y segura obteniendo un producto final con las caractersticas microbiolgicas de calidad adecuadas.

ABSTRACT

The quality control has been improved in the cosmetic industry, being aware of the importance of prevention and cleaness concept done in used materials to obtain excellent products to warranty customers confidence. Due to this, a comparative verification by means of bioluminiscence method and cleaning traditional method and disinfection method in a cosmetic industry to establish which method can optimize the production process choosing manufacture cans, manufacture can-caps and Tolva Ramaldo as Critical Control Points (PCC). The bioluminescence method allowed accessing the Adenosine Triphosphate upon surfaces due to enzyme reaction of this

molecule with the complex made between luciferina and luciferasa obtaining Relative Units of Ligth (URL). Using the traditional method of growing with swab petrifilm sheets of Plate Count to determine Form Unit Colonies (UFC) shown in the chosen point surfaces. Success values were established, alert and rejection in the three PCC that determined if a proper cleaning and disinfection were done correctly; also using the traditional growing method with swab only alive microorganisms are being

obtained while by means of the bioluminiscence method with the HY-LiTE system

ATP is detected such as alive microorganisms as dead beings to control microbiological beings in the ground.

1. INTRODUCCION

Actualmente la mayora de empresas, entre ellas las de cosmticos, deben garantizar que sus productos cumplan con el control de calidad necesario que permita garantizar su uso confiable en el consumidor final. Esto se consigue mediante control de calidad microbiolgico y fisicoqumico con soporte en procesos de limpieza, sanitizacin e higiene correctos, entre estos sistemas de control las buenas practicas de manufacturas (BPM), facilitando as la prevencin y control de los factores ambientales que surgen en el lugar de trabajo y que pueden generar incapacidad e ineficiencia tanto a la salud de las personas como en el proceso de produccin, con lo

cual se logra demostrar que todos estos productos se encuentran libres de cualquier tipo de contaminacin. Por lo anterior se hace indispensable adoptar un sistema de anlisis de superficies que permita prever problemas de contaminacin que generen prdidas para la empresa, una alternativa es seleccionando puntos crticos microbiolgicos, acorde con el Sistema de Anlisis de Peligros y Puntos Crticos de Control (HACCP).

Los equipos en la industria cosmtica se deben encontrar limpios, enmarcados dentro de un programa de limpieza y desinfeccin, que previene una posible contaminacin durante el proceso de produccin a fin de lograr un producto inocuo. La verificacin de la limpieza y desinfeccin se puede realizar con tcnicas de bioluminiscencia analticas o el mtodo tradicional de siembra con escobilln.

La bioluminiscencia se fundamenta en una reaccin qumica en la cual es necesaria la presencia de una protena denominada luciferina, la enzima catalizadora luciferasa,

oxigeno molecular y el Adenosin Trifosfato (ATP), molcula energtica necesaria para que se de la reaccin presente en todos los organismos. Uno de los

bioluminometros disponibles en el mercado es el HY-LiTE 2 que permite la cuantificacin del ATP midindolo en Unidades Relativas de Luz (URL). Utilizando estadsticamente los valores obtenidos en URL para el punto crtico seleccionado se

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pueden establecer lmites de aceptacin, alerta o rechazo que determinan si se llevo a cabo en forma correcta el proceso de limpieza y desinfeccin.

Por lo tanto el propsito de este trabajo de grado consiste en realizar una verificacin de la limpieza y desinfeccin en materiales de fabricacin y envasado comparando el mtodo tradicional en siembra y el mtodo de bioluminiscencia utilizando el equipo

HY-LiTE 2 sobre puntos crticos debidamente seleccionados que se encuentran en una determinada empresa de cosmticos.

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2. MARCO TEORICO

2.1 HISTORIA DE LOS COSMETICOS

El uso de cosmticos viene de la remota antigedad. A pesar de creerse que los cosmticos, como ahora se conocen, proceden del lejano oriente, el estudio de las culturas primitivas indica su empleo en todas las partes del mundo. Las pinturas de tipo simblico de las culturas indgenas, los tatuajes, las escarificaciones (incisiones superficiales en la piel) practicados por muchos pueblos y el uso de tinturas para decorar el cuerpo son todas formas de cosmtica.

Cuando se habla de cosmticos nos referimos a las preparaciones o productos destinados para aplicacin externa con el propsito de acondicionar la piel y las distintas partes del cuerpo limpiando, coloreando, perfumando, protegiendo y suavizando.

El empleo casi universal de los cosmticos en la actualidad es cada vez mayor debido al estudio cientfico que se realiza de los ingredientes empleados. Esta investigacin, que fue iniciada en el siglo XIX por los franceses, ha conducido al desarrollo de ms y mejores productos a menor precio, con mayor calidad empleando tcnicas y sistemas como HACCP que son preventivos en cuanto a la seguridad para su fabricacin.

2.2 SISTEMA DE ANLISIS DE PELIGROS Y PUNTOS DE CONTROL CRTICO (HACCP)

El concepto HACCP es un enfoque sistemtico de la gestin de la seguridad basado en principios que identifican los peligros que pueden surgir en cualquier etapa dentro de la fabricacin de un producto, estableciendo los controles que puedan evitar dichos

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peligros.

Para su implementacin se debe seguir una serie de pasos:

Observar la elaboracin del producto de principio a fin identificando los peligros potenciales decidiendo en que parte del proceso se pueden presentar e implementando los controles para evitar dichos peligros.

Decidir cual de esos controles son crticos para la seguridad del producto.

Establecer lmites de seguridad de los controles crticos.

Vigilar esos controles para asegurar que no se superen los lmites de seguridad.

Identificar las acciones correctas que se puedan realizar cuando el proceso se encuentre en mal estado.

Documentar los requisitos y registrar los datos obtenidos durante la elaboracin del producto.

Garantizar que el sistema funcione correctamente bajo la observacin de auditorias y revisiones regulares de su rendimiento.

2.2.1 Principios del Sistema HACCP

El sistema HACCP implementa siete principios con los cuales las empresas garantizan el xito de sus productos y logran un mayor reconocimiento dentro de su ambiente competitivo. Dichos principios son los siguientes:

1. Realizar un anlisis de peligros. 2. Establecer los Puntos de Control Crticos (PCCs). 3. Establecer los lmites crticos. 4. Establecer un sistema para vigilar el control de los PCCs.

