DAL PICK –UP ALL’ EMBRYO ALL’ EMBRYO

TRANSFER

Lab. Biologia della Riproduzione - Potenza

Fisiologia del gamete maschile

Lo spermatozoo è costituito da tre parti principali:a) La testa: sede del patrimonio genetico;b) Il pezzo intermedio: sede delle attività metaboliche, è costituito da un

asse centrale formato da due cilindri concentrici, quello più internocostituito da 18 fibrille e quello più esterno da 9 fibrille;

c) La coda: organo che permette la motilità, la parte finale della codacontiene solo la parte fibrillare assiale

Fisiologia del gamete femminileLa fisiologia della cellula uovo si differisce nei suoi tre stadi

maturativi, che sono:

GVGV

Vescicola Germinale (GV): la cellula è immaturaper la fecondazione ed è ben visibile il nucleo ;

M IM I

M IIM II

Ovocita primario (MI): la cellula è immatura per lafecondazione, è iniziata la prima divisione meiotica;

Ovocita secondario (MII): la cellula è ora maturaper la fecondazione, è avvenuta la prima divisionemeiotica con conseguente segmentazione cellulareasimmetrica che porta alla formazione dell’ovocitasecondario e del 1° globulo polare;

Cause di Infertilità

Infertilità femminile

Fattore Endocrino

Fattore Tubarico

Fattore Uterino

Fattore Immunologico

• Endometriosi• Fattore cervicale• Fibromi o Miomi• Utero setto• Polipi• Sinechie uterine

• Cause infiammatorie

Infertilità maschile

Cause congenitee/o

Cause acquisite

Malformazioni dell’apparatoriproduttivo

Alterazioni nella produzionedel plasma seminale

• Cause infiammatorie• Fattori endocrini• Fattori immunologici

Anomalie:• Congenite o da difetti genetici• Indotte da varicocele• Indotte da terapie chemio -terapiche e radioterapiche

•Cause infiammatorie• Cause traumatiche

Epidemiologia dell’infertilitàSulla base della definizione, mancatoraggiungimento di una gravidanza dopo12 mesi di rapporti non protetti epossibilmente mirati, l’ incidenzadell’infertilità nella popolazione italiana èstata valutata pari al 11.3% delle coppiedi età compresa tra 25 e 44 anni. Taleincidenza tende ad aumentareprogressivamente con l'età passando dal5.6% nella fascia di età compresa tra i25 ed i 29 anni, al 11.7% nella fascia tra i30 ed i 34 anni, al 13.7 % nella fascia trai 35 ed i 39 fino al 14.7% nella fascia dii 35 ed i 39 fino al 14.7% nella fascia dietà tra i 40 ed i 44 anni.

Le cause di infertilità possono riguardareil partner maschile, quello femminile odentrambi ma in circa il 17% dei casi nonè possibile riconoscere alcuna causaprecisa alla base della condizione (formeidiotipiche). Tra le possibili cause diinfertilità si indicano essenzialmente iseguenti fattori:

• Fattore Maschile;• Fattore Femminile: derivante da

endometriosi fattore tubar. eovulatorio;• Forme Idiotipiche;• Altre Cause;

In cosa consiste la Fecondazione Assistita ?

Prelievo degli ovociti sotto controllo ecograficoPrelievo degli ovociti sotto controllo ecografico

Induzione di un’ovulazione Induzione di un’ovulazione multipla multipla

Preparazione del liquido Preparazione del liquido seminaleseminale

FIVETFIVET ICSIICSIIncubazione in vitro Incubazione in vitro

di ovociti e spermatozoi di ovociti e spermatozoi con con fertilizzazione spontaneafertilizzazione spontanea

Microiniezione di un Microiniezione di un singolosingolospermatozoospermatozoo nell’ ovocita nell’ ovocita

selezionatoselezionato

Trasferimento in utero degli Trasferimento in utero degli embrioniembrioni

Ambiente Ambiente esternoesternoSNCSNC

IpotalamoIpotalamo

IpofisiIpofisiFeedFeed--back back ultracortoultracorto

Controllo neuroendocrino della Controllo neuroendocrino della funzione riproduttivafunzione riproduttiva

Ovaio

Strutture dell’apparato riproduttivoStrutture dell’apparato riproduttivo

(Endometrio, Muco cervicale)

FSH FSH LHLH

Estrogeni Estrogeni ProgesteroneProgesterone

FeedFeed--back back lungolungo

FeedFeed--back back cortocorto

PRELIEVO OVOCITARIO (PICK -UP) �� VieneViene effettuatoeffettuato circa 36 ore circa 36 ore dopodopo l'induzionel'induzionedell'ovulazionedell'ovulazione

�� TecnicaTecnica chirurgicachirurgica con cui con cui vengonovengono aspiratiaspirati tuttitutti iifollicolifollicoli presentipresenti per via transper via trans--vaginalevaginale sotto sotto controllocontrolloecograficoecografico

