(19) 한민 특허청(KR)

(12) 등 특허공보(B1)

(45) 공고 2012 09월20

(11) 등 10-1183538(24) 등 2012 09월11

(51) 특허 (Int. Cl.)

A01N 63/02 (2006.01) A01P 3/00 (2006.01)(21) 원 10-2009-0125938

(22) 원 2009 12월17

심사청 2009 12월17

(65) 공개 10-2011-0069272

(43) 공개 2011 06월23

(56) 행 술 사 헌

KR1020050040285 A*

KR1020090066412 A

*는 심사 에 하여 헌

(73) 특허

경 도

경 도 수원시 달 원 1 (매산 3가)

(72)

주

경 도 수원시 통 통 232, 벽 골 8단지우 A 822동 2006 ( 통동)

순

경 도 수원시 매실 70, LG삼 아 트113동 605 ( 매실동)

(뒷 에 계 )

(74) 리

특허 아

체 청 항 수 : 6 항 심사 :

(54) 신규한 니 실러스 폴리믹사 포함하는 식 역병 미생

(57) 약

본 신규한 니 실러스 폴리믹사 포함하는 식 역병 미생 에 한 것 ,

욱 상 하게는 고 , 마 , , 수 등 다양한 에 생하는 양병원균 역병균에 해 항 보

는 신규한 니 실러스 폴리믹사, 미생 포함하는 미생 상 미생 한 식

역병 에 한 것 다.

본 니 실러스 폴리믹사 No.72는 고 , 마 , , 수 등 하우스 나 훼 재 시

가 고 는 식 역병균 사 에 할 수 는 우수한 미생 수 다.

본 에 니 실러스 폴리믹사 No.72 미생 는 미생 함 하우스 가나

훼 가에 안 재 하므 가 득 시킬 뿐만 아니라 동 도 월등 감시킬

것 다.

도 - 도5

등록특허 10-1183538

- 1 -

(72)

진

경 도 수원시 안 수 363 17, 901 (원동, 청우아 트)

진

경 도 수원시 달 246, 110동 704 (계동, 래미안 블 래스)

경열

경 도 시 우동 동탄 당마 슬아트 145동 1803

경 도 수원시 통 청 33, 삼 래미안433동 1204 ( 통동)

등록특허 10-1183538

- 2 -

특허청

청 항 1

양에 리한 니 실러스 폴리믹사 (Paenibacillus polymyxa) No.72 (KACC 91502P).

청 항 2

1항에 어 , 열 1 시 는 염 열 가지는 것 니 실러스 폴리믹사 (Paenibacillus

polymyxa) No.72 (KACC 91502P).

청 항 3

1항 는 2항에 니 실러스 폴리믹사 (Paenibacillus polymyxa) No.72 (KACC 91502P) 포함하는

미생 .

청 항 4

3항에 어 , 상 미생 는 식 역병균 하는 것 미생 .

청 항 5

4항에 어 , 상 식 역병균 Phytophthora 것 미생 .

청 항 6

4항에 어 , 상 식 고 , 마 , , 수 는 상 것 미생 .

상 한

술 야

본 신규한 니 실러스 폴리믹사 포함하는 식 역병 미생 에 한 것 , [0001]

욱 상 하게는 고 , 마 , , 수 등 다양한 에 생하는 양병원균 역병균에 해 항

보 는 신규한 니 실러스 폴리믹사, 미생 포함하는 미생 상 미생 한 식

역병 에 한 것 다.

경 술

늘날 업 개량, 양 비 도 진, 병해 거 등 식량 산에 몰 해 [0002]

지만 지 약 사 과 남 양과 하천 심각한 염 하고 다. 한 에 들 약

하므 독 , 경 염 사람과 가 에 한 독 등 에 약 사 재 계

그에 한 가 강 고 는 실 다.

같 약에 한 우 삶 질에 한 심 커지 근에는 새 운 안 병해 [0003]

에 미생 나 식 하는 생 학 가 심 상 고 다.

생 학 는 비 안 한 산 에 하여 경에 해한 학 약 사 하는 신에[0004]

미생 는 식 하여 경, 다 식 에는 향 미 지 아니하 상 병 택

하는 다.

역병균 병원 강하고 주 특 지만, Phytophthora nicotianae Phytophthora cinnamomi 등[0005]

1,000 여 주 해하는 것 알 다. 1996 5 간 수행 내 생 역병균 체계

립 연 결과에 , 각 도별 생 는 역병균 는 8 에 14 도 것 사 었다. 들

P. cactorum, P. capsici, P. drechsleri, P. infestans, P. nicitianae는 해마다 생 고

주별 피해 도 경 피해수 등 감안할 들 내 생 5 주 역병균 라 할 수 다.