5. Establecer las acciones correctivas cuando la vigilancia indique que un determinado PCC no esta controlado.

6. Establecer los procedimientos de verificacin para confirmar que el sistema HACCP funcione eficazmente.

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7. Establecer el sistema de documentacin relativo a todos los procedimientos y registros que sean apropiados a estos principios y su aplicacin.

2.3 BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA (BPM)

Las Buenas Prcticas de Manufactura son regulaciones publicadas por la Administracin de Alimentos y Frmacos (FDA) de los Estados Unidos para proveer los criterios de conformidad con el Acta de la Ley Federal de Alimentos, Drogas y Cosmticos (Section of the Federal Food, Drug, and Cosmetic Act, FD&C Act) de los Estados Unidos, requiriendo que todos los productos de consumo humano estn libres

de toda adulteracin. El nfasis se centra en la prevencin de la contaminacin del producto por fuentes directas indirectas.

2.3.1 Buenas Prcticas de Manufactura en Cosmticos.

Se trata de la manufactura de productos cosmticos organizando y llevando a cabo la produccin de los mismos en forma segura de manera que los factores humanos, tcnicos y administrativos, que influyen sobre la calidad de los productos, estn efectivamente bajo control. Los problemas deben ser reducidos, eliminados y lo ms importante anticipados, con nfasis en el concepto de Calidad Total.

Lo anterior con el propsito de alentar a las empresas a formalizar su aseguramiento de calidad proponindoles una metodologa la cual establece una serie de pautas para las diferentes etapas del proceso de manufactura describiendo actividades que guan el aseguramiento de la calidad.

Las empresas deben renovarse de acuerdo a los adelantos que se presenten ya sea con

desarrollos tecnolgicos ligados a maquinarias, empaques o equipos de control, progresos en procesos de manufactura, tcnicas de acondicionamiento y evoluciones en la organizacin de la produccin.

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Estas empresas deben implementar prcticas de manufactura de acuerdo a sus posibilidades, asegurando un nivel de garanta apropiado en el desarrollo de sus productos (15).

2.4 BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO (BPL)

Las Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL) son un conjunto de reglas, de procedimientos operacionales y practicas establecidas que se consideran de obligatorio cumplimiento bajo las cueles se planean, realizan, monitorean, registran, relacionan, archivan y reportan los ensayos en el laboratorio o en campo para asegurar la calidad y validez de los datos obtenidos de un ensayo o calibracin.

Las BPL abarcan todos los eslabones de un estudio o investigacin y para ello se precisa que previamente se haya establecido un plan de garanta de calidad. Las BPL son un sistema de organizacin de todo lo que de alguna forma interviene en la realizacin de un estudio o procedimiento encaminado a la investigacin de todo producto qumico o biolgico que pueda tener impacto sobre la especie humana, las normas inciden en como se debe trabajar a lo largo de todo el estudio desde su diseo hasta el archivo.

Su objetivo es asegurar la calidad e integridad de todos los datos obtenidos durante un estudio determinado y tambin reforzar la seguridad. Conviene tener en cuenta que un buen procedimiento de trabajo es condicin indispensable para la seguridad y no puede suplirse con material especializado, el cual no deja de ser un complemento de aqulla.

El contenido de las BPL debe elaborarse por el propio personal y esta informacin deber ser especfica y detallada en las operaciones crticas y optimizarse. Un comit interdisciplinario puede identificar las operaciones que afecten en gran medida el

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trabajo hecho en el laboratorio y desarrollar los documentos de las BPL. Las BPL son virtualmente independientes de las tcnicas usadas y conducen aspectos tales como mantenimiento de la infraestructura, registros, manejo y disposicin de muestras, control de reactivos y limpieza del material de vidrio del laboratorio.

2.4.1 Especificaciones de las BPL

Para lograr los objetivos de las BPL hay que considerar una cantidad de puntos importantes:

La organizacin del laboratorio. El personal.

La Unidad de Garanta de Calidad. El local y las instalaciones.

Los aparatos, instrumentos, materiales y reactivos.

Las muestras, patrones y mtodos. Los Procedimientos de Trabajo o Procedimientos Operativos Estndar (POEs). La documentacin y los archivos.

2.5 LIMPIEZA, DESINFECCION, HIGIENE Y SANITIZACION

2.5.1 Limpieza

Consiste en retirar la suciedad visible en los equipos y utensilios que se manejan en la produccin. Tiene como objetivo la eliminacin de residuos e impurezas lo cual es importante para reducir el nmero de microorganismos que pueden entrar en contacto con el personal o el producto elaborado brindando un entorno agradable para la

fabricacin. Los mtodos de limpieza se determinan segn el tipo de superficie, la cantidad y el tipo de material orgnico presente (17). Al realizar la limpieza esta se puede hacer en seco de la siguiente forma:

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Retirando los slidos impregnados en las marmitas, agitadores y recipientes.

Colocando los residuos slidos en un recipiente.

Entregando a terceros para su disposicin el mismo da evitando que el proceso se contamine y que esto afecte las condiciones sanitarias de la planta.

Si lo anterior no es posible, recogerlos y llevarlos a un sitio alejado de la zona de produccin para ser desechados.

2.5.2 Higiene

La higiene es definida como los hbitos de conducta sanitaria, la prevencin y control de los factores ambientales que surgen en el lugar de trabajo y que puede propiciar incapacidad e ineficiencia tanto a la salud de las personas como en el proceso de produccin. Existen diferentes agentes que pueden causar daos en el personal de trabajo, estos agentes pueden ser fsicos, qumicos y biolgicos. Dentro de los agentes fsicos podemos encontrar la temperatura, la presin y la iluminacin; en cuanto a los agentes biolgicos se encuentran los insectos, hongos, bacterias y virus; por ltimo

como agentes qumicos podemos ver las radiaciones ionizantes, sustancias toxicas, metales entre otros (1).

2.5.3 Sanitizacin

Es la disminucin en un 99.9% del recuento de microorganismos en un rea determinada por medio de un agente, en su mayora qumico. Esta se realiza segn los requerimientos de salud pblica (20).

Existen bsicamente tres mtodos para sanitizar los equipos e instalaciones: aplicacin de calor, aplicacin de luz ultravioleta y aplicacin de sanitizadores qumicos; este ultimo es el sistema ms aplicado. En este grupo de los sanitizadores qumicos, los ms aplicados son los clorados, utilizndose los hipocloritos de sodio y

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calcio o las cloraminas. En general, estos sanitizantes deben aplicarse con un pH entre 6 y 7 por un tiempo de 10 a 15 minutos con temperaturas no superiores a los 30C y con baja luminosidad (10).

