Bacteriology Lab 1

به نام خدا

By: Dr. A. Mohammadi

Department of Biology,

Faculty of science,

University of Alzahra

سومآزمایشگاه انتروباکتریاسه

Dr A.Mohammadi 2

ایباکتری های گرم منفی روده کلایاشریشیا

کلبسیلاشیگلا

پروتئوسسالمونلا

Enterobacteriaceae

Dr A.Mohammadi

3

Dr A.Mohammadi

4

Dr A.Mohammadi

5

Dr A.Mohammadi

6

Dr A.Mohammadi

7

Colonial Morphology

Characteristics of the organisms' colonies on different media have been used toidentify common members of the family Enterobacteriaceae. For example, theability to ferment lactose (detected by color changes in lactose-containingmedia such as MacConkey agar).

lactose-fermenting strains *pink-purple colonies* (e.g., Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter ) Non lactose-fermenting strains * colorless colonies* (e.g., Proteus, Salmonella, Shigella, and Yersinia spp). Delayed lactose fermenter (DLF): (e.g., Morganella, Providencia, Serratia,

Edwardsiella, Erwinia, Hafnia )

Resistance to bile salts in some selective media has been used to separateenteric pathogens (e.g., Shigella, Salmonella) from commensal organisms that areinhibited by bile salts (e.g., gram-positive and some gram negative).

Dr A.Mohammadi

8

Dr A.Mohammadi

9

Dr A.Mohammadi

10

Dr A.Mohammadi

11

Dr A.Mohammadi

12

Some pseudomonads are motile by polar flagella.

Pseudomonads are catalase-positive

کار عملی

آگاربلومتیلنائوزینمحیط(EMB)می‌شوداستفادهمدفوعفرم‌هایکلیجداسازیبرای.غیرهازتخمیرکنندگاندهندهافتراقلذالاکتوزدارای

ائوزینرنگ‌هایدارایYمهاررامثبتگرمباکتری‌هایرشدآن‌ها(1:بلومتیلنومحیط(اسیدیمحیطدر)ودادهواکنشلاکتوزشدیدتخمیرکنندگانباآن‌ها(2می‌کنند

.درمی‌آورندسیاهیاتیرهارغوانیرنگبهرا

معمولاا‌وودهبایی¬رودهباکتری‌هایسایربهنسبتکلیاشرشیامختصتیرهرشداین.می‌دهدرخسبزرنگفلزیجلاییکباهمراه

استائوزینرسوبکلیاشرشیاباکتریبودنفلزیجلایعلت.می‌کنندایجادی‌هاییکلنکلبسیلایاانتروباکترهمچونلاکتوزملایمتخمیرکنندگاندیگر

.باشدتیرهارغوانیتاصورتی‌رنگازمی‌تواندکهرنگ،می‌باشندنلاکتوزتخمیربهقادرکهباکتری‌هاییوسوکروزتخمیرکنندهباکتری‌های

.می‌گیرندراکشتمحیطرنگاینکهیاکردهحفظراخودطبیعی

Dr A.Mohammadi

14

EMBمحیط کشت -1

لی‌فرم،کدوباساعتعقربه‌هایجهتدرترتیببهبالاازمحیطمثبتگرمباکترییکوکلی‌فرمغیرمنفیگرمباکترییکفلزیلایجبه.کرده‌اندرشدخوبیبههمگیکهاستشدهتلقیح

کلنیینهمچنوشدهایجادبالادرکهکلی‌فرمیکلنیسبزرنگدوهر.نیدکتوجهشدهتشکیلراستسمتدرکهصورتی‌رنگی

اینرنگیتفاوت‌هایکهمی‌باشندلاکتوزتخمیرکنندگانجملهازاکتریب.استتولیدی‌شاناسیدمیزانبودنمتفاوتدلیلبهدو

رشد.استهنکردایجادنیزرنگیونداشتهتخمیرقابلیتپایینوینائوزرنگ‌هایوجودبانیزچپسمتمثبتگرمباکتری.استشدهمهاربلومتیلن

Dr A.Mohammadi

15

E.coli و سالمونلا درEMB کلبسیلا و شیگلا درEMB

Dr A.Mohammadi

16

EMBدرباکتراینتروو پروتئوس

Dr A.Mohammadi

17

Dr A.Mohammadi

18

(منفیلاکتوز)محیطهمرنگهایکلنیشیگلا

معروفماهیچشمبهکهتیرهمرکزارغوانیهایکلنیکلبسیلابراقایهکلنیداردکپسولباکتریایناینکهدلیلبه.است(مثبتلاکتوز).کندمیایجاد

پلیت1کلبسیلا و شیگلا در گروه کشت خطی متراکم 2پلیت1در اشرشیا کلی و سالمونلا خطی متراکم گروه کشت 2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت خطی متراکم 2

