12
Copper and zinc fractions aecting microorganisms in long-term sludge-amended soils Takashi Kunito a, * , Kazutoshi Saeki b , Shigeko Goto c , Hiroaki Hayashi c , Hiroshi Oyaizu d , Satoshi Matsumoto c a Center for Marine Environmental Studies CMES), Ehime University, Bunkyo-cho 3, Matsuyama 790-8577, Japan b Oita University, Dannoharu 700, Oita 870-1192, Japan c Department of Applied Biological Chemistry, Graduate School of Agriculture and Life Sciences, The University of Tokyo, Yayoi 1-1-1, Bunkyo-ku, Tokyo 113-8657, Japan d Department of Global Agricultural Sciences, Graduate School of Agriculture and Life Sciences, The University of Tokyo, Yayoi 1-1-1, Bunkyo-ku, Tokyo 113-8657, Japan Received 10 July 2000; received in revised form 24 February 2001; accepted 2 March 2001 Abstract The in¯uences of Zn and Cu on soil enzyme activities acid phosphatase, alkaline phosphatase, arylsulfatase, cellulase, dehy- drogenase, protease z-FLase), urease, b-D-glucosidase and b-D-fructofuranosidase invertase)) and microbial biomass carbon were investigated in agricultural soils amended with municipal sewage sludge or compost since 1978. The trace metals in the soils were fractionated using a sequential extraction method. Long-term application of the sewage sludge and composts caused accumulations of Cu and Zn in the soils, ranging from 140 to 144 and from 216 to 292 mg kg 1 , respectively. The percentage of Cu was highest in the NaOH- and HNO 3 -extractable fractions 44±51% and 38±46%, respectively), while the percentage of Zn was highest in the HNO 3 - and EDTA-extractable fractions 65±83% and 11±32%, respectively). Although the percentage of the bioavailable fractions sum of KNO 3 H 2 O-, NaOH-, and EDTA-extractable amounts) of Cu 53±64%) was higher than that of Zn 15±37%), the percentage of the most labile fractions KNO 3 H 2 O of Zn 2.1±5.9%) was larger than that of Cu 1.1±2.4%). The size of the microbial biomass carbon increased with the application of sewage sludge or compost. For some enzymes, however, the ratio of the enzyme activity to microbial biomass was lower in the soils amended with sewage sludge or compost than that in the control soil. The soil enzyme activities were more adversely aected by Zn than by Cu. From a multiple regression analysis, it was found that dehydrogenase, urease, and b-D-glucosidase activities were reduced by the KNO 3 H 2 O-extractable fraction of Zn in the soils. These microbial activities seem to be sensitive to Zn stress, indicating the possibility that they might be useful bioindicators for evaluation of the toxic eects of Zn on microorganisms in the soils. Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: Sewage sludge; Compost; Metals; Soil enzymes; Microbial biomass 1. Introduction Huge amounts of sewage sludge have been produced, especially in advanced countries. The sewage sludge contains appreciable amounts of plant nutrients espe- cially P and N) and agronomically bene®cial organic matter. The application of sewage sludge to agricultural land enables us to reduce the use of arti®cial fertilizer and to make good use of resources. Actually, the ap- plication of sewage sludge on agricultural land has been practiced in many countries McGrath et al., 1994). The sewage sludge may, however, contain potentially harmful trace metals. Hence, repeated application of the sludge can lead to the accumulation of trace metals in soils, causing adverse eects on soil microbial activity and crop productivity Baath, 1989; McGrath et al., 1994, 1995; McBride, 1998; Giller et al., 1998). It is generally accepted that accumulated trace metals reduce the amount of soil microbial biomass Brookes and McGrath, 1984; Chander et al., 1995) and various en- zyme activities Mathur and Sanderson, 1980; Kandeler et al., 1996), leading to a decrease in the functional di- versity in the soil ecosystem Kandeler et al., 1996). However, the observed eects are not consistent among sewage sludge-treated soils. Fliessbach et al. 1994) suggested that low-metal sludge applications increased Bioresource Technology 79 2001) 135±146 * Corresponding author. Tel.: +81-89-927-8553; fax: +81-89-927- 8553. E-mail address: [email protected] T. Kunito). 0960-8524/01/$ - see front matter Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S 0 9 6 0 - 8 5 2 4 0 1 ) 0 0 0 4 7 - 5

Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

������ ��� �� ���� ��� ���� �� ������������ � ����� ����������������� ����

������ ��� � ���� ��� ��� ���� �� ������ �� � �� ����� ������ ������� ��� �� �� ��� !� ���� � �

� ������ ��� ���� ������ ���� ������ ������� �� � ��������� ���������� �� ����� �� �!"��� #$�� %� ��������� &������ � � %� !� �''�(� #$�

� &�$�� ��� �� )$$��� ����*�� ��� ����� +����� ������ �� )*�������� �� ,�� �������� -�� �������� �� -����� .�� '�'�'�

���������� -���� ''��!/"�� #$�� &�$�� ��� �� +��0� )*�������� �������� +����� ������ �� )*�������� �� ,�� �������� -�� �������� �� -����� .�� '�'�'�

���������� -���� ''��!/"�� #$�

"���#�� $% &��� '%%%( ����#�� � ��#��� ���� ') *������� '%%$( ����� �� ' !���� '%%$

��������

��� �+������ �� ,� ��� �� �� ��� ����� �� # �� -��� ������� ���� ������� ������� ���� ��������� ���� ���������� �����

���������� ��� ���� -�*.���/� ������� ��0����������� ��� ��0����� ������������ -�#�� ���// ��� ������� ������ ������ 1����#�� �� �� � ������ ���� ���� ������� 1 � ������� ��1��� ������ �� ������ ���� $2345 ��� ���� �� ��� � �� ���� 1���

���� ��� �� ���� � ��6��� �� �7 ��� �� �� ���5 .���� ��� ������ �� �� �� ��1��� ������ ��� ������ � ������ �������� ���

�� �� ��� ,� � �� ����� ������ ���� $)% � $)) ��� ���� '$8 � '2' �� ���$� ������ #���5 ��� ������ ��� �� �� 1�� ����� � �� 9� �� ��� �9 :��7 ��� ���� ���� ��� -));<$= ��� :4;)8=� ������ #���/� 1��� �� ������ ��� �� ,� 1�� ����� � ��

�9 :� ��� >0�?��7 ��� ���� ���� ��� -8<;4:= ��� $$;:'=� ������ #���/5 ?� ����� �� ������ ��� �� �� ���#������ ���� ���

-��� �� �9 : ��' �� 9� ��� ��� >0�?��7 ��� ���� ����� �/ �� �� -<:;8)=/ 1�� ����� ��� �� �� ,� -$<;:3=/� ��

������ ��� �� �� ��� ����� ���� ��� ��9 : ��' � �� ,� -'5$;<52=/ 1�� ������ ��� �� �� �� -$5$;'5)=/5 ��� �� �� ��������� ������ ������ �������� 1 � �� ������ �� �� ��1��� ������ �� ������ 5 *�� ���� ������� ��1�#��� �� �� � ��

�� ����� �� # � � ������� ������ 1�� ��1�� � �� ���� ������� 1 � ��1��� ������ �� ������ ��� �� � �� ��� ��� ���5

��� ��� ����� �� # �� 1��� ���� ��#������ ���� �� �� ,� ��� �� ��5 *��� � ��� ��� ��������� �������� 1�� ����� ��

�������������� ������� ��� ��0����������� �� # �� 1��� ������� �� �� �9 : ��' ��7 ��� ���� ���� �� �� ,� � �� ����5

����� ������� �� # �� ���� � �� ���� #� � ,� � ����� ���� �� �� ������ � �� ��� ��� �� ������ ������ ��� ���

�#���� �� �� �� �7� ���� � �� ,� �� ������������ � �� ����5 � '%%$ >���#�� ������ . �5 ?�� ��� � �����#��5

1��2����3 ��1��� ������( ������ ( !� ���( ��� ������( !������ ������

� ���� ������

���� ����� � �� ��1��� ������ ��#� ���� ������������������ � ��#����� ���� ���5 ��� ��1��� ��������� ��� ���������� ����� � �� ���� �� ��� � -���������� @ ��� 9/ ��� ������������ ����A��� �������� ��5 ��� ������ �� �� ��1��� ������ � ������ �������� ������� �� � ������ �� ��� �� �� A��� ��� ������ � ���� ���� ��� �� ���������5 ?� ������ �� ������� �� �� ��1��� ������ �� ������ ���� ���� ��� �������� ��� � ���� ���� ��� -!���� � � ��5� $22)/5 ���

��1��� ������ ���� ��1�#��� ��� �� �� �� ����������� ���� �� ���5 ������ ����� �� ������ �� �� �������� ��� ���� � �� �������� �� �� ���� �� ��� ������ ������ ��#���� ���� � �� ��� ������� �� # ���� ���� ������ # � -B�� �� $242( !���� � � ��5�$22)� $22<( !�B���� $224( ����� � ��5� $224/5 C ���������� ����� �� �� �������� �� ���� �� ��� ������ �� ����� �� ��� ������� ������ -B������ ���!���� �� $24)( ������� � ��5� $22</ ��� #����� ������ �� # �� -!� ��� ��� ���������� $24%( ��������� ��5� $228/� ������ � � �������� � �� ���� ���� ��#��� � � �� ��� ������ �� -�������� � ��5� $228/5��1�#��� �� �����#�� ���� � ��� �� ����� �� �������1��� ������� ��� �� ����5 *�������� � ��5 -$22)/������ �� �� ��1��� �� ������ ������ ��� ��������

B��������� ���������� 32 -'%%$/ $:<;$)8

������������� �� ���5 ���5D E4$�42�2'3�4<<:( ��7D E4$�42�2'3�

4<<:5

�� � ������3 ��� �F���5������5��5G� -�5 ��� �/5

%28%�4<')H%$HI � ��� ���� �� �� � '%%$ >���#�� ������ . �5 ?�� ��� � �����#��5

@CCD � % 2 8 % � 4 < ' ) - % $ / % % % ) 3 � <

Page 2: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

�� ������� ������ ������ -���/ ��� �� ��� �������� �� # �5 ��1�#��� 0���� � ��5 -$223/ ���1�� �� �� �+����� �� �� ���� �� ��� �� �� ��� �������� ������ �� 1�� � � � ����� ���A��� �#�� � ����1��� ������ ���� ��1��� ������� ��� �� ����5 B�� �� ��5 -$224/ ���1�� �� �� �� ��� �� ������������ � ��� 1�� ���A��� �� �� ���� �� ��� ��#��� �� ���9� ��� ,� � �� ��1��� ������� ��� �� ���� 1 � ������ � �� �� �� ����� ����� �� �� �� ������������� �5 ������� ��� B������ -$22$�/ ����� �� �� ��� ��������� ��� �� ��1��� ��� ��� � 1��� �� ���� �1��� ����� ��� �� ����9 ��� ����,� ��� ��� � ����� ������� 1 � ��1��� ������� ������� 1 � ������� ���5C� A��� � ����� � ��������� � �� ����� �� ��

