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ELABORACIÓN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD Y
DOCUMENTACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS
ESTÁNDAR POES E INSTRUCTIVOS DEL LABORATORIO DE
BACTERIOLOGÍA ESPECIALIZADA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
MÓNICA MARCELA ALONSO GUERRA
LINA MARIA CAMPOS CASTRO
TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial
Para optar al título de
MICROBIÓLOGO INDUSTRIAL
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Bogotá, D.C. Enero 2008
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NOTA DE ADVERTENCIA Artículo 23 de la Resolución N° 13 de Julio de 1946 “La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia”.
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ELABORACIÓN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD Y
DOCUMENTACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS
ESTÁNDAR POES E INSTRUCTIVOS DEL LABORATORIO DE
BACTERIOLOGÍA ESPECIALIZADA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
MÓNICA MARCELA ALONSO GUERRA LINA MARIA CAMPOS CASTRO
APROBADO
___________________________ _________________________ Dra. Alba Alicia Trespalacios Dra. Luz Marlén Acosta Bacterióloga MSc. Candidata Bacterióloga Especialista a PhD. en salud ocupacional DIRECTOR CODIRECTOR ______________________________ ____________________________ Dra. Luisa Gutiérrez Dra. Mónica Huertas Bacterióloga Bacterióloga JURADO JURADO
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ELABORACIÓN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD Y
DOCUMENTACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS
ESTÁNDAR POES E INSTRUCTIVOS DEL LABORATORIO DE
BACTERIOLOGÍA ESPECIALIZADA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
MÓNICA MARCELA ALONSO GUERRA LINA MARIA CAMPOS CASTRO
APROBADO
____________________________ __________________________
Ángela Umaña Muñoz Janneth Arias MPhil MSc. Decana Académica Directora de Carrera
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DEDICATORIAS
A Dios por el camino recorrido. A mi Hijo por ser lo más grande que tengo y darme fuerza y templanza, A mis Padres por su apoyo todos estos años, por su infinito amor, comprensión y por ayudarme a que este momento llegara. A mi Tía por ser mi segunda mamá, A mi Hermana por su cariño y comprensión. A mi amor Oscar por acompañarme y apoyarme en logar este objetivo que hoy se hace realidad. A Linis por su amistad sincera y fiel. Mónica Alonso
A Dios por darme la fortaleza para seguir adelante con mis metas y permitirme culminar con esta etapa de mi vida. A mi hijo por ser mi amor, fuerza y compañía durante este camino. A mis padres quienes durante todos estos años confiaron en mí; comprendiendo mis ideales y apoyando cada uno de ellos. A mis hermanas por ser una ayuda incondicional, a mi novio quien durante estos meses me motivo y acompaño a cumplir este objetivo y a la flaca por su amistad y por compartir todo este proceso.
Lina Campos
Detrás de cada línea de llegada, hay una de partida.
Detrás de cada logro, hay otro desafío. Si extrañas lo que hacías, vuelve a hacerlo. Sigue aunque todos esperen que abandones. No dejes que se oxide el hierro que hay en ti.
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AGRADECIMIENTOS
En primera medida a Dios por habernos concedido lograr este triunfo y nuestro más profundo agradecimiento hacia nuestras familias, quienes durante todos estos años nos apoyaron. Gracias Dra Alba, por la oportunidad y la confianza que depósito en nosotras para llevar a cabo este proyecto. A la Dra .Luisa Gutiérrez por el acompañamiento en este proceso. No tenemos letras para seguir diciendo el gran regocijo que nos da poder terminar esta carrera en donde profesores y compañeros dejan parte de su vida y enseñanzas para que nosotras seamos grandes profesionales.
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TABLA DE CONTENIDO
RESUMEN
ABSTRACT
1. INTRODUCCION ------------------------------------------------------------------- 11
2. MARCO TEORICO ----------------------------------------------------------------- 13
2.1 CALIDAD ---------------------------------------------------------------------------- 13 2.1.1 Historia de la Calidad ---------------------------------------------------------- 13 2.1.2 Sistema de Gestión de Calidad ------------------------------------------------ 14 2.1.3 Modelos de SGC ---------------------------------------------------------------- 15
2.2 BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO (BPL) ----------------------- 18 2.2.1 Principios de las BPL ----------------------------------------------------------- 18
2.3 ISO- NTC-IEC 17025:2005 ------------------------------------------------------- 20 2.3.1 Requisitos de la Norma -------------------------------------------------------- 21
2.4 DOCUMENTACIÓN DEL SISTEMA DE CALIDAD --------------------- 22 2.4.1 Estructura de la Documentación ---------------------------------------------- 23 2.4.2 Manual de Calidad -------------------------------------------------------------- 24 2.4.3. Procedimientos ----------------------------------------------------------------- 27 2.4.4 Instructivos----------------------------------------------------------------------- 34 2.4.5 Registros ------------------------------------------------------------------------- 35 2.4.6 Control de documentos --------------------------------------------------------- 36
2.5 BIOSEGURIDAD ------------------------------------------------------------------ 39 2.5.1 Principios de Bioseguridad ---------------------------------------------------- 40 2.5.2 Niveles de Contención --------------------------------------------------------- 41
2.5.3 Agentes Biológicos ---------------------------------------------------------------- 43 2.5.4 Normas Generales de seguridad biológica en el laboratorio -------------- 44 2.5.5 Barreras Primarias -------------------------------------------------------------- 44 2.5.6 Barreras Secundarias ----------------------------------------------------------- 48 2.5.7 Gestión de residuos Sólidos --------------------------------------------------- 50 2.5.7.2.2 Residuos peligrosos -------------------------------------------------------- 52
2.6 MICROORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA ESPECIALIZADA -------------------------------------- 62
8
2.6.1 Helicobacter pilori -------------------------------------------------------------- 62 2.6.2 Listeria monocytogenes -------------------------------------------------------- 65
3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN ---------------- 69
3.1 Formulación del Problema -------------------------------------------------------- 69
3.2 Justificación -------------------------------------------------------------------------- 69
4. OBJETIVOS -------------------------------------------------------------------------- 71
4.1 OBJETIVO GENERAL ----------------------------------------------------------- 71
4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS ---------------------------------------------------- 71
5. METODOLOGIA -------------------------------------------------------------------- 72
5.1. Lugar de estudio -------------------------------------------------------------------- 72
5.2. Análisis de la información que posee el laboratorio actualmente. -------- 72
5.3. Recolección de información ------------------------------------------------------ 72
5.4 Elaboración del Manual de bioseguridad del laboratorio de Bacteriología Especializada. ---------------------------------------------------------------------------- 73
5.5. Documentación de Procedimientos Operativos Estándar e Instructivos del Laboratorio de Bacteriología Especializada. ---------------------------------- 73
5.6 Elaboración del folleto informativo de Bioseguridad ------------------------ 73
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN --------------------------------------------------- 74
7. CONCLUSIONES ------------------------------------------------------------------- 87
8. RECOMENDACIONES ------------------------------------------------------------ 88
9. BIBLIOGRAFÍA --------------------------------------------------------------------- 89
9
LISTA DE TABLAS Tabla 1. Requisitos técnicos y de Gestión según la (NTC-ISO/IEC 17025:
2005)………………………………….................................…………………… 21
Tabla 2. Formato de un POEs (OPS, 2005). (Guarnido, J. 2005) ……………32
Tabla 3. Situación de los documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J. 2005)……… 38
Tabla 4. Identificación de documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J. 2005)…....…39
Tabla 5. Lista de procedimientos operativos POEs Documentados………..……75
Tabla 6. Lista de Instructivos de trabajo Documentados ……………………...77
Tabla 7. Lista de Instructivos de Operación de equipos…...……………………79
Tabla 8. Lista de Fichas de Seguridad MSDS de reactivos Químicos…………..83
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LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Estructura de la Documentación para un sistema de Gestión de Calidad…………………………………………………………………………...23 Figura 2. Estructura de un POEs (OPS, 2005)………………………………….31
Figura 3. Clasificación de los Residuos según su peligrosidad……………… 51
Figura 4. POES documentados en el Laboratorio de Bacteriología
Especializada. ……………………………………………………………………76
Figura 5. Instructivos documentados en el Laboratorio de Bacteriología
Especializada……………………………………………………………………. 80
Figura 6 Documentación implementada en el Laboratorio de Bacteriología
Especializada……………………………………………………………………..81
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1. INTRODUCCION Debido a los requerimientos normativos internacionales tales como la ISO 9001:
2000, ISO 14001, NTC-ISO 17025, OSHAS 18001, entre otras normas, es
necesario que cualquier laboratorio que preste servicios, docencia e investigación
cuente con un sistema de calidad que aumente la confiabilidad en sus resultados
demostrando competencia técnica y administrativa.
Las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL), representan un sistema de calidad
relativo a los procesos de organización, bajo los cuales se ha de planificar,
ejecutar y documentar los estudios experimentales para garantizar la calidad y
validez de los métodos y resultados, siendo la documentación una herramienta
importante para este proceso.
Teniendo en cuenta que la bioseguridad y la documentación son parte de los
requisitos fundamentales para la implementación de las Buenas Practicas de
Laboratorio, es que se ve la necesidad de establecer Normas de Bioseguridad para
reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulación de material
peligroso de acuerdo a lo establecido por la OMS (Manual de bioseguridad en el
laboratorio), CDC (Bioseguridad en el laboratorio de microbiología), OPS
(Gestión de calidad para laboratorio). Adicionalmente documentar los
procedimientos facilita el desarrollo de las pruebas, asegura la calidad, fiabilidad,
integridad de los estudios y trazabilidad de los resultados.
Con la elaboración del Manual de Bioseguridad para el laboratorio de
Bacteriología Especializada, se tiene el propósito de describir la metodología a
seguir en un programa de Bioseguridad en microbiología, de tal forma que sirva
como guía para el trabajo seguro en el laboratorio con microorganismos
potencialmente peligrosos. Documentando los procedimientos que se realizan en
12
el Laboratorio se pretende garantizar la reproducibilidad de las pruebas y la
confiabilidad de los resultados, cumpliendo con parte de los requisitos para
implementar las Buenas Prácticas de Laboratorio y a futuro el Laboratorio de
Bacteriología Especializada pueda acreditar sus pruebas bajo la norma NTC-ISO
17025.
13
2. MARCO TEORICO
2.1 CALIDAD Según la Norma ISO 9000 define Calidad como el conjunto de características de
un producto o servicio que tienen que ver con la capacidad para satisfacer unas
necesidades específicas e implícitas, que vienen definidas por una norma. Para un
laboratorio, la calidad supone conseguir resultados confiables documentado
procedimientos conforme a lo establecido por los diferentes modelos de sistemas
de calidad y normativas. (NTC-ISO 9000:2000)
2.1.1 Historia de la Calidad La calidad como concepto y su evolución en la historia tiene como referencia mas
cercana los planteamientos que comenzaron a principios del siglo XX,
innumerables maestros y escuelas del mundo de la administración. Frederick
Taylor, padre de la administración cientifica origina un nuevo concepto en la
producción al descomponer el trabajo en tareas individuales separando las tareas
de inspección de las de producción y el trabajo de planificación del de ejecución.
Walter Shewart, es elmas sobresaliente, considerado el padre de los sistemas de
gestión de calidad actual. Crea en 1924 las gráficas de control, las cuales se hacen
muy populares a mediados de la segunda guerra mundial, con la creación y
utilización de la producción en serie Sheward crea el ciclo PHVA, que mas tarde
los japoneses rebautizaron como ciclo Deming.
Durante la segunda guerra mundial los militares Estadounidenses comienzan a
utilizar procedimientos estadísticos de muestreo creando las tablas de muestreo.
En 1944 se pública la primera revista sobre control de calidad (Quality Control).
Sobre los años 70 hacen suyas las ideas de control de calidad, haciendo referencia
haciendo referencia al TQC (Total Quality Control) resaltando la importancia de
14
la administración y de las políticas operacionales. Al mismo tiempo propagan la
difusión de los círculos de la calidad.
En los años 80 con el auge de la globalización de la economía y las exigencias
hechas por los proveedores militares, de la industria nuclear y aeroespacial, se
comenzó a implementar una serie de normas a nivel internacional sobre
aseguramiento de la calidad, para eso se tomaron como modelo las normas
Británicas BS5750 nacidas en 1977. En 1987 sale publicada la primera edición de
la familia de la serie ISO 9000 y en 1994 su primera revisión. (Londoño, O. 2007)
2.1.2 Sistema de Gestión de Calidad El sistema de Gestión de Calidad es el conjunto de elementos interrelacionados de
una empresa u organización por lo cual se administra de forma planificada la
calidad de la misma, en búsqueda de la satisfacción de sus clientes. Los
principales elementos de un sistema de calidad son:
1. Estructura de la organización: Corresponde al organigrama donde se
jerarquizan los niveles directivos y de gestión.
2. Estructura de responsabilidades: Implica apersonas y departamentos en
explicitar las responsabilidades en calidad.
3. Procedimientos: Plan permanente de las pautas detalladas para controlar
las acciones de la organización.
4. Procesos: Es la sucesión completa de operaciones dirigidos a consecución
de un objetivo específico.
5. Recursos: Económicos, humanos, técnico y de otro tipo que deben estar
definidos de forma estable y circunstancial.