Se habla del plan de sanitizacin como una serie de procesos para limpiar y

desinfectar las instalaciones, los equipos, los utensilios y las manos del personal de la industria de cosmticos. Estos procesos deben ser definidos correctamente bajo el plan de sanitizacin que abarca el Manual de Procedimientos de Operacin Estndar (POES) en el cual esta especificado como deben ser los mtodos, los productos a emplear y la frecuencia en la realizacin de estos procesos (4) (1).

2.5.4 Desinfeccin

Es el proceso selectivo empleado para destruir o inactivar a los organismos

patgenos, especialmente bacterias de origen entrico y la mayora de saprofitos de las superficies. Esto con el propsito de que haya una correcta eliminacin de los

microorganismos actuando sobre su estructura o metabolismo (5). Existen diferentes mtodos de desinfeccin entre los cuales estn:

Desinfeccin Fsica: Calor, calor ms presin (autoclave), calor hmedo, luz ultravioleta.

De todos los agentes desinfectantes el calor es el ms efectivo. En las instalaciones y equipos donde sea factible, debera aplicarse tomando las precauciones de rigor.

Los rayos ultravioletas del sol, ejercen una importante accin germicida. Desafortunadamente hay limitaciones de orden prctico para su uso.

Desinfeccin Qumica: Con desinfectantes

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Los desinfectantes son agentes qumicos que pueden ser aplicados sobre las superficies inertes o inanimadas. Para su accin es indispensable tener en cuenta el tipo de microorganismos a eliminar. Sus mecanismos de accin dependern de: la capacidad de coagular, precipitar protenas, alterar las caractersticas de permeabilidad celular y toxicidad de los sistemas enzimticos de los microorganismos (13).

Las condiciones que influyen sobre la eficacia de un desinfectante son: tamao de la poblacin, composicin de la poblacin, concentracin o intensidad del agente, temperatura, potencial de hidrogeno y concentracin de la materia orgnica en la

superficie a tratar (5).

Una desinfeccin de alto nivel puede esperarse que destruya todos los microorganismos, con la excepcin de alta carga de esporas bacterianas. La desinfeccin de nivel intermedio inactiva bacterias vegetativas, la mayora de los virus y la mayora de los hongos, pero no destruye necesariamente las esporas bacterianas. La desinfeccin de nivel bajo puede destruir la mayora de las bacterias, algunos virus y algunos hongos, pero no puede dependerse de ella para eliminar microorganismos resistentes, tales como los bacilos de la tuberculosis o las esporas bacterianas (3) (20).

Para controlar la desinfeccin se utilizan dos clases de mtodos: estimativos y directos. Los estimativos se basan en el contacto entre un medio de cultivo y la superficie a evaluar, estos mtodos pueden ser el escobilln, placas Rodac y laminas de contacto. Los directos se basan en la recuperacin total de la flora residual

presente y entre ellos estn el enjuagado y la ATP-metra o la bioluminiscencia (5). La ATP-metra consiste en la reaccin luciferin luciferasa en un fotmetro con

registro en donde la molcula de ATP, en el complejo luciferina luciferasa, absorbe un fotn (partcula portadora de radiaciones electromagnticas como rayos gamma o luz ultravioleta) de alta energa que es emitido como un fotn de baja energa, lo que

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genera mayor longitud de onda, emitiendo una cantidad de luz que ser proporcional a la cantidad de ATP presente; mientras que al hablar de bioluminiscencia se hace referencia a una generacin de luz verdosa y fra por medio de una reaccin qumica (oxidorreducciones enzimticas) a lo cual se le conoce como quimioluminiscencia (5) (25).

2.6 CONTROL MICROBIOLGICO DE SUPERFICIES

El control microbiolgico de superficie proporciona informacin sobre la cantidad de microorganismos presentes sobre una superficie, que puede ser un equipo, mesn,

ropa, manos del personal, etc.

2.6.1 Mtodo del Hisopo

Este mtodo es utilizado para tomar muestras de superficies irregulares Se debe definir el rea donde se va a tomar la muestra, generalmente usando una plantilla con un rea entre 24 y 30 cm2. El hisopo estril se humedece en un diluyente (buffer o agua peptonada) y se frota sobre la superficie a evaluar, en dos direcciones distintas, rotndolo ligeramente. Luego la parte superior del hisopo se coloca en el diluyente y se toman alcuotas para sembrarlas en placas con agar Plate Count en profundidad. Se incuban por 24 horas de 37 a 48C y se cuenta el nmero de colonias calculando el nmero de UFC/rea analizada (8).

2.6.2 Mtodo de Bioluminiscencia

La bioluminiscencia por Adenosin Trifosfato (ATP) es una alternativa a los procedimientos de control de calidad microbiolgicos en las industrias proporcionando resultados rpidos, exactos y sensibles a travs de una operacin sencilla. Es una reaccin qumica en la cual es necesaria la presencia de una protena

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denominada luciferina, la enzima catalizadora luciferasa, oxgeno molecular y ATP (trifosfato de adenosina), sustancia capaz de generar la energa necesaria para que se d la reaccin y que se encuentra presente en todos los organismos vivos. La cantidad de luz emitida es proporcional a la cantidad de ATP presente ya sea en el lote o en el producto final (2).

El proceso es llevado a cabo cuando el fenol heterocclico termoestable como la luciferina y la enzima termolbil luciferasa reaccionan formando adenilato de luciferina, esta se une fuertemente al centro cataltico de la luciferasa y esta forma de la enzima, al exponerse al oxigeno molecular, se oxida y da oxiluciferina la cual

emite luz al volver a su estado bsico. En este ltimo proceso se libera el exceso de energa en forma de luz (7). La reaccin entre la luciferina y la luciferasa puede ser alterada por factores ambientales como:

La temperatura la cual es optima entre 5 a 35C.

El pH el cual debe estar entre 7.5-7.75.

Residuos de detergentes y desinfectantes utilizados para realizar la limpieza de equipos.

La reaccin completa se produce en menos de un milisegundo y se mantiene mientras

el organismo permanezca excitado. Muchos organismos emiten luz entre estos se encuentran bacterias, hongos, flagelados, gusanos, medusas y larvas (24). Segn las distintas especies de animales la composicin qumica de la luciferasa y de las luciferinas vara lo que produce colores distintos. A diferencia de la mayora de las reacciones qumicas no se produce calor como producto secundario y se genera

suficiente luz como para ser detectada (21).