+����� �� ���� �� ��� ���� �� �� � ��� ��� ������ ��������� ���� ��� ��� � ��� ��� ���� �� ��� ���� ���� �� ��� ������������ -@������� ��� 9�������� $228(@������� � ��5� $224/5 J����� ��� ����� �� # ����#� ���� �������� � �7���� �� �+����� �� ������ ��� �� �� ������������ � ����5 ��� ��� ����������� �� � ���������� ��� �7 ���������� ������-B����� $24'( 0��� ��� 9������� $224/5 ��� �7 ����������� ������ ��� �� � ����� � � ���������������� 1��� �� ������������� ������7�� -!�.����� $23<(B����� $24'/ ��� ��� �� ��� �� # �� -������ � ��5�$242( .�������� ��� @������� $22'( 0��� ���9������� $224/5 ��� �� # �� �� ���� �7 ������������� ������ ��� ���� �� �� �� ��� ���� ��� �-�������� ��� B������ $22)/� �� -K�6�����7� $243(>#� ��� ���� ���� $22%/� ��� ���� �� ��� ->#���� ���� ���� $22%( ����� � ��5� $224�/ ������� ������� ��� ����� �� �������� �� �� �� ������-� ��� �� ��� K�6�����7� $22)( .������ ��� K��6�����7� $228( ����� � ��5� $224�/5 *�� ��������>#� ��� ���� ��� -$22%/ ������� �� �� �� ������ ��� ����� ���� ���D -/ �� ������7�� ������ �� �� -/ �� ������� 1 � �� ��� �� �� #������ �� �� ������ �� -/ �� ���� �� 1 � �� ������;���� �� � ������75 C � ���� ���1� �� �� ������ � ����� � ��� � � ���� -*������������ ���&�������� $24'/5 ���������� 1� ��� ���� ������� ��������� �� ����� 1 � �� �� ��� � ����� � �7���� ���+������ �� �� �� ��� �� �� ��� ����� �� # ��5������� ��� B������ -$22$�/ ��� *�������� � ��5

-$22)/ ��������� �� �� �� � �� ������� ������������ -���/ � � �� ��� ������ ������ - ����/ 1�� ������� ���� �� ��� �#���� �� �� �+����� �� ������ ��� �� �� ������������ � ���� ������� 1 ���1��� ������5 ��� ���H ���� �� � � ����������� ���� � ����� � �� ���� � �� ������ �� �� ��� �� �� ��������� ������ �� ��� � ��+�� �� �+����� ������ �� �� ����������� ��� �� �� ������� ������5�������� �� �� � �� ����� �� # � � ������������� ��� �� ���� �� � ���� #� ���7 ��� �#���� ����#������ �� � ���� -�������� ��� ��������� $223(

?����� ��� 9������ $228� $223/5 ��� ������ ����� ������� ������ 1 � ��� ������ �� �� ��� �������� �� # �� 1 � ������� ������ ��� ���#��� ���� ���� #� ���� �� �� ���� �� �� ��� ���� �� ��� � ��� ����� �� # � �� ������� ������ ����������� � �����5����� �� ��� � ���� ��� ������ � #����� ����� ���

� � ���� ��� 1 � #����� ��� �������� �( ��������� �� � �� ������ �� ��� � ���� ����� ���#�� � ���������7 ��� �#���� �� ��� �+����� �� ��� ������������� -L��� ��� B������� $223( ��� � � ��5�$223���� $222���/5 �� �� �� ��1 � ��� � ��#� ���������� �� � ��#��� �� ���� ������ �� 1��� ������������� �� ��� ���� �� �� ����� � ���� -��� � � ��5�$224/� ����� ���� � ���� ��#� ���� ������ �� �������� -��� � ��#�1 �� "��� -$22)//5 ?���� ��� ���� �� �� ���� ���� �� ���� �� ��� � ������ ����� �������� ���� �� ������������ � �� ���� �������� 1 � ��1��� ������5 ��1�#��� #��� � �� 1��� ������� �� �#������ � �� �������� � ��� ��� �� �����G�� 5C� �� ������ � ���� ��� ������� 1��� ������ �� ����

������� ������ � �7������ �� ��� �( �� ��� ,� ����������� �� � ���� ���� -���� � ��5� $22'( �� �� ��5� $223/ ��� � �� ������ �� �� ������� ��1��������� �� ������ ���� $2345 ? ��6��� �� �7 ��� �� ����6�� 1�� ���� � ������ �� ������� ����� �� �� ���� �� ��� � �� ����5 ��#���� ��� ����� �� # ����� ��� � � �� ������������ ����� �� �� ���� �� ������ � -�� 9� @� ��� �/ -��� � ��5� $23<( 0�� ������� ���� $22:/� 1������ �� ������� ������ � ����� � � ����� �����#�� ��� ���� ������ � -&���������� .���� $24$/5 ������ ���� ������ ��� 1��� ��������� � ������ �� �+����� �� �� ����� �� �� ������ ��� �� �� ������������ �� ��� ���������5

� ����� �

(4'4 ����

��� ������� 1��� ������ �� � &��� $223 ���� ��������� ������ -%;$< ��/ � �� �7������ �� ��� ����� �� � �� >7������ �� *��� A��� � ������ � ����� M�#��� � �� �����5 ��� �7������ �� ��� � ������� ����� � ����� ��� A��� � ��� � ������ � �� �����#�� �� �� �� ��� ���� ��1��� ������5 ��� ���� ������ ��� 1�� )�<� 8% �'5 ��� ��� �� �� �7������ ��A��� 1�� � ���� �������� �����A�� �� ���� !����������� -M�0? ��� ��7�����/5 ��� ��� �7 ��� 1������� ���� -�./5 ��� ��1��� ������ �� ������ ������� ������ 1�� �������� ���� �� ������ �� $234-���� � ��5� $22'( �� � � ��5� $223/5 ����� ��� � ������� ������� 1�� �������� -���� � ������ ��� �������� ��� � 1� ��/ ���� �� ������ �� $2345 ��� �� ���1��� ����� �� �� ���� � ��5 -$22'/5

$:8 -4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/

Page 3: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

��� ��� ��� ��� -��� ��� ��� / ��� ����#��������� ��� ��� 1�� �������� ���� �� ������ ��$24% � �� �� � �� %5)4 ���$ ���$ �� 9� %53' ���$ ���$ �� @' <� ��� %58) ��

�$ ���$ �� �' 5 ������� ������ -0�/ ��� ����#�� � ���� ��1��� ���������� ���� � � -���� @����� ���� &����/ 1�� ��������� ��� ���� ����� ���� $234 �� $24$ � �� �� � ��'<254 ���$ ���$5 ������� ��� ��� 1�� ������ �� �� 0� ��� �� �� �� ����� ��� �� �� ��1��� ������������ ��5 ��� ��� ���� ������ -��/ ��� ����#��� ������ ���� ?� � � � -?� � @����� ���� &����/ 1�� �������� ���� $234 � �� �� � �� 4'5< ���$ ���$5 ��� ������ 1�� �������� ���� � �7� ��� �� ��1��� ������ ��� ��� �����5 ��� ��1��� ������ -��/ ��� ����#�� ������ ���� ����� � �-N����� � @����� ���� &����/� 1��� 1�� ������������ � �7 ��� �� ��1��� ������ ��� ��1��� � 1���������� ���� $234 � �� �� � �� 335' ���$ ���$5��� ������ #� ����� �� �� ������ �� ������ ������ 1�� '45$ ��� �� 0� ��� �'3% �'�� )'5: ��� �� �� ��� � ��� :258 ��� �� �� ��� 5 ��������� �� �� �� ��1��� ������ ��� ������ � ������1� � ����� $5 ��� ������ �� ��� �� ,� ��� ��� �� ������ ��� �� �� ��� �� 1��� ��1�� ��� �� ���� ������ �� ��� �� ������ � � &���� -,�D4:< �� ���$ ��� ��D '<%58 �� ���$� -�� � � ��5�$223/5 ��� � �� ������ �� �� �� ��� 1�� �#���� ������ �� ������ #� ����� � �� �� ������ �� ������� ��� �� ������ �� ��� ���1� � ����� $5 �������� ������� 1��� ������ �� ���� �� �� ��� � ����� ��� 5 ��� ��� ������ � - ����/� ��� � ��9 -�� ���9/ ��� ���1� � ����� '5 ��� �� 1���� ������ ���� � $D'5< �� � �� ���� ��1� ��5 �������� ��� ���� ��� �� ���9 ��� �� � 1��� ���������1 � � 9��������� -����� ������� ?��������������� 9�2%?/5 ��� ������ ��� �� 1� �� ��� �� 1�� ����� � ��� ���� 1��� �������� ������ ����:3= � )$=5

(4(4 ��� �� ��������� �� ����

��� �� ��� ,� � ' � ��� ������� 1��� ���� ��� ���� �� ��6��� �� �7 ��� �� ��������� �� >������� ��5 -$24'/ ��� ���� � � ��5 -$24'/5 ��� �7 ��� ����������� �� ��� �� �����1�� ��6��� ���� ������ ������� � ��� �7 ��� �� ���D %5< � �9 :� $8 �( �� ����1� ��� ' � -�7 ��� ���� ��� ��� ������ �7 ��� �� �/(%5< � 9� �� $8 �( %5%< � 9�'>0�?� 8 �( ) � �9 :�$8 � � 4%�5 ?������� � ���� � � ��5 -$24'/� ������� �� �� �� �7 ��� �� �� � �#�� �7 ��� �� ������ �� '< � 1�� ������� �� �������� � �� �����1���6�� ��D