El sistema de gestión de calidad en una organización tiene como punto de apoyo
el manual de calidad, y se completa con una serie de documentos adicionales
15
como manuales, procedimientos documentados, instrucciones técnicas, registros y
sistemas de información. (Londoño, O. 2007)
Normalmente sigue una norma de calidad. Una de las normas más conocidas y
utilizadas a nivel internacional para gestionar la calidad, es la norma ISO 9001:
2000. Pero también existe la norma ISO-IEC 17025: 2005, que aplica para el
diseño de un sistema de gestión de calidad en laboratorios, la norma ISO 14001
que aplica para la gestión ambiental y es compatible con la gestión de calidad, así
mismo la OSHAS18000 que sirve de guía para el diseño de un sistema de gestión
de seguridad industrial y también es compatible con el sistema de gestión de
calidad. Adicionalmente es fundamental la planificación, el control y mejora
continua de la gestión del sistema de calidad. En un laboratorio la
implementación de un sistema de Gestión de Calidad esta orientado a soportar el
desarrollo óptimo y sistemático de los ensayos que realice y debe ser diseñado,
teniendo en cuenta las siguientes variables: Alcance de los ensayos, grado de
normalización de los ensayos y necesidad de acreditación. (Londoño, O. 2007)
2.1.3 Modelos de SGC 2.1.3.1 ISO 9000:2000
La familia de normas ISO 9000: 2000 contempla una serie de estándares
internacionales referidos a la gestión de la calidad que tienen su origen en la
organización internacional de la estandarización (ISO). Esta familia de normas ha
sido elaborado para asistir a las organizaciones de todo tipo y tamaño, en la
implementación y la operación de sistemas de gestión de calidad eficaces. La
norma ISO 9001:2000, norma certificable dentro de la familia ISO 9000: 2000,
establece los requisitos que deben cumplir las organizaciones al implementar un
sistema de gestión de calidad.
Los beneficios que otorgan estas normas son:
16
1. Reducción de rechazos e incidencias en la producción o prestación de
servicios.
2. Aumento de la productividad
3. Mayor compromiso con los requisitos del cliente
4. Mejora continua.
Una organización que cumple con la ISO 9001: 2000 sólo cumple con los
requisitos básicos en cuanto a normas de calidad. Si se quisiera lograr la
excelencia debería cumplir con requisitos adicionales establecidos en la norma
ISO 9004: 2000 (guía de mejoras del funcionamiento) , esta no es una norma
certificable y su cumplimiento no puede ser requerido por una entidad
certificadora. . (NTC-ISO 9000:2000)
2.1.3.2 ISO14001:2004
ISO 14000 es un grupo de normas que describen los procedimientos tanto de
gerencia, como de administración y de funcionamiento, que hacen una
organización más efectiva, eficiente y responsable respecto al manejo del
ambiente. Al utilizar la ISO 14001:2004, norma certificable, una organización
puede planear, implementar y controlar su sistema de gestión ambiental de manera
que mejore continuamente el desempeño de sus procesos totales, particularmente
en lo referido al medio ambiente, pero también a la gestión administrativa en su
conjunto.
Esta norma internacional es aplicable a cualquier organización que desee
establecer un sistema de gestión ambiental.
La organización planifica, implanta y pone en funcionamiento una política
ambiental que tiene que ser apoyada y aprobada a nivel directivo y dada a conocer
al personal de la organización. La política ambiental incluye un compromiso de
17
mejora continua y de prevención de la contaminación, así como un compromiso
de cumplir con la legislación y reglamentación ambiental aplicable.
Adicionalmente la organización debe identificar los aspectos ambientales que
surjan de las actividades, productos y servicios, pasados, existentes o planificados
por la organización, y determinar los impactos ambientales significativos. (NTC-
ISO 14000:2004)
2.1.3.3 OSHAS 18001 (Seguridad y Salud Ocupacional)
Las normas OSHAS 18001 (Occupational Health and Safety Assessment Series),
es un estándar de gestión de prevención de riesgos laborales desarrollado por un
grupo internacional de entidades de normalización y de certificación.
Esta norma permite a las organizaciones adoptar un modelo de gestión de
seguridad y salud en el trabajo, cualquier organización puede implementar dicho
sistema.
En esta norma aplica que el personal debe ser competente para realizar las tareas
que puedan tener impacto sobre seguridad y salud ocupacional en el sitio de
trabajo. La organización debe establecer y mantener procedimientos para asegurar
que los empleados que trabajan en cada una de las funciones y niveles pertinentes
tengan conciencia de (OHSAS 18001, 2001):
1. La importancia de la conformidad con la política y los procedimientos de
seguridad y salud ocupacional y con los requisitos del sistema de gestión.
2. Las consecuencias, reales o potenciales, de sus actividades de trabajo para
la seguridad y salud ocupacional y los beneficios que tienen en el
mejoramiento del desempeño del personal.
3. Sus funciones y responsabilidades para lograr conformidad con la política y
procedimientos S & SO y con los requisitos del sistema de gestión incluida la
preparación para emergencias y los requisitos de respuesta.
18
4. Las consecuencias potenciales que tiene apartarse de los procedimientos
operativos especificados. (NTC-OSHAS 18001:2001)
2.2 BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO (BPL) La expresión Buenas Prácticas de Laboratorio, BPL o GLP de su correspondiente
en inglés Good Laboratory Practice, hace referencia a la organización y
condiciones de trabajo en las que los laboratorios planifican, desarrollan,
monitorean y registran sus ensayos.
Las BPL son un conjunto de reglas y procedimientos operativos que garantizan
que los datos generados por un laboratorio de control de calidad son
reproducibles y representativos, asegurando la validez y confiabilidad de los
resultados para ofrecer productos seguros e inocuos al cliente. Las BPL
involucran al conjunto de personas, instalaciones, equipos y procedimientos
necesarios para comprobar y vigilar la calidad de los productos. (TDR, 2000).
2.2.1 Principios de las BPL 2.2.1.1 Organización y Personal Se requiere una estructura de la organización y responsabilidades claramente
definidas para el personal investigativo, se contempla en un organigrama y plan de
trabajo, este debe brindar una idea inmediata de las funciones del laboratorio y las
relaciones entre los diferentes cargos, así como la calificación y competencias
referente a la educación. Adicionalmente el personal debe estar capacitado y
entrenado en forma continua en las áreas relacionadas con su desempeño, estas
capacitaciones deben ser evaluadas y registradas de forma periódica. (TDR,
2000).
19
2.2.1.2 Instalaciones y equipos Las BPL enfatizan en la adecuación de instalaciones y equipo los cuales deben ser
suficientes para el desarrollo de los estudios. Las instalaciones deben ser lo
suficientemente espaciosas para evitar problemas tales como el
congestionamiento, contaminación cruzada, confusiones entre proyectos y
condiciones de trabajo apretadas. Los equipos deben contar con un programa de
validación, calibración y mantenimiento. (TDR, 2000).
2.2.1.3 Reglas
Protocolos: resume la conducta de un estudio y asegura la reproducibilidad de este
(TDR, 2000).
Procedimientos escritos: son necesarios para estandarizar ciertas técnicas y para
facilitar la comparación de resultados.
2.2.1.4 Caracterización
Para que un estudio funcione correctamente es esencial conocer sobre los
materiales que se usan en el. Se debe evaluar las condiciones de seguridad y las
propiedades de los componentes que se utilizan. Es requisito tener conocimiento
detallado sobretodos las propiedades y forma de administración. Características
como identidad, pureza, composición, estabilidad de todos los materiales de
referencia. (TDR, 2000).
2.2.1.5 Documentación La documentación es uno de los aspectos principales de un programa de Garantía
de Calidad. Cada miembro del personal que ha realizado un determinado trabajo
debe poder demostrar que había recibido la capacitación necesaria, que el equipo
y los materiales que ha utilizado estaban en buen estado, que el método aplicado
era apropiado para el fin al que estaba destinado y ha producido resultados fiables
20
y que se han seguido unos procedimientos operativos estándar. Una buena
colección de procedimientos operativos estándar es prerrequisito para el éxito de
las Buenas Prácticas de Laboratorio. (TDR, 2000).
2.2.1.6. Aseguramiento de la calidad Asegura la integridad del estudio y la viabilidad de los resultados experimentales,
a su vez debe revisar todas las fases del estudio desde la planeación, a través de la
inspección finalizando con el reporte y archivo de la documentación (TDR, 2000).
Para lograr los puntos principales de las Buenas Prácticas de Laboratorio es
indispensable definir claramente responsabilidades, procedimientos y tareas, al
igual que un instrumento regulador de las mismas; esto puede obtenerse mediante
el sistema de gestión de calidad que articula procesos, procedimientos y tareas de
una forma sistemática lográndose así la consecución de las BPL(TDR, 2000).
2.3 ISO- NTC-IEC 17025:2005
La aplicación de las BPL y el cumplimiento de los requisitos necesarios para la
acreditación (norma ISO/IEC 17025:2005) ayudan a una correcta organización del
trabajo con un ahorro de tiempo y recursos, por lo que siempre resulta
beneficioso.
Un laboratorio puede alcanzar buenos resultados en sus ensayos con la aplicación
de las BPL. Sin embargo, si tiene clientes externos que le solicitan un trabajo con
confianza demostrada, debe acreditarse. La acreditación es un proceso que
conlleva no solo al cumplimiento de las BPL sino también de los requisitos
establecidos por la norma ISO/IEC 17025:2005 que es muy exigente; además este
cumplimiento debe demostrarse ante evaluadores imparciales o llamados de
tercera partes.
La ISO/IEC 17025:2005 es la segunda edición de esta norma elaborada por el
Comité
21
de evaluación de la conformidad (ISO/CASCO). Contiene todos los requisitos que
deben cumplir los laboratorios de ensayo y de calibración si desean demostrar que
poseen un sistema de gestión, son técnicamente competentes y son capaces de
generar resultados técnicamente válidos.
El empleo de esta norma facilita la cooperación entre laboratorios y otros
organismos y ayudan en el intercambio de información, experiencias y
procedimientos al igual que da confiabilidad en los datos y resultados obtenidos.
Esta norma especifica los requisitos generales de competencia para llevar a cabo
ensayos y/o calibraciones incluyendo el muestreo.
Esta norma es aplicable a todos los laboratorios, sin importar el número de
personas o la extensión del alcance de las actividades de ensayo y/o calibración.
Esta norma se encuentra dividida en requisitos de gestión y requisitos técnicos. En
la parte de gestión se encuentran los requisitos para la certificación del sistema de
calidad, mientras que en la parte técnica se describen los requisitos para el
personal, instalaciones, equipos, procedimientos, garantía de calidad e informes.
(NTC-ISO/IEC 17025: 2005)
2.3.1 Requisitos de la Norma
En el capítulo 4 de esta norma, se establecen los requisitos para una gestión
sólida. El capítulo 5 define los requisitos para la competencia técnica en los tipos
de ensayos o de calibraciones que el laboratorio lleva a cabo. (NTC-ISO/IEC
17025: 2005)
Tabla 1. Requistos tecnicos y de Gestión según la (NTC-ISO/IEC 17025: 2005)
22
REQUISITOS DE GESTIÓN REQUISITOS TÉCNICOS
Organización
Sistemas de Calidad
Control de documentos
Revisión de solicitudes, ofertas y
contratos.
Subcontratación de ensayos y
calibraciones
Compra de servicios y suministros.
Servicio al cliente
Quejas
Control de trabajos de ensayos y/o
calibraciones no conformes
Acciones correctivas
Acciones preventivas
Control de registros
Auditorias internas
Revisión por la alta gerencia.
Generalidades
Personal
Instalaciones y condiciones
ambientales
Métodos de ensayo y calibración.
Validación de métodos
Equipos
Trazabilidad de la medición
Muestreo
Manejo de elementos de ensayo y
calibración.
Aseguramiento de la calidad de los
resultados de ensayo y calibración
Reportes de resultado.
2.4 DOCUMENTACIÓN DEL SISTEMA DE CALIDAD
La documentación es base fundamental en un sistema de Gestión de Calidad y en
los principios de las Buenas Practicas del Laboratorio, es evidencia formal que
permite establecer pautas y parámetros que pueden ser ratificadas. En un
laboratorio, existen documentos de fuentes externas y elaborados internamente.
Los documentos pueden ser normas, instrucciones o recomendaciones, gráficos,
catálogos, informes, hojas de seguridad de reactivos. Fundamentales en la
23
documentación de un laboratorio son el manual de calidad y otros documentos
como procedimientos operativos, instructivos, especificaciones, formularios y
registros. (OPS, 2005).
2.4.1 Estructura de la Documentación
La documentación esta estructurada en tres niveles: El tercer nivel incluye la
recolección de planes, instructivos y registros que proporcionan detalles técnicos
sobrecojo hacer el trabajo y se registran los resultados, estos representan la base
fundamental de la documentación. El segundo nivel incluye la información
específica sobre los procedimientos de cada área; el primer nivel tiene la
documentación respectiva, la política de calidad y los objetivos, la estructura para
el levantamiento de cada procedimiento e instructivo de trabajo. La mayoría de las
normas del sistema de acreditación requieren que dispongan de pruebas
documentales cuando se realiza la inspección. (OPS, 2005).
Figura 1. Estructura de la Documentación para un sistema de Gestión de Calidad.
Que Hacer? Descripción del sistema, Políticas y objetivos
Información especificada sobre: Quién, Cómo, Cuándo, Dónde, Qué y porqué efectuar las actividades
Proporcionan detalles técnicos sobre como Hacer el trabajo y registrar los resultados
24
2.4.2 Manual de Calidad
El Manual de Calidad suministra una guía sobre políticas y procesos de un
sistema de calidad que permiten asegurar la eficacia y eficiencia de los productos
y servicios. El manual de calidad debe presentar la política de la calidad, describir
el sistema de calidad y mostrar la estructura de la documentación usada en él,
incluyendo o haciendo referencia a los documentos que lo soportan, incluso los
técnicos. En el manual se deben definir la estructura de la organización
(organigrama) con los roles y responsabilidades de la dirección técnica y del
responsable de calidad, incluyendo sus responsabilidades con el cumplimiento de
esta norma. (Ramirez, E. 2005)
El manual de calidad debe estar actualizado, bajo la autoridad y responsabilidad
de una persona designada como responsable de la calidad por la dirección del
laboratorio.
El personal debe ser instruido en el uso y aplicación del manual de calidad, y los
documentos que debe aplicar. (OPS, 2005).
2.4.2.1 Contenido del Manual de Calidad El contenido de un Manual de Calidad de un laboratorio debería incluir los
siguientes puntos, de acuerdo con el apartado 4.2 de la Norma ISO 17025:2005,
los estándares de la OMS y OPS.
a) Introducción. Se presenta el manual de calidad como el resumen de lo que es
un sistema de gestión de calidad de laboratorio, mostrando que elementos lo
componen y de que manera conduce a la Calidad.
b) Descripción del laboratorio. Se indica el nombre del laboratorio, su
identificación legal, tipo de laboratorio y principales actividades que se desarrolla.