2.6.2.1 Adenosin Trifosfato (ATP)

Es un nucletido constituido por una adenina, una ribosa y una unidad trifosfato. Constituye una molcula rica en energa debido a que su unidad trifosfato contiene

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dos enlaces fosfoanhdridos. Se unen por un enlace ester de fosfato y dos anhdridos de fosfato que unen los tres fosfatos (PO4) y la ribosa. Una gran cantidad de energa se libera cuando el ATP se hidroliza a adenosn difosfato (ADP) y ortofosfato (Pi) o cuando se hidroliza a adenosn monofosfato (AMP) y pirofosfato (PPi). El ATP es el principal donador inmediato de energa en los sistemas biolgicos (Figura N 1). En una clula tpica, la molcula de ATP se consume dentro del primer minuto que sigue a su formacin, por lo que el movimiento, el transporte activo, la amplificacin de seales y los procesos de biosntesis pueden ocurrir slo si el ATP se regenera continuamente. La liberacin de fosfato de ATP es exotrmica (reaccin que emite calor) y la reaccin a la que se conecta es endotrmica (requiere entrada de energa) (22).

El ATP tiene funciones en la clula como transporte de las sustancias por las membranas de la clula, trabajo mecnico, proporciona la energa necesaria para los movimientos musculares, suministra la energa para los cromosomas y flagelos y

emite la energa necesaria para sintetizar los tipos de macromolculas que la clula necesita (16).

La cantidad de ATP vara de un tipo de microorganismo a otro y segn el estado del ciclo de crecimiento de los microorganismos. El ATP bacteriano es capaz de permanecer fuera de la clula viable o fuera de niveles de pH neutros a temperatura ambiente.

Su obtencin es el resultado de procesos como la fermentacin, la respiracin y la fotosntesis. Para su sntesis bioqumica existen dos mecanismos que son la

fosforilacin del substrato y la fosforilacin oxidativa; en ambos se utilizan los enlaces energticos de un intermediario metablico para crear una molcula de ATP a

partir de una de ADP y de fosfato inorgnico (9).

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Figura N 1. Esquema de una molcula de ATP. GARRAHAN, P. Ciencia Hoy. El ATP. Pg. 48.

www.cienciahoy.org.ar/hoy27/atp.htm

2.7 VERIFICACION

2.7.1 Parmetros Analticos para la Verificacin de una Tcnica o Mtodo

2.7.1.1 Selectividad

El mtodo selectivo aporta resultados para los analitos de inters mientras que uno

especfico proporciona resultados exactos para un analito al tiempo que los otros analitos de inters pueden interferir los unos con los otros (6).

2.7.1.2 Especificidad

Capacidad del mtodo para diferenciar precisa y especficamente el compuesto de inters, en presencia de los dems componentes, que estn presentes en la matriz de la muestra. Los componentes son precursores de la sntesis o subproductos de la misma

(26).

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2.7.1.3 Linealidad

Proporcionalidad entre la concentracin del analito y su respuesta, lo cual se mira si la tcnica o mtodo produce resultados directa o indirectamente proporcionales a la concentracin o cantidad del analito, dentro de un intervalo determinado (26).

2.7.1.4 Precisin

Dispersin de la media alrededor de un valor medio o central y mide la concordancia entre ensayos individuales cuando el mtodo se aplica repetidas veces a muestras

separadas e idnticas, obtenidas del mismo lote de material homogneo (26). Esta comprende la repetibilidad, reproducibilidad, solidez y robustez.

2.7.1.5 Exactitud

Diferencia entre la media de los resultados del ensayo obtenidos por el mtodo y el valor aceptado como correcto para la cantidad de la media (26).

2.7.1.6 Estabilidad

Es adecuada si la desviacin estndar relativa calculada en los resultados obtenidos en diferentes intervalos de tiempo, no excede el 20% del valor correspondiente de la precisin del sistema (26).

2.7.1.7 Limite de Deteccin

Numero expresado en unidades de concentracin que describe el mas bajo nivel de concentracin de una sustancia que puede determinarse como estadsticamente diferente del blanco analtico (26).

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2.7.1.8 Limite de Cuantificacin

Baja cantidad del analito que puede determinarse cuantitativamente con precisin y exactitud aceptables (26).

2.7.2 Importancia de la Verificacin

2.7.2.1 Regulaciones y Legislacin que rige la industria cosmtica

Parte esencial de las Buenas Practicas de Manufactura Vigentes (BPMv) ya que por estas es posible implementar procesos y procedimientos consistentes llevados a cabo por tcnicas y mtodos exactos, reproducibles y slidos. Sin los procesos controlados es imposible obtener productos con calidad.

2.7.2.1.1 BPM Informe 32 OMS

La fabricacin de productos cosmticos debe ser llevada a cabo con altos programas de saneamiento e higiene en donde se incluya el personal, las instalaciones, los equipos, el material y todo aquello que pueda llegar a ser una fuente de contaminacin para el producto. Los equipos que se encuentren deben tener un diseo que permita el facial acceso para la limpieza. Las reas debern ser limpiadas peridicamente y en forma completa de acuerdo al instructivo estipulado en la empresa por parte del departamento de control de calidad. Los desinfectantes utilizados para tal propsito sern cambiados peridicamente a fin de evitar cepas de

microorganismos resistentes. Las diluciones de los desinfectantes debern ser controladas y mantenidas en recipientes y lugares adecuados para evitar su

contaminacin. Se llevara un control del monitoreo de los ambientes y de las superficies peridicamente para asegurar que este dentro de especificaciones (18).

17

2.7.2.1.2 Legislacin Colombiana

La resolucin Colombiana 3112 de 1998 del Ministerio de Salud Publica en la cual se implementan las BPM en cosmticos refirindose al tema de limpieza y desinfeccin ordena que el personal de fabricacin reciba la capacitacin correspondiente en cuanto a los mtodos de limpieza para llevar a cabo las operaciones de higiene industrial, as mismo el personal deber respetar dichas practicas de higiene siguiendo las instrucciones dadas por la empresa. La empresa deber mantener las reas, material, equipos, graneles, materias primas y productos terminados en buenas condiciones de higiene. Al personal involucrado en la fabricacin del producto se le

deber realizar exmenes mdicos peridicamente asegurando las condiciones ptimas del producto y del mismo personal. Los productos de limpieza utilizados deben estar claramente identificados para evitar el contacto con los cosmticos. Cada empresa deber tener documentacin sobre los procesos de limpieza y desinfeccin, as mismo informes y registros fechados y firmados por los responsables los cuales se verificaran para su cumplimiento. Los equipos deben ser limpiados y sanitizados peridicamente poniendo nfasis en llaves de paso, bombas, codos de tuberas, empalmes y dems evitando as que puedan ser foco de contaminacin de flora microbiana o de productos anteriores (12).