�� Il Il liquidoliquido aspiratoaspirato è è inseritoinserito in in unauna serieserie di di provetteprovette

�� Il Il contenutocontenuto vieneviene esaminatoesaminato alloallo stereomicroscopiostereomicroscopio, , �� Il Il contenutocontenuto vieneviene esaminatoesaminato alloallo stereomicroscopiostereomicroscopio, , e e tuttitutti gligli ovocitiovociti recuperatirecuperati vengonovengono messimessi in in colturacoltura, , accuratamenteaccuratamente contrassegnaticontrassegnati con con ii datidati della della pazientepaziente

�� NellaNella FIVETFIVET gligli ovocitiovociti messimessi in in colturacoltura (max 3) (max 3) vengonovengono inseminatiinseminati dopodopo 33--4 ore con 4 ore con ilil liquidoliquido seminaleseminale

�� NellaNella ICSIICSI a circa 2 ore dal pick up a circa 2 ore dal pick up sisi esegueesegue lo lo screening screening ovocitarioovocitario

�� TuttiTutti gligli ovocitiovociti MATURIMATURI sovrannumerarisovrannumerari vengonovengonocrioconservaticrioconservati

Classificazione e Selezione degli ovociti

Sono cinque gli

OvocitaImmaturo

MI

VescicolaGerminale

GVGVGV

Sono cinque gli stadi

maturativi dell’ovocita:

Degenerazione

Post –Maturazione

OvocitaMaturo

MII

MI

M IM I

M IIM II

Parametri di valutazione funzionale del liquido seminale ottimale

VALORI DI RIFERIMENTO PER I PARAMETRI DEL LIQUIDO SEMINALE (WHO)

Volume ≥ 2,0 ml

pH 8,0 ≥ X ≥ 7,2

Concentrazione di spermatozoi ≥20 × 106 spermatozoi/ml

Numero totale di spermatozoi ≥40× 106 spermatozoi per campione

Motilità ≥50% con motilità progressiva

Morfologia ≥30% di forme normali

Vitalità ≥75%

Leucociti ≤1 × 106/ ml

MAR test (Mixed Antiglobulin Reaction test)

≤50% di sperm. mobili con particelle adese

Indicazione per la scelta della giusta tecnica di PMA da applicare secondo linee guida

FIVET ICSI• Patologia tubarica

acquisita o congenita;• Infertilità maschile di

grado severo;

VSVSVSVS• Infertilità maschile di

grado moderato;

• Endometriosi trattata;

• Infertilità idiopatica trattata;

• Fallimento del I livello;

• Azoospermie di varia natura;

• Mancata o ridotta fecondazione con cicli FIVET ;

• Ridotto numero di ovociti

FIVETFIVET• Fertilizzazione• In• Vitro• Embryo• Transfer

LaLa FIVETFIVET consisteconsiste nelnel farfarentrareentrare inin contattocontatto ininlaboratoriolaboratorio (in(in vitro)vitro) ii gametigametifemminilifemminili (ovociti)(ovociti) ee ii gametigametimaschilimaschili (spermatozoi)(spermatozoi)eiaculatieiaculati

ICSIICSI

• Intra• Cytoplasmatic• Sperm

Singolo spermatozoo

Ovocita

• Sperm• Injection

La ICSI comporta l’iniezione diretta di un singolo spermatozoo all’interno del citoplasma ovocitario

ICSIPerPer eseguireeseguire l’ICSIl’ICSI èè necessarionecessario rimuovererimuovere tuttetutte lele cellulecellule (dette(dettecellulecellule deldel complessocomplesso cumulocumulo -- corona)corona) cheche circondanocircondanol’ovocita,l’ovocita, ee valutarevalutare lala maturitàmaturità ovocitariaovocitaria..

La ICSI viene effettuata grazie all’utilizzo di unLa ICSI viene effettuata grazie all’utilizzo di un micromanipolatore micromanipolatore collegato ad un computer che permette di visualizza re al meglio le collegato ad un computer che permette di visualizza re al meglio le cellulecellule

Fasi eseguite al micromanipolatoreFasi eseguite al micromanipolatore

Cosa avviene dopo la fertilizzazione Cosa avviene dopo la fertilizzazione

(giorno successivo al prelievo ovocitario)(giorno successivo al prelievo ovocitario)

A A 16 16 –– 20 20 ore dall’inseminazione (FIVET o ICSI) si esegue il ore dall’inseminazione (FIVET o ICSI) si esegue il controllo della fertilizzazione (formazione dello zigot e)controllo della fertilizzazione (formazione dello zigot e)

Dopo altri 2 o 3 giorni gli embrioni che si sono sv iluppati, Dopo altri 2 o 3 giorni gli embrioni che si sono sv iluppati, vengono trasferiti nella cavità uterina della pazien te tramite vengono trasferiti nella cavità uterina della pazien te tramite catetere specifico (embryo transfer).catetere specifico (embryo transfer).

GRADI DI QUALITA’ DEGLI EMBRIONI

RIEPILOGANDO