19کار عملی

Dr A.Mohammadi

وکلی‌فرمارگانیسم‌هایتشخیصبرایافتراقیوانتخابیمحیطیکآگارکانکیمک.استروده‌ایهای¬پاتوژن

خانوادهاعضایافتراقوجداسازیبرایلاکتوزتخمیرقابلیتبهتوجهبامحیطایناز.می‌شوداستفادهانتروباکتریاسه

ویولهکریستالبدونآگارکانگیمک:داردمختلفیانواعمحیطاین(CS)کهکنترلبرایCSدارایآگارکانگیمکومی‌کنندرشدآندرمثبتگرمکوکسی‌های.می‌کنندایجادتداخلنتایجدیگردرکه(پروتئوس)سوارمینگباکتری‌های

تروکوک‌هاانبه‌ویژهمثبتگرمباکتری‌هایرشدازمانعویولهکریستالوصفراویاملاح.می‌شونداستافیلوکوک‌هاو

معرفعنوانبهردنوترالpHاسیدیمحیطدروبی‌رنگ(8/6بالای)قلیاییمحیطدرافتراقیخصوصیاتدادننشانجهتویژگیاینازکهاستقرمزرنگ(8/6زیر)

Dr A.Mohammadi.می‌شوداستفاده

20

MACمحیط کشت -2

Dr A.Mohammadi

21

E.coli و سالمونلا درMAC کلبسیلا و شیگلا در

MAC

Dr A.Mohammadi

22

23

Dr A.Mohammadi

مثبتشیگلا لاکتوز منفی و کلبسیلا لاکتوز

پلیت1گروه کشت خطی متراکم کلبسیلا و شیگلا در 2پلیت1در اشرشیا کلی و سالمونلا خطی متراکم گروه کشت 2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت خطی متراکم 2

24کار عملی

Dr A.Mohammadi

آگارکُلاتدزوکسیلیزینگزیلوز(XLD)کهاستافتراقیوانتخابیمحیطیک..می شوداستفادهمدفوعنمونه هایازپروویدنسیاوشیگلاجداسازیجهت

میملعبهممانعتمثبتگرمباکتری هایرشدازکهاستصفراوینمکیککلاتدِاُکسی-.آورد

می باشندتخمیرجهتقندیمنابعسوکروزولاکتوز،گزیلوز.دِکربوکسیلاسیونجهتکهاستاسیدآمینه ایلیزین(یاکربوکسیلگروهحذفCOOH)

.استشدهافزودهمحیطبهراآنرندقادکهاستباکتری هاییبرایاکسیدشدهگوگردفراهم کنندهسدیمتیوسولفات

.نماینداحیاءH2Sبهیونآزادسازیموجبکهچرامی کندعملمعرفیکعنوانبهسیتراتآمونیومفریک

سیاه رنگرسوب،H2Sبایوناینواکنشنتیجهدروشدهمحیطبه(+Fe3)فریک.می شودتشکیلمحیطدر(FeS)آهنسولفید

معرفعنوانبهنیزردفنلpHمحیطدروزردرنگاسیدی،محیطدرکهمی کندعمل.می شودقرمزرنگیاصورتیقلیایی،

Dr A.Mohammadi

25

XLDمحیط کشت -3

شناساییتفسیرنتایج

درشد ضعیف یا عدم رش(P)

.مهار‌شده‌استدزوکسی‌کلات‌میکروارگانیسم‌توسط‌گرم‌مثبت

گرم‌منفی.مهار‌نشده‌استدزوکسی‌کلات‌میکروارگانیسم‌توسط‌( G)رشد خوب

.ستمیکروارگانیسم‌از‌تخمیر‌گزیلوز،‌اسید‌تولید‌کرده‌ا(Y)رشد زرد غیر‌از‌شیگلا‌یاپروویدنسیا

اه رشد قرمز با مرکز سی(RB)

.کنداحیاء‌میH2Sمیکروارگانیسم‌گوگرد‌را‌به‌

غیر‌از‌شیگلا‌یامالاً‌احت)پروویدنسیا‌

(سالمونلا

رشد قرمز بدون مرکز (R)سیاه

کند؛‌خمیر‌میعدم‌تخمیر‌لاکتوز‌یا‌اینکه‌به‌آهستگی‌گزیلوز‌را‌ت.زدسااز‌دکربوکسیلاسیون‌لیزین،‌محصولات‌قلیایی‌می

ا‌احتمالاً‌شیگلا‌یپروویدنسیا

Dr A.Mohammadi

26

Escherichia coli: flat yellow colonies; some strains may be

inhibited.

Enterobacter and Klebsiella: mucoid yellow colonies.

Dr A.Mohammadi27

Salmonella: usually red colonies with black centers.

Shigella and Pseudomonas: red colonies without black centers.