2.7.2.2 Optimizacin de Procesos

Rapidez y seguridad en la pruebas que disminuyen el tiempo muerto del equipo y ayudan a reducir costos energticos; adems se da el desarrollo de estndares para el proceso lo que permite mejores limites de especificacin.

2.7.2.3 Reduccin de Costos

Se tiene la planificacin de la calidad, entrenamiento, calibracin, validacin en procesos, lo cual es indispensable en auditorias y autoinspecciones. Tambin reduce

18

la devolucin y reclamos por calidad del producto evitando rechazos, reprocesos, reinspecciones y reanlisis.

2.8 HY-LiTE 2 (HYGIENE MONITORING SYSTEM)

Sistema que permite verificar la efectividad del proceso de sanitizacin llevado a cabo en los puntos crticos seleccionados en reas y equipos de la industria, favoreciendo la calidad del proceso de produccin y evitando la contaminacin de productos ya terminados.. Con este sistema se detecta la posible contaminacin que

queda bajo el principio de bioluminiscencia. El HY-LiTE 2 analiza las superficies cuantificando el ATP residual presente midindolo en Unidades Relativas de Luz (URL). Con este se generan valores que permiten hacer el clculo estadstico para establecer los lmites de aceptacin y de rechazo. Para esto el sistema usa el principio

bioluminiscencia cuantificando el ATP. Este mtodo no debe ser utilizado para detectar niveles bajos de bacterias, para correlacionar URL con el numero de bacterias u otras clulas vivas ni para detectar muerte bacteriana (5) (23).

Este equipo se compone de hisopos para la toma de muestras, reactivos con la enzima luciferin luciferasa, una solucin de enjuague para el hisopo, luminmetro para cuantificar el ATP y una varilla con extractante que lisa las clulas y toma el ATP de un volumen de 50 microlitros (11).

Figura N 2. Sistema HY-LiTE 2

es.vwr.com/app/catalog/Catalog?parent_class_id=32&parent_class_cd=104658

19

2.8.1 Procedimiento del HY-LITE 2

El procedimiento con el sistema HY-LiTE 2 se realiza en 4 etapas (14):

2.8.1.1 Preparacin del hisopo

Sacar el hisopo libre de ATP del empaque de proteccin y sumergirlo en la solucin de enjuague.

2.8.1.2 Muestreo

Frotar contra la superficie haciendo movimientos de arriba hacia abajo y luego de un lado al otro en una superficie de aproximadamente 25cm2.

2.8.1.3 Tratamiento de la muestra

Sacar con cuidado la tapa de proteccin, luego sumergir la varilla completamente en la solucin de enjuague, despus introducir la varilla en el dispositivo de reaccin y por ultimo agitar hacia abajo por unos 10 segundos para obtener una mezcla completa. Despus, se toman mximo 300l de la solucin de enjuague para realizar los cultivos para mesfilos, coliformes, hongos y levaduras.

2.8.1.4 Lectura

Se introduce el dispositivo en la cmara de reaccin, se cierra y al cabo de unos 15 segundos se obtiene la lectura.

2.8.2 Ventajas y Desventajas del HY-LiTE 2

20

2.8.2.1 Ventajas

La bioluminiscencia detecta microorganismos en minutos.

Facilidad en su uso.

Deteccin de menor cantidad de microorganismos.

Mayor exactitud.

No hay interferencia en la medicin por su capacidad de tamponacin.

2.8.2.2 Desventajas

Costo elevado.

No hay diferencia entre el ATP de microorganismos vivos y muertos.

No hay diferencia entre el ATP bacteriano y el ATP eucaritico.

Pigmentos que absorben la luz o sustratos de alta viscosidad interfieren en la

reaccin.

21

3. FORMULACION DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACION

La importancia de la calidad en los cosmticos se hace cada vez mayor, por lo cual se debe tener un correcto proceso de fabricacin a fin de minimizar la contaminacin que pueda afectar la calidad del producto. Uno de los puntos crticos de contaminacin que ms se presenta en estas empresas son las superficies de los equipos que se utilizan, debido a un mal manejo de los procesos de desinfeccin y sanitizacin que se requieren para lograr una correcta higiene.

La importancia de verificar el programa de limpieza y desinfeccin establecidos radica en comprobar que la persona encargada de llevar a cabo esta actividad la realizo correctamente; con esto se logra hacer mayor nfasis en la prevencin ya que

se generan productos libres de contaminantes y a su vez se crea la seguridad necesaria para el consumidor, adems se logran utilizar los equipos en menos tiempo para comenzar los procesos de fabricacin lo cual ayuda a aumentar la productividad de la empresa.

Tomando en cuenta lo anterior con este trabajo se busca mtodos efectivos y que arrojen resultados confiables, como el sistema HY-LiTE 2, que permitan la identificacin rpida de dichas fallas, a diferencia de los mtodos tradicionales, con el

fin de prevenir perdidas econmicas a la empresa y optimizar sus procesos de produccin ya que esto puede llegar a afectar su correcto desempeo y generar una mala imagen en el consumidor.

22

4. OBJETIVOS

4.1 OBJETIVO GENERAL

Verificacin comparativa por mtodo de bioluminiscencia y mtodo tradicional de la limpieza y desinfeccin en una industria cosmtica para establecer con cual de los mtodos se logra optimizar el proceso de produccin.

4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Definir las reas y equipos con una alta proporcin dentro de la industria de cosmticos de poseer puntos de control crticos (PCC).

Comprobar si se lleva a cabo correctamente los procesos de higiene, limpieza y desinfeccin realizados en la industria de cosmticos seleccionada.

Realizar una comparacin entre el mtodo de bioluminiscencia y el mtodo tradicional de siembra con escobilln para control microbiolgico de las superficies.

Determinar entre el mtodo de bioluminiscencia y el mtodo tradicional de siembra con escobilln cual tiene mayor efectividad para el control de superficies.

Evidenciar las Unidades Relativas de Luz (URL) que puedan estar presentes en las canecas de fabricacin, tapas de fabricacin y la tolva Ramaldo con el equipo

HY-LiTE 2.

23

Establecer las Unidades Formadoras de Colonia (UFC) que se encuentren presentes en las canecas de fabricacin, tapas de fabricacin y la tolva Ramaldo por mtodo tradicional de siembra.

