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Analisis de Liquidos Biologicos
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ANALISIS BIOQUIMICOS ANALISIS BIOQUIMICOS DE LIQUIDOS BIOLDE LIQUIDOS BIOLGICOSGICOS
Dr. Jose C. Jara AguirreProfesor
Escuela de Tecnologa MedicaFacultad de Medicina Alberto HurtadoUniversidad Peruana Cayetano Heredia
LIQUIDOS BIOLLIQUIDOS BIOLGICOS GICOS EXTRAVASCULARESEXTRAVASCULARES
z Liquido Pleuralz Lquido Cefalorraquideoz Lquido Asciticoz Lquido Pericardicoz Lquido Sinovial
LIQUIDOS BIOLLIQUIDOS BIOLGICOSGICOS
z LA DEFINICION DE FLUIDOS SEROSOS SOLO SE RESTRINGE
LIQUIDO PLEURAL LIQUIDO ASCITICO LIQUIDO PERICARDICO
LIQUIDO PLEURALLIQUIDO PLEURAL(LP)(LP)
ProducciProduccin y Reabsorcin y Reabsorcin de n de Liquido PleuralLiquido Pleural
z Normalmente, 1 a 15 ml.z Producido por la pleura parietal.z Reabsorbido por la pleura visceral.z Proceso continuo por filtracin del
endotelio capilar.
ProducciProduccin y Reabsorcin y Reabsorcin de n de Liquido PleuralLiquido Pleural
z Proceso continuo por filtracin del endotelio capilar.
z Velocidad depende de: la presin hidrostatica capilar, la presin onctica y la permeabilidad capilar.
z Es reabsorbido va capilares y linfticos.
FormacionFormacion del del LiquidoLiquido pleuralpleuralCapilar
sistemicoCapilar
pulmonar
Espaciopleural
Pleura parietal Pleura visceral
PO 26
PH 30
PO 26
PH 11
Presionintrapleural
5 cm agua linfaticoslinfaticos
OBTENCION DEL LIQUDIO OBTENCION DEL LIQUDIO PLEURALPLEURAL
TORACOCENTESIS
ASPECTO Y COLOR DEL LIQUIDO PLEURAL
HEMATICO QUILOSO TRANSUDADOHEMATICO QUILOSO TRANSUDADO
Diferencia entre un Diferencia entre un TransudadosTransudados y Exudadosy Exudados
TransudadosTransudados y Exudadosy Exudados
z Transudados
Producidos por incremento de la presin hidrosttica en los capilares pleurales o disminucin de la
presin onctica del plasma.
TransudadosTransudados
Los estados patolgicos que pueden generar transudado pleural
CAUSA PATOGENESIS1. Insuficiencia Hipertension sistemica y
cardiaca congestiva pulmonar2. Cirrosis hepatica Hipertension portal y cava
inferiorhipoalbuminemia
3.Sndrome nefrtico hipoalbuminemia
Trasudados y ExudadosTrasudados y Exudados
z Exudados
Por incremento en la permeabilidad capilar o una reduccin de la reabsorcin linftica.
.
ExudadosExudadosz Ocurre en una variedad de enfermedades.
CAUSA PATOGENESIS 1. Pancreatitis - Inflamacion quimica secundaria2. AR - Inflamacion de serosa3. LES - Inflamacion de serosa4. Infecciones - Inflamacion secundaria a (TBC, bacteriana, microorganismoViral, fungica)5. Infarto - Inflamacion secundaria(miocardio/pulmonar: embolia)6. Neoplasia - Incremento permeabilidad capilar
por implantes de tumor- Obstruccion linfatica secundaria
EFUSION PLEURAL
LIQUIDO PLEURAL : LIQUIDO PLEURAL : EXUDADO O TRANSUDADOEXUDADO O TRANSUDADO
z COMO SE DEFINE UN LIQUIDO PLEURAL COMO EXUDADO O
TRANSUDADO DESDE EL PUNTO DE VISTA DE LABORATORIO CLINICO?