Dr A.Mohammadi28

Dr A.Mohammadi

29

Dr A.Mohammadi

30

الههمحیطاطرافوبراقورنگبیشیگلاهایکلنییمانزتوسطصفراویاملاحهیدرولیزاثردررنگبی

.لایزینوصفراویهایمنفیH2Sدوهرکلبسیلاوشیگلا

(زردمحیط)مثبتلاکتوزکلبسیلا(قرمزمحیط)منفیلاکتوزشیگلا

پلیت1گروه کشت خطی متراکم کلبسیلا و شیگلا در 2پلیت1در اشرشیا کلی و سالمونلا خطی متراکم گروه کشت 2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت خطی متراکم 2

31کار عملی

Dr A.Mohammadi

HEکشت محیط -4

سالمونلاوشیگلاگونه هایافتراقوجداسازیبرای(HEA)آگارانتریکهکتوئنمحیط.داردکاربرد(هاانتریک)روده ایمنفی هایگرمدیگراز

.می کنندعملpHمعرف هایعنوانبهنیزاسیدیفوشینوبلوتیمولبرمرنگ هایارآگوباکتریاییکلنی هایدرمختلفرنگ هایتولیدواسطهبهباکتری هاافتراق

.استامکان پذیرتازردایکلنی هتشکیلموجبمی کنندتولیداسیدتخمیر،فرایندازکهانتریک هایی

.می شوندرنگایبهگُلصورتیبااآن همقابلدرنمی کنندتخمیرراقندهاازیکهیچشیگلاوسالمونلاگونه های

آبی-سبزکلنی هایتولیدومحیطpHدرافزایشاندکیموجبجانوریبافت هایتجزیه.می شوند

دارایکلنی هایتشکیلموجبH2Sبهگوگرداحیاءباسالمونلاگونه هایاینکهضمن.می نمایدتیرهکاملاًیانسبتاًراآن هاکهمی شوندآهنسولفید

Dr A.Mohammadi

32

Dr A.Mohammadi

33

یکابساعتعقربه‌هایجهتدرترتیببهبالاازمحیطاکتریبدولاکتوز،تخمیرکنندهمنفیگرمباکتری

تلقیحنفیمگرمباکترییکولاکتوزغیرتخمیرکنندهومیرکنندهغیرتخباکتریدوآبی-سبزرشدبه.استشده

قوعودلیلبه)شدهتشکیلسیاه‌رنگرسوبهمچنینکلنیدر(H2Sوسیتراتآمونیومفریکبینواکنشسمتتمثبگرمباکتریرشد.کنیدتوجهراستسمت.استشدهمهارصفراوینمک‌هایوجودبانیزچپ

Dr A.Mohammadi

34

35

Dr A.Mohammadi

پلیت1گروه کشت خطی متراکم کلبسیلا و شیگلا در 2پلیت1در اشرشیا کلی و سالمونلا خطی متراکم گروه کشت 2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت خطی متراکم 2

36کار عملی

Dr A.Mohammadi

SSAکشت محیط -5

تخمیرآندرکهشیگلاوسالمونلارشدتقویتدربودهکانکیمکرنگهممحیطی.استنظرمدلاکتوزقندسایروهامثبتگرمرشدمهاردرصفراویاملاحوگرینبریلیانتدارایمحیطاین

.باشدمیانتروباکتریاسهاعضاءوورتیصکلنیدارایهامثبتلاکتوزکه.باشدمیردنوترالآندرنظرموردمعرفمیصورتینیکلدارایشیگلاوسالمونلادارند،کهماتیارنگبیکلنیمنفیلاکتوزباشند

باشدمثبتH2Sباکتریاگرآندرکهداردنیزآهنوسولفاتتیومحیطایندر.باشدمیسیاهمحیطرنگویگلاشهایباکتریدر.باشدمیهمرنگهایکلنیدارایومنفیلاکتوزشیگلا

.شودنمیتولیدH2Sکلبسیلا

.Dr A.Mohammadi

37

Salmonella Shigella (SS) Agar

Dr A.Mohammadi

38

Dr A.Mohammadi

39

Dr A.Mohammadi

40

پلیت1گروه کشت خطی متراکم کلبسیلا و شیگلا در 2پلیت1در اشرشیا کلی و سالمونلا خطی متراکم گروه کشت 2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت خطی متراکم 2

41کار عملی

Dr A.Mohammadi

اعضایردلاکتوزتأخیریتخمیرکنندهباکتری هایتمایزوشناساییدرتستاین.می شوداستفادهانتروباکتریاسهغیرتخمیری

موضوعاینازاسهآنتروباکتریتشخیصدروبودهلاکتوزتخمیربهقادرمنفیگرمهایباسیلازبعضینمیتخمیراصلایاوکردهتخمیرآهستگیبهرالاکتوزمنفیگرمباسیلهایازبرخیاما.شودمیاستفادهجهتریباکتهر.گرددمیسالمونلامثلاییرودههایپاتوژنتشخیصدراشتباهباعثاینوکنندوگلوکزبهتوزلاکلیزسبببتاگالاکتوزیداز.داردآزپرمهوگالاکتوزیدازبتاآنزیم2بهنیازلاکتوزتخمیررااکتریهابایننباشدآزپرمهاگر.دهدمیراباکتریبهوروداجازهلاکتوزبهآزپرمهوشودمیلاکتوز