!� �� �7 ��� �� ���� � ���� �� � � � '<� �� �� �

1���� � � �� ������ �� �� ��� ��$� �� �� �� �� � ���7 ��� �� ���� ��( �� � �� ������ �� �� ��� ��$� �� �� �� �� � �� ���� �� �7 ��� �� � �� �������� � ���� �� ��6�����( ���� � �� ���� �� ���� �� -�/ �������#�� � �� ������ �7 ��� �� ���� �� �������� ���5B������ �� ������ �� ��� �� �� 1� ����7 ��� �������� �� 1��� �7 ������ ��1� �� ���� �� �7 ��� �� 1 ��9 : �����1�� �� �� ���� 1� �� 1�� ������� ���1�� �������� �� �� �� �9 : ��' ���� ��5 C � �7���� �� �� 1� ����������� ������� ������� ������ � ��� ��� ���� �� ������� ����� �� �� ��� ������� �1 � �� ��6��� �� �7 ��� �� �� �9 : ��' � 9� ��>0�?� ��� �9 :� ������ #��� -.������ � ��5� $24)/5.������ � ��5 -$24)/ ���� ������ �� �� �� A�� �������� ��� ��9 : ��' � 9� �� ��� >0�?/ ��� ����#������5 ��� ���� �� �� �� ���� �� ��� � ������ ���� �� �7 ��� �� ������ �������� -�5�5� �9 : ��' �9� �/ �� ��� �� �� �7��� �� ��� ���������� ���� ��-�5�5� 1� ����������� ������/ � �� ������ � ���� �������� 1�� ����������� �� �� ��6��� �� �7 ��� ���� ���� 1���� �� ���� � ������ �� ������� ���� # ��� �� �� ��� �� ��� ��� � ��#��� �� ��� ��� ��� ������� � ���� ������ ��� �� ��� � �� ���� -������ ���

����� $

@����� �� �� ��1��� ������ -���� � ��5� $22'( �� � � ��5� $223/

@��

0� �� ��

*��� �� ��1��� ������ 0��� ������ "�� ���� ������ ��1��� ������

*����� � �� -?������� ���� ��/ 9� N�� N��

�������� ������ ��� ��� ����� ������� @������ @������

?�� #� 9��� "�� ���� ��1���

����' � 9?� 85< 85$

�� ���� � ���$ 9? '<: )%$

�� ���9 � ���$ 9? $352 '$5%

,� �� ���$� :''% 8)8 838

�� �� ���$� ):' $%) $8$

�� �� ������ ��

,� � ��' ::< $%$ 225$

�� � ��' )<5% $85: ':58

�9� �������5�?#����� ������ �� ��5

-4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/ $:3

Page 4: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

��������� $244( "���� $22)( ��� � � ��5� $224/5 >����� �� 1�� �� ������ 1 � �� � ��� ������ �� ����� ���� �� -������� ??�84%/5 ?�� �� � 1��� ������ �� � �� �#������ -$$%��/ ��� ��� ��� �� 5 ����� ����������� � 1��� ���� � ����� �5 C� �� ������ � ���� �� ��� �� �� �� �� ������ �� ��� �� ���� ���� �� 1���������� �� �� � �� ������ �� �� � �� ���5

(4�4 ��� ��8� � ������

��� ���������� 1��� �����1�� �� �������� �� ����� ��� -$24'/ ��� ��� ������� ���� ������� �������� ���� ��������� ���� ��� ������� ��� �� ������ -$22'/��� ���������� ��0������������ ��� ��0����� ������������� -�#�� ���/5 ?�� ������� ��� �� # � 1�� ��������� 1 � $�� �������� ������� � �� �� ���� �� � ���� ���A�� ��#����� ����� -�� 85</� ������� �������� ��� 1 � $�� �������� ������� � ��� � ���A�� ���#����� ����� -�� $$/� ��������� ��� 1 � $�� ������������� �� ������ 1 � ����� ��������� 1 � �����7��� ������������ ����� -�!�/� ��0����� ������������ -��#�� ���/ 1 � �������� ��� ��0����������� 1 � $��� �������������������5 0������������ 1�� ������� �� �� �� ��� �� #�� !��� ��� ������� -$22$/ � 1������� �� � ������ -C9�/ 1�� ���� �� �� ���� �� �5������� ��� B������ -$22$�/ ����� �� �� ���#�� �� �� ��#������� �� �� ��� ����� �� �� ��� ������ 1��� ������������� �� # � 1�� �������� ���� �������� � ������ ������� �� �� ���� �� �5 C� ��� ��� ��� ��� �� �� ����� ��#������� �� �� 1�� �����#��� �� ������������� ����� ���� C9� �� �� ���� �� �-?����� ��� 9������ $228( ?����� ��� 9������$223/5 @�� ���� -�*.���/ �� # � 1�� �������� �� ���� ��� �� L� ����� ��� ������ -$22:/ ���� �������7����������.��������������.������� -�*./ �� ��

���� �� �5 ?�� ���� #����� 1��� �� ������ ���� A#������� �� ���� ���� ��� ��� �7������� �� ������ #����� ��0� ��� ���� ��� � ����� :5

(474 ����0� 0� �� ��0��

!������ ������ � � �� ��� 1�� �������� �� ������������ ����� ��;�7 ��� �� �� ��� -J���� � ��5�$243/5 ?������� � ?����� ��� 9����� -$228/� ����� ������� 1��� ��������� �� ��� ��� 1��� � '<���� �� ��G�� ��� � 8%= �� �� 1� �� ������ ����� �5��� ��� 1�� ��� ����� �� 1 � � ���������� ����������� ��� ') � � '<�� ��� �7 ��� �� 1 � %5< � �'� )��� :% ��5 ��� ��� ������� ������ � -���/ 1��������� �� ���� �� �6�� ��

��� ��� ��$� � '�%)� ���

1���� ��� -����� �� � ��� ��$� �7 ��� �� �� %5<� �'� ) ���� �� ����� �� ���/� -����� �� ���� ��$� �7 ��� �� �� %5< � �'� ) ���� �� ���������� �� ���/ -C������� $22'/5 ��� ����� � �� ������� � �� �7 ��� � 1��� �������� ���� �� ������ ������������� -������� � ��<%%%/5 ����� 1��� �� ������� ����� � ��� ���� ��� ��� �7������� �� ������ #����� ��0� ��� ���� ��� � ����� :5

(4"4 ������� ������

0� � ��� ��� �� ��� ������� �� � $'D) ��� � �: ��� �� 1��� ���� � �� � � � ��� ��������5 ? � ��1����� ��� ����� ��������� ������� 1�� ��������� ��#�� �� � �� ����� �� �� ��� ���������� �� ��� ������ �� # �� �� ������ � ��� �� � � �� ����5 C� ���������� #������� �� ���A��� � � � %�%< 1����7������ ���� �� ��������� �6�� ���5 ?�� �� ����

����� '

��� ������ ��

@��

��� ��� 0� �� ��

����' � )52� %5'�� <5<� %5'� 85:� %5$� 85)� %5$� ���� � ���$ )3� $� <:� '� 8'� %� 82� $��� ���9 � ���$ )5'� %5$� <5%� %5%� 85%� %5$� 858� %5'������� ���� �� �� ���$

�9 : ��' $5:� %5'� -$5$/� $58� %5:� -$5$/ :5)� %53� -'5)/ '52� %5)� -'5$/

9� � <:5%� '53� -)<5%/ 3:54� 354� -<$5)/ 8'52� :58� -):54/ 8'53� 453��� -))53/

>0�? 253� %5:� -45'/ $)5:� $5)� -$%5%/ $85:� %53� -$$5)/ $<54� '5'�� -$$5:/

�9 : <:53� <5$�� -)<53/ <:54� $58� -:35</ 8%52� $53� -)'5)/ <453� %5<� -)$52/

��� $$4� 3� $))� 2� $))� )� $)%� $$�,�� ���� �� �� ���$

�9 : ��' 85%� '5:� -<52/ $%54� '5$� -<5%/ 85'� '5%� -'5$/ <5<� %53� -'5$/

9� � %52� %5)� -%52/ $5:� %5$� -%58/ :5<� %5$� -$5'/ '58� %5'� -$5%/

>0�? $%54� $5:� -$%58/ <)5)� $%53� -'<5$/ 2)5:� $'58� -:'5:/ 4'5$� $%5'� -:$54/

�9 : 4)5)� <5%� -4'58/ $<%� 4� -825:/ $44� $8� -8)5)/ $84� :� -8<5$/

��� $%'� 3� '$8� $3� '2'� '4� '<4� 2��"�1 ������� �����1�� �� �� ���� �� �� � � ��� ������ � ��� �� ���A��� �� ������ � � � %�%<5�9����� � ����� ���� � �� �7 ��� �� ������ ��� �� �� �� ��5

$:4 -4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/

Page 5: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

� � � �� 1��� �7��� �� �� �� ������� �"C��?�-����� ���#�� "������� C������ ��� &����/5

� ������� �� ���������

�4'4 ��� �� ��������� �� ��$$�� �� 8��

C� �� ���� ������� 1 � ��1��� ������ �� ������ � �� ����� � �� ���� ��� �� ���9 1��� ���A��� ������� ��� ���� �� �� ��� ��� ���� -� � %�%<( �����'/5 ��� � �� ����� �� �� ��� ,� 1�� ���� �� � ������ ������� 1 � �� ��1��� ������ �� ������ ���� �� ��� ��� ����5 ��� � �� ����� �� ,� � ����� ��� ��� �� �� ������ �������� �� �7������ ������� -���� � ��5� $22'/5 ��� � �� ,� ������ �� ���� �� ��� �� ��� � �������� ��������� ��� ������� ��#����� �� :'' ��� '8% �� ���$ � $242� ������ #���-���� � ��5� $22'/� 1��� 1��� ���������� � ���� � �� ������ � ���5 ��� � �� ,� � �� 0� ��� ��������������� � '33 �� ���$ � $24$ -���� � ��5� $22'/ ������������ ��������� � '$8 �� ���$ � $223 -����� '/5��� ������� +�� �� �� �� �� 1�� ���� ������� ��� �� �� ,�5 ��� ������ �� �� �� � �� �� � ��� ��� � ������� ������ ���� �� ���� $234 -���� � ��5� $22'/5 C ������ �� �� �� �� �� � ��� �� ��� -�5�5� ��� @�� ���9/ ����� �� �� �� �� �� � ��� �� �� ���#���������� ��� ��� �� ������� � �� �� ��� ���#�� ���� ����� �� �� ��1��� ������ �� ������ 1�� �����5 ���,� ��� �� 1�� ���� ����� ��� �� �� ��� �� � ��� ���� ������ ��� ������ ������� -����� $/� ����� �� �

� ���� �� ������� � ,� ��� �� � �� ���� �������1 � �� ��1��� ������ �� ������ 5��� �� ��� �� ���� ��� ����� ����� � �� �� ���

����� ����� ��� �9 : ��' ���� ��� >0�?���� ��� �� � ��� 1� ����5 ��� 0� ��� ��� �� ����� ����� �� 9� ����5 ��� 0� ��� ���1�� �� ����� ����� �� �9 : ��' �,�5 ��� �� ��� �� ���� ��� ���������� � �� ,� � �� � �� 9� � ��� >0�? ���� ��� ��� �� � ��� 1� ����5 ��� ������ ��� �� �� �7 ��� ��1 � �� � 9� � ��� �9 : 1�� ��1��� #��� ���-����� '/5 ��� ��� �� �� ���� ���#������ �� ����� ���� �9 : ��' �� 9� �� ��� >0�?���� �7������<%= �� �� � �� �� ��� �� � ��� �� ��� �������5 ��������� ������ �� �������� �� ������ ��� �� �� � ��9� � ���� ��5 ����� ����� ��� #��� ����� �� 1 � ���� �� � ��� ����� � -���� � � ��5� $24'( ��� �������� $22$( @�� �� ��� ?�������� $223/5 C � 1������1� �� � ����� ����� �� �� � ������ �� 1 � �������� ���� �� � ���� ��� ������ � -����� ���� ���� $24)( ���� ��� ����� $22:( ���� � ��5�$22:/5��� �� ��� �� �� ,� ����� �� ���� ���� ��� 1��

6� � ������ ���� �� �� �� -����� '/5 ��� ��� �� �� ���� ���#������ ,� ���� ��� 1�� �<%= � ��� ����������5 ��� ������ ������ �� �������� �� ������ ���� �� ,� � �� >0�? ���� ��5 ����� ����� 1��� ����� ���� �������� 1 � ���� �� � ��� ����� � -���� �� ��5� $24'( .������ � ��5� $24)( ����� � ��5� $24)(��� ��� ����� $22$( @�� �� ��� ?�������� $223/5 C ���������� ����� �� �� � ���A��� ����� �� ,� ��������� �� *�;!� �7��� � ���� ��� ������ �

����� :

��� ����� �� # �� ��� ������� ������ ��

@��

��� ��� 0� �� ��

?�� ������� ��� -���� $�� �������� ���$ ��$/ <53� $5'� <5$� %5)� 45'� %5)� 45:� %5'�?�� ������� ���H��� -���� $�� �������� ��

�$ ��$��� ��� ��$/ :25'� $'5)�� ''53� '5'� $25:� :5%�� $<5:� '53�

?������ ������� ��� -���� $�� �������� ���$ ��$/ '5:� %5'� $53� %5'� )5'� %5)� :54� %5<�?������ ������� ���H��� -���� $�� �������� ��

�$ ��$H�� ��� ��$/ $35)� $%5'� 354� $5'� 252� '5$� 35$� $53�?�������� ��� -���� $�� �������� ���$ ��$/ %5$'� %5%'� %5'2� %5%:� %524� %5$3� $5'� %5'�?�������� ���H��� %52� %5:� $5:� %5'� '5:� %5)� '5:� %5'�-���� $�� �������� ���$ ��$H �� ��� �

�$/��������� -���� ������� ���$ ') ��$/ $58� %58�� $5<� %5$� $53� %5'� '5<� %58����������H��� -���� ������� ��

�$ ') ��$H�� ��� ��$/ $%54� :5:�� 852� $5$� )5%� %5'� )54� $52��0������������ -���� C9�* ���$ ' ��$/ %5:<� %5%:� %5:8� %5%3� %54%� %5$%� $5$� %5%�0������������H��� -���� C9�* ��

�$ ' ��$H�� ��� ��$/ '58� $5'� $58� %5)� $52� %5$� '5%� %5)�@�� ���� -���� ������ ���$ < ��$/ )52� %53� 352� $53� $'58� $5:� $$5:� %53�@�� ����H��� -���� ������ ��

�$ < ��$H�� ��� ��$/ :)5<� $:5:� :<58� 253� '254� <58� '%52� )5)�M����� -���� 9�) ��

�$ < ��$/ <5:� )53� )53� :53� $358� 454� '854� )5%�M�����H��� -���� 9�) ��

�$ < ��$H�� ��� ��$/ '35:� ':52� ''5%� $45$� :253� $<54� <%5<� $<5)���0����������� -���� $�� �������� ���$ ��$/ $5$<� %5:'� %538� %5%4� %533� %5%:� %54'� %5$%����0�����������H��� -���� $�� �������� ��

�$ ��$H�� ��� ��$/ 354� '5:� :5)� %58� $54� %5'� $5<� %5)���0�*��� ������������ -���� ������� ���$ ') ��$/ 252� %5)� $%5:� %5:� $%5:� %5'� $%5%� %5'���0�*��� ������������H��� -���� ������� ��

�$ ') ��$��� ��� � �$/ 3:54� )%5:�� )85'� )5<� ')5$� '53� $458� :5'���� ��� ��� ��$� $<45%� 8<58� '')5'� '$5)� ):%5%� <85<� <<$58� $%:5<����� ���� -�� ��� �

�$ ����/ :5)� $5<� )5:� %5:�� 35%� $5%� 45%� $5<���"�1 ������� �����1�� �� �� ���� �� �� ��� � ��� ������� ������ � ��� �� ���A��� �� ������ � � � %�%<5

-4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/ $:2

Page 6: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

-����� ��� � ���� $24)( ���� ��� ����� $22:(���� � ��5� $22:/5 ��� ������ ��� �� ,� � ���9 : ��' ���� �� 1�� ����� � �� ��� ��� ��� � �� 0� ���� ��� � �� � ��� ���� -����� '/5 ��� ��� �� � ��� ���� � �� ��1 �� �� �� ��� ��� ��� �� 0����� -����� '/5 ��� ������ �� �� ��� : � �� 1� ���� $242 ��� ��� � ���#�� �� ����� �� � � �� �� <5: ��� �� ��� ��� ��� � �� 85) ��� �� 0�� �� 85: ��� �� ������ �� <52 ��� �� �� ��� � � $22% -�� � � ��5� $223/5B� &��� $223� �� �� ��������� � �� 0� ��� � ���� ��85) � <5<5 ��� �� � �� ��� ��� ��� � ���� �� ������������� <5: � )52� 1��� 1�� �� ��1�� #���� ����� ������5 ����� �� #����� � �� �� ��� �� ���� ��� � �� ��� ��� ���� ��� ��#� ���� ��� � �� ��� �� ����1��� ������ 1 � �� 85< -��/ ��� 85$ -��/ -����� $/5��� ��� � �������� ���� ,� ��� �� � �� ����-"���� $22)/5 ��� ��� ���� -$22$/ ���� ����� �� �� ��� � ����� �� ������ ��� �� ,� � �� �9 : ��' ���� �� ��� ������� � �� 9� � ���� �� � �� ����5.������ ��� �� ��� �� ���� ���� � ��� ����� �� ������ �� �� �� ��� ���� ���� �� �� ��� �� � ����������� ���� ��5 ���� � ��5 -$22'/ ����� �� ������������ ,� ���1�� ������� ��1� �� ��� ���A�� � �� 0����� ��� �� ��� �� ��� �� ����� �� � � ������ �7 �� � �� �� ��� 5 ���� �� �� �� �� ��� � ���� $% �������� ������������ ,� ��� �� � ��#� ��1� ���� '% ��5��� ������ �� �� �� �� �9 : ��' ���� �� ��

�� ���� �� ��� �������� �� ���� �� �� � �� ����� �� �� �� �� ���� �� �� �� #���� � �� ���5 ���A��� �+������ �� �� �� ��� �� � �� ����� �� �� �� ���� �� ����� �� �9 : ��' ��7 ��� ���� �� �� 1�������� � �� ������ � ��� -*�5 $/5 ��� �� � ���9 : ��' �,� � � �� ,� ���������� 1��� �� �� �

�� �9 : ��' ��� � � �� �� �������� 1 � �� �������� � ��5 ����� ����� � ���� ������ ��� ��#����� ��� � �� �������� � �� �� ���O ������ �P�� �� ��� ������� ������ �� �� -� !/5 ��� ��� B����-$24%/ ����� �� � ����� �� � �� ���� �� � ��� 1 ��������� ��� ������� ������ �� �� 1�� �������� � ����� �� ��#��� ��� ������ � ���� ��;� ! ������7��5@��A � ��5 -$233/ ��� ����� -$24$/ ������ �� �� � ! ������ � �������� 1 � ��5 C� ��� ��� � ������ �� �� ������� ,� �7� �� �� �� ���� �� -*� �#� ��� 9���� $223/5 ���� � ���� ���� ��#����� �� ������� �� ��� �� ������� �� ��� 1��� ���A��� �� �+������� �� �� � �� ����� � �� �� ��� ��� �� �� #������ �� ���� -!�.���� ��� ���1����� $23:( ���#� � ��5�$223( !�B��� � ��5� $223( ���#� � ��5� $224( ��� �� ��5� $222�/5

�4(4 �9���� �� ��2*� ����*� �� ��� ���0� $��$�����

!�� �� �� ��� ����� �� # �� ��� ������ � 1�������� � �� ���� ������� 1 � ��1��� ������ �������� ��� � �� ��� ��� ��� -����� :/5 ?���� ��� �� �� �� � �� �� ����� �� # � � ��� 1�� �� ���������� ���A��� �� �� �� ��� �� �� ��1��� ������ �������� 5 ������ 1�� �7��� �� �� �� ��#���� ���� ��� ���� �� ��� ���� �� ��1��� ������ �� ������ 1���������� ��� �� ����A��� �� � ���� ���� � �� �� ���������� �� # �� ��� �� ������ �� � �� ������ � ���5 ��� �� ��0����������� �� # � 1�� �� ����� � �� ��� ��� ��� �#�� 1 � �� ��1�� ����� �� ������� �� �� -����� '/� ������ � �� ����� �� � ����0����������� �� # � � ��� � �� ���5 ��� ����� ����� �� ������ �� � �� �� ����� �� # � � ������ ���� ������� �� �� � �� �� ����� �� # � � ��������� ������ � ���1� � �� ���������� �� �� ���-*�������� � ��5� $22)( ?����� ��� 9������ $228�$223/5!��� ���A��� ���� ������ 1��� ����� ����� ��

��� ������ ������#�� -����� )/5 ���A��� �������� ��� ���� �7� �� �� 1��� �� ��� ����� �� # �� ��� ���� ��� ���5 C 1�� #��� ����� �� �� ��� ������� # �� ��� ��� �������� 1 � �� ���� ���#������ �� ��1��� ������ ��� ������ �� ����� �� ��*������������ ��� 0�� -$24:/ ��� 0��� ��� ���� ���� -$228���� $223/5 *������������ ��� 0�� -$24:/������� �� �� ��� #� ���� ������ ����� ��� ������ �� # �� 1��� ��� � �� ��� �� �� ��#�� ������� �� # � ������� 1 � �� ���� ��� �� � ������5 ��1�#��� ���� ��0����������� ��� �� ��0����� ������������ �� # �� �� �� ������� 1 � ��������� � ����� �� � ��� ����� �� # ��� ��� ���� �� ���� -����� )/5 ��� 1���� ������ �� ������� �� �� ��0����������� �� # � 1�� ������ ��� � ���� �� ��� ���#�� ���� �� ��� �� �� ��1��� �������� ������ 5