CRITERIOS DE LIGHTCRITERIOS DE LIGHTSS
1. Proteinas totalesz LP/SUERO > 0.52. LDH
LP/SUERO >0.63. LDH en el LP 2/3 superior al valor
referencial en suero
Ana C. Tarn. Biochemical analysis of pleural fluid. Ann Clin Bioch. 2001, 38:311-322
UTILIZACION DE LOS CRITERIOS DE UTILIZACION DE LOS CRITERIOS DE LIGHT PARA DEFINIR ENTRE UN LIGHT PARA DEFINIR ENTRE UN EXUDADO Y UN TRANSUDADOEXUDADO Y UN TRANSUDADO
Sensibilidad 99 %
Especificidad 98 %
Valor predictivo positivo 99%
Valor predictivo negativo 98%*
Ana C. Tarn. Biochemical analysis of pleural fluid. Ann Clin Bioch. 2001, 38:311-322
LLquidos Biolquidos BiolgicosgicosProcedimientos Procedimientos AnAnllticosticos
z Exmen Fsico (Ph, color, aspecto, coagulacin, aspecto del sobrenadante)
z Exmen Citolgicoz Exmen Qumicoz Papanicolaouz Exmen Bacteriolgico (Directo, BK, Cultivo para
germenes comunes, cultivos para BK y hongos)z Otros exmenes (Tinta china, ADA, marcadores
tumorales, enzimas)
Toma de la muestraToma de la muestra
z Citologico : EDTA
z Qumico: Tubo simple o tubo con anticoagulante
para enzimas -heparina
z Bacteriolgico: Tubo o frasco esteril con heparina
Procedimiento preliminarProcedimiento preliminar
z Tomar datos del examen fsico Color Aspecto Coagulo
Recuento diferencialRecuento diferencial
Tomar muestra para recuento.z Azul de metileno nuevo
0.5% en solucin fisiolgica.
CentrifugadoCentrifugado
z Centrifugar a 600g por 10 minutos.
z Decantar el sobrenadante.
z Resuspender el precipitado en vortex.
z Hacer cuatro frotices y fijar dos de ellos en metanol o etanol.
Examen BioquExamen Bioqumicomico
z LDH
z Proteinas
z ADA
z OTROS
PROTEINAS TOTALESPROTEINAS TOTALES
z 1. Fundamento:
z Metodo de Biuret-Proteinas Totalesz Metodo qumico colorimetrico de punto finalzz Los enlaces peptidicos de las protenas reaccionan en un medio alcalino con
el in cprico del reactivo de Biuret, estabilizado por el tartrato, para formar un complejo de color violeta cuya mxima absorcin se da a 540 nm.