25
Adicionalmente, se muestra la estructura funcional del laboratorio con su
respectivo organigrama donde se describe:
• Las responsabilidades de la Dirección.
• Las responsabilidades del Encargado del Área de Calidad y su relación con la
Dirección.
• Las responsabilidades del personal y sus capacitaciones cuando sea relevante.
c) Política de calidad. Se describe el conjunto de directrices, intenciones y
compromisos del laboratorio con respecto a la calidad. Se puede incluir la Misión,
la Visión y los objetivos de la Calidad. Anualmente esta política es revisada por la
Dirección para evaluar la necesidad de implementar cambios en los objetivos de
calidad como resultado de un proceso de mejoramiento continuo.
d) Capacitación del personal. Se muestra cómo se desarrollan los perfiles de
trabajo para cada función en el laboratorio y los programas, tanto de capacitación,
como de educación continuada.
e) Aseguramiento de la calidad. Se describe cómo se va a proporcionar la
confianza en que se cumplirán los requisitos de calidad.
f) Control de la Documentación. Se describe cómo se definen todos los
procedimientos de las etapas pre-analítica, analítica y post-analítica, siguiendo el
modelo establecido por la organización para la documentación y como se los
organiza en un Manual(es) de Procedimientos. Se define un sistema para la
elaboración, identificación, liberación, distribución, archivo y cambio de
documentos.
g) Registros, su retención y archivo. Se describe un sistema de identificación,
recolección, ordenamiento y almacenamiento seguro y confiable de todos los
registros técnicos y de calidad. Se adecua el tiempo de almacenamiento de los
registros de acuerdo con las exigencias de la Autoridad Sanitaria.
h) Instalaciones y condiciones ambientales. Se describen las medidas para
asegurar que los espacios y las condiciones ambientales son las adecuadas para la
26
actividad prevista y el mantenimiento de la integridad de los registros y la
protección de los usuarios, muestras y funcionamiento de equipos.
i) Gestión de instrumentos, reactivos y fungibles. Se hace referencia a: El
inventario con las especificaciones técnicas de los instrumentos, reactivos y
material no reciclable (fungible); al método para su adquisición y disponibilidad
de repuestos; a la capacitación del personal para su uso; y el programa de
calibración y mantenimiento.
j) Validación de los procedimientos de los exámenes y validación de los
resultados. Se hace referencia a la determinación de parámetros de los métodos,
como sensibilidad, especificidad, incertidumbre, exactitud, reproducibilidad,
límites de cuantificación.
k) Seguridad. Se hace referencia a las medidas de bioseguridad implementadas
para proteger a las personas, muestras y medio ambiente de acuerdo a normas
nacionales y/o internacionales, según la clase de riesgo involucrado en las
actividades del laboratorio en todas las etapas (pre-analítica, analítica y post-
analítica). Se describen brevemente las normas de higiene y protección. Se hace
referencia a los procedimientos para descontaminación de áreas por accidentes o
derrames, los cuales deben ser obligatoriamente registrados.
l) Aspectos medioambientales. Se muestra el compromiso de protección y
conservación del medio ambiente a través de procedimientos y programas
proactivos que evitan su deterioro.
m) Investigación y desarrollo. Si corresponde, se muestra en qué campos y con
qué idoneidad se hacen la investigación y desarrollo, a través de publicaciones o
boletines institucionales registrados y accesibles.
n) Lista de procedimientos analíticos.- Se muestra la lista de las técnicas o
protocolos a realizar y los procedimientos correspondientes.
o) Protocolos de solicitud, toma y manejo de muestras. Se hace referencia a los
procedimientos para la obtención, procesamiento, identificación y envío de las
muestras.
27
p) Validación de resultados. Se definen los procedimientos de verificación,
interpretación y validación de resultados por el personal autorizado, previo a la
emisión de los informes.
q) Control de la calidad. Se muestra la sistematización de control de calidad
(interno) y la participación en programas de evaluación externa de la calidad. Se
hace referencia a las acciones correctivas en caso de no conformidad.
r) Sistema de información del laboratorio. Se describen los procedimientos
necesarios para garantizar la confidencialidad y la integridad de la información.
s) Informe de resultado. Se describe el procedimiento de informe de resultados,
según un formato institucional que incluya los rangos biológicos.
t) Acciones correctivas y manejo de reclamos. Se describen los procedimientos
para la resolución de reclamos y el mantenimiento de sus registros, así como de
las investigaciones y las acciones correctivas tomadas.
u) Comunicación e interacción con usuarios, profesionales, laboratorios de
derivación y proveedores. Se hace referencia a los procedimientos para evaluar y
seleccionar proveedores y laboratorios de derivación, así como a los de las
encuestas de satisfacción de los usuarios.
v) Auditorias internas. Se muestra cómo se tienen formalmente planificadas y
organizadas las auditorias y cómo se realizan, tanto a sistemas administrativos
como técnicos.
y) Ética. Se muestra a través de un código de ética, cómo el laboratorio y la
comunidad. (OPS, 2005).
2.4.3. Procedimientos
Un procedimiento es una secuencia de pasos para ejecutar una tarea de rutina. Se
prescribe como se procedería en ciertas circunstancias para producir un resultado
deseado
28
Los procedimientos del sistema de calidad son un cierto tipo de procedimiento,
cumplen una política de calidad y regulan procesos que producen una salida de la
organización, cuya calidad es esencial para la empresa. (Lenis, S. 2007)
Existen varios tipos de prácticas documentadas:
Procedimientos de división: Que se aplican a más de una división de la compañía
y regulan actividades comunes.
Procedimientos de control, que controlan el trabajo sobre un producto a medida
que pasa entre departamentos o procesos. Deben contener como traspasar la
información de un departamento a otro y hacer referencia a los procedimientos de
operación que se aplican a cada tarea. (Lenis, S. 2007)
Procedimientos de operación, que prescriben como se realizan tareas específicas.
Subcategorías de estos procedimientos pueden incluir procedimientos de prueba,
de inspección, de instalación, etc. Estos deben hacer referencia a los estándares y
guías que se necesiten para llevar a cabo la tarea, documentar los resultados y
contener los formularios utilizados para registrar la información. (Lenis, S. 2007)
Los estándares que definen los criterios de aceptación para juzgar la calidad de
una actividad, un documento, un producto o un servicio.
Guías, que ayudan a la toma de decisiones y a la realización de actividades, deben
contener ejemplos, ilustraciones, indicaciones y avisos para ayudar al personal a
realizar su trabajo tan bien como sea posible(Lenis, S. 2007)
.
29
Instrucciones de trabajo, definen el trabajo requerido en términos de quien es el
que lo realiza, cuando se comienza y se completa, que estándar tiene que cumplir
y cualquier indicación que determine la calidad. (Lenis, S. 2007)
Los procedimientos normalizados para cada tipo de actividad deben ser
documentados en el manual de procedimientos del departamento involucrado.
Los procedimientos normalizados autorizados contribuyen a crear un sentido de
contabilizar los datos facilitando la supervisión y la auditoria. La responsabilidad
de la preparación, aprobación y publicación de los manuales de procedimientos
con respecto a los diferentes elementos de la norma ISO 9000 corresponde al
departamento o grupo involucrado. (Lenis, S. 2007)
2.4.3.1. Procedimientos Operativos Estándar
Los procedimientos operativos estándar (POEs) son instrucciones escritas para
diversas operaciones particulares o generales y aplicables a diferentes productos o
insumos. La realización de POE es requerida por las Buenas Prácticas de
Laboratorio y por la regulación bajo normas ISO 9000.
Se requiere que estos estén escritos y que sean seguidos fielmente por toda
persona envuelta en la operación correspondiente. Su propósito principal es
garantizar la uniformidad, reproducibilidad y consistencia de las características
del producto lote tras lote, empleado a empleado y turno a turno.
(Guarnizo,J.2005)
Los POES deben cumplir con ciertas características:
- Ser escritos en un idioma que los que lo van a ejecutar entiendan.
-Describir los pasos para realizar cada tarea en orden cronológico.
- Enumerar todos los materiales a utilizar.
30
- Evitar usar palabras ambiguas tales como: aproximadamente, varias, caliente o
frío, etc..
- Especificar temperatura, concentraciones, número de vueltas.
- Cumplir con todas las reglamentaciones (BPL, ISO, NTC etc).
- Describir claramente el uso de puntos decimales y reglas de redondeo.
- Evitar el uso de sinónimos y de la palabra etcétera.
- Escribir el POE usando oraciones cortas y con verbos en modo activo.
31
INICIO
Seleccionar redactores
Capacitar Redactores
Iniciar Redacción
Es un nuevo procediemieno? Revisar de acuerdo
con los requisitos y necesidades
Es necesario actualizar?
Es suficiente la documentación disponible
Listar las actividades necesarias y su secuencia
Elaborar diagrama de flujo Desarrollar el POE
Revizar con personal calificado y supervisores
Verificar pasos del POE Aplicar POE
Identificar documento Distribuir copias controladas de POE
Capacitar personal sobre POE
Evaluar la capacitación
Aplicar POE
Archivar copia original del POE
32
Figura 2. Estructura de un POEs (OPS, 2005)
2.4.3.2 Componentes de un POE
Tabla 2. Formato de un POEs (OPS, 2005). (Guarnido, J. 2005)
Objetivo/ proposito
Indicar el fin que se desea alcanzar con la redacción del procedimiento
Alcance/ Campo de aplicación
Señalar a que (equipo, materiales, documentos)y a quien afecta el POE
Desarrollo del Procedimiento
• Fundamento o principio: Marco o bases teórico prácticas que explican el procedimiento.
• Especificaciones de desempeño del procedimiento (Limite de
detección, especificidad analítica, incertidumbre de la medición). • Muestra requerida: Definir el tio de muestra y los requisitos que
esta debe cumplir. • Reactivos: Enumerar los reactivos necesarios y su calidad. • Materiales: Numerar los materiales necesarios • Instrucciones detalladas:
Indicar acciones en forma secuencial
Usar verbos en infinitivo o imperativo
Establecer que tareas se van a desarrollar y en que orden
Identificar el espacio físico y acondiciones ambientales
Establecer las precauciones de seguridad, bioseguridad y manejo del medio ambiente.
Definir posibles interferencias
Definir correctamente la forma de calculo de los
resultados.
Definir los intervalos de referencia, con los criterios de aceptación (Valores alerta).
Validación de los resultados.
Interpretación de los resultados.
33
2.4.3.3 Beneficios de los POES -Los procedimientos son la primera herramienta en el entrenamiento del nuevo
personal.
-Garantizan la realización de las tareas siempre de la misma forma.
-Sirven para evaluar al personal y conocer su desempeño.
-Al ser de revisión periódica, sirven para verificar su actualidad y como
reentrenamiento del personal con experiencia.
-Promueven la comunicación entre los distintos sectores de la empresa.
-Son útiles para el desarrollo de auditorias internas y externas. (OPS, 2005)
Informe y archivos de resultados.
Describir los cambios internos para cada etapa.
Calibración de Instrumental y mantenimiento de
equipos.
Formularios y Registros
Indicar los formularios requeridos para registrarlas actividades y los resultados de los ensayos. Identificar los formularios.
Referencias Mencionar los documentos y normas en las que se basa el procedimiento.
Anexos Utilizarlos para adjuntar diagramas de flujo y copias de formularios y otros documentos de apoyo.
Lista de distribución
Definir lista de áreas involucradas con su respectivo responsable al cual se le entregará copia del procedimiento.
Redactado por, Revisado por, Aprobado por.
Las personas que redactaron, revisaron y aprobaron el documento lo firmaran
Actualizaciones Todos los POEs, sus revisiones y actualizaciones, deben cumplir con el sistema de control de documentos y estar en el índice maestro, adicionalmente es conveniente que esten agrupados en un manual de procedimientos.
Fechas Hacer constar fechas de redacción ,revisión, aprobación ,vigencia y actualización
34
2.4.3.4 Requisitos para el manejo de los POEs -La distribución de POEs debe funcionar correctamente.
-Estar registrados adecuadamente.
-Guardar un juego completo de las versiones vigentes.
-Los POEs nuevos deben ser distribuidos tan rápido como sea posible, igual que
aquellos que sean nuevas versiones de otra ya existente.
-Tener disponibles suficientes manuales en las áreas de trabajo.
-Retirar las versiones anteriores de los POEs.
-Los POEs deben ser incluidos como parte del entrenamiento de normas GMP
(Good -Manufacture Practice).
-Validar su ejecución.
-Organización por áreas.
-No incluir varios temas diferentes en el mismo POE. (Guarnizo, J. 2005)
2.4.4 Instructivos
Por cada procedimiento se debe identificar si se requiere instrucción de trabajo. La
instrucción de trabajo es “información que explica en detalle el como se efectúa
una operación concreta”. Las modalidades comúnmente utilizadas son: listas de
verificación, flujogramas, tablas de decisión y ayudas visuales. Las instrucciones
de trabajo están en el tercer nivel, bajo el título de documentos de calidad, estas
cuando se requieran pueden referirse a los procedimientos e incluirse como anexo.
Las instrucciones deben redactarse en un lenguaje fácilmente comprensible para
los operadores del nivel mas bajo.
Una instrucción trasmite conocimientos, información o direcciones para el
propósito de realizar el trabajo. Los procedimientos también transmiten
conocimiento, información y direcciones, pero exponen como se realizan ciertas
35
tareas y especifican quien es el que la realiza, esta es la principal diferencia entre
estos tipos de documentos. (Lenis, S. 2007)
2.4.4.1 Estructura y formato
Se recomienda incluir el título y una única identificación. El nivel del detalle debe
adaptarse a las necesidades del personal de la organización y del trabajo y
métodos utilizados. Pueden estar incluidas en los procedimientos documentados o
hacerse referencia a ellos (Guarnizo, 2005).