24

5. MATERIALES Y METODOS

En primera instancia se identificaron los procedimientos operativos estndares (POEs) de la empresa sobre la forma en que se lleva a cabo todo lo concerniente con la limpieza, desinfeccin, sanitizacin e higiene de las superficies y equipos, posteriormente se realizo una reunin en la empresa entre la direccin tcnica y el departamento de control de calidad para analizar las reas con el fin de determinar los puntos crticos de control, acorde con el sistema HACCP, en cada una de estas llegando de esta manera a concertar los siguientes puntos para monitoreo:

1. Canecas de Fabricacin 2. Tapas Canecas de Fabricacin 3. Lnea 3 de Acondicionamiento: Tolva Ramaldo

5.1 MATERIALES

Los siguientes materiales y equipos fueron utilizados para la comparacin por mtodo de bioluminiscencia y mtodo tradicional con escobilln para la verificacin del proceso de limpieza y desinfeccin.

5.1.1 Material para el mtodo por Bioluminiscencia

o Hisopo Estril

o Luminmetro o Solucin de Enjuague o Varilla Muestreadora o Software Trend2

25

Figura N 3. Partes Sistema HY-LiTE 2 www.merckla.com/MBRA/Site/wmsp.nsf/vstRefConPorTit/Hy-Lite%20Hy-Rise

5.1.2 Material para el mtodo tradicional de siembra

o Autoclave

o Incubadora de 35 a 37C o Miristato de Isopropilo o Peptona

o Pipetas de 1ml y 5ml o Pipeteador o Placas de Petrifilm con medio Plate Count

o Recipiente de transporte de muestras o Tubos de vidrio tapa rosca de 16 x 150mm o Tween 80 o Gradilla

5.2 MTODOS

5.2.1 Muestreo por Mtodo de Bioluminiscencia

Tapa Cmara de Reaccin

Solucin de

Enjuague

Varilla Muestreadora

Hisopo Estril

Cmara de Reaccin

Panel de Control

26

Para lograr la verificacin de la limpieza y desinfeccin por este mtodo, se tomaron 40 muestras de cada uno de los puntos crticos de control seleccionados que fueron las canecas de fabricacin, las tapas de las canecas de fabricacin y la tolva Ramaldo en la lnea 3 de acondicionamiento. Este tamao de muestra se debe a pruebas

realizadas en Merck (casa comercial del sistema HY-LiTE 2) con un intervalo de confianza del 95% que demuestra que cuarenta ensayos por cada punto son representativos obteniendo la validacin del equipo (14).

Para el correcto manejo del equipo se tomo la adecuada asesoria con el propsito de comenzar a tomar las muestras.

Como primera medida se utilizo la vestimenta adecuada para el ingreso a la planta (uniforme, gorro, tapabocas y guantes); los elementos correspondientes de toma de muestras como: esferos de reaccin, hisopos estriles y luminmetro se colocaron dentro de una lonchera para transporte de toma de muestras. Antes de tomar la muestra las superficies analizadas fueron limpiadas y sanitizadas. Se tomo el hisopo estril y se saco evitando tocarlo, en seguida se abri la parte de arriba del esfero de reaccin y se humedeci el hisopo con la solucin de enjuague, posteriormente se paso el hisopo sobre una superficie de 25cm2 de manera uniforme, luego se volvi a humedecer el hisopo en la solucin de enjuague. Se coloco en contacto la varilla muestreadora con la solucin de enjuague y esta se coloco en contacto con el reactivo que contiene la enzima luciferin luciferasa y los cofactores adecuados para que se diera la reaccin de bioluminiscencia. Por ultimo se ubico la varilla muestreadora en la cmara de reaccin y se cerro la tapa apareciendo en la pantalla luego de unos segundo la medida de Unidades Relativas de Luz (URL).

27

Figura N 4. Procesamiento de Muestra www.merckla.com/MBRA/Site/wmsp.nsf/vstRefConPorTit/Hy-Lite%20Hy-Rise

Se instalo el software trend2 en el computador ubicado en el rea del laboratorio con el cual se pudo mantener un control y almacenamiento sobre todas las muestras y

datos que se tomaron con el equipo HY-LiTE 2 a los puntos seleccionados anteriormente para determinar por medio de herramientas estadsticas y graficas si se llevo a cabo correctamente los procesos de limpieza y desinfeccin en la empresa seleccionada.

5.2.2 Muestreo por mtodo Tradicional de siembra

Se preparo 360ml de agua peptonada, para 40 muestreos por cada punto critico de control, diluyendo 1.25g de peptona en agua desionizada y agregando miristato de isopropilo y tween 80. Posteriormente se adiciono 9ml en tubos tapa rosca de 16x 150mm y los cuales se esterilizaron en autoclave. En el momento de tomar las muestras se dispuso de la indumentaria adecuada para el ingreso a la planta. Las manos fueron sanitizadas con alcohol al 70%, luego los guantes se colocaron y son sanitizados con alcohol al 70%. Se tomo el escobilln estril y se saco evitando tocarlo, en seguida se abri el tubo de 16 x 150mm y se humedeci el escobilln con

28

el agua peptonada, posteriormente se paso el escobilln sobre una superficie de 25cm2 de manera uniforme y luego se coloco en el tubo que contiene los 9ml de agua peptonada previamente preparada. Los tubos fueron transportados al laboratorio de microbiologa en la lonchera respectiva para el transporte de muestras con el fin de realizar la siembra en profundidad en placas de petrifilm con medio Plate Count para mesfilos. Posteriormente las placas se incubaron de 34 a 37C por 24 a 48 horas. Finalmente se realizo el recuento de Unidades Formadoras de Colonia (UFC) y se registro el resultado.

5.3 RECOLECCIN DE LA INFORMACIN

Para el almacenamiento de los datos que se obtuvieron durante el estudio por mtodo

de bioluminiscencia el sistema HY-LiTE 2 en su dispositivo de memoria guardo los resultados de cada muestreo en cada punto crtico de control seleccionado y posteriormente estos se enviaron al software trend2 que se instalo en el computador del laboratorio el cual los mantendr archivados secuencialmente.

En cuanto a los datos que se tomaron por mtodo tradicional de siembra se realizo un formato en que se registraron los datos obtenidos y parmetros como la fecha, hora y

el desinfectante utilizado que sern de importancia para la discusin de los mismos.