*�5 $5 "��� ����� �� 1��� �� ��� �� � �� �9 : ��' ��� �� �

� �� �� ��5 -�/ ,� �� � '�:<� $%�%�:'�� � � �%�482�( -�/ ��

�� � %�%%%2'� $%%�''�� � � %�4)3�5

$)% -4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/

Page 7: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

�4�4 ���� ������� �� ��� $��$����� �:�����* ���0� $��$�����

��� ����� �� # � ��� ��� ��� �� ��� �� ������ �� �� �� � �� ��#�� �� ���� �� �� ��� ���� �� ���� �� ��1��� ������5 L� �� ������ �� ���� �������� 1��� �� ���#������ �� �� ���� ��� ��� �� ��� � ���� �� � ��� ��� ����� �� # �� � ��� -����� </1��� ��� ���� #� ����� ��� �#���� �� ���� �� �� �7� � � ��� ������������ -������� ��� B�������$22$�( *�������� � ��5� $22)( ?����� ��� 9������$228� $223( �������� ��� ��������� $223/5 !��� ������ �� # �� ��� ��� 1��� ��� #��� ������� �� 1 � �� �� �� ���� ��� � �� ����5 ����� ���� ������ ����� ��� � �� ������� � �� � �� ���� �� ��� ��������� �� �� 1 � �� ��� �� �� ��1��� ������-����� '/ ���H�� �� �������� �� �� ���� �� �� ����� ��� 1 � � ��� ��� ������ ��5 *�� �7������ ������ ���� �9 :� �' ���� >0�?���� 9� ��,� ���>0�?�,�� 1��� ����� ������� �� 1 � ���� ��� ��-����� 8/5 C� ��� ��� � ��� �� �� ��� ����� �� # �� � ��� �� �� 1��� ���� #��� ������� �� 1 � ������� �� �� �� ���5 ���A��� ���� #� ������� ���1 � �� �� ���� ��� 1��� ����� ��� ��� ������� ������� ������� ���H���� ������� ������� ���H���� ����������H���� ��0������������ ��0�����������H���� �����0����� ������������H��� -����� </5 ?�� � ��� �� �������� �� �� � �� ����� �� # �� � ���� ����� ���� 1��� ��� #� ���� ������ �� 1��� ����� ��� ����� �� # �� -����� </5 ��� ��� #� �������� ��� �� 1��� �� ��� ����� �� # �� 1����������� ��� � �� � ���� ��� #� ������� �� �� 1������ ��� �� �� � %�428�5 L� ������ �� ��� � ��

�� �������� �� ����� �� # �� ����� �� �� ���� #�������� �� �� 1��� �� ��� �� �� � �� ����� ��� # �� � ��� ��� ��� ��� ������ �7��� ��� ���������� ���5B� � ��� ��� ���H ���� 1��� �� ���� #��� ����

���� �� 1 � ��� �� �� �� �� ���� ��� �� � %�%<�� ����+� �� 1 � ���#��� ����� � -B������ ��� !���� ��$24)( ������� ��� B������� $22$�( ������� � ��5�$22</5 ��1�#��� ���� ����������� ���� ����� �� ����������#� ��� -C���� � ��5� $228( ��� � � ��5� $222�/5? .����� �� -M�/� �� ��1�� �����#�� ��#���� ���� ������ �� ��� -. ?>��/ �� ,� ��� �� 1��� '4$ ���$<% �� ���$ ��� ��� �� ��� ������� ������� ������� #��� -!���� � � ��5� $22</� 1��� 1��� ����� ��� ���� � �� ������ � ��� �7��� ��� �� ,������ � �� �� ��� -����� '/5 B������ �� .������ �� ��� ������ �� -����� ����( ����� :=( ��� 85</1��� ����� � ���� �� �� ���� � �� ������ � ���� 1���� �� �7��� �� �� �� ������� ����� �� ������ ��� 1��� ����� � �� � ����5 ������ 1� ������ �� ��� ��� �� ��#� ���� ��#������ ���� �� �� ������ ��� � �� ������ � ���5 *�������� � ��5 -$22)/ ���������� �� �� ��1 �� �� ������ ��� ����A��� ���� � �����5L� �7����� �� ���� � �� �� ���� �� �� ����� ���

�� ��� ������ �� �� �� ������� �� # �� ��� �� ������� � �� ������� ������ � �� ���� ���� ��� ��1�� ��� ��� ��������� �������5 ��� �� �� ��������� ��� �� ������� 1��� ���#������ �� �� #�������9 : ��' �� 9� ��� ��� >0�?����� ���/5 ������ ����� �� # ��� �������������� ������� ��� ��0������������ 1��� ����� � �� ��#������ ���� �� �� ���� ���5 ��� ����� � �� ���� 1��� �� �����1�5

����� )

������� �� �� �7 ��� �� 1��� ��� ����� �� # ��� ������� ��� ��� ������ ��?������

�����

��� ���

?����

����� ���

��������� 0����

���������

@�� ���� M����� ��0������������

��0�*��� ��

�����������

��� �� ���� �� ���9

?��

������� ���

%543) %548) %5<)' %543$ %54$< %54%4 �%5%4% %5%88 %548% %54)$ %54%8 %54$4

?������

������� ���

%54): %5)2$ %54)4 %54%) %5822 �%5':% %5%:% %5388 %532) %533: %534<

?�������� ��� %5<<< %5282 %54') %548) �%5)$< %5$'$ %52<< %52:' %52<< %523'

��������� %5842 %5)'$ %5384 �%5%'$ �%5'8< %5<84 %5)24 %5<4' %5<8'

0������������ %534$ %52:< �%5'44 %5%)3 %52:4 %5438 %52:3 %52:8

@�� ���� %583) �%5):8 %5:<3 %5348 %52)3 %54$2 %543<

M����� �%5$34 �%5%%3 %548% %53<3 %54:: %54:)

��0�����������

�%5%8< �%5:': �%5<%) �%5<:3 �%5<)3

��0�*��� �������������

%5$)4 %5'43 %5%82 %5$<<

��� %5428 %52'$ %52:3

�� %52:% %523%

���� %5248

� ���A����� � �� <= ��#�� �� � $'�5�� ���A����� � �� $= ��#�� �� � $'�5

-4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/ $)$

Page 8: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

����� <

������� ��� ���P��� � ��� ��� ���� ������ �� 1��� ��� ������ ��� ������� ��� ���#� �� �� ���� ����� �����9 :�

�' ��������9� ����� ��� �>0�?���� ��� -���#���

�������/

�����9 :��' �,��

����9� ��,�� ��� ->0�?�,�/ ��� -���#���

�����,�/

?�� ������� ��� %54)$ %533$ �%5%2$ %5<)3 %5%22 �%58%3 %543< %5<4% %5884

?�� ������� ���H��� �%54'3 �%58'8 �%5<)4 �%534: �%58)% %5$%2 �%533: �%54%2 �%534$

?������ ������� ��� %532) %5442 �%5$<' %5<8% %5%3$ �%5)<: %5323 %5<43 %5828

?������ ������� ���H��� �%5<4) �%5'22 �%5<8< �%5<8$ �%5<34 %5$%% �%5<82 �%5<32 �%5<')?�������� ��� %52:' %52$) %5'%' %534: %5:22 �%5:43 %548$ %532' %54)4

?�������� ���H��� %52$2 %52<< %5')' %54'' %5))< �%5'%: %548% %54<3 %52%2

��������� %5)24 %5:3< �%5$$) %5'%$ �%5%'8 �%5:4% %5:<2 %5:%' %5'4%

���������H��� �%54<$ �%5823 �%5))% �%54$< �%5<3$ %5'$8 �%5424 �%54$: �%54:%

0������������ %5438 %54<% %5%<% %588$ %5')4 �%5)4) %54%3 %5844 %53:8

0������������H��� �%5:38 �%5$%4 �%5<'8 �%5:22 �%5)2) �%5%'3 �%5:2' �%5)%: �%5:8'@�� ���� %52)3 %5432 %5:%3 %54)4 %5)2: �%5$42 %52:$ %544' %52%<

@�� ����H��� �%5)42 �%5::$ �%5%$3 �%5'3$ �%5%34 %5)4% �%5)43 �%5'2% �%5:'<M����� %53<3 %582$ %5%%: %5<$3 %5$8$ �%5<3: %53:% %5<3: %58%%

M�����H��� %5)3% %5:4$ �%5%<3 %5'') %5%') �%5<<3 %5<': %5'4$ %5:%'

��0����������� �%5<%: �%5)4< �%5<$% �%5832 �%5<38 �%5<<: �%5:<< �%53'2 �%588<

��0�����������H��� �%5424 �%53$4 �%5<'4 �%54<$ �%58)) %5%:: �%54:: �%5424 �%543<

��0�*��� ������������ %5'43 %5'82 %5)<: %5)<4 %5)24 �%5%4: %5:3: %5):< %5)%)

��0�*��� ������������H���

�%54'2 �%58'2 �%5:3$ �%584< �%5)33 %5'2: �%54'$ �%53$2 �%53'3

��� %5428 %54'' %5''4 %53<% %5)%: �%5:2< %54': %53)< %534<

���H ���� %543) %53<% %5'24 %584% %5)'' �%5):3 %53$< %58<3 %533'

� ���A����� � �� <= ��#�� �� � $'�5�� ���A����� � �� $= ��#�� �� � $'�5

$)'

-41����

���45������

����

-���

����*����( '�'�"6'7/

Page 9: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

0������������ �� # �� %5%:$4 ����� <8$53��� ��9 : ��' �,�� � 3':�'�' � %�2<4� � � %�%%%$�� � $'�5M����� �� # ���'8�) ��� ��9 : ��' �,�� �

%�%%%2%3 ����� $854 �' � %�4<'� � � %�%%%'� � � $'�5��0����������� �� # ���%�:48 ��� �>0�?�,��

�%�88$ ��� ��9 : ��' �,�� � '�%8 �' � %�333� � �%�%%$'� � � $'�5��� ��� ������� ���H���� ��� ��0����� ���������

����H������ �� 1��� ��� ���A��� �� ������� �� 1 ���� ->0�?�,�/ ��� ��� -9� ��,�/� ������ #��������� �� �� �� ���� ��� �� ���1� � ����� <( ��1��#��� ��#���� ���� � �� �� ���� �� ��� �� �� �� # ��1��� �� ����� � �� � ��1�� ��� ��� ����������������5 B������ ���� �� �� ���� ��� ��� ����� �������� �� 1 � � ��� ��� ������ �� -����� 8/� 1� ����� ����� � �� �� �� ���� ��� ���� �� �� ��� ������� # ��5 ��1�#��� �� ���� � �� �� �9 : ��' �,����� �� �� �� �������������� ������� ��� ��0������������ �� # �� 1��� �������� ������� �� ���� ��1�� �� ������� �� 1 � �� � ��� �� �� ���� ��� ��� ����� ������ �� -����� 8/5 ��� 1�� ������ �� �� �� ��� �� �� �� �� �� �������������H��� ��� ������H���1��� ��1�� � �� 0� -����� :/ 1��� ��� � ����������� �� �� �� �9 : ��' �,� ��� � ��� ��� �-����� '/5 ��� ���� �� ���A��� ������� ��� �� 1��� ���� ����� �� # �� ��� �� �9 : ��' �,� ����� �� � �� ����� ������� �� ������� -����� </ ��� ����� � �� ��� �� �� ���� �� �� ,� ���� �� 1�������� �� � ��� ��� ��� -�5�5� ���� ��� ���/59� ��#���� ���� �� �� �� �� ��� ����� �� # ��

��� ��� 1�� ����� � �� ��� ��� ��������� �������5��� �� ��� ,� ������ �� ��� � �� ������ � ���-����� '/ 1��� 1 �� �� ����� �� . ?>�� ����� �����#����� -B�� �� $242( !���� � � ��5� $22</5 ��1��#��� ���� ��� 1�� #��� ��� � �� ������ �� ���������� #����� ��� ������ �� ��� ���� �+����� ��. ?>�� -B�� �� $242( !���� � � ��5� $22</5 ��� �������� � �� ���#�� ���� �� ��� �� �� ��1��� �������� ������ 1�� ���� ��1�� ��� �� �� ,� � �� ����-����� '/( ��������� ���� �� ���� �� ,� ����� �� ����A��� 5 ?� ���� #���� �� �9 : ��' ��� ���� ����� �� ��+�� �� ���#����� � ���H�� �7� � ��

�� � ������������ � �� ����5 ?������� �� �#������ ������ � �� �� �� �7� � � ��������������� �� �� �� �� �� �� ���� �� �� �� �� # � � ����-���#� � ��5� $224( ������ � ��5� $222( 0���� �� � ��5�$222( !���� � � ��5� $222/5 !�� �� �� ������� ,��7� � �� �� ���� ��� 1������ �� ������� �� � � ����������� ������7�� ����� -!�B��� ��� B������ $24)(���� � ��5� $22<( 0��� � ��5� $228( *� �#� ��� 9����$223/5 ���������� ���� �� ��#���� ���� �� ,� ��� ������� � �� ������ � ���5��� �������������� ������� ��� ��0����������� ���

# �� ��� �� ���� ������ ��� � ,� ��� �� � ������ ����� �� # �� � �� ����5 ��� �� �� ������ ��� � �� �������������� ������� ��� ��0������������� # �� 1�� ����� �� �� �������� � ��5 -$228/ ����������� ��� ������� -$223/5 ��� ��� �� �� ������ �� # �� �� ���� �� ��� � ���� � ��������� � � ��� �� � �� ����� ���� -���������� �� ������������� �� ��� �������� �� # ��/ ���H�� � ���� ���� -��� #� �� �� �7 ���������� ������ ��� � �����1 � �� ���/5 ?���� ����� � ��5 -$224�/ ����� �� ������ ��� #� �� �� �� �7 ���������� ����� �� ������ ��� ��� � ��� ����� � ���� ���� ���� � �������5 B������ ������ ��� ��0����������� ��� ������ �7 ������������ � �� ���� -!�.����� $23<( B��� ���!�� ����� $24<( !�� ��� ��� *������������� $22$(����� � ��5� $224���/� �� ���������� ��� �� � � ��� ���� � �� ��� �� ,� ���������� �� ������ �������������� �������� �� ������ ��� �� �������� �� # � ��� �� �� �7 ���������� ������ 1������� �� ��� #� �� �� ,�5 ?������� � B�� � -$242/� �� ������ � ����� �� # �� � ���� �� ������ ����� �� ���� � ����� �� ���� �� � ��������� �������� ���� ������ �� 1 � ��� �� ������� ���1 ��� ��� ��� � ���� ����� ��� �� �� �� �� ���5 C� �� ������ � ���� ��1�#��� �� �� �� ��� ��� ���� � �� ���� ���� �������� 1 � ������ ������ ��-����� :/� ���� �� �� ������ ��� ��0������������� # �� 1��� ��� �� ���� �� �� ,� �� � �������� � �� ������������ �������� �� ������ ��� � �������� � ������ �� � �� ������� ������ �5 C���� ��� � �� ��� �� �� ������������� �� # � ��� �� ��� � �� ������� ������� ������� ��� ��

����� 8

������� �� �� �7 ��� �� 1��� �� �� ���� ��� ��� ��� ������ �������9 : ��' ���� ����9� ����� ����>0�?���� �����9 : ��' �,�� ����9� ��,�� ����>0�?�,��

�� %52%8 %5:<) %5444 �%5''$ %52:3 %52'%

���� %54:$ %5$4' %533$ �%5''$ %54'8 %54'$

��� ��9 : ��' ���� %5'38 %54)) �%5'3: %543% %54:8

��� -9� ����/ %582: %5)8$ %5')$ %58%:

��� ->0�?���/ %5$%% %54%< %523$

��� ��9 : ��' �,�� �%5:<< %5%4$

��� -9� ��,�/ %54)$

� ���A����� � �� <= ��#�� �� � $'�5�� ���A����� � �� $= ��#�� �� � $'�5

-4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/ $):

Page 10: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

�� # � �� ,� � �� ����� ������� �� �� # � � ���#������ �� � ���������� ����� -���G��� $283/5 ��� ������ � �������� ���� �� �� ���������� �� ��� ������� # �� 1���� ���� � �� ����� �� �� ��� ���� ���� �� �� �� ��� ���� �� � �� ����5��� � ��1�� ��� ��� ��������� ������� ���� ���

#����� �� �� ���� ���� �� � 1�� ���� �� ���� ���� -�' � %�38:� � � %�%%$/5 ��� ���� �� �� �� ���� � 1�� ���� ����� � � ��� � ���� -L�� ��� ���&���������� $22$( ?������� ��� 0������ $22:( ?�������� ��� &���������� $223/5 ?������� � ?�������� 9����� -$228� $223/� ��1�#��� �� ���� ������ � 1�� ��#������ ���� �� �� ���������� ����� �� ����5 *�� ��� � ���� ��� ������ � ��#��� �� �� �� ��������� �� �� �� �5

� �����������

?� �������� �� �� �� ��� ,� 1�� ����� � �� ����������� 1 � ������� ��1��� ������ �� ������ 5 ����� � �� ���#������ ���� ��� ��9 : ��' �� 9� ������ >0�?��7 ��� ���� ���� ���/ � �� � �� ����� 1�� ������ � �� ��� ,�� ��� �� �� � �� �� ��� ����� ���� ��� �� �9 : ��' ���� ��� � �� � ������� 1�� ������ ��� ,� ��� ��5 ����� 1�� �� �������� ���������� �� ������� �� # �� � �� ����������� 1 � ������� ��1��� ������ �� ������ 5!������ ������ ��� ��� ��� ����� �� # �� �7��� ��� ��0����������� �������� 1 � �� ��� �� ����1��� ������ �� ������ � ������ �� �� �� ������� �� �� ��1��� ������ ��� ������ � � ��� ����� #� ��� ��� �� � #������� ������ �� ������ �� �� ���������� �� ��� �5 ��1�#��� �� �� � �� ����� ��� # � � ������� ������ ����� � �������� 1 � �������� ��� 1��� ��� ���� �� ���� �� ��� ������1��� ������� ��� ������ � ������ ���� ��#���� ������ � �� ��� ������������5 C� �� ��� ��� ����������������� 1�� ������ �� �� �������������� ���������� ��0����������� �� # �� 1��� ��#������ ���� �� ���9 : ��' �,� 1��� 1�� ���� �� �� �� ��� �� � �� ����� �� ,� � �� ����5? ������ � ���� ��� ��������� � ��� ������ ��� ���

�� ������ �� �� ��1��� ������ � ���� ���� ��� �������� �� �� � �� ���� �� �� ������ �� ��� � �� ����-!���� � � ��5� $22)/5 ��1�#��� ��� ������ � ��������� � �� ���������� � �� ���� � �� ���� �� �������� �� ��� ����� ���#�� � ������ ����� �� ���� �� ���#����� � ���H�� �7� � � ������������� ���� ������� 1 � ��1��� ������� ���� �� �� ��� ���� A� #��� � � 6��� ����5 ������ ��� ���� ���� � ��#��� �� ���� � �� ���� �� ��� �� ��� ������������� 1 � ������� �� �� ����� �� ��� ���������� � ����#� �� ������ ��� ��� �� ��1��� ������������ ��5 ����� ���������� ���� ����������������� �� �� ����� 1����� ��� �� � �#���� � �� ���

�� �� ��� ��#���� ���� � �� ���� �� ��� �� ����� ������ ������ �� ���� ����5

�������� �������

L� ���� 0��5 &���� N������ ��� ���� > �� ��� ��� ���� ���� � ������� �� �� ����� ��� A��� �7������� � �� >7������ �� *���� ��� M�#��� � �������5 L� ���� ���� 0��5 N������ ����� -&����C� ���� ���� "������� ��� �� ��� ?����� ���� �������/��� �������� !���� -9� ���� C�� � � �� ?����>�#������ �� �������/ ��� �� ��� �� �� ������ ������� �������5 �5�5 1�� ������ �� �� �� &���� ���� ���� �� @���� �� �� ������5

����������

?�������� �5��5� 0������ �5��5� $22:5 ��� �� ����� 6�� �� ���

� ' �� '� �� � ����A� �� # � ������ �� � ������ �� ���� � ����#������ �� ���� ���� ���� �� ��� �� �� ������� ������ ��

����� ����5 ��� B��5 B�����5 '<� :2:;:2<5

?�������� �5��5� &���������� "5�5� $2235 "��� ����� �� 1��� �C"

