8
Bovine and buffalo in vitro embryo production using oocytes derived from abattoir ovaries or collected by transvaginal follicle aspiration Gianluca Neglia a , Bianca Gasparrini a , Viviana Caracciolo di Brienza a , Rossella Di Palo a , Giuseppe Campanile a , Giorgio Antonio Presicce b , Luigi Zicarelli a,* a Dipartimento di Scienze Zootecniche e Ispezione degli Alimenti, Federico II University, Via Delpino 1, 80137 Napoli, Italy b Centro Sperimentale per la Zootecnia, Rome, Italy Received 28 August 2001; accepted 15 April 2002 Abstract This study was undertaken in order to evaluate the effect of oocyte source (live animals and abattoir ovaries) on subsequent embryo development in buffalo (Bubalus bubalis). Cow ovaries were also collected as oocyte donors for in vitro embryo production (IVEP). Three hundred thirty-eight oocytes were recovered by ovum pick up (OPU, Group A) from 8 pluriparous buffalo cows, while 1127 and 1457 oocytes were aspirated, respectively, from buffalo (Group B) and bovine (Group C) slaughterhouse ovaries. Cumulus enclosed oocytes (COCs) suitable for IVEP were in vitro matured (IVM), fertilized (IVF) and cultured (IVC) to the tight morula (Tm) and blastocyst (Bl) stage. Within buffalo species Group A had a higher Bl yield (29.7 % versus 19.9%; P < 0:05) and a lower proportion of embryos arrested at Tm stage (11.1% versus 22.3%; P < 0:05) than Group B. Within slaughterhouse groups cattle oocytes had a higher cleavage rate (83.9% versus 64.8%; P < 0:05) and yielded 49.2% more blastocysts than buffalo. However, when data are related to the total number of cleaved oocytes, only 13.7% more blastocysts were produced in cattle than in buffalo. In conclusion, in buffalo species the source of oocytes signi®cantly affected post-fertilization embryo development, as demonstrated by the higher Bl yields derived from OPU-derived oocytes. A higher overall IVEP ef®ciency, mainly related to the higher cleavage rate, was recorded in cattle compared with buffalo when ovaries from an abattoir were used as oocyte donors. # 2002 Elsevier Science Inc. All rights reserved. Keywords: In vitro embryo production; Ovum pick-up; Buffalo; Bovine Theriogenology 59 (2003) 1123±1130 * Corresponding author. Tel.: 39-81-4421928; fax: 39-81-292981. E-mail address: [email protected] (L. Zicarelli). 0093-691X/02/$ ± see front matter # 2002 Elsevier Science Inc. All rights reserved. PII:S0093-691X(02)01170-6

Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

Embed Size (px)

DESCRIPTION

FIV la vaca si bivolita

Citation preview

Page 1: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

������ ��� ����� �� �� �� ����� ����� ��� �������� �� ������� ���� �� ��� ������� �� ������ ��

� ����������� �������� ������ ���

������� �������� ������ ������������������� ���������� �� ��������� �������� �� ������

������� ����������� ������� �� ���� ��������� ���� ����������!

����������� �� � ���� ��� � �� � ������� ����� �������� ������ �� ����������

��� ����� �� ���� !����� �����"��� ����������� ��� �� ��� ��� #��� �����

�������� "# ��� "$$%& ����� �� %' ����� "$$"

��������

()�� � �� *�� ���� �+�� �� ����� � ����� � )� ����� �� ���� � ����� ,���� ������� ��� �� ���

�������- �� ���.�� ����� ���������� �� ����� ,$%&��%� &%&����-/ ��* ������� *��� ����

������ �� �� ���� � ������ ��� �� �� �� ����� ����� ��� ,0�1�-/

()��� )����� )�� �2���) ���� �� *��� ��������� � ��� ���+ � ,3�4� ���� �- ���� #

��������� ����� ��*�� *)��� %%"5 ��� %6'5 ���� �� *��� ������ ��� ������ ������ ���� �����

,���� �- ��� ����� ,���� �- ����) ��)��� �������/ ���� �������� ���� �� ,�3��- �� ���

��� 0�1� *��� �� �� �� �� ��� ,0�7-� ��� ������ ,0�8- ��� �� ��� ,0��- � )� ��) ����� ,(�-

��� ��� ���� ,��- � ���/

9� )�� ����� ������� ���� � )�� � )��)�� �� ����� ,":/5 ; ����� %:/:;& ' � $�$'- ��� � ��*�������� ��� �� ������ ����� �� � (� � ��� ,%%/%; ����� ""/<;& ' � $�$'- )�� ���� �/9� )�� ����) ��)��� ����� �� �� ���� �� )�� � )��)�� �������� �� � ,#</:; ����� =6/#;&

' � $�$'- ��� ������� 6:/"; ���� ��� ���� � )�� �����/ >�*����� *)�� �� � ��� ���� �� � )�

� �� ���� �� ������� ���� ��� ���� %</5;���� ��� ���� � *��� ������� �� �� �� )�� �� �����/

0� ���������� �� ����� ������� )� ����� �� ���� �� �����?��� �� ����� �� ��� 2��� ����� ���

����� ���������� � �� ������ �� �� � )� )��)�� �� ������ ������� ���� 3�42������� ���� ��/

� )��)�� ������� 0�1� ��?������� ������ ���� �� � )� )��)�� �������� �� �� *�� �������� �� �� ��

�������� *� ) ����� *)�� ������� ���� �� �� ��� *��� ��� �� ���� � ������/

� "$$" 1������� @������ 0��/ ��� ���) � ��������/

(��)���* 0� �� �� ����� ����� ���& 3�� ���+2�& ������& ������

()������������ ': ,"$$<- %%"<A%%<$

! ������������� � )��/ (��/B �<:2#%266"%:"#& ��CB �<:2#%2":":#%/+,���� �������* ��������D����/� ,�/ ��������-/

$$:<2=:%EF$"FG A ��� ���� �� �� � "$$" 1������� @������ 0��/ ��� ���) � ��������/

�00B @ $ $ : < 2 = : %E , $ " - $ % % 5 $ 2 =

Page 2: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

� ���� ������

0� �� �� ����� ����� ��� ��������� ��� ������� *����*��� *� ) �������� ����� ��� �

����� � �� ����� ��+ �������� �C� ��� *��� ��� ���������� ������� H%A'I/ ()� �������� �

�� � ������ ������ ���� �� �� �� ��)������ )�� ���*� )� � �� ��� �� ������

����� �� � ��� �� ����������� ������ ���������� *)�� � ��� �������� �������� ���

���������� ���� �� ���� �� ��� ��������� �� ���� ������� ����� � ���� ���� ��� ����� ���

�������) H=A%%I/ ������ ��� �� ���� �� � ����� �� � ������ ����� ���������

������ ��� �� �� ����� ��������� *� ) ������ �� ����� �������� ��� ��� ������

������� ���� ������ �)����������� ��� �� )�������� ����� ���� H%"A%=I/ ������ �� � �

)��) ���+ ����� ���� )� 7��� �������� 0 ����� ����� �� �� )��) ������ ����� )�

*����� �� *��� �� ����� �� ��� )� ����� �������/ @������ ����� � ��� ������ � �������

������� � ������� ����� ��� �������/ ()� ������� ��� �� 3�4 ��)������� ��� )�� *� )

�� �� �� ����� ����� ��� �� �� ��� ���� � � *�� �� ��� ��� )�� ����/ (���� �����

������� ��� ��)�������� ��� ����� �� ������ �� )�� �������� ���� ��)����

�)����������� ��� ��� ��) �� ������ �C�������� �� �)������� �� �� H%5�%#I� � ��*��

���� �� ��������� �������� � )� ����� ������� H%:I ��� ������� � ������

�������������� � )������� � ���� ��� H"$A""I ������ ����� ������ ����� ����*)�

���� ��?���� ������� ����� �������� � )� ����� �������/ ()� ������� ��� �� 3�4

��)������ � ������ ��� )�� *� ) �� ���������� �� )� �� �� �� ������� �� �� �� ��

����� ����� ���� ��� ��)���� ���� �� ����������� )���) )� �� ����� �������� )�

���������� )� ������ ����� �� ��?������ ���+�� � ���� ���� ����� �������)�� H"<�"6I/

>�*����� �� �� �� ����� ����� ��� �� )� ����� ������� )�� ��*��� ��� ������� ��

*� ) � ��*�� ��?������ �������� � )� ����� ������� H"6�"'I� �� )��) ����� �� ����

���������� ���������� � )��� ��� ����� �� H"=I/ ()� ��� �� )�� � �� *�� �

������ � ������� ����������� � *��� �� �� �� ����� � � ���� )� ����� ���

����� �������� ���� ���� �� ������� ��� ���� �� ��� ������� ,����� ��� �����- ���

���� �� ������ �� � ����������� ��������� ������ ��� ,�����-� ���� )� ���� �����2

��� ����� ����/

� ��������� �� ����� �

-.�. / ��� �%� �

1��) ��� ��� � ��� ��������� ����� ��*�� � )� ��� �� )��� �������� ����� ����2

*�� ����� �� ����������� ��������� ������ ��� ��� � ������ �� = ��� )�� ���� 7���) � ��

@�� ����/ ��� ������� *��� ���)���� ��� ���� ��� ������ � �� ���/ ()��� )�����

��� )�� �2���) ���� ���� � ������C�� ,�3��- *��� ���������/ 3�� ���+ � *��

����� ������� � *��� *��+�� �� )� ����� *� ) ���� � �����) ��������� ������� ���

�� �� ��������� ������ ���/ 8�� ����� ����������� ����� ��� ��* ������� *��� ������ ��

���� ����� ����) ��)���� ���� � *��+ ,%5 ��������- ����� )� ���� *��+� �� 3�4 ,<6

��������-� ��� ���) � )� ����� ��� *� )�� 6 ) ���� )��� �C������/ 3������ ������� �

� ������ ���� �� ����� ��������� ������� ����) ���� � )� ��� �� )��� �������� ����/

8��� )��� ������� � � �� �� %%"5 ����� ��� %6'5 ����� �3�� *��� ������ ��/ 0� )�

%%"6 0. !����� �� ��. 1 2��������� 34 5-���6 ��-�7����

Page 3: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

������ � ��� ���� )� 3�4 �������� ������� � *)�� ����� ��� ����� ������� ����

����) ��)��� *��� ���� ��������� *��� �������/

-.-. 2��������� 8��� %��� ��������

3�� ���+ � �.����� ������ �� �� � ��� ��� � ������ �� ,@@�2'$$� ���+� ��/�

(�+��- *� ) � '/$ 7>� ��� �� ������� ��� �� �� � �������� �������� ������� ����� �

�.����� *� ) � ������ ����/ ()� '$ �� ���� ������ ,%5 ����- *�� ������ �� � �

����� �� ���� ��� ,J27��2'%$$� ���+ 0�8 ��/� �� �����- *)��) ���*� )�

������� �� � � %' �� � ����� �/ ������� *��� ��� ������ �� � �.���� �) � ��� �����

�� ������� ������� �� ��� �� 6A= �� �� "; ��������� ,�������� 0 ���-/ ����� ������� ��

�6$ �� >� *�� ���� �� �� ���� ����� ��� )� ������ ��� ���� *�� ��� ������ ������

*� ) "' �7 )���� ������ (�7 %:: �������� �� *� ) %$$ 4@� �� �F�� �� )������

����� ��������� ������ ���/ ��� ������ �� ��� ��������� *��� ��� ���/

-.�. / ��� �� �����

7���� ��� �)������� ��� ��� ���� � ��� ����� ���������� *��� ���)���� ����

@���� ,@����� 7������ 0 ���-/ ()� �3�� ��������� � � ������ ����� ������ ��� *���

�����)�� ������� ��� �� �� ?� ����� )� ������ �� ��������� K�� ��� ������ ��� �����

��� ������B �3�� �)���� ������ � ������ �� �������� ���������� ��� �������� *� )�� <

,����� �- �� ���� ,����� �- ������ �� ����� ������ �������� ����� *��� ����������

�� ��� ��� �� �� �� ����� ���/ ����� � ���� �� ,�3�� �)���� ������ � ���� )�� )���

������ �� �������� ����� �� ��� ����� ������- *��� ������� ��� �� )�� ����������

�� ��� �� ������ �� �����/

()� ���� �� *��� *��)�� *��� �� >����2������ (�7 %:: ,> %::- *� ) %$; 8�@ ���

)�� ������ �� �� )� ���� ����� �������� �� *� ) $/' ��F�� 8@>� ' ��F�� �>� % ��F�� �� ������ ��� '$ �7 ��� ������/ ��������� ���� �� *��� � ���� �� %' �� 8����� ��

�� � ��� ��� ���� �� � <: �� ��� ����� � )� �� *� )�� 6A= )� *)��� )�� *���

���������� �� � '$ �� ������ � ���� ������� ��� �� ?��� �� �� ��� ����� ������ ��� ��

������� �2������ (�7 %:: ,� %::- *� ) %$; 8�@� $/' ��F�� 8@>� ' ��F�� �>� % ��F�� �� ������ ��� '$ �7 ��� ������/

�� ��� ������� *��� � ���� �� ������ �� � ��� ��� ���� �� � <$A<' �� ��� ����� � )� ���� �� *� )�� <A6 ) ��� �� )�� ����������/ ����K�� �3�� *��� ��������� ���� �����

� ����� ���� ��������� ,"A# ��-� *��)�� *��� �� > %:: ��� ���� �� ?��� �� �� ���

����� ��������� ��?���/ �� ) ���� �� ��������� �� ���2������� �3�� *��� )��

������ ��� �� �� �� �� �� ��� �� � '$ �� ������ � ,%$ �3�� ��� ������ - �� � %:: ���

)������� *� ) )� ���� ��� �� '$ �7F�� ��� ������ ��� ����� ���� �� H"=I ��� %$$ �7F�� ��� ����� ���� �� H"5I/ 0� )�� � ��� ����� � ��� � ���� �� *��� ������ �� �

�� �� ��� ������ � ������� � ������� ��� ��� ���� �� � <#/' �� ,�����- ��� <: ��,�����- ��� ""A"6 ) ���� ��� ������ ��� � ����)��� ������ ��� �� '; �3" �� )����?��

���/ ()� ���� ) �� �� �� ��� ��� ��� 3�42������� ���� �� �� )� ���� �� ��� �� ���

���� ��� �� �� ��� �� ���������� � � �� ���� )� �C����� �� )� ���� �� � )�

)������� ������� ��� �� �� ��������/ ()�������� ��� �� � ��� ������ � ����)��� ��� )��

����� �� ���� �� �� ������ *)�� �������� � �� ���2������� ���� ��/

0. !����� �� ��. 1 2��������� 34 5-���6 ��-�7���� %%"'

Page 4: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

-.9. ����������� �� ��&�� %��%��

0� � ) ������� ������ ���� *��� �������� ���� ������2 )�*�� ������ � ����� ����

���������� � ������ ��� )� *��� ��������� �� �� ��� 0�8 �� �� ����� ���/ 0� ��

�C�������� )� �� ���� ����� ������ �� ��� �������� ��� ����� ��� ����� ���/ @����

*�� ��� �� � �*��2� �������� �� � ����?�� ������� �� >��L� ����� ��� % )/ ()�

����� � ����� �� �� ��� ����� ��� �� ������ �� *�� ���������� � � ?��� ������ �� ���

�� %� %$=F�� ,�����- ��� "� %$=F�� ,�����- �� )� ��� ����� ��� ������ � ����?��

(��� �������� �� *� ) $/" �7F�� �������������� $/% �7F�� )��� ����� ���

$/$% �7F�� )������/ 8�� ������� ������ � ,' �3��F'$ �� ������ - ������� � �������

��� *��� ���� �� ���� )� ���� ��� � ����)��� �� ��� �� �� �� �� �� ���/ @���� ���� ��

��2���� ��� ��� �� "$A"" )/ ������ ��� ���� �� *��� ����� �� � "$ �� ������ � ,%$ ��������� - �� � >����2������ ������� �� ��� )� �� ����� K�� ,@38- ����� H"#I *� ) )�

���� ��� �� ����� ��� ��� ��� ����� ��� ����� ����� �������� *� ) ������� ��� �� �

����� ��� �)���� ,8���� @���� �?�� 4@�-� *� ) � ��� � ����)��� �� '; �3"� 5;

3" ��� ##; �" H"#I/ ()� �)���� *�� ������ � )� ��� �� ���� ��� ,' ��� *���

����*�� ��� �������- ��� � ��� '� *)�� ������ *��� ���������� �� � ����) ������ �

����� �C��� � �� � )��) ������ �� �>6�/ �������� *�� �������� �� )� ���� ��� �� �����

� ����� �)����� �� ��� � ����)��� ����� ����� ����� ���������� *� )�� )�

�)����/ 8���� ����� � � ,(� ��� ��- *�� ����� �� � ��� 5 �� �� ��/

-.3. �������� �� �������

�)�2�.��� �������� *�� ��� ��� �� � ����� ��� ��� � � �� ���� �� ����� � ���/ ������2

����� *��� ���������� �����?��� � )� '; �����/

� �������

9� )�� ����� �� � ���� ��� ���������� �� ��� ��� 0�1�� )� ��������� �� ����� �

���� �� *�� 6'� '' ��� #$; �� ����� �� � ��� �� ������ �����/

� ���� ��* ������ ��� �� ����� � 3�42������� ����� ���� �� ��������� � ��� ����

� ��� ,</<;-/ ���� � ����� �� �� (��� % ������ ���� ����� � ��� � ���� �� ��� ��� )�

����� ����������/

� )��) ��������� �������� � *�� �)���� ���� �� �� ������� �M�� �� � 3�4� ��

��K�� �� � )��)�� @/�/ ,(��� %-/ � )��)�� ����� ����� *�� � ����� �� ���� �

�������� *� ) ���� � *� )�� ����� ������� ,(��� %-/ �� ������� � �� 0�1� ��?������

*�� �������� �� ���� � �������� *� ) ���� � ,(��� %-/

8� )������ � )��)�� ������ ��� �� ����� � � �� ������ *�� ������� �� ���� �

�������� *� ) ����� � ��� �� �� �)�*� �� (��� "/

()�� �� ���?���� � )� ?����� )� )� ����� �� (�� ��� ��� �� ��� ������ �� �� �

������ ��� �� � �� �3��� *��� �� �������� *� )�� ���� � ,<</%; ����� ":/5;-

*)����� ����������� *��� ���� *� )�� ���� � ,"'/5; ����� %:/:;& ' � $�$%- ������� � ,<</5; ����� ":/5;& ' � $�$'-/ @������ ���� � *��� ������� ���� *)�� )������ �� (�� ��� ��� �� �� *��� ������ �� �� � ������ ��� �� � �� ������� ���� ��/