등록특허 10-1183538

- 3 -

역병 피해가 가 가지과 과 채 것 나타났 나, 각 과수 에도 역병 많[0006]

생 고 다. 지재 에 는 여 철 6월과 9월 사 에 역병 생 많지만, 하우스 나 훼 에

는 연 생 고 , 특 , 근에 재 가하고 는 양액재 에 는 역병 생 거 포

감염 어 피해 는 경우가 다.

내

해결 하고 하는 과

본 신규한 니 실러스 폴리믹사 한 식 역병 미생 공하는 것 다.[0007]

본 다 양에 리한 니 실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa) No.72 (KACC 91502[0008]

P) 공하는 것 다.

한, 본 열 1 시 는 염 열 가지는 것 니 실러스 폴리믹사 No.72 (KACC[0009]

91502P) 공하는 것 다.

본 다 니 실러스 폴리믹사 No.72 (KACC 91502P) 포함하는 미생 공하는 것[0010]

다.

과 해결수단

하, 본 상 하 다 과 같다.[0011]

본 양에 리한 니 실러스 폴리믹사 (Paenibacillus polymyxa) No.72 (KACC 91502P) 것 다.[0012]

하, 본 욱 상 하 다 과 같다.[0013]

본 에 는 다양한 경에 채취한 양 항진균 나타내는 미생 탐색, 보하 다.[0014]

그 결과, 본 에 는 경 도 고양시 양 시 하우스에 재 상 포 근 양 채취하여 얻[0015]

어진 시료 생 검 에 해 식 역병균에 해 항 보 는 균주 하 다. 균주에

하여 태 , 생 학 특 NCBI blast 검색 실시한 결과, 새 운 니 실러스 폴리믹사

(Paenibacillus polymyxa) 균주 동 하 다.

별 균주 니 실러스 폴리믹사 No.72 하고, 2009 11월 10 립 업과학원 업 원[0016]

에 탁하 다( 탁 KACC 91502P).

본 에 라 별 균주는 니 실러스 폴리믹사 89% 상동 나타냈 , β- 시다 , β-만[0017]

시다 나마 신에 다 생 학 보여 새 운 균주 었다.

본 에 , 상 니 실러스 폴리믹사 No.72는 양 지 TSB(Triptic Soy Broth) 지 상에 [0018]

라 , 15 내지 30 ℃ 에 생 가능하고, 20 내지 25 ℃에 가 란다.

본 니 실러스 폴리믹사 No.72 생 pH 는 6 내지 9 pH 7.0 내지 8.0에 가 란다.[0019]

상 한 본 에 니 실러스 폴리믹사 No.72는 식 역병 에 하다.[0020]

본 에 니 실러스 폴리믹사 No.72에 해 역병균 하는 식 에는 특별 한 없 나, 상[0021]

식 는 가지과 과 채 , 람직하게는 고 , 마 , , 상 는 수 등 다.

본 니 실러스 폴리믹사 No.72 식 병원균에 한 항균 알아보 하여 Phytophthora capsici[0022]

뿐만 아니라 Phytophthora infestans, Phytophthora dreschleri Rhizoctonia solani, Sclerotinia

homoeocarpa, Sclerotinia sclerotinia, Botyritis cinerea 등에 해 paper disc 양한 결과, 고

역병균 뿐만 아니라 잿빛곰 병, 시들 병, 탄 병 등 주 병원균에 해 도 항균 나타내

었다.

본 에 해 단리 니 실러스 폴리믹사 No.72는 항균 포트 검 에 고 역병균에 한 과가[0023]

등록특허 10-1183538

- 4 -

었 , 포 시험에 생 검 결과 처리 과 비하여 78% 가 나타내었다. 한 고 역

병균 3 에 해 도 과 나타내었다.

라 , 본 리, 동 니 실러스 폴리믹사 No.72는 미생 체 식 역병균 에[0024]

사 수 , 포함하는 식 역병균 미생 수 다. 한, 본 에

니 실러스 폴리믹사 No.72 포함하는 미생 한 식 역병균 에도 사 수

다.

과

본 에 니 실러스 폴리믹사 No.72는 식 역병균 할 수 는 미생 , 는 포함하는 미[0025]

생 가에 사 수 다.