قندورود)تاخیریصورتبهرالاکتوزآزپرمهنداشتنعلتبهدهندقرارلاکتوزحاویکشتمحیطدروشرشیاادرکهاند،لاکتوزکندهایتخمیرکنندهاینهاواقعدرکنندمیمصرف(ازپرمهجزبهراهیاز

.باشدمیمثبتکلبسیلا،انتروباکتر،سراشیا،سالمونلا

Dr A.Mohammadi

42

ONPGتست-6

Dr A.Mohammadi

43

یک:ONPGتستنتایجااشرشی)مثبتONPGباکترییکوراستسمتدررا(کلی

منفیONPGباکتریدررا(ولگاریسپروتئوس)

.می‌کنیدمشاهدهچپسمت

جدول نتایج

علامتتفسیرنتیجه+گانیسمتولید‌بتاگالاکتوزیداز‌توسط‌میکروارتشکیل‌رنگ‌زرد-عدم‌تولید‌بتاگالاکتوزیدازعدم‌تغییر‌رنگ

Dr A.Mohammadi

44

مثبتONPGو انتروباکتر E.coli.منفی نمی تواند لاکتوز مصرف کند عدم تغییر رنگ محیط ONPGشیگلا

کشت شیگلا ، اشرشیا کلی و انتروکوک

ساعت محیط را 4وارد می کنیم و ONPGبا لوپ باکتری را به محیط .انکوباتور قرار می دهیم سپس نتیجه را گزارش می دهیم

45کار عملی

Dr A.Mohammadi

اعضایردلاکتوزتأخیریتخمیرکنندهباکتری هایتمایزوشناساییدرتستایناورهیزهیدرولدرتوانایی شاناساسبرمیکروارگانیسم هاافتراقبرایتستاین

.می شوداستفادهآز¬اورهآنزیمکمکباریعسفعالیتواسطهبهاستممکنپروتئوسجنسازادراریدستگاهپاتوژن های

.شوندمتمایزای¬رودهباکتری هایدیگرازخودآزی¬اورهدنشمغلوبموجبمثبتآز¬اورهباکتری هایوسیلهبهآمونیاکبهاورههیدرولیز

.می شودصورتیتانارنجیبهمحیطرنگتغییرومحیطبافرثبتمآز¬اورهباکتری های.شودچکروزانهبایستیانکوباسیونطیدرآگارمحیط

بارابطهدرامراین.می کنندصورتیرامحیطشیبکلساعت24مدتدرسریع.(جدول)بکشدطولروزچنداستممکنضعیفمثبتآز¬اورهباکتری های

دلیلبهاینکهیانمی شوندرنگتغییرموجبیامنفیآز¬اورهباکتری هایمی کنندرنگزردراآناسیدی،محصولات

Dr A.Mohammadi

46

اوره آز-7

اوره آز-7

Dr A.Mohammadi

47

جدول نتایج

علامتتفسیرنتیجه

+آزهیدرولیز‌سریع‌اوره؛‌تولید‌قدرتمند‌اورهصورتی

-.دگی‌کندآز‌تولید‌نمی‌کند‌یا‌نمی‌تواند‌در‌براث‌زنعدم‌هیدرولیز‌اوره؛‌باکتری‌اورهدنارنجی یا زر

Proteusباکتری‌هایباراستبهچپازبراثآزاورهلوله‌های

mirabilis(مثبتآزاوره)،لقیحت(منفیآزاوره)کلیاشرشیاوºC37دمایدرساعت16مدتبهلوله‌هاتمام.شده‌اند

.شدندگرمخانه‌گذاری

Dr A.Mohammadi

48

‌دارشیبآگارآزاورهلوله‌های:آگارآزاورهتستنتایجباشدهتلقیحکنترل،:ازعبارت‌اندراستبهچپاز

Proteus mirabilis(سریعمثبتآزاوره)،Klebsiella pneumoniae(تأخیریمثبتآزاوره)و

16مدتبهلوله‌هاتمام.(منفیآزاوره)کلیاشرشیا.شدندگرمخانه‌گذاریºC37دمایدرساعت

گروه کشت کلبسیلا و شیگلا 2گروه کشت اشرشیا کلی و سالمونلا2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت 2

49کار عملی

Dr A.Mohammadi

آگارآیرونلیزینمحیط(LIA)خانواده)انتریکباکتری هایافتراقجهتکردندِآمینهیاکردندِکربوکسیلهدرآن هاتواناییاساسبر(انتروباکتریاسه

محیطکناردرLIAمحیط.می شوداستفاده(H2S)هیدروژنسولفیدتولیدولیزینTSIAداردکاربردنیزشیگلاوسالمونلااعضایشناساییمنظوربه.