2.4.4.2 Contenido
Describe solamente actividades críticas para su control. Se puede considerar el
propósito y el alcance del trabajo y los objetivos, y hacer referencia a los
procedimientos documentados pertinentes (Guarnizo, 2005).
2.4.4.3 Revisión, aprobación y modificación
La organización debe proporcionar clara evidencia de la revisión y aprobación de
las instrucciones de trabajo, su estado de revisión y fecha de modificación
(Guarnizo, 2005).
2.4.4.4 Identificación de los cambios
Cuando sea factible la naturaleza de los cambios debe identificarse en el
documento o en los anexos apropiados (Guarnizo, 2005).
2.4.5 Registros
Los registros técnicos son una acumulación de datos e información resultante de
la realización de los ensayos o calibraciones y que indican si se alcanza la calidad
36
o los parámetros especificados de los procesos (NTC-ISO-IEC 17025, 2005).
Muestra los resultados obtenidos o proporcionan evidencia que indica que se están
realizando las actividades establecidas en los procedimientos documentados e
instrucciones de trabajo. Deben indicar el cumplimiento de los requisitos del
sistema de gestión de la calidad y de los especificados para el producto (Guarnizo,
J. 2005)
2.4.5.1 Control de registros Los registros deben incluir la identidad del personal responsable del muestreo, de
la realización de cada ensayo o calibración y de la verificación de los resultados.
Las observaciones, los datos y los cálculos se deben registrar en el momento de
hacerlos y deben poder ser relacionados con la operación en cuestión. Cuando
ocurran errores en los registros, cada error debe ser tachado, no debe ser borrado,
hecho ilegible ni eliminado, y el valor correcto debe ser escrito al margen. Todas
estas alteraciones a los registros deben ser firmadas o visadas por la persona que
hace la corrección (NTC-ISO-IEC 17025, 2005).
2.4.6 Control de documentos
Según la NTC-ISO-IEC 17025 las ediciones autorizadas de los documentos se
deben encontrar disponibles en todos los lugares en donde se desempeñen
operaciones esenciales para el funcionamiento efectivo del laboratorio, estos
documentos deben ser revisados periódicamente y en caso de ser necesario
actualizados a fin de asegurar la continua adaptabilidad y cumplimiento con los
requisitos aplicables, a su vez los documentos sin validez u obsoletos deben ser
retirados prontamente de los puntos de uso.
Todos los documentos distribuidos entre el personal del laboratorio como parte de
un sistema de gestión deben ser revisados y aprobados, para su uso, por el
personal autorizado antes de su emisión. Se debe establecer una lista maestra o un
37
procedimiento equivalente de control de la documentación, identificando el estado
de revisión vigente y la distribución de los documentos del sistema de gestión, la
cual debe ser fácilmente accesible con el fin de evitar el uso de documentos no
válidos u obsoletos (NTC-ISO-IEC 17025, 2005).
Si el sistema del control de la documentación del laboratorio permite la enmienda
de documentos en forma manual hasta la nueva expedición de los documentos, se
deben definir los procedimientos y autoridades para tales enmiendas. Las
enmiendas deben ser claramente marcadas, firmadas y fechadas. Tan pronto como
sea práctico debe reemitirse formalmente un documento actualizado.
ISO 9001 determina que una organización que implante un sistema de calidad
debe “establecer y mantener al día procedimientos para controlar todos los
documentos y datos” relevantes para el sistema. Los documentos del sistema de
gestión generados por el laboratorio deben ser identificados unívocamente. Dicha
identificación debe incluir la fecha de emisión o una identificación de la revisión,
la numeración de las páginas, el número total de páginas o una marca que indique
el final del documento, y la o las personas autorizadas de emitirlo (NTC-ISO-IEC
17025, 2005). El objetivo del control de la documentación es asegurar que todos
los que realizan tareas conocen la existencia y disponibilidad de los documentos
que regulan dichas tareas.
Debe establecerse un procedimiento documentado que defina los controles
necesarios para:
-Aprobar los documentos en cuanto su adecuación antes de su emisión.
-Revisar y actualizar los documentos cuando sea necesario y aprobarlos
nuevamente.
-Asegurarse de que se identifican los cambios y el estado de revisión actual de los
documentos.
-Asegurarse de que las versiones pertinentes de los documentos aplicables se
encuentran disponibles en los puntos de uso.
38
-Asegurarse de que los documentos permanecen legibles y fácilmente
identificables.
-Asegurarse de que se identifican los documentos de origen externo y se controla
su distribución.
-Prevenir el uso no intencionado de documentos obsoletos, y aplicarles una
identificación adecuada en el caso de que se mantengan por cualquier razón.
El control de documentos debe iniciarse al tiempo de su redacción y se mantendrá
hasta que sean descartados. Los documentos que deben controlarse no se limitan a
las especificaciones que genera el departamento de diseño. Todos los documentos
que definen el producto, o que sean necesarios para el funcionamiento eficaz del
sistema de la calidad, deben incluirse dentro del sistema de control. (Guarnizo, J.
2005)
Tabla 3 . Situación de los documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J. 2005)
VIGENCIA El documento tiene pleno efecto. Se debe especificar desde cuándo.
REVISION Se incluye en este concepto la revisión periódica de los documentos (POE) para evaluar la validez del procedimiento, sin necesariamente traducirse en una modificación. En la medida en que se realizan mejoras a los procedimientos, los documentos deben ser actualizados.
SUSPENSIÓN El documento pierde vigencia momentáneamente por un motivo determinado. Se debe establecer y comunicar la fecha de suspension.
ANULACIÓN El documento es suprimido definitivamente del sistema.
ACTUALIZACIÓN,
MODIFICACIÓN
El documento sufre una modificación para hacerlo más apropiado.
39
Tabla 4 . Identificación de documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J. 2005)
TIPO MC Manual de Calidad (nivel 1). PC Proceso (nivel 2). PO Procedimiento operativo estándar (nivel 3). F Formulario (nivel 4).
ÁREA Define el área y puede expresarse con letras o números, por ejemplo: 1 o T Toma de muestra 2 o C Procesamiento analítico 5 o I Emisión de informe 3 o E Entrega de informe.
NÚMERO Identifica el número consecutivo / correlativo del documento o procedimiento. En los formularios, al número se agrega una letra (puede haber varios formularios para un mismo proceso).
VERSIÓN Se identifica con números que van precedidos por una barra.
2.5 BIOSEGURIDAD
La bioseguridad, se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a
mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes
biológicos, físicos o químicos, logrando la prevención de impactos nocivos,
asegurando que el desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten
contra la salud y seguridad del personal del laboratorio.
Adicionalmente debe entenderse como una doctrina de comportamiento
encaminada a lograr actitudes y conductas que disminuyan el riesgo del personal
del laboratorio de adquirir infecciones en el medio laboral. Compromete también
a todas aquellas personas que se encuentran en el ambiente asistencial, por lo que
las áreas, espacios o entornos asistenciales deben estar diseñados de tal forma que
faciliten la disminución o control de los riesgos inherentes a la actividad
propiamente dicha. (Dagmar, L.2004).
El concepto de bioseguridad surge a nivel internacional cuando se desarrolla la técnica
40
del DNA recombinante en 1972, y con ésta, las nuevas biotecnologías.
En 1975 se reunieron los 40 científicos de todo el mundo que trabajaban con el DNA
recombinante. De esta reunión proviene la primera guía de bioseguridad. Estas normas
tratan de minimizar los riesgos de estas nuevas tecnologías. (Dagmar, L.2004).
2.5.1 Principios de Bioseguridad La sociedad española de enfermedades infecciosas y microbiología clínica (2003)
define cuatro principios en bioseguridad:
A) Universalidad: Las medidas deben involucrar a todas las áreas del laboratorio,
el personal, pacientes, visitantes de todos los servicios, independientes o
dependientes. Todo el personal debe seguir las precauciones que se aclaran en un
manual de bioseguridad, de forma rutinaria para prevenir la exposición de la piel y
de las membranas mucosas, en todas las situaciones que puedan dar origen a
accidentes.
B) Uso de barreras: Comprende el concepto de evitar la exposición directa a
agentes biológicos y muestras orgánicas potencialmente contaminados o de
riesgo, mediante la utilización de materiales o barreras adecuadas que se
interpongan al contacto de los mismos, disminuyendo las consecuencias de
accidente.( Arias, J. 2005).
C) Medios de eliminación de material contaminado: Contiene el conjunto de
dispositivos y procedimientos adecuados a través de los cuales los materiales
utilizados en la atención de pacientes, toma de muestras y eliminación de muestras
biológicas son depositados y eliminados sin riesgo.
d)- Evaluación de riesgos
La evaluación de riesgos corresponde a un proceso de análisis de la probabilidad
que ocurran daños, heridas o infecciones en el laboratorio. La evaluación de los
riesgos debe ser efectuada por el personal de laboratorio que realiza los procesos
con los agentes de riesgo, el uso del equipamiento e insumos, los modelos y la
41
contención correspondiente. Una vez establecido, el nivel de riesgo debe ser
reevaluado y revisado permanentemente. La evaluación de riesgos estará
sistemáticamente asociada con el manejo de los mismos, con el objeto de formular
un plan de mitigación
Deben conocerse los tipos de accidentes (físicos, químicos o biológicos) que
pueden generarse en el laboratorio según los procedimientos que allí se realicen,
para analizar la probabilidad de que estos realmente ocurran. (OMS, 2005)
2.5.2 Niveles de Contención
El primer principio de Bioseguridad, es la contención. El término "contención"
se emplea para describir los métodos que hacen seguro el manejo de materiales
infecciosos en el laboratorio. El propósito de la contención es reducir al mínimo la
exposición del personal de los laboratorios, otras personas y el entorno a agentes
potencialmente peligrosos. (Arias, J. 2005)
2.5.2.1 Características de los Niveles de Contención
Se describen cuatro niveles de contención o de seguridad biológica, que consisten
en la combinación, en menor o mayor grado, de los tres elementos de seguridad
biológica descritos: técnica microbiológica, equipo de seguridad y diseño de la
instalación. Cada combinación está específicamente dirigida al tipo de
operaciones que se realizan, las vías de transmisión de los agentes infecciosos y la
función o actividad del laboratorio.
a) Nivel de contención 1:
Es el nivel de seguridad requerido para los agentes biológicos del grupo 1, es decir,
los que no producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad
conocida y estable a los antimicrobianos. Es el utilizado habitualmente en los
laboratorios de prácticas de universidades o centros docentes donde se emplean
42
cepas no patógenas. (Escherichia coli, B. subtilis, Naegleria sp, Saccharomyces
cerevisiae, etc.). (OMS, 2005.)
b) Nivel de contención 2 :
Es el obligado para agentes del grupo 2 como algunos que, perteneciendo a la
propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patología infecciosa
humana de gravedad moderada o limitada. Deben ser manipulados por personal
especializado (técnicos de laboratorio, especialistas en Microbiología) y son los
que con más frecuencia se estudian en el Laboratorio de Microbiología Clínica:
Staphylococcus, Salmonella, Toxoplasma, Hepatitis B , etc.(OMS.2005.)
c) Nivel de contención 3:
Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biológicos del grupo 3,
microorganismos que cursan con patología grave, de difícil y largo tratamiento,
que pueden causar secuelas y son capaces de producir la muerte. El mayor y más
frecuente peligro que entrañan éstos es la infección adquirida a través de aerosoles
y por fluidos biológicos. Por ello, las principales medidas a tomar en este caso son
la correcta manipulación y la utilización de cabinas de seguridad. En los
Laboratorios de Microbiología Clínica los ejemplos más típicos de este tipo de
microorganismos son M. tuberculosis, Brucella, Coxiella burneti, St. Louis virus,
etc. Sólo pueden ser procesados por personal calificado y en una zona con la
infraestructura recirculación de aire, con gradiente de presión, cabinas de
bioseguridad, etc. (OMS, 2005).
d) Nivel de contención 4:
Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha un agente
especialmente patógeno e infectocontagioso, exótico o no, que produce alta
mortalidad y para el que no existe tratamiento y/o es poco fiable. Normalmente
43
son microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Este nivel
también puede utilizarse para trabajar con animales de experimentación infectados
por microorganismos del grupo 4. (OMS, 2005).
2.5.3 Agentes Biológicos
Se entiende por agente biológico cualquier microorganismo, incluyendo los
genéticamente modificados, cultivo celular, animal o planta o producto de estos,
capaz de producir cualquier tipo de infección, alergia o toxicidad en humanos,
animales u otros seres vivos. (OMS; 2005)
2.5.3.1. Clasificación de los Microorganismos por Grupo de Riesgo Se clasifican los agentes biológicos en cuatro grupos:
- Agente biológico del grupo 1. Aquél que resulta poco probable que cause una
enfermedad en el hombre.
- Agente biológico del grupo 2.Aquél que puede causar una enfermedad en el
hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable
que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis tratamiento
eficaz.
- Agente biológico del grupo 3. Aquél que puede causar una enfermedad grave
en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que
se propague a la colectividad y existiendo frente a él generalmente profilaxis o
tratamiento eficaz.
- Agente biológico del grupo 4. Aquél que causando una enfermedad grave en el
hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades
de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente frente a él
profilaxis o tratamiento eficaz. (Weng, Z. 2005).
44
2.5.4 Normas Generales de seguridad biológica en el laboratorio La peligrosidad de un agente está directamente relacionada con el tipo de
manipulación a la que es sometido. Por ello es básico conocer:
1. Los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio.
2. La metodología de trabajo del laboratorio.
3. El equipamiento del laboratorio.
4. Las medidas a tomar en caso de emergencia.
5. Las leyes relacionadas con la seguridad Biológica.
6. Respetar y verificar el cumplimiento de todo lo anterior.
Para que se produzca un accidente por agente biológico deben ocurrir básicamente
cuatro elementos. Un huésped susceptible, un agente infeccioso, una
concentración suficiente de éste y una ruta de transmisión apropiada. De todos
ellos, el que mejor se puede controlar en el laboratorio es la ruta de transmisión
(Arias, J. 2005).