한, 본 니 실러스 폴리믹사 No.72는 고 , 마 , , 수 등 하우스 나 훼 재[0026]

시 가 고 는 식 역병균 사 에 할 수 는 우수한 미생 수 다.

본 에 니 실러스 폴리믹사 No.72 미생 는 미생 함 하우스 가나[0027]

훼 가에 안 재 하므 가 득 시킬 뿐만 아니라 동 도 월등 감시킬

것 다.

실시 한 체 내

하, 본 실시 에 하여 욱 상 하 다 과 같다. 하 실시 는 단지 본 체[0028]

하는 것 , 본 리 가 하 실시 에 해 한 는 것 아니다.

실시 1 균주 리[0029]

2007 3월 경 도 고양시 양 시 하우스에 재 상 포 에 근 양 채취하 다. [0030]

채취 양 람 통하는 실내에 건 시 후 양 1 g 량하여 10 ml 균수에 어 탁한[0031]

후 탁액 1 ml 채취하여 9 ml 균수가 담 시험 에 차 10 씩 하 다. 탁액 균

수 200 ul 씩 취하여 NA(Nutrient Agar) 고체 평 지 앙에 고 균 스프 드 골고루 어 후

25 ℃ 항 에 3 간 양하 다.

각각 양 니 취하여 균주 여주고 항진균 에 하 다.[0032]

실시 2 균주 동[0033]

양병해 고 역병균, Phytophthora capsici에 해 항 보 는 균주 동 하 해 16s rDNA [0034]

염 열 하여 NCBI blast 검색하여 Paenibacillus polymyxa 99% 하 다.

균주 태 동 해 처리 과 거 후 주사 미경(Sanning Electronic microscope,HITACHI[0035]

S-3000) 찰하 고, 균검 VITEK PRO BCH 드 하여 생 학 검 하여 균

하 다. 동 결과 β- 시다 , β-만 시다 , 나마 신에 다 생 학 보

니 실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa) 89% 상동 보 다.

미경 검경결과, 도 2에 보 는 같 단간균 균주 태가 었다.[0036]

에 리 동 균 니 실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa) No.72 하 다. 균 2009[0037]

11월 10 립 업과학원 업 원 에 탁 KACC 91502P 탁하 다.

[ 1] [0038]

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니 실러스 폴리믹사 No.72 생 학 특[0039]

1[0040] β-

시다

- 3 라 신 - 4 아스트

- 5 루 신 + 7 닐알라닌

+ 8 L-프린

-

9 β-갈락시다

+ 10 L-피리도닐

- 11 α-갈랄시다

+ 12 알라닌 - 13 티 신 + 14 β-N-아틸-

루 사민다

-

15 알라프아

릴아미다

- 18 사

스트린

- 19 D-갈락스

+ 21 라 진 + 22 미 -

시

- 24 틸-A-D- 루

피라사드

+

25 엘만 - 26 틸-D-

사드

- 27 α-만시다

- 29 말 트리 + 30 라신

- 31 D-만니 +

32 D-만 + 34 D-엘 - 36 N-아 틸-D- 루사민

- 37 라티 + 39 L-람 - 41 β- 루시다

+

43 β-만시

다

- 44 포스포릴린

- 45 피루트

- 46 α- 루시다

- 47 D-타가 - 48 D-트리할

+

50 눌린 - 53 D- 루스

+ 54 D-리보 + 56 트 신 - 58 NaCl6.5%

- 59 나마신

-

60 린도마신

- 61 에스쿨린하드라

+ 62 트라리움드

(-)

63 플 마 신 +

실시 3 니 실러스 폴리믹사 No.72 생 건 시험[0041]

1) 도[0042]

균 양 도 하 해 TSB(Triptic Soy Broth) 지 200 ml에 양액 2 ml 하여 도별[0043]

10, 15, 20, 25, 30, 35 ℃에 24시간동안 180 rpm 양한 후 양액 UV 스 트 포 타(BECKMAM

DU730) 600 nm 에 도 사하여 균 생 도 비 하여 생 도 하 다.

그 결과 도 3에 보 는 같 20 ℃에 48시간 양과 25 ℃에 24시간 양하 가 생 [0044]

었다.

2) pH[0045]

균 생 에 한 산도 하 해 TSB 지 200 ml NaOH HCl 산도 3,4,5,6,7,8 하여[0046]

24시간 동안 180 rpm 양한 후 양액 UV 스 트 포 타 600 nm 에 도 사하여 균 생

도 비 하 다.