��� *> �� �� �� �� ������� ������ � � �������� ����� ����

� ������ ��5 ��� B��5 B�����5 '2� $%::;$%)'5

?������ !5� 9������ �5� $2285 *�� ��� ���� �� ������� ������

��� ������������� �� # � � ����� ������� ���� 1 � ���#� �� ��

�������� ��5 ��� ��5 @��� 9� �5 )'� 4'$;4:$5

?������ !5� 9������ �5� $2235 >��� � �� ���#� �� �� �������� ��

� ����� ������� ���� �� ������� ������ ��� �������

�� # ��5 ��� ��5 @��� 9� �5 ):� 8%$;8$'5

B�� �� >5� $2425 >��� � �� ���#� �� ��� � ��� �� ������� ���������

��� ������ ��� -� ��#�1/5 L� �� ?� ��� @���� 5 )3� ::<;:325

B�� �� >5� 0��"�#��� !5� *��� ������ ?5� ��������� �505� $2245

>��� �� �� ������ ������ �������� � �� �� ��� �������

������ �5 ?���5 >�#���5 !������5 8)� ':4;')<5

B���� �5?5� !�� ����� !5!5� $24<5 M����� �� # � �� � �����������

������75 ��� ��5 ���5 ?�5 &5 )2� 8$2;8''5

B������� @5�5� !���� �� �5@5� $24)5 >��� � �� �� �� �7� � �� ��

�� �� �� ��� ������� ������5 &5 ��� ��5 :<� :)$;:)85

B����� "5�5� $24'5 >���� �� # � � ���D ���� �� ��� � ������� ����

� ������� �������5 ��� B��5 B�����5 $)� )':;)'35

�������� �5� B������� @5�5� $22$�5 C� �� ������������� ����� �#���

�� � �� ��� � �� �� � ������� �� # � � ���������� ���� ��

����Q5 ��� B�� B�����5 ':� 2%2;2$<5

�������� �5� B������� @5�5� $22$�5 >��� � �� ���#� �� ��� ���� ���

������ ��� �� ��1��� ������ �� ������� ������ ��� ������

�� �� �������� �� � � ����� ���� ��� �� � ���� M� ���5 ���

B��5 B�����5 ':� 2'3;2:'5

�������� �5� B������ @5�5� ������� �5?5� $22<5 !������ ������

������� �����1�� ��� �� �� �� ���������� ��1��� ������� � �

����� ����5 ��� B��5 B�����5 '3� $)%2;$)'$5

������ ?5�5� @���� ?5.5� L������� &5>5� ������#�� >5� $24)5

��6��� �� �7 ��� �� �� ��� ���#� �� ��� �����1�� � ������

������ ��5 &5 >�#���5 K���5 $:� ::;:45

������� ?5!5� ���� � B5@5� B�������&�������� J5.5� @��� ��� �5�

@� ��� �5C5� ������� �5� ����� 95� 9�������� *5?5� ���������

B5&5� !���� �� �5@5� $2225 0� ����� �� �� ��� � ,� �7� � �

���� 1� �� ���� ���� ���#����� ��� �� 1 � ��1��� ������ ����

������������� ������5 >�#���5 ��5 �������5 ::� $44%;$44<5

����� !5� �� �� �5� �����1�� �5� 1�� 95� N������� 5� �������

95� C������� �5� C���� �5� 0������� �5� N������� "5?5� $22'5

$)) -4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/

Page 11: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

B���#�� �� �� ��� ������ � ��� 1 � ���� ��� ������ �� ��

��1��� �������5 ��� ��5 @��� 9� �5 :4� $<2;$835

0����� �5� L ��� >5� !�� ������� ?5� ������� ?5� B�� �� >5� $2235

L����O� �� �� Q ������� � �� ������������ ������ �� ��

������ ���� ���� � ��1 ��#��� �� �� �� ��� ���� ��5 ��� B��5

B�����5 '2� $)%<;$)$<5

0���� N5@5� ������ �5�5� 0����� "5�5� >�1����� 05�5� $2285 ,��

����� �� � ��� ���� �� �� J�� ����5 ?�� 5 &5 ��� "��5 :)�

:82;:4:5

0���� �5@5� ���� ���� !5?5� $228�5 >��� �� ����� ��� ������

��������� �� ����� �� # �� � ���� C5 ?�������������5 B��5

*�� �5 ���� ''� '%';'%35

0���� �5@5� ���� ���� !5?5� $228�5 >��� �� ����� ��� ������

��������� �� ����� �� # �� � ���� CC5 �����������5 B��5

*�� �5 ���� ''� '%4;'$:5

0���� �5@5� ���� ���� !5?5� $2235 >��� �� ����� ��� ������

��������� �� ����� �� # �� � ���� CCC5 @������ ���� ���

��������� ���5 B��5 *�� �5 ���� ')� $)$;$)85

0��� L5?5� ���� ���� !5?5� $22:5 ���A����� ��� �� �� �� ���� ��

��� ������5 C�D !� ��� &�5� *5B5 ->�5/� ��� !������ >������5

!����� 0������ 9�1 N���� ��5 2<;$'35

0���� 5� 9������� @5� $2245 C� ���������� ��� �7 ���������� �����

�� # � � ��� 1 � ��������� � ������ �� ������5 ,5 @+�������

����5 B�����5 $8$� '):;')45

0���� ��� ?5� ���#�� �5� !�B���� !5� B�#���� @5� B�� ����� &5� $2225

������ ����� �� ��� ������� �� # � � ����� ��� ��� ���

�� �� ����5 ?���5 >�#���5 ��� ��5 ��7���5 :8� $');$:$5

>#�� *5� ���� ���� !5?5� $22%5 *�� ��� ���� �� ���������� ���

����� ������ �� # �� � ����5 ��� B��5 B�����5 ''� 42$;4235

>������� L5>5� .���� .5&5� @���� ?5.5� ������ ?5�5� $24'5 ����

����� ����� �� ���#� �� ��� � ��1��� ������� ��� �� ����5

&5 >�#���5 K���5 $$� $34;$4$5

*��������� ?5� !�� ���� "5� "����� �5�5� $22)5 ��� ������� ������

��� ������� �� # � � ���� ��� �� 1 � ���#� �� �� ��� ���

�� �� ��1��� ������5 ��� B��5 B�����5 '8� $'%$;$'%<5

*� �#� � ?5� 9���� "5� $2235 C�� �7������ ���� ��� !C9�>K?'

����� �� �� ,� ��� �� � ������� ���� ��� ���� ��� �7 ��� �5

?�� 5 &5 ��� "��5 :<� 3$$;3'85

*������������� &�5� L5�5� 0��� L5?5� $24:5 "��� ������ �� 1���

����� �� # �� ��� ������� ���1 � ��� �� # � ����� � ���5

��� ��5 ���5 ?�5 &5 )3� 2)<; 2<$5

*������������� &�5� L5�5� &�������� &5B5� $24'5 >��� �� �� ��

����� � ��� � � ����5 ��� B��5 B�����5 $)� )::;):35

������ �5� B������ �5� *������ �5� ������� "5� $224�5 ��� ���� ��

������ �� �� �� # � �� ��������� ��� ������������ � �� ���������� ��� ������� � �� ?����� ������� �5 ��� B��5 B�����5 :%�

$<:3;$<))5

������ �5� .#��� ��� !5@5� *���� *5� ������� "5� $224�5

������������ �� # � � �� �������� �� ������ ��� ��� � �5>��5 &5 ��� ��5 )2� $3;':5

