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SEROLOGÍA DE FIEBRE TIFOIDEA, BRUCELOSIS Y MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO FILIAL JAEN
ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICAEspecialidad de Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica
INTEGRANTES : MONTEZA FACHO AMPARO CASTRO RAMIREZ MARIBEL FLORES LOPEZ TANIA
Fiebre tifoidea (Salmonella).
Es una enfermedad infectocontagiosa de alta prevalencia a nivel mundial, causada por la bacteria Salmonella typhi, se consideran patógenos entéricos obligados. Los alimentos y el agua contaminados son los mecanismos de transmisión.
Cuadro clínico:
fiebre alta constante (40º), sudoración profusa, gastroenteritis y diarrea, sarpullido de manchas aplanadas de color
rosáceo.
La prueba que se realiza en las reacciones febriles para detección de fiebre tifoidea es la reacción de Widal.
La reacción de Widal, es un método serológico, rápido, barato, y ampliamente conocido para el diagnóstico de la fiebre tifoidea; sin embargo, tiene grandes limitaciones por reacciones antigénicas cruzadas con otras bacterias (principalmente enterobacterias, incluyendo Salmonellas no typhi), parásitos, virus y hongos, llevando con frecuencia al clínico a sobre diagnosticar síndromes febriles como fiebre tifoidea.
prueba de laboratorio:
Para detección de fiebre tifoidea es la REACCIÓN DE WIDAL
falsos negativos: Antibioticoterapia temprana, la cual, retrasa la
aparición de anticuerpos (descrito principalmente con cloranfenicol)
Utilización de corticosteroides Medición temprana de anticuerpos (primera semana) Inmunodeficiencias adquiridas y congénitas. Portadores crónicos de Salmonella typhi. Relacionadas a estandarización de la prueba.
Los falsos positivos de la reacción de Widal también han sido descritos en procesos no infecciosos, como enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide- lupus eritematoso sistémico) y hepatopatías crónicas, lo cual contribuye aun más a su baja especificidad.
ANTIGENOS FEBRILES
INTRODUCCIÓN : Las reacciones febriles son un conjunto de
pruebas que sirven como su nombre lo indica para diagnosticar enfermedades que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea (Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta) .
PRUEBA DE ANTÍGENOS FEBRILES
FUNDAMENTO: Estas reacciones se basan en el hecho de que
cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especifico. El titulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnóstico el título de ellos debe aumentar.
REACTIVOS PROVISTOS: ANTIGENOS FEBRILES SALMONELLA: Suspensión
conteniendo los siguientes antígenos bacterianos: Antígeno Paratífico A (Salmonella, antígeno flagelar a) Antígeno Paratífico B (Salmonella, antígeno flagelar b) Antígeno Tífico H (Salmonella, antígeno flagelar d) Antígeno Tífico O (Salmonella, antígeno Somático D)
Muestra : Suero Recolección : Debe obtenerse suero
límpido en forma estéril.
MATERIAL REQUERIDO : -Placa de vidrio -Micropipetas -Tubos de vidrio -Varilla -Reloj
PROCEDIMIENTO:
1. MÉTODO DE AGLUTINACIÓN RÁPIDA EN PLACA.
Anotar el antígeno correspondiente en la placa de vidrio. Depositar en cada cuadro una gota (50ul) de suero del
paciente para cada uno de los antígenos que se va a utilizar.
A cada gota de suero añadir una gota de cada antígeno. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador
para cada antígeno. Agitar suavemente la placa por rotación (120 r.p.m)
durante 2-3 minutos. Observar la presencia o ausencia de aglutinación
utilizando una luz indirecta sobre fondo oscuro.
2.-TITULACIÓN RAPIDA EN PLACA.
Cuando hay reacción positiva se repite la técnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma:
Dividir una placa de vidrio en sectores. Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores
80ul,40ul,20ul,10ul,5ul de suero. Colocar 1 gota de Antígeno previamente agitado sobre cada gota de suero. mezclar con una varilla distinta para cada dilución. Agitar la placa durante 2 minutos en forma circular. Observar la presencia de aglutinación utilizando luz indirecta sobre fondo
oscuro. Las diluciones del suero en la titulación en placa equivalen apropiadamente a
las de la prueba en tubo como se muestra a continuación:
. Volumen de Suero Dilución aproximada en
(ml) la prueba en tubo.