5.4 ANLISIS DE LA INFORMACIN

Por el mtodo de biolumiscencia se realizo una estadstica con los 40 resultados obtenidos en los tres puntos crticos de control seleccionados (canecas de fabricacin, tapas canecas de fabricacin y tolva Ramaldo) obteniendo la mediana de los datos con la cual se determino el valor de aceptacin (A); el valor de alerta fue el resultado obtenido entre el valor de aceptacin y el de rechazo y el valor de rechazo (R) se estableci tomando la mediana obtenida de los valores de cada punto y

multiplicndola por tres.

29

Con el mtodo tradicional de siembra con escobilln se realizo recuento en placa observando las UFC/25cm que fue el rea analizada correspondientes.

30

6. RESULTADOS

De acuerdo a los puntos seleccionados por la empresa como puntos de control crticos (PCC) en los procesos de fabricacin, sobre la forma en que se lleva a cabo todo lo concerniente con la limpieza, desinfeccin, sanitizacin e higiene de las superficies y equipos, se analizaron para monitoreo:

1. Canecas de Fabricacin 2. Tapas Canecas de Fabricacin 3. Lnea 3 de Acondicionamiento: Tolva Ramaldo

6.1. MUESTRAS INTERIOR CANECAS DE FABRICACIN

6.1.1 Tabla N 1. Datos de URL y UFC / 25cm

N MUESTRA

HORA URL UFC/25cm

1 09:21 a.m. 28 URL

31

19 13:44 p.m. 37 URL

32

6.1.3 Valores obtenidos de aceptacin (A), alerta y rechazo (R) para el interior de las canecas de fabricacin.

PUNTO ACEPTACION ALERTA RECHAZO

Interior Canecas de Fabricacin < 27 URL 27 URL- 80 URL > 80 URL

Acorde con los resultados obtenidos por mtodo de bioluminiscencia, de las 40 muestras tomadas para el interior de las canecas de fabricacin, se obtuvo como criterio de aceptacin un valor de < 27 URL, como criterio de alerta el limite entre 27 URL- 80 URL y como criterio de rechazo un valor de > 80URL. Por mtodo tradicional los resultados encontrados en mas del 90% de las muestras fue de

33

Figura N 6. Imagen limpieza de las canecas de fabricacin TECSER LABORATORIOS S.A.

6.2. MUESTRAS TAPAS CANECAS DE FABRICACIN

6.2.1. Tabla N 2. Datos de URL y UFC / 25cm

N MUESTRA HORA URL UFC/25cm

1 11:29 a.m. 95 URL

34

18 09:39 a.m. 13 URL

35

6.2.3. Valores obtenidos de aceptacin (A), alerta y rechazo (R) para las tapas de las canecas de fabricacin.

PUNTO ACEPTACION ALERTA RECHAZO

Tapas Canecas de Fabricacin < 26 URL 26 URL- 77 URL > 77 URL

Segn los resultados obtenidos por mtodo de bioluminiscencia, de los 40 muestreos para las tapas de las canecas de fabricacin, se obtuvo como criterio de aceptacin un valor de < 26 URL, como criterio de alerta el limite entre 26 URL- 77 URL y como criterio de rechazo un valor de > 77 URL. Con el mtodo tradicional los resultados obtenidos en el 90% de las muestras fue de

36

6.3. MUESTRAS ENVASADORA TOLVA RAMALDO

6.3.1. Tabla N 3. Datos de URL y UFC / 25cm

N MUESTRA HORA URL UFC/25cm

1 15:06 p.m. 49 URL

37

31 17:28 p.m. 14 URL

38

Acorde con los resultados obtenidos por mtodo de bioluminiscencia, de las 40 muestras para la tolva Ramaldo, se obtuvo como criterio de aceptacin un valor de < 14 URL, como criterio de alerta el limite entre 14 URL- 42 URL y como criterio de rechazo un valor de > 42 URL. Con el mtodo tradicional los resultados obtenidos en el 90% de las muestras fue de

39

7. DISCUSION DE RESULTADOS

Con los resultados obtenidos se determinaron valores de aceptacin (A), alerta y rechazo (R) en URL de los tres puntos crticos de control (canecas de fabricacin, tapas canecas de fabricacin y tolva Ramaldo) que verificaron el correcto manejo del programa de limpieza y desinfeccin llevado a cabo sobre las superficies de los puntos seleccionados.

Segn las tablas y graficas N 1 y 2 los valores obtenidos por mtodo de bioluminiscencia como criterios de aceptacin, alerta y rechazo en Unidades Relativa

de Luz (URL) son similares, logrando la concordancia esperada en estos dos puntos seleccionados (interior de las canecas de fabricacin y las tapas de fabricacin) debido a que en ambos se realiza al tiempo el mismo programa de limpieza y desinfeccin. Era importante verificar dichos procesos ya que all se coloca el producto fabricado y es el primer material que tiene contacto con el producto antes de ser envasado. En cuanto a los valores obtenidos por mtodo tradicional de siembra para el interior de las canecas las muestras nmero 8,9 y 14 con recuentos 10UFC/25cm2 fueron las que presentaron mayores URL, esto debido a la presencia de gran cantidad de ATP detectado de microorganismos vivos sobre las superficie. Para las tapas de las canecas de fabricacin se observaron las muestras nmero 5, 28 y 30 con recuentos 10UFC/25cm2, sin embargo los valores de URL de estos no son los mas altos lo que indica que estos recuentos fueron posiblemente por contaminacin del escobilln en el momento de tomar las muestras.

Lo observado en la tabla y grafica N 3 por mtodo de bioluminiscencia para la tolva

Ramaldo en comparacin con los otros dos puntos indica que en este se realizo mayor nfasis en el proceso de limpieza y desinfeccin ya que los datos de la cuantificacin

de ATP fueron menores, lo cual pudo deberse a que este equipo es limpiado por las operarias y no por los fabricantes como en los anteriores puntos analizados; por

40

mtodo tradicional todos los datos se presentaron por debajo de los limites establecidos segn la especificacin manejada por la empresa.

Como se observo en las tablas fueron pocos los valores en URL altos los cuales no interfiri en los resultados alcanzados. Estos valores altos pudieron deberse a una incorrecta toma de la muestra por parte del analista ya que pudo abarcar una mayor rea de la trabajada, contaminacin del hisopo con que se tomo la muestra antes de obtener el resultado final o la falta en el correcto uso del uniforme por parte de los fabricantes y operarias ya que pudieron dejar restos de clulas epiteliales cuantificando el ATP all encontrado.