NaOHz cobre + protenas LP complejos cupro-proteicoszz
z540 nm.Reactivo Biuret : Sulfato de cobre, NaOH, Tartrato de Sodio y PotasioEstabilizante : Ioduro de potasio y EDTA
Lactato Lactato deshidrogenasadeshidrogenasa(LDH)(LDH)
zMetodo segun Scandinavian Committe on EnzymeszMetodo puntos multiples UV-Metodo de referenciaz Principio :z LDHz Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+
pH neutroAbs : 340 nm
- Cuantifica el consumo de NADH+ H+
Criterios Transudate Exudate Lechoso: quiloso
Rojizo: ver celulas abajo Turbio: lipidos o GB Purulento: empiema
Olor putrido: anaerobios Sanguinolento: neoplasia
Pasta de anchoas: amebas Densidad < 1.016 > 1.016
Proteinas totales 3.0 Relac. Proteinas liquido/suero 0.5*
LDH 200* Relac. LDH liquido/suero
LIQUIDO ASCITICO o LIQUIDO ASCITICO o LIQUIDO PERITONEALLIQUIDO PERITONEAL
TOMA DE MUESTRATOMA DE MUESTRA
Criterios Trasudado ExudadoProteinas 3.0
Relac. Proteinas liquido/suero >0.5 sugiere neop. maligna
LDH Incr en neop. maligna
Relac. LDH liquido/suero >0.6 sugiere neop. maligna
ACE >10 sugiere neop. malignaRelac. ACE liquido/suero >2 sugiere neop. maligna
Glucosa 1
LIQUIDO LIQUIDO CEFALORAQUIDEOCEFALORAQUIDEO
(LCR)(LCR)
FormaciFormacin y Circulacin y Circulacin de n de LCRLCR
FormaciFormacin y Circulacin y Circulacin de n de LCRLCR
CirculaciCirculacin de LCRn de LCR
CirculaciCirculacin de LCRn de LCR
Adultos
150 mL total
30 ml cerebro
120 mL ESA
500 mL/d
4-6 horas se renueva
AbsorciAbsorcin de LCRn de LCR
FUNCIONES DEL LCRFUNCIONES DEL LCR
z FUNCION DE SOSTENz FUNCION DE DISMINUIR EL PESO
TOTAL CEREBRALz FUNCION DE DETOXIFICACION
CEREBRALz FUNCION DE TRASPORTE DE
SEGUNDOS MENSAJEROS Y HOMEOSTASIS DEL SIST NERVIOSO
PUNCION LUMBARPUNCION LUMBAR
PUNCION LUMBARPUNCION LUMBAR
Toma de la muestraToma de la muestra
z TUBO 1: ESTUDIO QUIMICO E
INMUNOLOGICO
z TUBO 2: MICROBIOLOGICO
z TUBO 3 : CITOLOGICO
Toma de la muestraToma de la muestra
z TUBO 1: ESTUDIO QUIMICO BASICO
z -GLUCOSA
z - PROTEINAS TOTALES
z - IgG e Index Ig G
z - ACIDO LACTICO
MetodosMetodos de laboratorio para cuantificar de laboratorio para cuantificar GlucosaGlucosa
zMetodos Enzimatico de Punto final colorimetrico
Metodo de Glucosa Oxidasa /Trinder
Glucosa OxidasaGlucosa +02 cido glucnico +
H202
1/3 alfa-d-glucosa mutarotasas2/3 beta-d-glucosa
PeroxidasaH202+fenol+4-AF cromgeno coloreado
+ H20
VR : 2/3 del valor en suero
Trinder
510 nm
El anEl anlisis de protelisis de protenas totales en LCR puede nas totales en LCR puede clasificarse en 3 tipos de mclasificarse en 3 tipos de mtodos principales :todos principales :1. TURBIDIMETRICO :1. TURBIDIMETRICO :
a. Prueba de Acido a. Prueba de Acido SulfusalicilicoSulfusalicilico+ sulfato + sulfato de sodiode sodio
b. Prueba de Acido Tricloacetico12,5% b. Prueba de Acido Tricloacetico12,5% 2. QUIMICO :2. QUIMICO :
a. a. BiuretBiuret MODIFICADOMODIFICADO3. FIJACION DE COLORANTES3. FIJACION DE COLORANTES
a. Azul brillante de a. Azul brillante de CoomassieCoomassieb. Rojo de b. Rojo de PirangolPirangol
VR: 20VR: 20--40 40 mgmg//dLdL
PROTEINAS TOTALES
INDEX INDEX IgGIgG
z Ig G index = Ig G ( LCR) x albumina ( suero)z Ig G ( suero) x albumina ( LCR)
z VR: 0.25-0.85z Ig G (LCR) :1-4 mg/dL
ProteinogramaProteinograma o o ElectroforesisElectroforesisde de proteinasproteinas
zFundamento:Separa a lasProteinas enFuncion deSu carga o Puntoisolectrico
ElectroforesisElectroforesis de de proteinasproteinas
Albumina
Globulinas
Muestra :LCR
Coloracion:Coosmasie bluePonceu S
ElectroforesisElectroforesis porpor inmunofijacioninmunofijacionde de proteinasproteinas
Albumina
Globulinas
Uso de AbMonoclonalContra lasFracciones deIg (G, A, M y Cadenas ligerasKappa y Lamda)
Muestra 1
ADENOSINA DEAMINASAADENOSINA DEAMINASA
z Es una enzima del grupo de las hidrolasas, involucrada en el catabolismo de las bases purnicas.