0.08 1:20
0.04 1:40
0.02 1:80
0.01 1:160
0.005 1:320
Interpretación:
El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideración la dilución más alta que se observe en la reacción positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener títulos diagnósticos hasta los 8 días después de la fiebre.
Brucelosis (Brucella abortus).
La Brucelosis (conocida también como fiebre de Malta, fiebre ondulante, enfermedad de Bang o fiebre del Mediterráneo) es una Zoonosis es decir una enfermedad que es transmitida de los animales al humano causada por bacterias del genero Brucella. La enfermedad se adquiere por ingerir alimentos contaminados o mantener un estrecho contacto con el ganado.
La brucelosis en el hombre se transmite por la ingesta de leche, y sus productos derivados contaminados, no pasteurizados, por contacto con productos y desechos como tejidos o excreciones de animales enfermos, y por inoculación de brucelas o inhalación del polvo de corrales o mataderos, donde éstas se encuentran.
Cuadro clínico:
Es una enfermedad que se auto limita o se vuelve crónica. Muchos pacientes padecen infecciones asintomáticas. La forma aguda de la brucelosis se caracteriza por
fiebre que en la mayoría de los casos es alta e intermitente (ondulante), presentándose generalmente por la tarde/noche acompañada de cefalea intensa frontal y occipital, y diaforesis. En bazo, hígado, ganglios linfáticos aparecen nódulos granulomatosos que pueden evolucionar hasta convertirse en abscesos.
En la forma crónicaLas manifestaciones más comunes son:
Síndrome febril: habitualmente de poca intensidad en la mayoría de los casos;
Osteoarticulares: poli o monoartritis, gránulos óseos, abscesos.
Psíquicas: síndrome depresivo, nerviosismo, irritabilidad. Digestivas: esplenopahetomegalía, hepatitis. Neurológicas: meningobrucelosis, polineuritis, síndrome
ciático, síndrome radicular. Hematológicas: anemia hemolítica, anemia ferropriva. Respiratorias: bronquitis, neumonía
Diagnóstico:
El diagnóstico de certeza se establece aislando al microorganismo a partir de cultivos de sangre, médula ósea u otros tejidos.
Los métodos serológicos como las reacciones febriles sólo aportan un diagnóstico presuntivo.
Existen varios métodos serológicos para el diagnóstico de Brucelosis como el Rosa de Bengala, 2-mercapto-etanol, y la reacción de Huddleson, esta ultima es la utilizada en la prueba de reacciones febriles.
prueba de laboratorio:
Reacción de Huddleson
Es una reacción de aglutinación rápida en placa donde se enfrentan cantidades decrecientes del suero a investigar con cantidades constantes de antígeno y se observa la presencia o no de aglutinación. Existe una escala de títulos, establecida por convención, que permite la expresión de resultados. Se utiliza una suspensión Antígenos de B. abortus al 3-10% de gérmenes en fenol, con verde brillante y cristal violeta para la búsqueda de anticuerpos.
interpretación:
Se deben tomar en consideración los aspectos clínico-epidemiológicos de cada caso, hay que considerar los falsos positivos y falsos negativos. El tratamiento del paciente sospechoso o confirmado debe indicarse bajo vigilancia médica, o por personal debidamente capacitado.
Rosa de Bengala: Utiliza como antígeno en una suspensión
bacteriana a la que se ha añadido el colorante rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo. Proporciona una aproximación diagnóstica en pocos minutos con una sensibilidad y especificidad muy altas. Presenta elevado grado de correlación con la seroaglutinación y, por su simplicidad, es muy útil como prueba de despistaje inicial o screening.
Sus falsos negativos se limitan a enfermos con procesos de pocos días de evolución y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.
Prueba de Coombs: Es de gran interés para el diagnóstico de la brucelosis
crónica. Se utiliza para demostrar la presencia de anticuerpo aglutinantes y no aglutinantes, fundamentalmente IgG.