2.5.5 Barreras Primarias
Tal como su nombre lo indica, las llamadas barreras primarias son la primera línea
de defensa cuando se manipulan materiales biológicos que puedan contener
agentes patógenos. El ejemplo más claro de contención primaria lo constituyen las
cabinas de seguridad biológica.
Cuando no es posible el aislamiento del foco de contaminación, la actuación va
encaminada a la protección del trabajador mediante el empleo de prendas de
protección personal. En la mayoría de las ocasiones se practica la combinación de
ambos tipos de medidas, tal como puede ser el empleo de la cabina junto con
guantes y mascarilla. Todo ello sin olvidar que la máxima contención del riesgo
biológico sólo se da cuando, además, se emplean las técnicas de trabajo correctas
45
unidas a un diseño del laboratorio acorde con el nivel de riesgo. (Chavez, E.
2006).
Las barreras de contención primaras son:
-Técnicas de laboratorio e higiene personal
-Equipos de protección personal (EPP)
-Inmunización
-Limpieza, desinfección y esterilización
2.5.5.1 Técnicas de Laboratorio Estándar
Las técnicas de laboratorio estándar se refieren al seguimiento estricto de las
buenas prácticas de laboratorio y técnicas de laboratorio. Como parte de estas
prácticas esta el desarrollo en cada laboratorio de procedimientos escritos de
rutina, en el que se especifiquen los pasos para minimizar riesgos biológicos,
químicos y físicos.(OMS, 2005)
2.5.5.2 Equipos y Protección Personal Redefine el equipo de protección personal como cualquier equipo destinado a ser
llevado por el trabajador para que le proteja de uno o varios riesgos que puedan
amenazar su seguridad o su salud, así como cualquier complemento o accesorio
destinados a tal fin. (OMS, 2005)
2.5.5.2.1 Cabinas de Seguridad Biológicas Son cámaras de circulación forzada que, según sus especificaciones y diseño,
proporcionan diferentes niveles de protección. Son fundamentales en un
Laboratorio de Microbiología y se clasifican según el nivel y tipo de protección.
Las cabinas de Seguridad Biológica son recintos ventilados diseñados para limitar
al máximo el riesgo del personal de laboratorio expuesto a agentes infecciosos.
Las CSB disponen de dos sistemas que impiden la salida de contaminación: las
barreras de aire y los filtros. (Chavez, E. 2006).
46
Las CSB se dividen en tres categorías: Clase I, Clase II y Clase III.
- Cabinas de Clase I. Son cámaras cerradas con una abertura al frente para
permitir el acceso de los brazos del operador. El aire penetra por este frontal,
atraviesa la zona de trabajo y todo él sale al exterior a través de un filtro HEPA.
La velocidad del flujo de aire es de unos 0,40 m/s (75 pies/m). Son apropiadas
para manipular agentes biológicos de los grupos 1, 2 ó 3. La mayor desventaja que
presentan es que no proporcionan protección al material con el que se trabaja, no
evitando por lo tanto que éste se pueda contaminar. (Chavez, E. 2006).
- Cabinas de Clase II. Se diferencian principalmente de las de clase I en que,
además de al operario y su entorno, ofrecen protección al producto frente a la
contaminación. La superficie de trabajo está bañada por aire limpio que ha
atravesado un filtro HEPA. La salida del aire se produce a través de otro filtro
HEPA. Son equipos válidos para el manejo de agentes biológicos de los grupos 1,
2 ó 3. Existen varios tipos de cabinas de clase II, A, B1, B2 y B3, según sus
características de construcción, flujo de aire y sistema de extracción.(Chavez,E.
2006).
- Cabinas de clase III. Constituyen el máximo nivel de seguridad. Son recintos
herméticos en presión negativa y, por ello, su interior está completamente aislado
del entorno.(Chavez, E. 2006).
2.5.5.3 Inmunización Inmunización es el proceso que permite generar resistencia a una enfermedad
infecciosa y se divide en Inmunización activa e inmunización pasiva.
La inmunización activa consiste en la producción de anticuerpos como respuesta
a la administración de productos biológicos de origen heterólogo (vacuna,
antitoxina), en cuyo caso es artificial. La natural se adquiere por padecimiento de
la enfermedad.
47
La inmunización pasiva, es la transferencia de la inmunidad temporal mediante la
administración de anticuerpos o antitoxinas preformadas, en cuyo caso es artificial.
La natural es la transferencia de anticuerpos maternos al feto. (OMS, 2005)
2.5.5.4 Limpieza, Desinfección y Esterilización Limpieza: Es el conjunto de operaciones que permite eliminar la suciedad visible
o microscópica de una superficie. Una limpieza regular periódica tiene un efecto
además higienizante ya que reduce la presencia de microorganismos patógenos
disminuyendo a su vez la necesidad de desinfectar. Deben utilizarse materiales
que sean químicamente compatibles con los germicidas que vayan a utilizarse
después. Es muy frecuente utilizar el mismo germicida químico para la limpieza
previa y la desinfección. (Delgado, E.2006)
Desinfección: Es un proceso físico o químico que destruye la mayoría de
microorganismos patógenos y no patógenos, pero rara vez elimina las esporas. Por
esta razón a los objetos que se van a desinfectar se les debe evaluar previamente el
nivel de desinfección que requiere, para lograr destruir los microorganismos que
contaminan los elementos. La desinfección puede hacerse por contacto directo,
aspersión. (Delgado, E.2006)
Esterilización: Es una operación que comprende todos los procedimientos físicos,
químicos o mecánicos, que se emplean para destruir, inactivar agentes biológicos
en general y patógenos en particular. La esterilización por calor es el agente físico
más utilizado para la descontaminación de patógenos. Existen dos tipos de
esterilización: por calor seco y por calor húmedo. El calor seco, que no es en
absoluto corrosivo, se utiliza para tratar muchos objetos de laboratorio que pueden
soportar temperaturas de 160 °C o más durante dos a cuatro horas. La combustión
o incineración es también una forma de calor seco. El calor húmedo es
especialmente eficaz cuando se utiliza en autoclave. (Delgado, E.2006)
48
2.5.6 Barreras Secundarias
La magnitud de las barreras secundarias dependerá del tipo de agente infeccioso
que se manipule en el laboratorio. Dentro de ellas se incluyen la separación de las
zonas donde tiene acceso el público, la disponibilidad de sistemas de
descontaminación (autoclaves), el filtrado del aire de salida al exterior, el flujo de
aire direccional, etc.
El diseño y construcción de un laboratorio (lo que en Seguridad Biológica se
conoce como “barreras secundarias”) contribuye a la protección del propio
personal del laboratorio, proporciona una barrera para proteger a las personas que
se localizan fuera del laboratorio. (NTC- ISO/IEC 17025). Adicionalmente son
requisitos establecidos por las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL).
Localización. Es aconsejable que el Laboratorio de Microbiología localice fuera
del tráfico y que no sea un lugar de paso para otras dependencias en las que no
exista restricción para su acceso (cafeterías, almacenes, bibliotecas,
aparcamientos). (NTC- ISO/IEC 17025).
Acceso de personal. En general, debe ser restringido a las personas formadas para
el manejo de agentes infecciosos. Para un nivel 2 de contención es suficiente que
la puerta del laboratorio pueda cerrarse con llave, mientras que para el nivel 3 la
puerta ha de ser doble además de recomendarse un cambio de ropa. (NTC-
ISO/IEC 17025).
Lavado. Debe existir uno en el mismo laboratorio. Estará dotado de grifos que
puedan accionarse sin utilizar las manos y situado preferiblemente cerca de la
puerta de salida.
Lava ojos. Se recomienda que exista uno dentro del laboratorio como equipo de
emergencia.
49
Superficies interiores. Los suelos, paredes y techos deben ser impermeables al
agua y resistentes a diferentes productos químicos, de forma que permitan una
limpieza a fondo y una posterior descontaminación. En el nivel 3 de contención,
además, todas las penetraciones deben ir selladas.
Superficies de trabajo. Las mesas y bancos de trabajo deben ser resistentes al
calor moderado, a disolventes orgánicos, ácidos y álcalis.
Señalización. Siempre que el trabajo esté en marcha, debe colocarse en la puerta
del laboratorio la señal reglamentaria de peligro biológico.
Presión negativa. Se recomienda que el laboratorio se mantenga a una presión
negativa con respecto al exterior del mismo, es decir, con respecto a los pasillos u
otras zonas del edificio, de manera que exista un flujo de aire desde las zonas
menos contaminadas hacia las de mayor riesgo de contaminación. Las puertas y
ventanas del laboratorio han de permanecer cerradas si se quiere mantener esa
presión negativa. No es aconsejable la recirculación de aire.
Filtros HEPA. Las normas internacionales que rigen a las cabinas a nivel
mundial, en el caso de las cabinas de flujo laminar, se basa en las
recomendaciones para el diseño y fabricación por la norma Federal Standard 209E
(ISO-14644). (Arias, J.2005)
Para las cabinas de Seguridad Biológica, la fabricación y el diseño debe cumplir
con las recomendaciones de la norma internacional ANSI/NSF Standard 49.
En ambos casos, y de acuerdo con las normas mencionadas, lo principal es que
estos equipos provean clase 100 para la protección al producto, y esto se logra con
un filtro HEPA con eficiencia del 99.99% sobre 0,3 micrones, no requiriendo otro
tipo de filtración. Recuerde que la norma exige clase 100 y ésta se consigue con
un filtro HEPA, sin importar la cantidad de tiempo de trabajo en el equipo o la
toxicidad o riesgo biológico, ya que la filtración HEPA es la recomendada por la
norma y ésta provee la clase 100 requerida.
50
Las cabinas de flujo laminar deben tener un filtro HEPA del 99.99% de eficiencia
sobre 0,3 micrones, y un prefiltro de alta eficiencia, sintético.
Las cabinas de seguridad Biológica, Clase II Tipo A2, tienen dos (2) filtros HEPA
del 99.99% de eficiencia sobre 0.3 micrones. ( Dagmar, L. 2004).
Todos los filtros HEPA deben controlarse y certificarse una vez al año. Sus fundas
están diseñadas para permitir descontaminar el filtro in situ antes de quitarlo.
También se podrá retirar el filtro colocándolo en un contenedor sellado hermético
a los gases para su futura descontaminación o su destrucción mediante
incineración. (OMS 2005)
2.5.7 Gestión de residuos Sólidos
2.5.7.1 Generalidades
La gestión de residuos debe ser considerada como una parte muy importante de la
seguridad en el Laboratorio de Microbiología. Muchos de los desechos que se
generan pueden estar contaminados por microorganismos o contener sustancias
químicas tóxicasy peligrosas. En menor medida, el personal del laboratorio puede
estar expuesto a los efectos de las radiaciones ionizantes.
Los casos de infecciones o intoxicaciones en el laboratorio son conocidos desde
antes, lo que hace obligada la adopción de medidas de protección para la persona
que trabaja en este ámbito. La protección debe ampliarse con prácticas tendentes a
preservar la salud de los compañeros de trabajo. Además, aunque la visión que
aquí se pretende dar está sobre todo encaminada a la protección del personal de
los laboratorios, no debemos olvidar que las actividades que en ellos se realizan
pueden afectar a la salud comunitaria.
La mejor manera de racionalizar los residuos es mediante una gestión integrada
cuyos pilares básicos son la minimización, la segregación y la eliminación
51
controlada (disposición). El personal del laboratorio debe ser consciente de que la
puesta en marcha de normas de buena práctica en la gestión de los residuos
repercute poderosamente sobre su salud y la de los que lo rodean, a la vez que
contribuye a la reducción de costos. (Decreto 2676 de 2000).
2.5.7.2 Clasificación de los Residuos según su peligrosidad
Según el Decreto 2676 de 2002 expedido por el Ministerio del Medio ambiente y
Ministerio de Salud, los residuos se clasifican en:
Figura 3. Clasificación de los Residuos según su peligrosidad
2.5.7.2.1 Residuos no peligrosos:
Son aquellos producidos por el generador en cualquier lugar y en desarrollo de su
actividad, que no presentan ningún riesgo para la salud humano y/o el medio
ambiente. . (Decreto 2676 de 2000).
52
Cualquier residuo no peligroso sobre el que se presuma el haber sido mezclado
con residuos peligrosos debe ser tratado como tal.
Los residuos no peligrosos se clasifican en:
- Biodegradables: Son aquellos restos químicos o naturales que se descomponen
fácilmente en el ambiente. En estos restos se encuentran los vegetales, residuos
alimenticios, papeles no aptos para reciclaje, jabones y detergentes biodegradables,
madera y otros residuos que puedan ser transformados fácilmente en materia
orgánica.
- Reciclables: Son aquellos que no se descomponen fácilmente y pueden volver a
ser utilizados en procesos productivos como materia prima. Entre éstos se
encuentran: papel, plástico, chatarra, telas y radiografías.
- Inertes: Son aquellos que no permiten su descomposición, ni su transformación
en materia prima y su degradación natural requiere de grandes períodos de tiempo.
Entre éstos se encuentran: el icopor, papel carbón y los plásticos.
-. Ordinarios o comunes: Son aquellos generados en el desempeño normal de las
actividades. Estos restos se producen en oficinas, pasillos, áreas comunes,
cafeterías y en general en todos los sitios del establecimiento del generador. .
(Decreto 2676 de 2000).
2.5.7.2.2 Residuos peligrosos
Son aquellos residuos producidos por el generador con alguna de las siguientes
características: infecciosas, combustibles, inflamables, explosivas, reactivas,
radioactivas, volátiles, corrosivas y/o tóxicas, que pueden causar daño a la salud
humana y/o al medio ambiente. Así mismo se consideran peligrosos los envases,
empaques y embalajes que hayan estado en contacto con ellos. Se clasifican en:
- Residuos Infecciosos o de Riesgo Biológico: Son aquellos que contienen
microorganismos tales como bacterias, parásitos, virus, hongos, virus oncogénicos
53
y recombinantes como sus toxinas, con el suficiente grado de virulencia y
concentración que pueden producir una enfermedad infecciosa en huéspedes
susceptibles. Cualquier residuo hospitalario y similar que haya estado en contacto
con residuos infecciosos o genere dudas en su clasificación, por posible
exposición con residuos infecciosos, debe ser tratado como tal. . (Decreto 2676 de
2000).