محیطLIAاعثبمحیطازشکلاین.می شودآمادهعمیقشیب دارمحیطیکشکلبه.می شودعمیقمنطقهدربی هوازیمنطقه یوشیب دارسطحدرهوازیمنطقهایجاد

باگاهآنوشدهتلقیحمارپیچیصورتبهنیزآنسطحعمقی،تلقیحدوبارازبعد.می شودانکوبهساعت24تا18مدتبهمحکم،صورتبهلولهدرپوشبستن

Dr A.Mohammadi

50

LIAمحیط کشت -8

علامتتفسیرنتیجهعمق/بنفششیب دارسطحبنفش

مثبتدکربوکسیلازلیزینمنفی؛دآمینازلیزینK/K

ردزعمق/بنفششیب دارسطحگلوکزتخمیر؛منفیدکربوکسیلازلیزینمنفی؛دآمینازلیزین

K/A

زردعمق/قرمزشیب دارسطحگلوکزتخمیر؛منفیدکربوکسیلازلیزینمثبت؛دآمینازلیزین

K/A

زقرمعمق/قرمزشیب دارسطحوهوازیطشرایدرپپتون.استنگرفتهصورتتخمیریهیچ

باکتری.دمی‌شونتجزیهقلیاییمحصولاتتولیدبابی‌هوازی.نمی‌باشدانتروباکتریاسهخانوادهازنظرمورد

R/A

H2Sسولفوراحیاسیاه رنگرسوب Dr A.Mohammadi

51

حاویلوله‌هایتفسیر.LIAمحیطنتایج(شکل,K/A)؛(R/A):راستبهچپازLIAمحیط

H2S){وبرسکممقدارکهباشیدداشتهتوجهازاشینگازتولیدومحیطمیانهبهنزدیکسیاه

؛{دمی‌شومشاهدهلولهانتهایدرگلوکزتخمیر,K/K)وتلقیح؛بدونکنترل H2S){عمقرنگ.{‌شودمیدیدهمبهمرسوبتشکیلدلیلبهلوله

Lysine Iron agar (LIA)

Dr A.Mohammadi52

گروه کشت کلبسیلا و شیگلا 2گروه کشت اشرشیا کلی و سالمونلا2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت 2

53کار عملی

Dr A.Mohammadi

و(نمی کندرشدمحیطدرکه)اشرشیاافتراقبرایابتدادرمالوناتتسترایبافتراقیمحیطیکعنوانبهتستاینحاضرحالدر.شدطراحیانتروباکتر

.می شودرفتهگبکارسالمونلاویژهبهانتروباکتریاسهاعضایدیگرتمایزوتشخیصمعرفعنوانبهنیزبلوتیمولبُرمورنگpHتلقیحمحیطدرکهشدهاضافهمحیطبه

.استرنگسبزنشده،اماّکنندهاستفادکربنمنبععنوانبهمالوناتازنیستندقادرکهارگانیسم هایی

نندکزردکمیرامحیطاستممکنمی شوند،گلوکزازکمیمقدارمصرفبهموفق.استتستبودنمنفیازحاکیوقایعاین.نکنندتولیدرنگیاینکهیا

منبعانعنوبهرامالوناتقادرندمی کنند،تولیدتیرهآبیرنگکهارگانیسم هایی.می کنندقلیاییرامحیطلذاوکننداستفادهکربن

می توانندسپکنند،استفادهکربنمنبععنوانبهمالوناتازبتوانندباکتری هااگربهسبزازمحیطرنگتغییروpHافزایشدلیلکهکنندتولیدقلیاییمحصولات

.استتستبودنمثبتازحاکیتیرهآبیظهور.استتیرهآبیDr A.Mohammadi

54

محیط سدیم مالونات-9

جدول نتایج

علامتتفسیرنتیجه

+مصرف‌مالوناتتیرهآبی

-عدم‌مصرف‌مالوناتردزکمییارنگ؛تغییرعدم

Dr A.Mohammadi

55

آگاراتسیترسیمونمحیط‌هایاین:مالوناتتستنتایجو(چپمتسلوله)مثبتمالوناتباکترییکباشیب‌دار

.شده‌اندتلقیح(راستلوله)منفیمالوناتباکترییکتاسنشدهتلقیحوکنترلعنوانبهنیزوسطلوله

گروه کشت کلبسیلا و شیگلا 2گروه کشت اشرشیا کلی و سالمونلا2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت 2

56کار عملی

Dr A.Mohammadi

محیط اورنیتین دکربوکسیلاز-10

pHدرکروزولبرممعرف .استزردرنگ،5/2زیرpHدروبنفشرنگبهبالابه6.8یژناکسورودازممانعتباتامی شودمسدودمعدنیروغنباتلقیحازپسکشتمحیططح