El mtodo de bioluminiscencia permiti cuantificar el ATP tanto de microorganismos vivos como de microorganismos muertos midindolo en URL, mientras que el mtodo tradicional de siembra con escobilln solo permiti determinar los microorganismos mesfilos aerobios vivos que estuvieron en las superficies de las muestras analizadas informando en UFC, por tanto su comparacin es nula ya que el fundamento de cada tcnica es distinto, adems las unidades de medida utilizadas en el estudio por ambos mtodos son diferentes por ende solo pueden ser descritas.

De los mtodos utilizado durante la verificacin se encontr que el mtodo de bioluminiscencia es el mas efectivo ya que se utiliza menos material durante la toma de muestra, los resultados se conocen en pocos segundos y permite detectar tanto microorganismos vivos como muertos logrando as la rapidez y optimizacin en los procesos de fabricacin generando la seguridad requerida para demostrar la calidad microbiolgica del producto final. Es por esto que el estudio desarrollado en la

empresa de cosmticos busca que se mantenga el mtodo de bioluminiscencia, adicional al mtodo tradicional de siembra, de forma continua para el control

microbiolgico de superficies, tomando el resultado dado de los valores de aceptacin, alerta y rechazo como criterio para definir que el proceso de limpieza y

41

desinfeccin se realizo correctamente y as cumplir con las necesidades de la empresa en cuanto a la calidad de sus productos.

El area de lavado y limpieza y desinfeccin de las canecas y tapas de fabricacin es un rea donde transitan muchas personas, por tanto el ambiente en dichas reas suele presentar mayor cantidad de partculas debido a que es un espacio abierto y es por esto que se pudieron presentar valores de aceptacin, alerta y rechazo en URL y UFC mayores a los observados en la tabla N 3 de las muestras tomadas a la tolva Ramaldo ya que esta se encuentra dentro de un rea aislada en la lnea 3 de fabricacin.

Es importante precisar que una lista de chequeo, para comprobar el proceso de limpieza y desinfeccin, fue innecesaria ya que la empresa tiene establecido un programa para este propsito y solo se buscaba observar si esta actividad es llevada a cabo correctamente como medida preventiva de calidad para el producto.

Los resultados obtenidos durante el trabajo fueron dados a conocer a las directivas de la empresa y a los empleados por medio de una ponencia en la cual se mostraron los valores de aceptacin, alerta y rechazo que se tendrn que manejar; tambin se realizo un instructivo correspondiente al manejo del sistema HY-LiTE 2 el cual quedo como soporte para la compaa.

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8. CONCLUSIONES

1. Se logro verificar la correcta realizacin del proceso de limpieza y desinfeccin, por parte de los fabricantes y operarias, en una industria cosmtica por mtodo de bioluminiscencia y mtodo tradicional en los puntos crticos de control seleccionados.

2. Se defini como puntos crticos de control en la empresa de cosmticos las canecas de fabricacin, las tapas de las canecas de fabricacin y la tolva Ramaldo,

debido a que tienen mayor contacto con el producto antes de ser envasado.

3. Se determino que no existe proporcionalidad entre la Unidades Formadoras de Colonia (UFC) obtenidas por mtodo tradicional de siembra con escobill y las Unidades Relativas de Luz (URL) obtenidas por mtodo de bioluminiscencia ya que no solo se esta determinando la cuantificacin de Adenosin Trifosfato (ATP) microbiano.

4. Se logro determinar los valores de aceptacin, alerta y rechazo para los tres puntos crticos de control seleccionados por parte de la empresa de cosmticos, evidenciando valores mucho ms bajos a los manejados por la empresa.

5. Se tomara el mtodo de bioluminiscencia, adicional al mtodo tradicional, de forma continua para el control microbiolgico de superficies y de esta forma cumplir con las necesidades de la empresa para optimizar los procesos de fabricacin.

6. Con el sistema HY-LiTE 2 se logro realizar el anlisis de las superficies y conocer las condiciones de higiene en forma rpida y segura para mantener el control microbiolgico adecuado en las mismas.

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7. Se evidenciaron las UFC y las URL que estaban presentes en las superficies de los tres puntos crticos de control analizados.

8. Los valores de UFC, por mtodo tradicional, encontrados en los tres puntos crticos de control analizados fueron < 100 UFC/25cm2, valor que corresponde al limite permitido segn lo manejado por la empresa.

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9. RECOMENDACIONES

1. Utilizar los valores obtenidos en URL por el mtodo de bioluminiscencia para verificar que el proceso de limpieza y desinfeccin se llevo a cabo de forma correcta.

2. Es recomendable realizar un siguiente trabajo sobre los otros puntos crticos de control que pueda tener la empresa para optimizar aun ms los procesos de fabricacin.

3. Seguir el programa de capacitacin continua a las operarias y fabricantes sobre como deben realizar la limpieza y desinfeccin del material y equipos a utilizar, adems de concientizarlos sobre la importancia de esta actividad para la calidad del producto.

4. Comprobar el correcto manejo de las BPL por parte de los empleados como parte fundamental de la calidad en el producto final.

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48

11. ANEXOS

REGISTRO DE DATOS PARA VERIFICACION DE LIMPIEZA Y DESINFECCION POR METODO DE BIOLUMINISCENCIA Y METODO

TRADICIONAL

PUNTO CRTICO DE CONTROL:

MUESTRA N:

FECHA

HORA

DESINFECTANTE

URL

UFC/25cm2


MUESTRA N:

FECHA

HORA

DESINFECTANTE

URL

UFC/25cm2


MUESTRA N:

FECHA

HORA

DESINFECTANTE

URL

UFC/25cm2

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PRESUPUESTO

EQUIPO O MATERIAL CANTIDAD COSTO Equipo HY- LiTE2 1 unidad $15000.000

HY-LiTE2 repuestos 100

determinaciones en superficie (caja por 100

unidades)

2 cajas $2000.000

HY-LiTE2 repuestos

hisopos estriles libres de ATP (caja por 50 unidades)

3 cajas $225.000

Petrifilm Mesfilos

Aerobios (bolsa por 50 unidades)

3 bolsas $349.000

Peptona marca Merck 500g $114.000 Tween 80 100g $93.000

Miristato de Isopropilo 100g $87.000 Tubos de 16x150mm 30 tubos $12.000

Pipetas de 1ml 10 unidades $17.000 Pipetas de 5ml 10unidades $19.000

VALOR TOTAL: $ 17916.000

La compra de material y equipos para la realizacin del trabajo ha sido autorizada y suministrada por la empresa (Tecser Laboratorios).

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Desinfeccion en Una Indsutri Cosmetica