%%"= 0. !����� �� ��. 1 2��������� 34 5-���6 ��-�7����

Page 5: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

� ����������

()� �� �� �� ����� ����� ��� ��?������ �� ����� ������� ���� ���� �� ��������� �

����� �� ����������� ��������� ������ ��� *�� �������� � �� �� �� ����� � �

� ����� *� ) ���� �� ������� ��� ���� �� ��� �������/ 9� ���� �������� )� 0�1�

��?������ �� �� ���2������� ���� �� �� ����� ��� ����� �������/

3�� ���+ � *�� ���� �+�� �� � ������ �� )� ���� +��*� � � ��������� � )�

����� �� ���� �� ������� ��� ��?������ H%5�":A<%I� ��� �������� ���������� ��

������ ��� *��� �������� � ������ ������� ���� ����� ��� ����� �� ��� ������� �

)� ���� ��� �� )� ����/ ()��� *�� �� �����?� ������ ��� �)������ )� ������ �� )� ����

� )�� )�� ������� *��� �������� ��� �������� � )� �C������� /

� )��)�� ������ ��� �� ����� � ���� �� *��� ��������� ���� ����) ��)��� �������/ 9�

������ � )� )�� ?�������� � ����� �� ��� � )����� �����)������ ������ ������ �

�������� ����� ����� )� 3�4 ��������/ 0� ��� )� ���� ) �� )� ������� �� *��� �� �� )�

���� ������ �� � )� �� ��� �� � ��� ���� �� � ���� �� ���� �� �������� �����/

0� ����������� *� ) )�� ?������ *� )�� )� ����� �������� ����� � � ������� ��������

�� � � )��)�� ����� ���������� �� �� � *�� �������� �� )� 3�42������� ���� ��/

8� )������� ��������� )� � �� ����� � � � *��� )� *� �������� ����� ��

���� ��� ���������� �� ������ ������� ���� ����) ��)��� ������� *�� ����� �� � )�

����� � ��� � � �����?��� �� )��)�� �� � �������� � 3�42������� ���� ��/ ()��

��C��� �� ?����� �� �� ������ �C�������/ ()� ���� �� ���)������ ����� ��� *)��)

(��� %

1���� ���������� �� ������ ��� ,����� @���- ���� )� *� �������� ������ �� ������� ��� ���� ��

3��� �� ,- �������� ,;- (� � ��F � % ,;- (� � ��F���" ,;- ��F � < ,;- ��F���6 ,;-

���� � <<# ==/6 � "</5� <</% � %:/$� '"/" � "6/$� ":/5 � %:/'� 65/= � "=/6�

���� � %%"5 =6/# � :/=� "' 5 � 6/" 6$/% � =/= %:/: � 6/" <%/< � 5/:

���� � %6'5 #</: � 5/= <</5 � 6/<� 6$/< � 6/: ":/5 � 6/'� <'/= � '/'�

������ *� ) �������� ��������� � ,�A�- ������ ,' � $�$'-/% (��) ����� ��� ��� ���� �F � �� ���� ��/" (��) ����� ��� ��� ���� �F��������/< ���� ���� F � �� ���� ��/6 ���� ���� �F��������/

(��� "

7���� ��� ��� ���� ���������� �� �� ,����� @���- ���� )� � �� ���� �� ������ ������� ����� )�

*� �������� ���� � ��� ������� ������ ,;-

1�����% ,- 7��F � ������" ,;- ���F � ������< ,;-

���� � :' %%/% � %# ##/: � %#

���� � ":% ""/< � %"/<� 55/= � %"/<�

���� � 6:5 %%/# � =/= ##/% � =/=

������ *� ) �������� ��������� � ,�� - ������ ,' � $�$'-/% (� �� ���� �� ������ �������/" 7���� �� � ���� )� � �� ���� �� ������ �������/< ���� ���� �� � ���� � �� ���� �� ������ �������/

0. !����� �� ��. 1 2��������� 34 5-���6 ��-�7���� %%"5

Page 6: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

���� �� ������ ����� 3�4 ���) ���� �� �� �������� ����� ��� �� )��� .��� �� *)��)

�� ������ ������ ��� �� �������� *� ) �� ���2������� ���� ��/ >�*����� )� 3�4

��)��.� ���� � �� ���� ��� )� ��������� ����� ��� ��� ���.�� �� ���������� )�

��������� *��� ���.���� H%%I/ 0 �����*� )� )� ��������� �� ��������� � ����� �� )��)��

������/ 0� ��� ��������� ��� ��� ��� ����� )�� ����� � �� ��/ 9� ���� ������ � )�

)� ���� �� )� �������� ���� � ��� ������ �� �� �� ���������� )��)�� ����� ��� � �� �����

���� �� � ���������� �� � ����/ 3��� �� ��������� ���� ����) ��)��� ������� ������ �

������ ��� �� ����� � *��� �C������ �� ������� ���� )� ���� ����� ���� � ��� ����� ���

����������/ 3� )� ��� ���� ���� �� ��������� � ��� ���+ �� *)��) ��� ������� ���

��� �������� ��������� �� )� ��� ��� )�� ����� � )� ����� ��� ��� �� )�� �����������

������� �� ���� �� ������ ���� � )� ����� ��� ��� ���� � ����/ �������� �����

���� �� ��� � ���� ����� �� �� ���� .��+�� ����� �� � ������� ������ �� � � ��� ��

��������� �� �� �������� ��� � ��������� ������ �� �C����� �������/

0� ���� �� ������� ���� �� ��� �������� �������� �� �� *��� �����?��� �� )��)�� ��

�� �� )�� �� �����/ 8� )������� �����?��� �� )��)�� ����� ��� ��� ���� �� �� �� �

������ ��� �� )� � �� ���� �� �3�� *��� ���� �� ����� �������� �� ���������� *� )

������� ����� � H"'I/ >�*����� ��� ���� �� ������� ���� �� ��� �������� *)�� �� � � ���

����� ���������� �� �� *��� ������ �� �� ���� ��� � ������� ���� ��� ���� � ��������

���� ��� ��� ���� � � /

9)� ��� )� ������� ����� �� ��*�� ����� ����� ��� ��?������ �� ����� ��������

*� ) �� ��N 0 ����� � ���� � )� ����� ���� �� ��� ���� ����� ��� � ���������� ��

� ���� )�� ����� ���� ��/ ()� ����� �� � ���� ����� � ����� ������ ��� ��� ����� ���

���������� � �� ������ �� �� � )� ��*�� ������ ��� �� (� )� ����)�� �� � ��� � ��� 5

*)�� �� ���2������� ���� �� *��� ���/ 0� ���� ��� � )�� *� ���)����� )� ��

����������� �� �������� �� � *��� ���� *� )�� ����� ������� � *��� )� *� ������

�� ���� ��/ 8� )������� )� �� ��� �� �� �� ��� �� )�� ��� ��������� �� )� �����

������� � �C ������ ��� ������� ��� ��.���� �� ���� � ���� ������� ��) �� �� ��/

�������� )�� ���� ��� )������� � )� �)�� ��� �� �C������� �� �� ����� ��) �� �������

���� ����) ���� �������� � �� ��� �������) ������� �� )� ��� ���� �� *)��) )� �������

�� ���/ ()� �� �� �� �� �� ��� � �� �������� � � �������+ ��� �� )�� ���������� /

�� )��) )� ���� ��� ��� �� ���������� � � ������� � )� ����� �������� )��� ��

���� ��� ������� ��������� )� ��.���� ��� ��� ������ ��� �� �������� �� �� ��� ��

�� �� H<"�<<I/ 0� ��� � �� ����� ����� ��� ���� )��� �������� � �)�� �� ��� ��.���� ��� ��

�� �� ������ �� �� ��� �� )� ����� ������� H<6I/ ()�� ����� � ��� )�� ������� *� )

�������� ����� � �� ����� ��.������ � �� )� ����� ���������� �� � ��� ��� )� ��*��

.��� � �� ������ ����� H<'I� ��� ����� ��� )� ��*�� �������� �� ��/

0� ���� ������ ����� � � �����?��� �� ��*�� �������� �� �� ����� 3�42������� ���� ��

��������� � ��� ���� � � � ������� �� � � �� �� �� ���2������� ���� ��/ @��.�� ��

)� )��)�� ��� ���� ����� ���� ����� �� �� � ������ ��� �� ������� ���� ��� *��

�������� �� ���� �/ 0 �� ��+��� )� 3�42������� ����� ���� �� ��� OO�.�����LL *� ) �

���� ��?���� �������� ���)������ ������� � )� ?��� � ���� �� ��������� � ��� ������

�� )� ����� �������/ 3� )� ��� ����� ������� ����� � �� �� �� )��� �� �)�*� � ��������

���������� �� ����� ���� *)�� )� *� ������ �� ���� �� *��� �������� H<=I/ ()��

?����� ����� � �� )��� )���� )� ����� ���� �� ��� ���� ����� ��� � � ���� )�� �� ��

���� ��/

%%"# 0. !����� �� ��. 1 2��������� 34 5-���6 ��-�7����

Page 7: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

�� ��� ��������� *��� ������� � � )� ���� ��)����� ���������� )��� ��������

���� � ��� ������� � ��K�� ��������� �����������/

@���� ����������� ����� ������� �������� *)�� ���� � ��� ������ �� �� �������

���� ��� *� ������ )� 0�1� ��?������ �� ����� ��� � ���� �� �������� � ����2

������ � ���� ����� 0�7 ��� ���� ������ )� ����� �� )� ��*�� �������� �� �/ 0 �� ��

����� �� )� ��*�� �������� �� � �� �� � ������� �������� ����� 0�7 �� 0�8/

()� ���������� �� )��� � ��� �� )������� ��� ���� � �� ����� )� ��?������ ��

�������� ������� ��� � �� ����� �� )�� �������/

�������� �������

()� � )��� ��� ��� ��� � ����/ ���� >/ 8�� � ��� ��� ���� ������� �� )� �������� /