Los residuos infecciosos o de riesgo biológico se clasifican en:
Biosanitarios: Son todos aquellos elementos o instrumentos utilizados durante la
ejecución de los procedimientos asistenciales que tienen contacto con materia
orgánica, sangre o fluidos corporales del paciente tales como: gasas, apósitos,
aplicadores, algodones, drenes, vendajes, mechas, guantes, bolsas para
transfusiones sanguíneas, catéteres, sondas, material de laboratorio como tubos
capilares, de ensayo, láminas porta objetos y laminillas cubre objetos, sistemas
cerrados y sellados de drenajes y ropas desechables o cualquier otro elemento
desechable que la tecnología médica introduzca para los fines previstos en el
presente numeral.
- Anatomopatológicos: Son aquellos provenientes de restos humanos, muestras
para análisis, incluyendo biopsias, tejidos orgánicos amputados, partes y fluidos
corporales, que se remueven durante cirugías, necropsias, u otros.
- Cortopunzantes: Son aquellos que por sus características punzantes o cortantes
pueden originar un accidente percutáneo infeccioso. Dentro de éstos se
encuentran: limas, lancetas, cuchillas, agujas, restos de ampolletas, pipetas,
láminas de bisturí o vidrio y cualquier otro elemento que por sus características
cortopunzantes pueda lesionar y ocasionar un accidente infeccioso.
-. Animales: Son aquellos provenientes de animales de experimentación,
inoculados con microorganismos patógenos y/o los provenientes de
animalesportadores de enfermedades infectocontagiosas, o cualquier elemento o
sustancia que haya estado en contacto con éstos. . (Decreto 2676 de 2000).
54
Residuos químicos: Son los restos de sustancias químicas y sus empaques ó
cualquier otro residuo contaminado con éstos, los cuales, dependiendo de su
concentración y tiempo de exposición pueden causar la muerte, lesiones graves o
efectos adversos a la salud y al medio ambiente.
Fármacos parcialmente consumidos, vencidos y/o deteriorados: Son aquellos
medicamentos vencidos, deteriorados y/o excedentes de las sustancias que han
sido empleadas en cualquier tipo de procedimiento.
Citotóxicos: Son los excedentes de fármacos provenientes de tratamientos
oncológicos y elementos utilizados en su aplicación tales como: jeringas, guantes,
frascos, batas, bolsas de papel absorbente y demás material usado en la aplicación
del fármaco.
Metales Pesados: Son cualquier objeto, elemento o restos de éstos en desuso,
contaminados o que contengan metales pesados como: Plomo, cromo, cadmio,
antimonio, bario, níquel, estaño, vanadio, zinc, mercurio.
Reactivos: Son aquellos que por sí solos y en condiciones normales, al mezclarse
o al entrar en contacto con otros elementos, compuestos, sustancias o residuos,
generan gases, vapores, humos tóxicos, explosión o reaccionan térmicamente,
colocando en riesgo la salud humana o el medio ambiente.
Contenedores Presurizados: Son los empaques presurizados de gases anestésicos,
óxidos de etileno y otros que tengan esta presentación.
Aceites Usados: Son aquellos con base mineral o sintética que se han convertido o
tornado inadecuados para el uso asignado o previsto inicialmente. . (Decreto 2676
de 2000).
Residuos Radiactivos: Son las sustancias emisoras de energía predecible y
continua en forma alfa, beta o de fotones, cuya interacción con la materia, puede
dar lugar a la emisión de rayos x y neutron. . (Decreto 2676 de 2000).
55
2.5.7.3 Gestión de Residuos
Definición
De una forma conceptual, podemos considerar que un residuo infeccioso es todo
aquel material capaz de producir una enfermedad infecciosa. Sin embargo, a
diferencia de los residuos químicos y radiactivos, los desechos infecciosos y sus
riesgos asociados no pueden ser identificados de una forma objetiva. La
posibilidad de contraer infecciones en el laboratorio a través de los cultivos
microbiológicos desechados o tras una punción o herida accidental es algo bien
conocido. No ocurre lo mismo a la hora de evaluar el riesgo que las actividades
del laboratorio puedan tener sobre la salud de la comunidad. (Decreto 2676 de
2000).
Manual de Procedimientos para la Gestión Integral de Residuos
Hospitalarios y Similares –MPGIRH
Es el documento expedido por los Ministerios del Medio Ambiente y Salud,
mediante el cual se establecen los procedimientos, procesos, actividades y
estándares de microorganismos que deben adoptarse y realizarse en los
componentes interno y externo de la gestión de los residuos provenientes del
generador. . (Decreto 2676 de 2000).
Plan de Gestión Integral de Residuos Hospitalarios y Similares PGIRH:
Es el documento diseñado por los generadores, los prestadores del servicio de
desactivación y especial de aseo, el cual contiene de una manera organizada y
coherente las actividades necesarias que garanticen la Gestión Integral de los
Residuos Hospitalarios y Similares, de acuerdo con los lineamientos del presente
manual. . (Decreto 2676 de 2000).
56
Todo Laboratorio de Microbiología debería elaborar un manual o protocolo para
la gestión de estos residuos, siguiendo las directrices generales contenidas en el
Plan de Residuos de cada institución. Esta recomendación puede ser norma
obligada en el caso de que el laboratorio pretenda certificarse o acreditarse. Entre
los diferentes aspectos que debe contener dicho manual se pueden citar los
siguientes:
· Estrategias de minimización de los residuos, incluyendo la reducción en origen.
· Segregación de los residuos infecciosos de los no infecciosos.
· Identificación y tipificación de los residuos infecciosos y su riesgo relativo.
Algunas Comunidades Autónomas disponen de reglamentaciones que pueden ser
orientadas.
· Normas de señalización, rotulación, almacenamiento y transporte.
· Plan de formación de todas las personas expuestas a estos residuos.
· Normas de actuación en caso de vertidos o roturas accidentales.
· Plan de contingencia ante el fallo de las medidas de contención habituales.
(Decreto 2676 de 2000)..
2.5.7 .4 Gestión de Residuos Químicos
Al igual que con los residuos infecciosos, se recomienda abiertamente la
elaboración de manuales, procedimientos o protocolos destinados a la gestión de
los residuos químicos. Deberán ser acordes y formar parte del Plan de Gestión de
Residuos de cada institución. Antes de su elaboración, debe hacerse una auditoria
interna del laboratorio para identificar todos aquellos residuos peligrosos que sean
susceptibles de atención. A modo de ejemplo, algunos de los aspectos a considerar
en el manual podrían ser:
- Enumeración de los residuos químicos peligrosos, resultado de la encuesta
previa.
- Descripción individualizada de su peligrosidad.
57
- Métodos para reducir su producción.
- Sistemas de eliminación controlada.
- Normas de actuación en situaciones accidentales.
- Plan de formación del personal. . (Decreto 2676 de 2000).
2.5.7.4.1 Residuos Químicos Peligrosos y su Tratamiento
El Laboratorio de Microbiología no es un generador de grandes cantidades de
residuos químicos, salvo casos concretos, aunque algunos de ellos pueden ser
nocivos y peligrosos. En otras ocasiones el peligro viene por situaciones
accidentales. Se recomienda disponer en la Estación de Seguridad de material
absorbente inerte específico para productos químicos.
En general, el tratamiento de estos residuos por parte del propio laboratorio no
suele ser aplicable por razones prácticas, siendo materia de especialistas
(gestores). En ocasiones forman parte de reactivos comerciales, por lo que deben
leerse con atención los prospectos y las fichas de seguridad respectivas. Las más
de las veces pueden eliminarse después de un sencillo tratamiento en el propio
laboratorio. Cuando no es posible, debe consultarse a las autoridades locales para
su vertido controlado. Seguidamente, exponemos algunos ejemplos que pueden
plantearse en el Laboratorio de Microbiología (Arias, J. 2005).
Ácidos inorgánicos
Salvo roturas accidentales, no suele ser frecuente tener que eliminar ácidos
concentrados (HC1, HNO3, H2SO4, etc.), aunque sí soluciones diluidas. Como
norma aproximada, no deben eliminarse directamente aquellas soluciones cuya
concentración sea mayor de 1N. Los ácidos más concentrados se diluyen con agua
al 1:5 (atención con el ácido sulfúrico), se neutralizan a pH 6,8 con soluciones de
hidróxido sódico, se vuelven a diluir al 1:10 en agua y ya pueden eliminarse por
los desagües. Las soluciones más diluidas se neutralizan con sosa, se diluyen con
agua y se eliminan.(Arias, J. 2005).
58
Bases inorgánicas, sales básicas y disoluciones básicas
Rige un procedimiento paralelo al de los ácidos. Las bases y sales básicas se
neutralizan con ácido sulfúrico diluido. Si son muy concentradas, se diluyen
previamente con agua al 1:5. Una vez neutralizadas se vuelven a diluir con agua
(1:10) y se eliminan directamente.
Fenoles
El fenol y sus derivados son irritantes y tóxicos. No deben eliminarse a través de
los desagües, ni siquiera diluidos. Los procedimientos de destrucción química
están fuera de las posibilidades de los laboratorios. Lo más aconsejable es
separarlos en recipientes específicos y transferirlos a un gestor autorizado de
residuos.(Arias, J. 2005).
Azida sódica
Está presente en muchos reactivos comerciales como conservante. Nunca debe
eliminarse directamente por desagües de plomo pues se forman derivados
altamente explosivos. Además, la azida sódica es altamente tóxica y un poderoso
agente mutágeno. Es conveniente contactar con las autoridades locales o gestores
autorizados para recabar normas específicas, pues la destrucción química con
nitrito sódico no resulta práctica en los laboratorios diagnósticos.
Aldehídos, cetonas y disolventes orgánicos
El residuo más importante dentro de este grupo que puede ser generado en el
laboratorio de microbiología es el formaldehído. No debe ser eliminado
directamente por los desagües. Conviene almacenarlo en recipientes seguros para
luego ser eliminado de forma controlada. La destrucción con permanganato
59
potásico es compleja. La eliminación controlada también es aconsejable para los
diversos disolventes orgánicos (acetona, cloroformo, xileno y otros derivados
bencénicos, etc.) utilizados en el Laboratorio de Microbiología.
Bromuro de etidio
Es un poderoso mutágeno de efecto acumulativo utilizado en técnicas de biología
molecular. Deben seguirse de forma estricta los procedimientos de manipulación
que eviten el contacto del usuario con esta sustancia (guantes, etc.), así como la
exposición del resto de trabajadores del laboratorio. Los geles teñidos con
bromuro de etidio no deben eliminarse como una basura convencional, sino a
través de los sistemas de eliminación de mutágenos y citostáticos propios de cada
institución. Los tampones de electroforesis que lo contienen no deben eliminarse
por los desagües, sino que deben tratarse con carbón activo (100 mg por cada 100
ml de solución), filtrar la suspensión formada a través de un filtro de papel y
depositar el conjunto en el cubo de eliminación de citostáticos. Las superficies
pueden descontaminarse aplicando una papilla de carbón activo: dejarla actuar,
retirarla y depositar los restos en el cubo de eliminación de citostáticos.
Colorantes utilizados en las tinciones Gram, Giemsa, Papanicolau y similares
No deben ser eliminados directamente por los desagües. Se recomienda efectuar
las tinciones en cubetas que drenen sobre botellas o bidones y entregarlos a un
gestor de residuos autorizado.
Tinción de auramina
Cabe aplicar las mismas recomendaciones que con las otras tinciones, si bien aquí
la recomendación es más rigurosa.
Naranja de acridina
También es un mutágeno. Es recomendable almacenar los restos en recipientes
adecuados y eliminarlos a través de un gestor autorizado.(Arias, J, 2005).
Metales pesados, mercurio y compuestos órganomercuriales
60
Se incluyen dentro de este grupo las pilas y elementos afines, para los que ya
existen planes locales de recogida controlada. Por otra parte, es difícil que se
generen en el laboratorio otros residuos que contengan estos metales, pero hay que
recalcar que nunca deben eliminarse a través de los sistemas de desagüe. La rotura
de termómetros y manómetros puede ser una causa de exposición al mercurio. Se
recomienda recoger los restos más visibles y depositarlos en un recipiente cerrado.
Los menos visibles pueden recogerse con ayuda de polvo absorbente o azufre y
guardar el conjunto en otro envase. Entre los derivados organomercuriales que
podemos encontrar en el Laboratorio de Microbiología destaca el mertiolato. Los
residuos deben ser almacenados y eliminados de forma controlada.(OPS, 2005)
Residuos Reactivos
No es necesario insistir en sus peligros. En los Laboratorios de Microbiología se
generan residuos radiactivos de moderada o baja intensidad, y cada vez hay mayor
tendencia a sustituir las técnicas radiométricas por métodos alternativos. La
eliminación debe hacerse de acuerdo con el plan específico de cada institución. La
recolección y gestión de los residuos radiactivos es competencia exclusiva del
laboratorio.
2.5.7.4.2 Recomendaciones para la Manipulación de Residuos Químicos
La mejor prevención es la educación. El laboratorio deberá contar con manuales o
protocolos de gestión de los residuos biológicos y químicos .Dichos documentos
deberán contar con normas específicas de actuación en caso de accidentes y
establecer un plan de formación del personal.
Es obligado que todos los trabajadores del laboratorio conozcan y entiendan su
contenido. El laboratorio debería entregar un ejemplar a cada nuevo trabajador en
el momento de su incorporación. (OMS, 2005).
Los recipientes para desechar los residuos de riesgo o específicos (grupos III y IV)
en el área de trabajo deben ser rígidos, impermeables, resistentes a ácidos y
61
álcalis, de cierre hermético para ser incinerados. Así está ya establecido en la
reglamentación de algunas Comunidades Autónomas. Los residuos sanitarios que
genera el laboratorio deberán identificarse y segregarse en concordancia con las
normas generales del Plan de Residuos de cada centro, con especial atención a los
residuos grupos III y IV. El almacenamiento y transporte deberán hacerse en
condiciones seguras (OMS, 2005).