La adenosina es un nucleosido endgeno encontrado en cantidades pequeas a travs del cuerpo. Su frmula qumico es C l0 H 13 N 5 O 4 .
Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)
z Es un marcador de inmunidad celular, cuya actividad plasmatica estaumentada en enfermedades donde la respuesta inmune tiene una mediacin celular.
z Se encuentra presente en los linfocitos T activados.
Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)
z Presente en linfocitos T activadosz Presente en liquidos biolgicos de procesos
inflamatorios mediados por inmunidad celular
zMicosis TBCz Alta sensibilidad y especificidad en TBC
pleural, pericardica, meningea, articular y peritoneal
IsoenzimasIsoenzimas de ADAde ADA
z La Adenosina Deaminasa presenta tres isoenzimas:
z ADA 1
z ADA 2 est relacionada a procesos de actividad linfocitos T y en especial en tuberculosis menngea, pleural.
MMTODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA TODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA DETERMINACIDETERMINACIN DE ADAN DE ADA
z Fundamento
El NH3 reacciona con el hipoclorito de sodio y fenol a 37oC (con nitroprusiato de sodio en medio alcalino como catalizador) para formar indofenol de color azul intenso, que es medido a 640 nm.
32 NH Inosina deaminasa Adenosina H Adenosina ++ O
SIGNIFICADO CLINICOSIGNIFICADO CLINICO*Aumento: Enfermedades hepticas Mononucleosis infecciosa Fiebre tifoidea Leucemia aguda Micosis TBC
En la tuberculosis pulmonar activa se ha encontrado una elevacin srica de ADA. Asmismo en meningitis y peritonitis tuberculosa se observa de ADA en LCR y lquido peritoneal.
VALORES DE REFERENCIAVALORES DE REFERENCIA
z Es un gran mtodo auxiliar en el diagnstico de tuberculosis de serosas, pleura, peritoneo o pericardio.
z Valores referencia : z - L Pleural : 0 45 U/L
LCR : 0 6 U/L L asctico : 0 40 U/L L. pericardico: 0 20 U/L
LIQUIDO SINOVIALLIQUIDO SINOVIAL
- Es un dializado del plasma ricoen acido hialuronico
-99% mucoproteinas (acetilglucosamina +ac. Glucoronico)
Criterios Normal No inflamatorio Inflamatorio Purulento Hemorragico
Color Claro o amarillo palido
Xantocromico Xantocromico a blanco
Blanco Sanguinolento
Aspecto Transparente Transparente Translucido u opaco
Opaco Opaco
Viscosidad Muy alto Alto Bajo Muy bajo -Coagulacin c/mucina Buena Pobre a buena Pobre a buena Pobre -
Coagulacin espontanea Ninguna Frecuente Frecuente Frecuente -GB 150 3000 3000-50K 50K-300K -
PMNs 25% 25% 70% 90% -GR - - - - +++
Examen de cristales* - Puede ser + Puede ser + - -
Etiologias
Osteoartritis, AR temprana, trauma, deterioro/cronico,
sinovitis por cristales, LES, poliartritis, escleodermia,
necrosis aseptica, etc.
AR, Reiter, aguda por cristales,
sinovitis, artritis psoriatica, (enf
inflam. de Bowel), viral artritis, fiebre
reumatic.
Bacteriana, TBC, por hongos.