����������

H%I ������ 0� � J>/ ����� ��� �� ������ �� �� �� ��� � � ����� �� ����� ��+ ����� ���/ ()������������

%::$&<<B55A##/

H"I ��� ����� 7�� ��� ����� �>� ����� 3�� 7���� �� �P/ ()� ������� ��� �� ��* ������� ���

��)�������� � @� ) �������� ��������/ ()������������ %::'&6<B"%A<$/

H<I ��������� ��P� �� @�� 1���� �� P��� >�/ @������� �� �� �� ��� ����� ��� �� �� ���� �� ���

���� �� ������ �� ���������������� ���� ��� ���� )���� ,"���%� �����%�-/ ()������������ %:::&'%B#:%A#/

H6I ��������� ��P� P��� >�/ ()� �� �� ��� �� ����� �� ������� ��)��.�� ��� �������� ��� ��

���������� ��������� �������B � �����*/ �� ��� %::<&%6<B%':A=#/

H'I ���� �3/ ������� ��� �� ������� ��� ��)�������� �� ��� ) �������� ���� ,$�� &��-/

()������������ %::'&6<B%<A"$/

H=I J��� ()�7� ���� �� 9� ) Q�� ��������� 797� ��� ���� 7�/ �� �� ��� �� �� ��� ���+ � ���

����� ����� ��� ��� ������� �� �� ��/ ()������������ %::6&6"B=5'A#</

H5I ��� ���� 7�� ��� ���7� J��� ()�7� 9�� ) Q�� ��� ������� ()>� 9������� �>� (������ 7�7/

(����������� � ������ ����� ��������� ������ ��� �� ����� ���� ��/ ()������������ %::%&<'B%:A"6/

H#I @ ���� ��� ���� ���� �(� ������ ��� ����� �J/ � �� )�� ��� ������ ��� ����� ���� �� ����

����� �������� ���������/ ()������������ %:#<&"$B%6:A=%/

H:I ���� �� �� ���� �� ������� �� �������� �/ 3�� ���+ � �� ���� ���� �� �������/ 0�B ����������� �� )�

8�� ) 9���� ������ ��������� ���/ <& %::6� �/ 6#$A"/

H%$I ���� �� ��������� 797� ��� ���� 7�� 9� ) Q�� J��� ()�7/ 8�������� ����� ��� �� �� ����� ��

������� �� ��� ��������� � R" �� �� )� ����� �����/ P ������ 8�� �� �� � @�� %::<&%"B6$/

H%%I ���� �� �������� @� �������� �/ ����� �� ��� ���+ � �� 0 ����� 7��� �������� ����� ��*�/

()������������ %::=&6=B#::A:$:/

H%"I 7��� M�� 7� �����* 7@� �������� P�� ��� P�� ���+� ��/ (����������� ������ ��� �� ����� ���� ��

���� )������2 ��� �� ������� ��� �� �� ��� 0�8/ ()������������ %::<&<:B"=5 H�� ��� I/

H%<I ������ ��� ������� ��� ����� ) ��� P�)���� ��/ ���������� ����� � �� ���� � �� ������ ��� �� �� ��

��� ����� ��� ,0�8- ��� ����� ����� ��� �� ������ ��*�/ ()������������ %::6&6%B=5A5"/

H%6I ���� � �� ����2>�)�� �� �� ) �� ������� >/ ������ ��� �� ���� �� ���� �� �� ��� ���������

������ ��� ����� � � ������ *� ) �� *� )� ������ ����� ��� ��� ��� ��� �� �������� ������� ���

� ����/ ()������������ %::'&6<B==5A5'/

H%'I ���� ���� �(� >��� �� 0����� �� �� ����� ��� @ ���� ��� 7����� �� � ��/ ����������� ��� ���� �� )

���� �� �� �� ��� ����� ��� �� ���� ���� �� ������ �� � ������������ ��������� ������ ���/ ()������������

%::"&<#B==5A5#/

H%=I �������� ��� P���� @� @��+�� 7� )��� �� ������ ��� ���+� ��� � ��/ ��� ��� )������� ���������� ��

��.��� ��� �� ���� � ����� ���� ��� ������������ �� ������ �� ������/ ���� ������ %::5&'=B<#=A:"/

0. !����� �� ��. 1 2��������� 34 5-���6 ��-�7���� %%":

Page 8: Bovine and Buffalo in Vitro Embryo Production Using Oocytes (2002)