Deberán existir zonas acotadas para su almacenamiento intermedio, específicas
para esta función si los residuos son de riesgo (grupos III y IV).
El tiempo de almacenamiento en el laboratorio (almacenamiento intermedio) no
debería superar las 24 h. El tiempo se cuenta una vez el recipiente se ha llenado y
cerrado. . (Decreto 2676 de 2000).
Los recipientes con residuos nunca se apilarán o se colocarán en zonas elevadas,
tanto durante su almacenamiento intermedio como durante el transporte. Los
residuos que puedan originar tóxicos volátiles se almacenarán en un área bien
ventilada. (OMS, 2005). . (Decreto 2676 de 2000).
Deberá evitarse la proximidad de los residuos inflamables a cualquier fuente de
calor. Si, además, son volátiles, se almacenarán en una habitación bien ventilada.
El transporte fuera del laboratorio debería estar encomendado a personas con
formación específica y con los medios adecuados, por lo general dentro del
contexto de la gestión general de residuos de cada centro sanitario.
Para los residuos no específicos se utilizarán bolsas diferenciadas de colores. Si
los residuos son punzantes o cortantes deberán utilizarse recipientes rígidos
resistentes a la perforación cuyo volumen no supere los 2 L. (OMS, 2005). .
(Decreto 2676 de 2000).
Los residuos de las clases III y IV se transportan en los propios recipientes en los
que se depositan. No se recomiendan recipientes de un volumen superior a los
60L. El transporte puede efectuarse en carros específicamente destinados a tal fin.
No se transportarán a la vez residuos de riesgo junto con residuos no específicos.
Si los recipientes son los adecuados y se manipulan correctamente, no es
62
necesario establecer circuitos especiales, aunque muchas veces sea recomendable
por razones estéticas. (OMS, 2005). . (Decreto 2676 de 2000).
Deberá evitarse originar aerosoles durante el transporte de los residuos biológicos,
muy en especial de aquellos que contengan patógenos cuya vía de transmisión sea
la aérea. Los recipientes que los contengan se manipularán sin hacer movimientos
bruscos. Como resulta obvio, no es apropiada la utilización de bajantes para el
transporte de los residuos de riesgo o específicos. (OMS, 2005). . (Decreto 2676
de 2000).
2.6 MICROORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA ESPECIALIZADA
2.6.1 Helicobacter pilori
H. pylori es una bacteria Gram negativa de forma espiral, de alrededor de 3
micras de largo con un diámetro aproximado de unas 0,5 micras. Tiene unos 4–6
flagelos. Es microaerófila, es decir, requiere oxígeno pero a más bajas
concentraciones de las encontradas en la atmósfera. Usa hidrógeno y
metanogénesis como fuente de energía. Además es oxidasa y catalasa positiva.
(López,M. 2004)
Es una bacteria que infecta el mucus del epitelio estomacal humano. Muchas
úlceras y algunos tipos de gastritis son debidas a infecciones por H. pylori. En
muchos casos, los sujetos infectados nunca llegan a desarrollar ningún tipo de
síntoma. Esta bacteria vive exclusivamente en el estómago humano, siendo el
único organismo conocido que puede subsistir en un ambiente tan
extremadamente ácido. Es una bacteria espiral (de esta característica morfológica
deriva el nombre de Helicobacter). ( López, M. 2004)
63
El mecanismo patogénico responsable de la amplia diversidad de manifestaciones
clínicas de H. pylori aún no está totalmente esclarecido.
El mantenimiento de la integridad de la mucosa gástrica es un proceso biológico
que depende del balance entre proliferación y muerte celular programada, o
apoptosis. La progresión tumoral es un proceso multipaso en el que la regulación
de la proliferación y la muerte celular programada está alterada. . (López, M.
2004)
El papel de H. pylori en carcinogénesis gástrica se apoya, casi exclusivamente, en
datos epidemiológicos y estudios prospectivos histopatológicos. Pero no hay
evidencia de que H. pylori o sus productos citotóxicos tengan efecto mutagénico.
La apoptosis es un proceso codificado genéticamente, irreversible, activo y
fisiológico que se caracteriza por distintos cambios morfológicos y bioquímicos
en la célula. Este proceso juega un importante papel en la homeostasis y
desarrollo de los tejidos, incluyendo el tracto gastrointestinal. (López, M. 2004)
2.6.1.1 Cáncer y H. pylori
El cáncer gástrico y el linfoma de MALT (linfoma de la mucosa asociada al tejido
linfoide), han sido relacionados con H. pylori, por lo que esta bacteria ha sido
catalogada en el grupo I de carcinógenos por la Agencia Internacional de
Investigación del Cáncer (IARC). Mientras que la asociación de estas
enfermedades con H. pylori está apoyada por sospechas razonables, no está
totalmente claro que haya una relación causal involucrada. (OMS, 2005)
Linfoma gástrico tipo MALT
Varios estudios apoyan la asociación con esta enfermedad puesto que tras la
erradicación de la bacteria se ha observado cómo ha existido regresión del linfoma.
64
Este tipo de linfoma se localiza preferentemente en el antro del estómago, dado
que es la zona donde existe más tejido linfoide. Prolifera tras un proceso
inflamatorio crónico
2.6.1.2 Diagnostico en el Laboratorio
Para diagnosticar la infección por H. pylori se han empleado cultivos
microbiológicos, estudios histopatológicos, test del aliento, test rápido de la
ureasa, test serológicos, test de antígeno en heces y más recientemente pruebas
moleculares de ADN y ARN. Hoy día, el diagnóstico definitivo de la infección
por H. pylori ha estado basado principalmente en el aislamiento de la bacteria en
cultivos microbiológicos o la detección del microorganismo en preparados
histológicos, ambos métodos provenientes de muestras de biopsias gástricas
obtenidas por procesos invasivos como la endoscopia. Sin embargo, existen otros
métodos uya determinación se correlaciona con la infección por este
microorganismo pero con la diferencia que la obtención de la muestra no es de
forma invasiva, es así el caso de los exámenes serológicos, el test del aliento o el
test de la ureasa. (Premoli, G. 2004)
Los cultivos microbiológicos y los exámenes histológicos requieren de
condiciones especiales y períodos de incubación largos (3-7 d), ambos con buena
sensibilidad (90-98 %) y especificidad (98--100 %).
El diagnóstico por PCR de H. pylori tiene una sensibilidad y especificidad de
95 % y su principal ventaja es que se puede detectar el microorganismo sin
importar la viabilidad de la bacteria en las muestras. (Premoli, G. 2004)
2.6.1.3 Bioseguridad
Desde su descubrimiento en 1982, Helicobacter pylori ha recibido cada vez más
atención como agente de gastritis. El hábitat principal del H. pylori es la mucosa
gástrica humana. La infección humana con H. pylori puede tener una duración
65
prolongada, presentando pocos o ningún síntoma, o puede presentarse como una
enfermedad gástrica aguda. Se han informado infecciones humanas de laboratorio
accidentales y experimentales con H. pylori. El agente puede estar presente en
secreciones gástricas u orales y en las deposiciones. Si bien no se comprende
totalmente, se piensa que su transmisión es por vía fecal-oral u oral-oral. (CDC.
2005)
Riesgos de laboratorio: El agente puede estar presente en secreciones gástricas y
orales y en materia fecal. La ingestión es el principal riesgo de laboratorio
conocido. No se conoce la importancia de la exposición a los aerosoles. (CDC.
2005)
Precauciones Recomendadas: Para las actividades con materiales y cultivos
clínicos que contienen los agentes o que puedan contener los agentes, se
recomiendan las prácticas, el equipo de contención y las instalaciones del Nivel de
Bioseguridad 2. ( CDC. 2005)
Para las actividades con animales infectados natural o experimentalmente, se
recomiendan las prácticas, el equipo de contención y las instalaciones del Nivel de
Bioseguridad Animal 2. Actualmente, no hay vacunas disponibles para su uso en
humanos. (CDC. 2005)
2.6.2 Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes es una bacteria que rara vez causa un brote a un número
grande de población (14). L. monocytogenes es una bacteria gram positiva, bacilo
o cocobacilo, anaerobio facultativo, psicotrófico que posee motilidad a
temperatura ambiente. Esta bacteria tolera condiciones extremas de temperatura (-
1.5 ºC a 45.0ºC) y pH (4.3-9.1). ( Hernandez, M. 2006)
Los brotes de listeriosis en humanos pueden ser tanto invasivos como no
invasivos. Los brotes invasivos causan meningoencefalitis, encefalitis, septicemia
y abortos con una alta tasa de mortalidad (20-30%); este tipo ocurre
66
principalmente en 10 grupos específicos de personas como: niños, ancianos,
mujeres embarazadas e inmuno comprometidos. En las mujeres embarazadas no
solamente puede causarle aborto sino que se corre el riesgo de que la criatura
nazca muerta o con septicemia aún cuando la mujer experimente síntomas leves
parecidos a un resfriado. La listeriosis no invasiva causa diarreas, fiebre, dolores
musculares, dolores de cabeza, nauseas, vómitos y dolores abdominales aún en
adultos saludables. La dosis infecciosa para L. monocytogenes es desconocida y
depende de la susceptibilidad del individuo. Su modo de acción es mediante la
invasión del epitelio gastrointestinal y una vez invade a la célula hospedera se
riega en la sangre y se convierte en septicemia. Por lo tanto, tiene un fácil acceso
al cerebro o traspasar a la placenta y migrar hacia el feto. ( Hernadez, M. 2006)
Se han aislado asociados a enfermedades en peces, aves y mamíferos. En el
hombre se trata de una enfermedad profesional (personas que trabajan con
animales) y también se transmite por alimentos, sobre todo leche y derivados
lácteos.
2.6.2.1 Diagnostico en el Laboratorio
L. monocytogenes se aísla fácilmente de muestras orgánicas habitualmente
estériles como sangre, líquidos cefalorraquídeo y amniótico, placenta y tejido fetal.
Estas muestras deben ser remitidas al laboratorio y procesadas tan pronto como
sea posible o en su defecto conservarse a 4ºC durante un máximo de 48 h. Las
muestras clínicas habitualmente estériles pueden ser inoculadas directamente en
medios habituales como el agar sangre. Las muestras de sangre pueden inocularse
en cualquier sistema convencional de hemocultivos. ( Chavez, E. 2006)
Para el estudio de portadores las muestras de heces son más productivas que las
torundas rectales. Las muestras de heces deben ser inoculadas en un medio de
enriquecimiento selectivo, de los que existen diversas formulaciones. ( Chavez, E.
2006)
67
Las muestras no estériles pueden conservarse a 4ºC durante 24-48 h como
máximo. Si se va a producir una mayor demora en su procesamiento deben ser
congeladas a -20ºC para evitar el sobrecrecimiento bacteriano. Este tipo de
muestras, asi como las alimentarias, deben ser enriquecidas con un medio
selectivo para Listeria spp. antes de sembrarse en placas.( Chaves, E. 2006)
2.6.2.2 Bioseguridad
Listeria monocytogenes, es considerado como un microorganismo del grupo II por
su baja incidencia, parece llamado a convertirse en un importante factor de riesgo
en un futuro plazo.
Listeria monocytogenes representa un peligro potencial para el personal de
laboratorio.. Se han aislado bacterias del suelo, del polvo, de alimentos para
consumo humano, de animales y de humanos asintomáticos. La mayoría de los
casos de listeriosis ha surgido como consecuencia de consumir alimentos
contaminados, en su mayoría quesos blandos, carne cruda y vegetales crudos no
lavados. Si bien los adultos y niños sanos pueden contraer una infección con
Listeria, generalmente, la enfermedad no es grave. Quienes corren riesgo de
contraer una enfermedad grave por esta causa son las mujeres embarazadas, los
recién nacidos y las personas cuya función inmune está deprimida. (CDC 2005)
Riesgos de laboratorio: Listeria monocytogenes se puede encontrar en las heces,
en líquido cefaloraquídeo y en la sangre, así como en los alimentos y en
materiales ambientales. Los animales infectados natural o experimentalmente son
una fuente de exposición para quienes trabajan en el laboratorio y para el personal
encargado del cuidado de animales y para otros animales. La ingestión es la forma
más posible de exposición, pero la Listeria también puede provocar infecciones
oculares y de la piel después de una exposición directa. Las infecciones con
Listeria monocytogenes en mujeres embarazadas se producen con mayor
68
frecuencia en el tercer trimestre del embarazo y pueden adelantar el parto. La
transmisión transplacentaria de L. monocytogenes representa un grave riesgo para
el feto y puede tener como resultado abscesos que contribuyen con una tasa de
mortalidad de casi el 100%. (CDC, 2005)
Precauciones Recomendadas: Para las actividades realizadas con especimenes y
cultivos clínicos que contienen el agente o que puedan contenerlo, se recomiendan
las prácticas, el equipo de contención y las instalaciones del Nivel de
Bioseguridad 2.(CDC, 2006)
69
3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN
3.1 Formulación del Problema
Debido a que el laboratorio de Bacteriología Especializada de la Facultad de
Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana, carecía de un Manual de
Bioseguridad y de Procedimientos Operativos Estándar POEs e Instructivos
documentados; se requería la elaboración e implementación de estos, teniendo en
cuenta los parámetros establecidos por el Sistema de Gestión Documental del
departamento de Microbiología y adicional a esto para cumplir con las exigencias
requeridas por la norma ISO- NTC-IEC 17025 y las Buenas Prácticas de
Laboratorio (BPL).
La falta de Documentación favorecía los errores en los procedimientos, en la
manipulación de reactivos y materiales, e inadecuado uso de equipos, generando
poca trazabilidad en sus resultados, problemas de Bioseguridad e incremento de
costos.