.شودفراهمتخمیرشرایطخارجی،ی،اسیدنهاییمحصولاتتجمعدلیلبهرامحیطابتدادربی هوازیمحیطدرگلوکزتخمیر

باکتری هایتحریکباعثخاصاسیدآمینهحضوروپایینpH.می کندزردرنگ.می شودآنزیمتولیدبرایمثبتدِکربوکسیلاز

تولیدآمینونمودهدکربوکسیلهکشتمحیطدرراآمینهاسیدهایدکربوکسیلاز،آنزیم های.ی شودممحیطشدنرنگبنفشموجبقلیایینهاییمحصولاتتجمعباعملاین.می کنند

کربوکسیلازدامّاباشد(انتروباکتریاسهاعضایتماممثل)گلوکزتخمیرکنندهیکباکتریاگروکسیلازدکرباگرامّامی ماندباقیرنگهمانبهوشدهرنگزردمحیطنکند،تولیدمناسبیافزایشکشتمحیطpHآمین،ایجادواسیدآمینهدکربوکسیلاسیونباشودتولیدمربوطه.کردخواهیممشاهدهرا(ارغوانی)بنفشبهزردرنگتغییرومی یابد

.تاستستبودنمنفیازحاکیدیگررنگهرظهوروبودنمثبتازحاکیبنفشرنگظهور

Dr A.Mohammadi

57

Dr A.Mohammadi

58

نتیجهیر،تصودر.دکربوکسیلاسیونتستنتایجلوله)مثبتلیزیندکربوکسیلازباکترییکتستریباکتیکووسطدرکنترلیک،(چپسمت

مشاهدهار(راستلوله)منفیلیزیندکربوکسیلازنینچ.کنیدتوجهرنگیتغییراتبه.می‌کنیدویتیناُرندکربوکسیلازمحیط‌هایدرراتغییراتی.می‌بینیدهمآرژینین

جدول نتایج

علامتتفسیرنتیجه

-عدم‌دِکربوکسیلاسیونرنگتغییرعدم

-تخمیر؛‌عدم‌دِکربوکسیلاسیونرنگزرد

اص‌تولید‌دِکربوکسیلاسیون؛‌باکتری‌آنزیم‌عدم‌دِکربوکسیلاز‌خ(یاندکحتی)بنفش.می‌کند

+

گروه کشت کلبسیلا و شیگلا 2گروه کشت اشرشیا کلی و سالمونلا2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت 2

59کار عملی

Dr A.Mohammadi

نکربمنبعتنهاعنوانبهسیتراتمصرفدرمیکروارگانیسمیکتواناییتعیینمیله‌ای‌هایباکتریازآن‌هاافتراقهمچنینوانتروباکتریاسهخانوادهاعضایافتراقوشناسایی

.منفیگرمتنهانوانعبهسدیمسیتراتدارایکهاستاختصاصیمحیطیکآگارسیتراتسیمونمحیط

.استنیتروژنمنبعتنهاعنوانبه((NH4H2PO4)آمونیومفسفاتوکربنمنبعبلوتیمولبُرمورنگBTB))معرفعنوانبهpHدرکهمی‌کندعملpH ورنگسبز،6.9

pHدر .استرنگآبی،7.6

سفاتفهمچنینکنند،مصرفراسیتراتوماندهباقیمحیطدرمی‌توانندکهباکتری‌هاییموجبدوهرکهمی‌کنندتبدیل(NH4OH)آمونیومهیدروکسیدو(آمونیاکبهراآمونیوملذامی‌یابدتغییرآبیبهسبزازمحیطرنگمحیط،pHرفتنبالابا.می‌شوندمحیطشدنقلیاییاستسیتراتتستبودنمثبتازحاکیآبیبهکشتمحیطرنگتغییر

Dr A.Mohammadi

60

(راتمحیط کشت سیمون سیت)مصرف سیترات-11

Citrate Utilization test

Positive Negative

Dr A.Mohammadi61

Dr A.Mohammadi

62

گروه کشت کلبسیلا و شیگلا 2گروه کشت اشرشیا کلی و سالمونلا2انتروکوک و پروتئوسگروه کشت 2

تلقیح کم با انس

63کار عملی

Dr A.Mohammadi

محیطSIMآنزیمازاستفادهباایندولکنندهتولیدباکتری هایشناساییمنظوربه.می باشدتریپتوفاناز

تستاجزاءازیکیایندولتستIMViC(،وپروسکوئر-وُژِزرد،متیلایندولقراراستفادهموردانتروباکتریاسهخانوادهافتراقبرایکهمی باشد(سیترات.می گیرد

محیطSIMخانواده یسولفوراحیاءکننده یاعضاافتراقوتشخیصبرایمورگانلاازسپروتئووفرانسیسلاسالمونلا،جنساعضاخصوصبهانتروباکتریاسه