��������� .5� B������ &5�!5� $22)5 >��� �� ���� �� �� ����#�� ��

������� ������5 ��� ��5 ���5 ?�5 &5 <4� $83';$84$5

������ �5>5� L ��� >5� !���� �� �5@5� $2245 ��7� � �� ���#� �� ���

� ������������ ��� ������� ��������� � ������ ���� ����D �

��#�15 ��� B��5 B�����5 :%� $:42;$)$)5

�� �� �5� ����� !5� N������� &5� �����1�� �5� $2235 ���#�

�� �� �������� �� � ��� ������ �� 1 � ����� ��� ������ �� ��

��1��� ������ ������ 5 &��5 &5 ��� ��5 @��� 9� �5 84� $<8;$8'5

������� �5� $22'5 0�G������������������� ����5 C�D 0�G��������

������������ ->�5/� 0�G������� ���G�������5 N������� ���

���� ��5 :88;:385

������ !5�5� � ���� &5?5� $24)5 ������� ��� ���� �� �������

������� ����� ��� �� � ���� ��� ������ � ��� ���� ��� ��#���

�� ���#� ��� ���5 &5 >�#���5 K���5 $:� :3';:385

����� @5>5� ���� ������ �5�5� �G���� &5�5� !���� �� �5@5� $22<5

����� �� �� ������ ��� �� 1 � ������ �� � ��� ���� ���5

&5 >�#���5 K���5 ')� $4:;$2%5

C����� �5� �� ������� �5�5� "����� �5�5� $2285 >��� � �� ���#�

�� �� � ���� �� �� �� ����� 6�� �� �� �� ��� ����+���5 ���

B��5 B�����5 '4� 82$;82)5

C������� �5� $22'5 0�G�������������� ����5 C�D 0�G������� ���

��������� ->�5/� 0�G������� ���G�������5 N������� ������

��5 $3:;$2%5

&�������� 05�5� .���� &595� $24$5 !������ ������ � ���D

���������� ��� ����#��5 C�D @���� >5?5� .���� &595 ->��5/� ���

B������ ��5 !����� 0������ 9�1 N���� ��5 )$<;)3$5

��������� >5� ���������� �5� ������ 5� $2285 C�+����� �� ���#�

�� ��� �� �� ���� ���� �#��� � �� ��� ������� ������ ��5

B��5 *�� �5 ���� ':� '22;:%85

���� �5� 0������B������� !5� "��������� 05� $23<5 B������� �����

����� �� ������ �������� �� � ���5 ?�#5 ?����5 '3� '<;435

��� �� �5� 9������� �5� ����� 95� ����� �5� ������ �5� ���� �5�

!� ���� �� �5� $223�5 ������ ��� �� �� ������� �� ��� ����

������ �� � ������ ���� �� ����5 ��� ��5 @��� 9� �5 ):�

3%2;3$35

��� �� �5� ������ �5� 9������� �5� ���� �5� !� ���� �� �5�

$223�5 0� ��� �� �� ������� �� ��� �������� �� ��� ��� �

��#���� ������ ���� �� ���� � &����D ���������� �� �� ��������

��#�� �� �� ���7 �� �� ��� ���� �� � ���5 B���5 B� ���5

B�����5 8$� $$2%;$$2:5

��� �� �5� ���� �5� !� ���� �� �5� $2245 >������ �� ��� ���#�

�� ������� �� ��� ��� ��� ������� #� �� �������� �� �� ���#�

�� ������ ���� �� ����5 "���� "��5 0�#��5 ?���5 B��5 ����5 '�

$4<;'%85

��� �� �5� ����� �5� ���� �5� !� ���� �� �5� $222�5 C�+������ ��

������ ����� �� �� �7� � � ������������ � ����5 >�� �7�

���5 >�#���5 ���5 ))� $3);$4$5

��� �� �5� ������ �5� ����� �5� ���� �5� !� ���� �� �5� $222�5

M��������� �� �� ���� # ������ ���� ���7 � �� �� � �� �7� �

�� ������ �� ��� ��� � ���������� ���� �� ����5 >�� �7���5

>�#���5 ���5 ))� $4';$425

���� �5� B����� ?5�5� $24%5 ���� �� �� ������� ��� ��� ������ ��

���� ��� ����5 ��� ��5 ���5 ?�5 &5 ))� 282;23)5

��������� !5!5� �������� "5�5� $2235 ��� ���#� �� �� ������ ���

���� ������� ������ ��� ����� �� # �� � � ��� ���� ��

��������� ������ ��5 ��� B��5 B�����5 '2� $32;$2%5

.��������� @5� @������� "5� $22'5 ��� ���������D ���� ��

��� �� #� ������ ��� ��� � �� ������#� �� �� �7������

�� # �� � ���5 ��� B��5 B�����5 ')� $$3:;$$335

.������� &5@5� ������ ?5�5� .�#��6��� �5�5� ���� �� �5� $24)5 �����

�� �� ����� �� � ������� A��� ���� ������� 1 � ��1���

������D CJ5 ������� ��� �� 1��� �� �� ��� ��� �7 ��� �� ���

�� ���� ���5 ��� ��5 ���5 ?�5 &5 )4� <%2;<$:5

.������� *5� K�6�����7� �5� $2285 >7 ���������� ����� �� # � �

���D ���� �� �� ��� ��� � ���� � �� �� � ���� �� 1 �

��� ������� � �� 1� ��� ������� ���� ����� �� �� �� �� ����

������� ������ ;�0��� ��������$��� 5 >��5 &5 ��� ��5 )3�

<$$;<''5

!�� ���� 05?5� *������������� &�5� L5�� $22$5 ��������� �������

�� �� �7 ���������� �������� �������� �� ��� ������������5

��� B��5 B�����5 ':� 3:$;3:85

!� ���� �5@5� ���������� "5B5� $24%5 ��� ��� �� ��� #� �� ��

������� #� ��� ������ �� ������� ��� ��� ������ � �� �����5

��� ��5 ���5 ?�5 &5 ))� 3<%;3<<5

!�B���� !5B5� $2245 ���1�� ���� ����� �� �������������� ����D

�������� 1 � �� M� >�#������ �� @�� �� �� ?����� �� ���

�� �� �� �� �7� �� �� �������5 >�#���5 ��7���5 ����5 $3�

''3);''4$5

!�B���� !5B5� B������ 05"5� $24)5 .���� ��� ���� ��� �� ������

-CC/ � � ��� ���� �� ���������� ���5 ��� ��5 ���5 ?�5 &5 )4�

<8;<25

!�B���� !5� ���#�� �5� ��������� � L5� $2235 ������ � ��� ��� ��

��� ,�� �� ��� @� � ��� ���� �� ����5 >��5 &5 ��� ��5 )4�

::3;:)85

-4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/ $)<

Page 12: Copper and zinc fractions affecting microorganisms in long-term sludge-amended soils

!���� �� �5@5� ������ ?5�5� @���� ?5.5� L ��� >5� $22)5 .���

������ �� �� ��1��� ������D ���� A� ������� #�� �� ���#� �� ��

������ �� � � >����� ��� �� M�5 >�#���5 "�#5 '� $%4;$$45

!���� �� �5@5� ������� ?5!5� ������ �5>5� $22<5 .���� ��� ���� �

�� �� ��� � ��1��� ������ �� ����� ������������ ��� ���� �5

&5 C��5 !������5 $)� 2);$%)5

!���� �� �5@5� ���� � B5� ������� �5� @��� ��� �5� @� ��� �5C5� $2225

?�������� �� �� �7� � �� �� ��� � ���� ������� 1 � ��1���

������ ���� � ������� ����� �� ����6�� ��� � ��<������

��������5 >�#���5 ��7���5 ����5 $4� 8<2;88:5

!�.����� ?505� $23<5 ��� �� � ��� �� �� ����� ��� ���� �������

������5 ����5 ���5 4� 23;225

!�.����� "5�5� ���1����� 05J5� $23:5 � ���� �� ��� ������5 C5 ���

���� ��� �� �� ������ � ����5 &5 ��� ��5 ')� $3';$4$5

@�������� �5� 9�������� ?5� $2285 @�� ���� �� #��� �� ��

������� ���������� � � ����� ���� � � ���#� �� �� ���

���� �� � 6��� � �������� ��� � �� ��� �� ���� ������� ���� ����

���� ��� ��� #��� � � � � ��5 ��� B��5 B�����5 '4� 3$$;3'%5

@�������� �5� 9�������� ?5� B�� �� >5� $2245 !�� #��� � ��������

�� ��� ������� #������� � ����� ��� ��� ���� �� �� ���#�

�� ��� ���� 1� ������� �������� ��� �������� ��H!�5 ���

B��5 B�����5 :%� :)<;:<35

@��A � "5.5� *������ ?5"5� *������ J5�5� $2335 ?����� �� ��

������� �7���5 CCC5 *��#� ��� ��� ���� ��� �� ��� � ��

���� � ��� ����� �5 &5 ��� ��5 '4� '42;'285

@�� ��� &5� ?�������� !5� $2235 ����� �� �� ���#����� � �

������� 1�� � ��� ��1��� ������ ������ �5 B��������� �����

���5 8%� '':;''25

K�6�����7� �5� $2435 ? � ��1�� �������� � �� ������ ����� ��

�7 ���������� ����� �� # � � ��� CC5 ����� #� ���� � �� ��

������ �� �� � ��0����������� � �7�� ������ �� ������������� ��� ���5 B����� 82� 38<;33$5

"���� �5!5� $22)5 "� �� ��� ��������� �� ��� ���� � �� �7�

�� ��� � ����5 C�D "���� �5!5 ->�5/� ��7� !� ��� � ���;@���

��� ���5 L���� ������ ��� ��5 8:;$<'5

����� �5� ����� !5� $22:5 ���#� �� �� �������� ��� � � ����

�������� ������� ����� ��� ��D ���� ��������� &����5 @�� '5

���#� �� �� �������� ��� � ������ �5 L� �� ?� ��� @���� 5 82�

32;2$5

����� �5� ����� !5� !� ���� �� �5� $22:5 ��� ������� �����

������� � ���#� �� ��� 1 � ����� ��� �7�� �� �� �� ����

������ �5 L� �� "��5 '3� $'):;$'<$5

������� &5!5� .����1�� ?5� B������ &5�!5� $2425 C������ �� ��

������ �� ����� ��� ����5 ��� B��5 B�����5 '$� '':;':%5

���#�� �5� !�B���� !5B5� 9��#���� L5?5� ��������� � L5�5� $2235

������ ������ � ��� ����� �� �� � � � ��� ���� �� ����D

���� �� ������ ��#��� �� ��� ������ �� ��5 L� �� ?� ���

@���� 5 $%%� $::;$)25

���#�� �5� 0���� ��� ?5� !�B���� !5� ��������� � L5� $2245

0��#� �� �� ��� 6��� � �� ��� ���� ����� �� ������� �����

� �� �� @�'� ��� ��'�5 >�#���5 ��7���5 ����5 $3� $)4$;$)425���� &5�5� ����� &5�5� $22$5 ������� ���� ��� �� ��� ���� �� ���

�� ���#� �� ��� � ���� ������� 1 � ��������� �� ��1��� ������5

&5 >�#���5 K���5 '%� :43;:2<5

���G��� &5&5� $2835 >����� � ����5 C�D !�.����� ?505� @� ������

�5�5 ->��5/� ��� B������ ��5 !����� 0������ 9�1 N����

��5 :3$;)$)5

���� �� �5� .���� .5&5� ������ ?5�5� $24'5 ����� �� �� ����� �� �

������� A��� ���� ������� 1 � ��1��� ������D C5 *��� ��� ��

�� 9� ��� ,�� ��� ��� @� � ���� ������5 ��� ��5 ���5 ?�5 &5 )8�

'8%;'8)5

� ��� ��� �5� K�6�����7� �5� $22)5 ?����� �� ��� �������� ��

�� ��#�� ����� ������ �� ��� ������� �D ���A�� �� �� ��

������� �� 1��� ���������� ��� ���� ��� � � � ���� ��� ��

��� �� �� ���� �� ��� �� #��� ��5 &5 ������ C� ������ ��5 $88�

42;2)5

���� ���� !5?5� $24'5 ��� ������5 C�D @���� ?5.5� !����� "5�5�

������� 05"5 ->��5/� !� ���� �� ��� ?������� @�� '5 �������

��� !����������� @����� ��5 ?������ ���� � �� ?��������

!������ ��5 ':';::85

������� ?5� ��������� @5�5�5� $2445 ������ � �� �� �� �� �� ��

�������� �� �� �7 ��� �� ��������� ��� �� ������ �� ��� ���

�� �� ���� �� ��� � ������ �5 ?���5 ����5 8%� $)3<;$)385

������ >5� $24$5 ��� ������ �� �� �6�� � ���� ���� ����� �� ���

�7���5 ������5 ��������5 ?� � )<� $2$;$225

��������� 05� ��������� >5� $2235 >�� �7�������� ���� � �� +�����

����� � �� ������� ������ ��� ����� �� # � � ���������5

>��5 &5 ��� ��5 )4� :'2;::<5

J����� >505� B������� @5�5� &�������� 05�5� $2435 ?� �7 ��� ��

�� ��� ��� �������� ��� ������� ������ �5 ��� B��5

B�����5 $2� 3%:;3%35

#�� !���� L5� �������� *5� $22$5 ?� ����#�� ��� ������ � �� ���

��� �� ������ �� ������������� �� # � �� ���� 1 � �����

�� � ������ �������5 B��5 *�� �5 ���� $$� '$8;''%5

L� ������ �5� ������� �5� $22:5 ������ �� ��� ��� ���� � �����

A����5 ���5 &5 !������5 :2� $%:<;$%)%5

L���� �5� B������� �5L5� $2235 !������ �7� � �� �� ��� �� �

������ ���� ���� �� � � �� ��� 1� ���������� ��� �� �5 >�� �7�

���5 >�#���5 ���5 :4� '%%;'%)5

L�� ���� J5� &���������� "5�5� $22$5 !������ ������ ����#�� �

����� ����� ���� � ������ � ���� �� ���A�� ��5 ��� B��5

B�����5 ':� 423;2%'5

$)8 -4 1���� �� �4 5 ���������� -�������*� �� �( '� '�"6'7/