Fractura, articulacin de
Charcot, hemofilia, tumor,
condrocalcinosis, anticoagulantes, n rx, protesis artic,
enf cel falciformes.
Anlisis de Lquido Sinovial
ADENOSINA DEAMINASAADENOSINA DEAMINASA
z Es una enzima del grupo de las hidrolasas, involucrada en el catabolismo de las bases purnicas.
La adenosina es un nucleosido endgeno encontrado en cantidades pequeas a travs del cuerpo. Su frmula qumico es C l0 H 13 N 5 O 4 .
Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)
z Es un marcador de inmunidad celular, cuya actividad plasmatica estaumentada en enfermedades donde la respuesta inmune tiene una mediacin celular.
z Se encuentra presente en los linfocitos T activados.
Adenosina Adenosina DeaminasaDeaminasa (ADA)(ADA)
z Presente en linfocitos T activadosz Presente en liquidos biolgicos de procesos
inflamatorios mediados por inmunidad celular
zMicosis TBCz Alta sensibilidad y especificidad en TBC
pleural, pericardica, meningea, articular y peritoneal
IsoenzimasIsoenzimas de ADAde ADA
z La Adenosina Deaminasa presenta tres isoenzimas:
z ADA 1
z ADA 2 est relacionada a procesos de actividad linfocitos T y en especial en tuberculosis menngea, pleural.
MMTODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA TODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA DETERMINACIDETERMINACIN DE ADAN DE ADA
z Fundamento
El NH3 reacciona con el hipoclorito de sodio y fenol a 37oC (con nitroprusiato de sodio en medio alcalino como catalizador) para formar indofenol de color azul intenso, que es medido a 640 nm.
32 NH Inosina deaminasa Adenosina H Adenosina ++ O
SIGNIFICADO CLINICOSIGNIFICADO CLINICO*Aumento: Enfermedades hepticas Mononucleosis infecciosa Fiebre tifoidea Leucemia aguda Micosis TBC
En la tuberculosis pulmonar activa se ha encontrado una elevacin srica de ADA. Asmismo en meningitis y peritonitis tuberculosa se observa de ADA en LCR y lquido peritoneal.
VALORES DE REFERENCIAVALORES DE REFERENCIA
z Es un gran mtodo auxiliar en el diagnstico de tuberculosis de serosas, pleura, peritoneo o pericardio.
z Valores referencia : z - L Pleural : 0 45 U/L
LCR : 0 6 U/L L asctico : 0 40 U/L L. pericardico: 0 20 U/L
LIQUIDO SINOVIALLIQUIDO SINOVIAL
- Es un dializado del plasma ricoen acido hialuronico
-99% mucoproteinas (acetilglucosamina +ac. Glucoronico)
Criterios Normal No inflamatorio Inflamatorio Purulento Hemorragico
Color Claro o amarillo palido
Xantocromico Xantocromico a blanco
Blanco Sanguinolento
Aspecto Transparente Transparente Translucido u opaco
Opaco Opaco
Viscosidad Muy alto Alto Bajo Muy bajo -Coagulacin c/mucina Buena Pobre a buena Pobre a buena Pobre -
Coagulacin espontanea Ninguna Frecuente Frecuente Frecuente -GB 150 3000 3000-50K 50K-300K -
PMNs 25% 25% 70% 90% -GR - - - - +++
Examen de cristales* - Puede ser + Puede ser + - -
Etiologias
Osteoartritis, AR temprana, trauma, deterioro/cronico,
sinovitis por cristales, LES, poliartritis, escleodermia,
necrosis aseptica, etc.
AR, Reiter, aguda por cristales,
sinovitis, artritis psoriatica, (enf
inflam. de Bowel), viral artritis, fiebre
reumatic.
Bacteriana, TBC, por hongos.
Fractura, articulacin de
Charcot, hemofilia, tumor,
condrocalcinosis, anticoagulantes, n rx, protesis artic,
enf cel falciformes.
Anlisis de Lquido Sinovial