.ی شودماستفادههممی باشند،منفینظراینازکهرتگریپروویدنسیاومورگانیخانوادهبرایمهمتمایزیویژگییکحرکتمحیط،ایناولکاربرددوبرعلاوه

.می باشدانتروباکتریاسه

Dr A.Mohammadi

64

SIMمحیط-12

Dr A.Mohammadi

65

Dr A.Mohammadi

66

.SIMمحیطدرسولفوراحیازاچپسمتمحیطدرباکتری

نفیمسولفور،احیاتوانایینظرتسممحیطدرباکتریوبوده

وودهبسولفوراحیابهقادرراست.می‌باشدمثبتتست

SIM medium

Dr A.Mohammadi

67

SIM medium

Dr A.Mohammadi

68

SIM medium

Dr A.Mohammadi

69

گروه کشت کلبسیلا و شیگلا 2گروه کشت اشرشیا کلی و سالمونلا2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت 2

70کار عملی

Dr A.Mohammadi

MR-VPتست -13

:(MR)ردمتیلتستاسیدیولاتمحصآنهامتابولیسمنهایینتیجهونمودهمصرفراگلوکزکههاییباکتریردیابیجهتانجامبرای.دکنمیمعلومرااسیدیمخلوطتخمیرقابلیتکهباشدمیاستاتوفوماراتقبیلازفراوانانکوبهساعت48مدتدردرجه37-35انکوباتوردرMR.VPبراثمحیطدرراارگانیسمتستزردرنگماابودهمثبتنشانهقرمزتاصورتیرنگبروزوکردهاضافهراردمتیلمعرفوسپسکردهردمتیلانتروباکتریاسهتمام.است4.5ازکمترمحیطPHکهاینستنشانهمثبتردمتیل.استمنفی.(انتروباکتروسراشیاکلبسیلاو)کلبسیلاسهدستهبجزبودهمثبت

:VPتستنفتولآلفاضورحدردیولبوتانتخمیرمسیردردیولبوتانواستوئینتولیدپروسکوئروگستستدر48کشتمحیطازاینکاربرای.شودمیردیابیقرمزرنگپیدایشباقلیایینسبتامحیطدر

انکوباتوردردقیقه15وکردهاضافهآنبهپتاسقطره2ونفتولآلفاقطره6حدودMR,VPساعتهمنفینتیجهاینصورتغیردروبودهاستوئیننشانهقرمزرنگپیدایشبینیممیآنراسپسگذاشتهمحیطدر.بودهمنفیرپروسکوئوگس(انتروباکتروسراشیاوکلبسیلا)کلبسیلاسهدسته.شودمیگزارش

قرمزرنگوشدهالیزکاتنفتولوالفااستیلدیبینواکنشوشدهاکسیداستیلدیبهاستوئینییقلیاDr A.Mohammadi.شودمیدیده

71

Methyl Red test

ردمتیلتستMR))اسیدیتخمیربهقادرکهشدهطراحیمیکروارگانیسم‌هاییتشخیصبرای.می‌شوندمحیطpHکاهشموجبفسفاتبافربرغلبهباومی‌باشندمخلوط

معرف.ودمی‌شتأییدانکوباسیونمرحلهازپسرِدمتیلمعرفافزودنبامخلوطاسیدیتخمیر=pHدرکهاستpHاندیکاتوریکردمتیل =pHقرمز،رنگبه4.4 دروزردرنگبه6.2

.می‌باشدمختلفسایه‌هایبانارنجیرنگبهpHدواینبینمحدوده

تستبودنهبی‌نتیجیامنفیازحاکینارنجی.استمثبتواکنشصحیحنشانهتنهاقرمزرنگ.استتستنتیجهبودنمنفیازحاکینیززردرنگ.است

Dr A.Mohammadi

72

Dr A.Mohammadi

73

Dr A.Mohammadi

74

Dr A.Mohammadi

75

Voges-Proskauer test

بوتاندیول،-3و2تخمیرمسیردرگلوکزازقادرندکهمی‌کندشناساییراباکتری‌هاییتستاین.کنندتولید(کربونیلمتیلاستیل)استوئین

وناکسیداسیموجبانکوباسیونمرحلهازپسمحیطبهپروسکوئر-وُژِزمعرف‌هایافزودنپپتونانیدینگوهسته‌هایباخودنوبهبهکهمی‌شوداستیلدیبه(باشدمحیطدراگر)استوئینمی‌کندایجادقرمزرنگیکودادهواکنش

تستمثبتنتیجهVPرنگیکایجاد)رنگتغییرعدم.است.می‌شودمشخصقرمزرنگبا.استتستبودنمنفیازحاکیمعرف‌هاافزودنازپس(مسی