그 결과, 도 4에 보 는 같 pH 7 상에 균 생 체 었다.[0047]

실시 4 니 실러스 폴리믹사 No.72 항균 검[0048]

1) 탄 원에 한 항균 검[0049]

균주 생 에 필 한 탄 원 결 하 해 지(K2HPO4 0.7%, KH2PO4 0.2%, 루 스 0.5%, (NH4)2SO4[0050]

0.1%, MgSO4? 7H2O 0.01%) 하여 탄 원에 는 루 스 시 고 각각 탄 원 체 액에 하여

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1% 도 첨가하여 25 ℃에 180 rpm 24시간 양한 후 양 도 하 다.

항균 검 하 해 PDA 지에 각각 탄 원 양 양액 스 에 100 ul씩 하여 역[0051]

병균(Phytophthora capsici)에 양하여 항균 하 다.

검 시험 결과, 하 2에 나타낸 같 (starch) 탄 원 사 하 균주 양 가[0052]

었 나 비 (sorbitol) 탄 원 하 고 역병균에 한 항균 가 게

나타났다.

[ 2][0053]

[0054]

2) 질 원에 한 항균 검[0055]

균주 생 에 필 한 질 원 결 하 해 지에 (NH4)2SO4 0.1% 신 각각 질 원 0.5%씩 첨가[0056]

하여 25 ℃에 180 rpm 24시간 양한 후 양 도 하 다. 항균 PDA 지에 각각 질 원

양 양액 스 에 100 ul씩 하고 고 역병균에 양 함 항균 하

다.

검 결과 (yeast extracts) 질 원 하 균주 양 가 었고 항균 질 생[0057]

도 가 양 하 다.

[ 3][0058]

[0059]

실시 5 염 항균 검[0060]

균주 생 에 향 미 는 염 하 해 지에 염 K2HPO4 0.7%, KH2PO4 0.2%,[0061]

MgSO4? 7H2O 0.01% 신 각각 염 5 mM씩 첨가하여 25 ℃에 180 rpm 24시간 양한 후 양 도

하 다. 항균 PDA 지에 각각 염 첨가하여 양 양액 스 에 20 ul

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- 7 -

씩 하고 역병균에 양함 항균 하 다.

검 결과 하 4에 재하 , 에 보 는 같 MgCl2 염 하 균주 양[0062]

과 항균 게 나타났다.

[ 4][0063]

[0064]

실시 6 항미생 식 병원균에 한 항진균 검[0065]

리한 항 미생 식 병원균에 한 항균 알아보 하여 1주 도 양 우수한 병원균[0066]

보아 8 mm 떼어낸 후 PDA 한천 지 가 리에 상하고, 편에 25 ℃에 24시간 양 미생

양액 스 에 20 ul 하여 25 ℃ 항 에 7 상 양하여 균사가 상 라지 못하는

억 사하 다.

병원균 Phytophthora capsici 뿐만 아니라 Phytophthora infestans, Phytophthora dreschleri[0067]

Rhizoctonia solani, Sclerotinia homoeocarpa, Sclerotinia sclerotinia, Botyritis cinerea 등에 해

paper disc 양하고, 그 양 결과 도 6에 나타내었다.

도 6에 보 는 같 , 상 실시 에 니 실러스 폴리믹사 No.72는 고 , 마 상 역병[0068]

균에 해 항균 나타내었 , 고 역병균 뿐만 아니라 잿빛곰 병, 시들 병, 탄 병 등 주

병원균에 해 도 항균 나타내는 것 하 다.

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[ 5][0069]

[0070]

실시 7 항미생 항균 포트 검[0071]

실 포트에 재식 고 지 에 25 ℃, 180 rpm 24시간 양 항균 10 ml 씩 처리하고, 3 후[0072]

병원 다 역병균들 주 5 x 103 개/ml 5 ml씩 고 에 하고, 3주후 역병균 병 한

결과, 3 고 역병균에 해 No. 72 미생 양액 처리 한 후 역병균 한 경우는 병 지 않

아 처리 비 하여 수집한 고 역병균 3 에 해 과가 었다.

[ 6][0073]

[0074]

실시 8 항미생 포 검[0075]

180rpm TSB 지에 24시간 양한 항미생 1 x 108 cfu/ml 도 한 후 상에 재 고[0076]

30 간 지한 후 직경 30 cm 에 식하 다. 고 역병균 트리 쉬에 5 간 양한

후 균사 리 거하고 실 에 50 cm 에 등 빛 3 간 사한 후 주 낭

도하 다. 균수 30ml 트리 쉬에 어 주 낭 수거한 후 주 5 x 103 개/ml 5 ml씩

식 고 에 하 다. 3주 후 역병 병 도 사하 다. 결과 미생 처리한 고 에 는

처리 비 하여 78% 과가 었다.