El suero de Coombs (inmunoglobulina humana)
Se encargaría de facilitar la aglutinación de los anticuerpos no aglutinantes del suero problema, fijados a la suspensión antigénica de B. abortus. El título obtenido es, por ello, como mínimo el de la aglutinación y generalmente es mucho más elevado, tanto más cuanto mayor es el tiempo de evolución de la enfermedad. Pueden persistir en ocasiones de forma prolongada y con titulación elevada, incluso en pacientes con tratamiento adecuado y buena evolución clínica.
MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
Es una enfermedad benigna producida por el virus Epstein-Barr (EBV) .
El 50% de los niños se infectan por EBV antes de los 5 años, y hasta el 95% de la población adulta se encuentra infectada.
Síntomas clínicos:
La tríada característica de los síntomas es fiebre, dolor de garganta y linfadenopatías (inflamación de los ganglios linfáticos, especialmente en el cuello). Generalmente está presente la fatiga y puede continuar durante varios meses.
Transmisión:
La mononucleosis infecciosa se transmite por contacto próximo de persona a persona. La saliva es el método principal de transmisión. La mononucleosis infecciosa toma su nombre común de "enfermedad del beso" de esta forma prevalente de transmisión entre adolescentes y jóvenes, y les afecta con mayor frecuencia entre los 15 y 17 años. Sin embargo, la infección puede desarrollarse a cualquier edad.
Diagnóstico serológico de la Mononucleosis infecciosa El diagnóstico serológico de la infección
por EBV comprende una serie de pruebas no específicas como la detección de anticuerpos heterófilos, así como unas pruebas específicas para EBV relacionadas con la respuesta de anticuerpos en función del tiempo frente a varios antígenos producidos durante el ciclo de vida del virus.
Diagnóstico de Laboratorio: la mayoría de las pruebas serológicas
más comúnmente usadas para diagnosticar la infección EBV detectan anticuerpos IgG e IgM anti-VCA, e IgG anti-EBNA.
Puede hacerse por 2 técnicas: 1) indirecta: respuesta serológica y 2) directa: demostración del virus, sus antígenos o
DNA viral.
prueba de aglutinación en placa con neutralización según davidsohn
FUNDAMENTO : La detección de anticuerpos heterófilos es la
prueba fundamental para el diagnóstico de MNI. Los anticuerpos heterófilos asociados a la mononucleosis infecciosa se detectan por su capacidad de aglutinar los eritrocitos de caballo, neutralizando simultáneamente los anticuerpos no asociados a mononucleosis(anticuerpos Forssman)con extracto de riñón de cobayo. La aglutinación se visualiza macroscópicamente.
PROCEDIMIENTO:PRUEBA CUALITATIVA
Colocar 1 gota (50ul) de muestra inactivada en uno de los círculos de la placa limpia y seca.
Agregar 1 gota (50ul) de reactivo homogenizado. Mezclar con palillo de madera hasta obtener una suspensión
uniforme. Observar macroscópicamente el resultado dentro de los dos
minutos. Observar los resultados sobre un fondo negro y ligeramente
por encima de un haz luminoso horizontal.
PRUEBA CUANTITATIVA :
Los sueros positivos según la prueba anterior pueden titularse efectuando diluciones seriadas :
Colocar en una serie de tubos 200ul de solución fisiológica.
Agregar al primer tubo 200ul de la muestra inactivada y mezclar. Transferir 200ul de esta dilución al segundo tubo y mezclar, continuando de esta forma las diluciones hasta el último tubo.
Las diluciones así obtenidas equivalen a 1:2 ; 1:4; 1:8; 1:16 etc.
Tomar una gota de cada dilución y realizar según la prueba cualitativa
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS : Negativo : Suspensión homogénea Positivo : Aglutinación que aparece dentro
de los dos minutos. se califica de 1 a 4 (+). Un resultado positivo indica la presencia de
anticuerpos heterófilos asociados a la mononucleosis infecciosa.
Titulo : Se expresa como la inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible macroscópicamente.
Se considera como reacción positiva para MNI en diluciones mayores de 1/16
GRACIAS POR SU ATENCION
