DESAROLLO DE UN PLAN EXPERIMENTAL DE DESAROLLO DE UN PLAN EXPERIMENTAL DE

MAEDI-VISNA EN CASTILLA Y LEÓNMAEDI-VISNA EN CASTILLA Y LEÓN ..

CONCLUSIÓN:CONCLUSIÓN:1.1. Se ha completando la primera fase del Plan , encaminado a diseñar un sistema diagnóstico eficaz del Maedi-Visna. De esta forma se dispondrá en Castilla y León de una serie de técnicas validadas para el diagnóstico oficial de la enfermedad.Se ha completando la primera fase del Plan , encaminado a diseñar un sistema diagnóstico eficaz del Maedi-Visna. De esta forma se dispondrá en Castilla y León de una serie de técnicas validadas para el diagnóstico oficial de la enfermedad.2.2. Con estas nuevas herramientas diagnósticas a finales del año 2009, se dispondrán de los primeros resultados del estudio de la efectividad de las medidas encaminadas a reducir el contagio intrarebaño.Con estas nuevas herramientas diagnósticas a finales del año 2009, se dispondrán de los primeros resultados del estudio de la efectividad de las medidas encaminadas a reducir el contagio intrarebaño.

MARQUÉS PRENDES, S.; GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DIEZ GALLEGO, M.; COLLAZOS MARQUÉS PRENDES, S.; GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DIEZ GALLEGO, M.; COLLAZOS MARTINEZ, J. AMARTINEZ, J. A

INTRODUCCIÓN:INTRODUCCIÓN:La puesta en marcha del programa recogido en la ORDEN AYG/861/2007, puso de manifiesto la presencia en nuestra Comunidad de rebaños ovinos con serologías positivas frente a anticuerpos del virus del Maedi-Visna muy superiores al 50% del censo.La necesidad de lograr una mejora en el estatus sanitario de las explotaciones, con el fin de garantizar en un futuro la apertura de nuevos mercados , hizo necesaria la puesta en práctica de un estudio de la dinámica de la enfermedad, que permita ir reduciendo paulatinamente la prevalencia intrarebaño (específicamente en la reposición). Dicho estudio, que se concretó en un plan experimental para el Maedi-Visna en Castilla y León, pretende profundizar en la dinámica de la enfermedad de forma que se puedan identificar aquellas pautas de manejo que garanticen , en la medida de lo posible, la obtención de corderas reposición que permitan a medio largo plazo disminuir la prevalencia de la enfermedad a niveles menores del 5%

MATERIAL Y MÉTODOS:MATERIAL Y MÉTODOS:• FACTORES OBJETO DE ESTUDIO:FACTORES OBJETO DE ESTUDIO: 1- Se pretende realizar un estudio sobre los dos factores que a priori y según la literatura científica más relevante, tienen importancia en la transmisión intrarebaño a) Contagio a través de la toma de calostro y contacto con la madre en el postparto en los primeros días de vida. b) Contagio por vía aerógena / fómites en el primer año de vida.2- Así mismo y de forma paralela, se pretende realizar un estudio de los parámetros de fiabilidad de las analíticas basadas en la técnica de ELISA disponibles en el mercado para la raza Assaf y sus condiciones de manejo. Dado que la efectividad de las medidas, se va a valorar en función del número de positivos que cada grupo presente a las técnicas de diagnóstico ELISA, se hace indispensable un estudio previo y ajuste de las mismas con respecto a su efectividad en razas criadas bajo estos sistemas productivos.3- Desarrollo y puesta a punto de un sistema de PCR capaz de ofrecer un diagnóstico de la presencia o ausencia del virus en los tejidos animales.•EXPLOTACIONES:EXPLOTACIONES:•El estudio se está realizando en 5 explotaciones de la raza Assaf. •Todas ellas pertenecen a la categoría de explotaciones con alta prevalencia al virus del Maedi-Visna.•MUESTREO Y ANALÍTICA LABORATORIAL:MUESTREO Y ANALÍTICA LABORATORIAL:Cuatro de estas explotaciones (A, B, C, D), cuya prevalencia es ser superior al 75%, se incluyeron en el estudio para la determinación de la importancia relativa de cada uno de los dos factores en la transmisión del virus. Para ello se constituyeron en cada una de las explotaciones dos lotes de corderas/os. El estudio se realiza mediante un estudio de cohortes. Estudio epidemiológico observacional, analítico y longitudinal, en el que los individuos que componen los grupos de estudio se seleccionan en función de la presencia de una determinada característica o exposición. Estos individuos no tienen la enfermedad de interés y son seguidos durante un cierto periodo de tiempo para observar la frecuencia con que la enfermedad aparece en cada uno de los grupos.

RESULTADOS:RESULTADOS:1.1. Estudio de los parámetros de fiabilidad de las analíticas basadas en la técnica de ELISA: Estudio de los parámetros de fiabilidad de las analíticas basadas en la técnica de ELISA:

Estudio ciego de concordancia de resultados finales para Maedi-Visna en el Laboratorio Regional de Sanidad Animal de León.