3주 후 역병 병 도 사하여, 그 결과 하 7에 재하 다.[0077]

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[ 7][0078]

[0079]

상술한 실시 , 시험 도 내 상 하 한 뿐, 술 사상 [0080]

한 하고 하는 아니 , 상에 한 본 본 하는 술 야에 통상 지식

가진 에 어 본 술 사상 어나지 않는 내에 여러 가지 , 변 변경 가능하므

상 실시 첨 도 에 한 는 것 아님 , 후술하는 청 뿐만 아니라 청

함께 균등 포함하여 단 어야 한다.

도 간단한

도 1 본 에 단리 니 실러스 폴리믹사 No.72 염 열 나타낸 것 다.[0081]

도 2는 본 에 단리 니 실러스 폴리믹사 No.72 주사 미경 사진 다.[0082]

도 3 본 에 단리 니 실러스 폴리믹사 No.72 생 도 검 그래프 다.[0083]

도 4는 본 에 단리 니 실러스 폴리믹사 No.72 생 pH 검 그래프 다.[0084]

도 5는 본 에 단리 니 실러스 폴리믹사 No.72 처리 항미생 처리 과 처리 지 않 [0085]

생 결과 나타낸 사진 다.

도 6 본 에 단리 니 실러스 폴리믹사 No.72가 식 역병에 해 항균 나타낸 결과 보여[0086]

주는 사진 다.

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도

도 1

도 2

등록특허 10-1183538

- 11 -

도 3

도 4

도 5

등록특허 10-1183538

- 12 -

도 6

열

<110> GyeongGi-Do

<120> NOVEL PAENIBACILLUS POLYMYXA AND MICROORGANISM AGENT COMPRISING

THE STRAINS FOR PREVENTING PHYTOPHTORA CAPSICI OF PLANTS

<160> 1

<170> KopatentIn 1.71

<210> 1

<211> 1426

<212> DNA

<213> Paenibacillus polymyxa

<400> 1

taatacatgc aagtcgagcg gggttagtta gaagcttgct tctaactaac ctagcggcgg 60

acgggtgagt aacacgtagg caacctgccc acaagacagg gataactacc ggaaacggta 120

gctaataccc gatacatcct tttcctgcat gggagaagga ggaaaggcgg agcaatctgt 180

cacttgtgga tgggcctgcg gcgcattagc tagttggtgg ggtaaaggcc taccaaggcg 240

acgatgcgta gccgacctga gagggtgatc ggccacactg ggactgagac acggcccaga 300

ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt ccgcaatggg cgaaagcctg acggagcaac 360

gccgcgtgag tgatgaaggt tttcggatcg taaagctctg ttgccaggga agaacgyytk 420

등록특허 10-1183538

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gtagagtaac tgctcttgaa gtgacggtac ctgagaagaa agccccggct aactacgtgc 480

cagcagccgc ggtaatacgt agggggcaag cgttgtccgg aattattggg cgtaaagcgc 540

gcgcaggcgg ctctttaagt ctggtgttta atcccgaggc tcaacttcgg gtcgcactgg 600

aaactgggga gcttgagtgc agaagaggag agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc 660

gtagagatgt ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctc tgggctgtaa ctgacgctga 720

ggcgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga 780

tgaatgctag gtgttagggg tttcgatacc cttggtgccg aagttaacac attaagcatt 840

ccgcctgggg agtacggtcg caagactgaa actcaaagga attgacgggg acccgcacaa 900

gcagtggagt atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc 960

cctttgaccg gtctagagat agacctttcc ttcgggacag aggagacagg tggtgcatgg 1020

ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat 1080

gcttagttgc cagcaggtca agctgggcac tctaagcaga ctgccggtga caaaccggag 1140

gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtactac 1200

aatggccggt acaacgggaa gcgaagsmgc gatgtggagc caatcctaga aaagccggtc 1260

tcagttcgga ttgtaggctg caactcgcct acatgaagtc ggaattgcta gtaatcgcgg 1320

atcagcatgc cgcggtgaat acgttcccgg gtcttgtaca caccgcccgt cacaccacga 1380

gagtttacaa cacccgaagt cggtgaggta accgcaaggr gccagc 1426

등록특허 10-1183538

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