صحیحمزقررنگباکهکرددقتبایستیوشدهایجادمعرف‌هابرهمکنشنتیجهدرمسیرنگاحتمالی،تباهاتاشازجلوگیریجهتمی‌شودپیشنهاد.(شکل)نشودگرفتهاشتباهمثبتتستدر.کنیداستفادهمنفیومثبتکنترلنمونه‌هایاز

Dr A.Mohammadi

76

Dr A.Mohammadi

77

Dr A.Mohammadi

78

Dr A.Mohammadi

79

Methyl Red test

NegativeNegative Positive

Dr A.Mohammadi80

Voges-Proskauer test

NegativePositive

Dr A.Mohammadi81

Dr A.Mohammadi

82

گروه کشت کلبسیلا و شیگلا 2گروه کشت اشرشیا کلی و سالمونلا2

انتروکوک و پروتئوسگروه کشت 2

83کار عملی

Dr A.Mohammadi

تری هاباکجداسازیبرایکهمی باشدغنیمحیطیکآگارآیرونشوگرتریپلمحیطشدهیطراحسولفوراحیانیزوساکاروزولاکتوزگلوکز،تخمیرتواناییاساسبر

.استنوانعبهحیوانیپروتئین هایحاویکشتمحیطاینکربوهیدرات،سهاینبرعلاوه

نابعمعنوانبهتیوسولفاتسدیموفروسسولفاتونیتروژنوکربنمنابعایندرهیدروژنسولفیدوpHتغییراندیکاتورهای.می باشدشدهاکسیدسولفور

.می باشندفروسسولفاتشکلبهآهنوردفنلترتیببهمحیطادزیعمقهمراهبهکمضخامتباشیب دارآگارصورتبهمحیطایندرموجودآگار

فراهمرابی هوازیوهوازیباکتری هایبرایرشدشرایطکهاستلولهانتهایدر.می کند

پسسوعمقیصورتبهابتداکهاستصورتاینبهمحیطایندرباکتریتلقیحرمنظوبهگذاریگرمخانهزمان.دهندمیکشتمارپیچخطیصورتبهراآنسطح

بیشترهیدروژنسولفیدواکنش هایبرایوساعت24تا18کربوهیدرات،تخمیر.می باشدساعت48از Agar

Dr A.Mohammadi

84

TSIمحیط-14

Dr A.Mohammadi

85

علامتتفسیرنتیجه

A/Aمقعوشیب‌دارسطحدراسیدتجمعهمراهبهلاکتوزوگلوکزتخمیرKIA--زردعمق/زردسطح

TSIA--زردعمق/زردسطحشیب‌دارحسطدراسیدتجمعهمراهبهساکاروزیا/ولاکتوزوگلوکزتخمیر

A/Aعمقو

زردعمق/قرمزسطحسطحدر)هوازیشرایطدرپروتئین‌ها.اسیدتولیدهمراهبهگلوکزتخمیر

K/A.می‌شوندتجزیه(reversion)قلیاییمحصولاتتولیدبا(شیب‌دار

قرمزعمق/قرمزسطح

با‌هوازیبیوهوازیشرایطدرپپتون.استنگرفتهصورتتخمیریهیچانوادهخازنظرموردباکتری.می‌شوندتجزیهقلیاییمحصولاتتولید

.نیستانتروباکتریاسهK/K

تغییربدونعمق/قرمزسطح

تولیدباهوازیشرایطدرپپتون.استنگرفتهصورتتخمیریهیچخانوادهازنظرموردباکتری.می‌شوندتجزیهقلیاییمحصولات

.نیستانتروباکتریاسهK/NC

دونبعمق/تغییربدونشیب دارسطحتغییر

NC/NC.یستنانتروباکتریاسهخانوادهاز.می‌باشدآهستهرشددارایباکتری

آگاردرسیاهرسوب

درسیاهوبرسلاکتوز،یاگلوکزتخمیرازاسیدی،شرایطدر).سولفوراحیاونامشخصسیاهرسوببه‌واسطهزردرنگاگرحتیمی‌شودایجادعمق.باشدمبهم

H2S

گازتولیدگارآشدنبلندیاآگاردرشکافایجادDr A.Mohammadi

86

Dr A.Mohammadi87

سالمونلا

Dr A.Mohammadi

88

پروتئوس

Dr A.Mohammadi

89

Dr A.Mohammadi

90

Dr A.Mohammadi

91

Dr A.Mohammadi 92

تست های اضافی

Dr A.Mohammadi 93

Dr A.Mohammadi 94

Dr A.Mohammadi 95

Dr A.Mohammadi 96

Dr A.Mohammadi 97

Dr A.Mohammadi 98

Dr A.Mohammadi 99

:منبع

Dr A.Mohammadi 100

،3-1جلد،شناسیمیکروبآزمایشگاههایمهارت•:نگارش

(س)الزهرادانشگاهعلمیهیئتعضو-محمدیعلیدکتر•بهشتیشهیددانشگاه–میرشفیعیحمیدهدکتر•