Estudio ciego de concordancia de resultados para Maedi-Visna en el Laboratorio Regional de Sanidad Animal de León, para los Kits de confirmación y screening

2. Puesta a punto de un PCR para el diagnóstico de Maedi-visna :2. Puesta a punto de un PCR para el diagnóstico de Maedi-visna : Estudio en suero:

Estudio en tejidos:

Explotaciones

Separación materna y Calostro

pasteurizado

Separación del resto

del rebaño

si si A.1 (+,+) no si A.2 (- ,+) si si B.1 (+,+)

no si B.2 (- ,+) si no C.1 (+, -)

no no C.2 (- , -) si no D.1 (+, -)

no no D.2 (- , -)

lotes

A

B

C

D

Se obtienen así ocho lotes de animales, correspondientes a cuatro exposiciones diferentes (+ + / - + / + - / - -) a los supuestos factores de riesgo. De esta forma podremos evaluar el riesgo relativo de contagio que las distintas prácticas ganaderas tienen para los animales jóvenes nacidos y criados en este tipo de sistema productivo.

La quinta explotación (E), cuya prevalencia está entre el 50-60%, se incluirá en el estudio de evaluación de las técnicas diagnósticas.

Positivo Negativo Dudoso TotalPositivo 142 4 0 146Negativo 7 84 2 93Dudoso 1 0 0 1

Total 150 88 2 240

"Envío A"

"En

vío

B"

Kappa: 0.878 (donde K=1 es la mayor concordancia posible y K=0 seria la esperable por puro azar) Hay que tener en cuenta que al ser el resultado “dudoso” una categoría poco definida en este caso seria mejor usar como medida de concordancia la suma de probabilidades de la diagonal principal ( 94.2%)En resumen la concordancia observada puede calificarse según el Kappa de muy buena y podría cifrase en un 95±1% en función de si se incluyen los resultados dudosos o el método elegido para calcular la concordancia.

Positivo 146 0 4 150

Negativo 3 84 1 88

Dudoso 0 0 2 2

Total 149 84 7 240

"screening Envío A"

"Con

firm

acío

n En

vío

A"

Positivo Negativo Dudoso Total

Positivo 136 0 10 146

Negativo 0 93 0 93

Dudoso 0 0 1 1

Total 136 93 11 240

"screening Envío B"

"Co

nfi

rmacío

n E

nvío

B"

Positivo Negativo Dudoso Total

Positivo 282 0 14 296

Negativo 3 177 1 181

Dudoso 0 0 3 3

Total 285 177 18 240

"screening Envío A+B"

"Co

nfi

rmac

ío

n E

nvío

A+

B"

Según se puede apreciar en las tablas, el 96,25% de los resultados de screening- confirmación coinciden. (Índice Kappa 0.924). El poder de discriminación del test de confirmación es relevante a nivel de resultados dudosos en el test de screening, ya que el 83.3% de las muestras catalogadas como dudosas son asignadas a las categorías positivo (77.7%) o negativo (5.5%) y solo el 16.7% siguen apareciendo como dudosas.En cambio su poder de discriminación no es relevante a nivel resultados positivos/ negativo en el test de screening, ya que confirma el 99.4% de los resultados de este.Por tanto parece que es una analítica cuya utilidad se circunscribiría a la asignación de los sueros dudosos en el test screening en las categorías de positivo / negativo.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

- + + - + + - - - - - ++ + + + + + - - + - + +

Nº de muestra

Resultado gag-PCR

Resultado LTR-PCR

•Se esta poniendo a punto un a PCR para la detección viral , tanto en suero como en tejidos.

•Se han realizado ensayos con dos PCR basadas en la amplificación de secuencias genéticas distintas a fin de valorar cual de las dos ofrece un mejor rendimiento.

•El estudio en suero se realizó con ovinos procedentes de una única explotación de alta prevalencia a Maedi-Visna. Las muestras procedían de animales tanto ELISA positivos como negativos.

• El estudio en tejidos se realizó a partir de muestras de ovejas procedentes de dos ganaderías, con analíticas positivas (ELISA) a Maedi-Visna en al menos dos ocasiones y/o sintomatología compatible.

Tipo de muestra LTR-PCR gag -PCR LTR-PCR gag -PCR LTR-PCR gag -PCR LTR-PCR gag -PCR LTR-PCR gag -PCR LTR-PCR gag -PCR LTR-PCR gag -PCR LTR-PCR gag -PCR

Sangre + - ND ND ND ND ND ND + - + + + - ND NDBazo + - - - - - - - - - + - + - - -

Ganglios mamarios + + + + - - + - - - + + + + + -Glándula mamaria + + + - + - - - - - + + + + - -

Ganglios mediastínicos - - + - - - + - - - + + + + + -

Cerebro - - - - - - - - - - - - - - - -Pulmón - - + + - - - - - - + + + + - -Suero

muestra 5 muestra 6 muestra 7 muestra 8muestra 1 muestra 2 muestra 3 muestra 4

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