H%5I 1����� � �� ��������� �� �� ���� �� ���� �� �� 7�� �� �������� �/ @������� ������� ��� ������ ��

������� ��� �� 0 ���/ 0�B ����������� �� )� (*��� ) 0� ���� ����� ��������� ()� >���� ()�

�� )�������� ���� ������ ,0���- %::"&6B"$6'A5/

H%#I �������� �� 1����� � �� ��������� �� �� ���� �� ���� ���� �(/ 1���� �� ���� ����� ������ ��� �� �0

���� ��� �� )� ������� ��� ��?������ �� 0 ����� ����� ��*�/ ���� ������ @�� %::5&65B%5%A#$/

H%:I ��� (� �� ����� �E� @�� >�� ������� 7�/ @������� ��� ��� ������� ��������� ����� ��� ��

M������ ������� ��� ������/ ���� ������ @�� %::6&<'B%:%A:/

H"$I @)�������� 9� P������� 7�/ @������� ��� ��� ���2������� ������ ��� �� ��� �� )� *� �� �����

,$%&��%� &%&����-/ 0�B ����������� �� )� (�� ) 0� ���� ����� ��������� 4����� ���� ������ �0 ,0���-

%:#6&6B"6$A"/

H"%I J��������� �/ ������� ��� � ���� �� )� �������� ��� ����� �� �7@3 ��� 8@> �� )� *� �� �����

,$%&��%� &%&����-/ ()������������ %:#=&"=B'%A=$/

H""I ���� 7� 9���) P7� 1����� ��/ 0� ��������� ����� ������� � *��� *� �� ����� ��� ����� �� �� ��/

()������������ %:#=&"'B%<A"</

H"<I @�+� (� @����� @J� @M� � P� 7���� 7�/ 0� �� �� ��� ����� ��� �� *� �� ����� ��������� ���� �� ���

)��� ���� � � ������ �� �� ��/ ()������������ %::"&<#B%%#5A:6/

H"6I (� �� @7� @���) �� (���M� 7� ��*�)� �>� (��*�� ��/ 0� �� �� �� �� ���� ��� ����� ��� ��� ����������

�� ��������� ���� �� ���� ����� ,$%&��%� &%&����-/ P ������ 8�� �� %::"&:'B':5A=$5/

H"'I ���� �� �������� @� ���������� �� �������� 7� �������� �/ 0� �� �� ����� ��� ������ �� �)��������

��?��� �����/ ������ P %:::&%B%%'A"$/

H"=I ���������� �� ������ �� �� ���� �� ��������� �� �������� �/ 1���� �� ��� ������ ����� �� �� ��

�� �� ��� �� ����� ����� ���������� / ()������������ "$$$&'6B%'<5A6"/

H"5I �� 7� �� ��� 8��� ��� 7���� �8� ����������� >/ 1���� �� ��� ������ �� �� � )���� ����� ���

���������� ������ � �� ����� ���� � �� ��� �� �� ��/ 7�� ������ ��� %::'&6"B6<"A=/

H"#I (���� >�� 9)� ���)�� �3� ��*��� �1/ @������� �� �� �� �� �� �� �)��� ��� �� �� ���/ P ������

8�� �� %:5"&<$B6:<A5/

H":I >����� �P/ �)� ��������� ����� ��� �� ������� ��� �� ������� ������� ���� ���� ��� ����� �)��

����/ ���� ������ @�� %:#'&:B<$%A%'/

H<$I ����������� �� @���� 1� 1����� � �� ����)��� �� �� ���� �� (������ �7/ ������ ������ �� ���� ���� ��

����� ��*�/ 0�B ����������� �� )� 0� ���� ����� @������� �� OO������� �� ����� ����� ��� �� )�

7��� �������� ��� 7����� 1�� LL� ������ 1��� & %::"� �/ 6$%A</

H<%I �������� �/ ������� ��� ��������� � �� �����/ 0�B ����������� �� )� ()��� 0� ���� ����� ����� ��

��� ��)������ �� ������ ������� ���� ������& %::5 ,����/ $%&��%� &%&����-� �/ ":A'"/

H<"I J������ ��� 7� �)������������ 4/ (��� ���� �� � �� �� �� �� �� ��� �� ���� �� ���� �� �� �*���

�������/ ������ P @��� %::6&"B%<'A6=/

H<<I �)������������ 4� J������ ��� 7/ 3��� � �� �� ��� �� �� �� ��� ����� ��� ��� �� �� ��� �� ���

���������� ��������� � ��� �*��� ����� ������ ���� ������ )�*�� �����/ ������ P %::%&5B%#:A:#/

H<6I ������ �� 7����� 7� �� ���� �� 9������ 7� ���������� �� ������� �� ���� �� � ��/ � ���������� �� ��

�� �� �� �� ��� �� ����� ,$%&��%� &%&����- ��� ����� ���� �� ���� �������� ����������/

()������������ "$$%&''B6## H�� ��� I/

H<'I 7�� @J� ��� @�� 7�)�� �� �)��� �0/ ��������� �)����� �� ������� ��� ���� �� �� �� ��� �����/

()������������ %:##&<$B%$$'A%$/

H<=I ����� �� ��� � �� �� ��� �� (���� �� ��)� �� ������� �/ 1���� ����� ��� � ��� ���+2� ���� ����

������/ ()������������ "$$%&''B%<6%A'5/

%%<$ 0. !����� �� ��. 1 2��������� 34 5-���6 ��-�7����