3.2 Justificación
Según la norma ISO- NTC-IEC 17025 y las Buenas Prácticas de Laboratorio
(BPL), los Procedimientos Operativos Estándar POEs, Instructivos y el Manual de
Bioseguridad, son elementos importantes en el momento que un laboratorio de
ensayo quiera acreditarse. Es por eso que en el laboratorio de Bacteriología
Especializada, ha surgido la necesidad de elaborar e implementar un Manual de
Bioseguridad que mejorará las actividades y procedimientos de seguridad
biológica, pudiendo así brindar un mejor y más seguro ambiente laboral, evitando
accidentes que generen problemas en la salud del investigador.
70
Documentar los procesos que se realizan en el laboratorio permite garantizar que
el personal que realiza los análisis dentro del mismo, tenga una descripción
precisa, concisa y clara del material, equipo, condiciones, actividades y
requerimientos para obtener un producto o un servicio de una calidad definida y
finalmente ayudar a prevenir errores.
Es muy importante mencionar que la evidencia documentada permite tener
trazabilidad dentro de los procesos que se lleven a cabo en el laboratorio,
asegurando así la calidad de los análisis, de manera tal que si se llega a encontrar
errores se pueda llegar a determinar los puntos en los cuales se cometió el error y
así mismo desarrollar acciones correctivas sobre el mismo. (Trazabilidad y
repetitividad).
71
4. OBJETIVOS
4.1 OBJETIVO GENERAL
Elaborar el Manual de Bioseguridad y documentar los Procedimientos Operativos
Estándar POEs del Laboratorio de Bacteriología especializada de la Facultad de
Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana.
4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Elaborar el Manual de Bioseguridad del Laboratorio donde todo el personal,
pueda identificar los riesgos físicos, químicos y biológicos que pueden
representar un peligro y de esta manera tomar medidas preventivas.
• Documentar los procedimientos que se realizan en el Laboratorio de
Bacteriología Especializada bajo el esquema de gestión documental establecido
por el Departamento de Microbiología de la Facultad de Ciencias en
Procedimientos Operativos Estándar POEs, Instructivos de trabajo y de
operación de equipos, formatos y registros.
• Realizar un folleto que resuma y de a conocer de manera rápida y clara las
actividades y precauciones de bioseguridad que se deben llevar a cabo en el
laboratorio de Bacteriología Especializada.
72
5. METODOLOGIA
5.1. Lugar de estudio
El proyecto se desarrolló en la Pontificia Universidad Javeriana, en el laboratorio
de Bacteriología Especializada de la Facultad de Ciencias. Ubicado en el Edificio
51 Laboratorio 236.
5.2. Análisis de la información que posee el laboratorio actualmente.
Se elaboraron dos listas de chequeo. Una para identificar los procedimientos que
se llevan a cabo en el laboratorio y que debían ser documentados, como
Procedimientos Operativos Estándar POEs, Instructivos de soporte de trabajo,
Registros y Hojas de Vida de equipos. Otra para hacer un diagnóstico en materia
de seguridad biológica que se lleva acabo en el laboratorio y poder establecer las
normas de bioseguridad que aplicarían para este.
5.3. Recolección de información
Se realizó revisión bibliográfica acerca de BPL, sistemas de gestión de calidad y
normas como la ISO 9001, NTC 17025, ISO 14001 y NTC-OHSAS 18001 para
establecer la estructura y contenido de los procedimientos e instructivos.
Adicionalmente en cuanto a bioseguridad se tomaron como referencia documentos
internacionales y nacionales como CDC (Centro de Control de Enfermedades),
OMS (Organización Mundial del la Salud), Instituto Nacional de Salud,
Organización Panamericana de la Salud, Decreto 2676/ 2002 , MPGRHS entre
otros.
73
5.4 Elaboración del Manual de bioseguridad del laboratorio de Bacteriología
Especializada.
De a cuerdo a la información recolectada y analizada se procedió a redactar el
Manual de Bioseguridad del laboratorio de Bacteriología Especializada,
estableciendo las normas generales de seguridad biológica frente a los riesgos
físicos, químicos y biológicos. Como anexo del manual se elaboraron las fichas de
seguridad de los reactivos químicos presentes en el laboratorio.
5.5. Documentación de Procedimientos Operativos Estándar e Instructivos
del Laboratorio de Bacteriología Especializada.
Después del reconocimiento e identificación de los procedimientos o técnicas que
se realizan en el laboratorio, se procedió a documentar bajo la estructura
establecida en el Sistema de Gestión Documental del Departamento de
Microbiología (Guarnizo. 2005). Clasificando los procedimientos en POES,
Instructivos, Registros, Formatos y Hojas de Vida para equipos.
5.6 Elaboración del folleto informativo de Bioseguridad
Se elaboró un folleto teniendo en cuenta las normas principales de bioseguridad
para facilitar, incentivar y promover la divulgación de la información presente en
el Manual de Bioseguridad.
74
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los procesos documentados son elementos del sistema de calidad que representan
una herramienta para reducir los errores relacionados con la manipulación y las
variaciones de las técnicas dentro del Laboratorio de Bacteriología Especializada.
Estos documentos son más que instrucciones para cumplir una determinada tarea,
constituye una guía que establece las expectativas de la dirección con respecto al
trabajo. Se entiende entonces que una buena documentación es esencial para el
sistema de calidad constituyendo el único modo de asegurar que se cumpla con la
política de calidad establecida por el laboratorio.
Adicionalmente el diseño de la documentación es una tarea fundamental que
requiere de varias etapas de prueba antes de su aprobación e implementación,
dando así cumplimiento a requisitos de las BPL e ISO – NTC 17025.
Después de analizar el sistema actual de documentación y las normas de
bioseguridad del Laboratorio de Bacteriología Especializada, se realizaron las
listas de chequeo correspondientes, indicando cual era la situación con respecto a
los cuatro niveles de documentación previstos para el Sistema de Gestión
Documental del Departamento de Microbiología y la situación referente a las
normas de seguridad biológica y su respectiva implementación.
A partir de los procesos y técnicas que se desarrollan en el laboratorio se elaboró
la lista de chequeo (Ver Anexo A) sobre la documentación, indicando para cada
caso que tipo de proceso era (central o de apoyo), para así poder clasificarlos
según el tipo de documento:
POEs (Procedimiento Operativo Estándar), como procedimiento o protocolo de
mayor complejidad, incluyendo aquellas técnicas referentes a Extracción de DNA,
PCR, electroforesis, entre otras para la Identificación de Helicobacter pylori y
Listeria monocytogenes .Bajo este esquema de POES, se documentaron 18
pruebas, siguiendo el modelo establecido en el 2005 por Guarnizo J.(Figura 2.)
75
Tabla 5 Lista de Procedimientos Operativos POES Documentados
Procedimiento Operativo (POES) NÚMERO
RECOLECCIÓN Y TRANSPORTE DE BIOPSIAS GÁSTRICAS
DM-LBE-PT-001
PROCESAMIENTO DE BIOPSIA PARA CULTIVO
DM-LBE-PT-002
PRUEBA DE UREASA A PARTIR DE BIOPSIAS
DM-LBE-PT-003
EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE CULTIVO
DM-LBE-PT-004
CUANTIFICACIÓN DE DNA Y RELACIÓN DNA/RNA A PARTIR DE CULTIVO
DM-LBE-PT-005
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA PARA VERIFICAR CALIDAD DE DNA
DM-LBE-PT-006
AMPLIFICACIÓN POR PCR DE CEBADORES CagA y VacA
DM-LBE-PT-007
AMPLIFICACIÓN POR PCR (REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA)
DM-LBE-PT-008
ELECTROFORESIS PARA PRODUCTOS DE PCR
DM-LBE-PT-009
TÉCNICA DIFUSIÓN EN AGAR – MÉTODO KIRBY BAUER
DM-LBE-PT-010
Determinación de la resistencia de Helicobacter pylori por medio de la técnica E –test
DM-LBE-PT-011
CONGELACIÓN DE CEPAS DM-LBE-PT-012
EXTRACCIÓN DE DNA CROMOSOMAL DE BACTERIAS
DM-LBE-PT-013
AISLAMIENTO DE DNA TOTAL DE Pichia pastoris
DM-LBE-PT-014
EXTRACCIÓN DE DNA PLASMIDICO DE BACTERIAS
DM-LBE-PT-015
EXTRACCIÓN DE DNA DE Listeria monocytogenes A PARTIR DE QUESO, LECHE Y CARNE
DM-LBE-PT-016
PCR PARA Listeria monocytogenes DM-LBE-PT-017
PRUEBBAS DE IDENTIFICACIÓN DE Helicobacter pylori
DM-LBE-PT-018
76
PORCENTAJE DE PRUEBAS DOCUMENTADAS BAJO EL NIVEL DE POES
0%
100%
ANTESDESPUÉS
Figura 4. POES documentados en el Laboratorio de Bacteriología Especializada.
A los 18 POES documentados se les formulo el objetivo, alcance, responsabilidad,
frecuencia, condiciones generales de bioseguridad, manejo de residuos,
documentos de referencia y el contenido que incluye: Fundamento, definiciones,
materiales, procedimiento y por último anexos específicos para cada prueba.
Los procedimientos operativos estándar que se elaboraron para el laboratorio
facilitan la comprensión y brindan trazabilidad a las acciones, permiten al
investigador conocer conceptos importantes para el desarrollo del procedimiento,
al mismo tiempo que orientan en bioseguridad, manejo de residuos y da a conocer
el fundamento de la técnica estableciendo objetivos claros. Estos documentos
permitirán la reproducibilidad, consistencia y uniformidad de los distintos
procesos en el laboratorio.
Instructivos, como documentos donde se encuentran las actividades que soportan
el desarrollo de procedimientos técnicos (POES), o actividades de menor
complejidad, como preparación de soluciones, medios de cultivo, manejo de
equipos entre otros. Sobre este esquema se documentaron 32 instructivos de
trabajo y 15 instructivos de operación de equipos
77
Tabla 6 Lista de Instructivos de Trabajo Documentados
Instructivos de Trabajo NÚMERO Preparación de caldo Brucella Glicerol
al 20%
DM-LBE-INT-001
Cadena de Frío para Toma de muestras DM-LBE-INT-002
Preparación del Medio Wilkins
Chalgren Modificado para
Helicobacter pylori
DM-LBE-INT-003
Preparación de Isovitalex DM-LBE-INT-004
Preparación del suplemento selectivo
de Helicobacter pylori
DM-LBE-INT-005
Preparación del caldo Urea DM-LBE-INT-006
Prueba Bioquímica de Ureasa a partir
de Cultivo
DM-LBE-INT-007
Coloración de Gram DM-LBE-INT-008
Prueba de oxidasa DM-LBE-INT-009
Prueba de Catalasa DM-LBE-INT-010
Preparación de etanol al 75% DM-LBE-INT-011
Preparación de Hidróxido de Sodio
(NaOH) al 2M y 8mM
DM-LBE-INT-012
Preparación de la solución Buffer TAE
(Amortiguador TRIS-ácido Acético-
EDTA)
DM-LBE-INT-013
Preparación del Amortiguador TRIS-
EDTA (TE)
DM-LBE-INT-014
Preparación del Amortiguador TRIS
(Hidroximetil amino metano)
DM-LBE-INT-015
Preparación de la Solución EDTA DM-LBE-INT-016
78
(äcido Etilén-Diamino-Tetra-Acético)
Preparación del Amortiguador TRI-
HCl y TRIS NaCl
DM-LBE-INT-017
Preparación del Buffer de carga 6X
amortiguador de muestra para
electroforesis
DM-LBE-INT-018
Preparación del Gel de Agarosa 2%
para electroforesis
DM-LBE-INT-019
Preparación de la cama electroforetica DM-LBE-INT-020
Preparación de Bromuro de hexadecil
Trimetil Amonio (CTAB)
DM-LBE-INT-021
Preparación de Primes para PCR DM-LBE-INT-022
Preparación de la TucanTaq
Polimerasa
DM-LBE-INT-023
Preparación de dNTPs (2´-
deoxynucleoside 5´-triphate)
DM-LBE-INT-024
Preparación de Cloruro de magnesio
MgCl2
DM-LBE-INT-025
Preparación de SDS (Dodecil Sulfato
de Sodio)
DM-LBE-INT-026
Preparación del Medio de Cultivo
Mueller-Hinton
DM-LBE-INT-027
Microaerofilía – Sobres CampyPack DM-LBE-INT-028
Preparación de Escala de McFarland DM-LBE-INT-029
Prueba E-TEST DM-LBE-INT-030
Coloración con Bromuro de Etidio DM-LBE-INT-031
Manejo de desechos con Bromuro de
Etidio
DM-LBE-INT-032
79
Tabla 7 Lista de instructivos de Operación de Equipos
Instructivo de Operación de
Equipo
NÚMERO
Balanza Analítica DM-LBE-INT 01
Centrifuga DM-LBE-INT 02
Centrifuga Refrigerada DM-LBE-INT 03
Cámara Electroforetica DM-LBE-INT 04
Espectrofotómetro DM-LBE-INT 05
PHmetro DM-LBE-INT 06
Potenciometro DM-LBE-INT 07
Lector de Placas DM-LBE-INT 08
Termociclador PCR TR DM-LBE-INT 09
Termociclador DM-LBE-INT 10
Transiuminador DM-LBE-INT 11
Baño Termostático DM-LBE-INT 12
Cabina de Seguridad Biológica DM-LBE-INT 13
Microscopio DM-LBE-INT 14
Documentador de Geles DM-LBE-INT 15
Autoclave DM-LBE-INT 15
80
PORCENTAJE DE INSTRUCTIVOS DOCUMENTADOS
0%
100%
ANTESDESPUÉS
figura 5. Instructivos documentados en el Laboratorio de Bacteriología
Especializada.
La totalidad de instructivos se documentaron siguiendo el formato establecido en
el 2005 por Guarnizo, J., el cual es mas sencillo que el de los procedimientos, ya
que incluyen únicamente el fundamento y procedimiento para llevar a cabo una
tarea determinada. Estas instrucciones de trabajo facilitan la preparación de un
determinado reactivo, medio o solución sin necesidad de tener que buscar dentro
de un procedimiento o varios para elaborarlos y el fundamento da al investigador
una información teórica facilitando la interpretación de los resultados obtenidos
después de realizada la técnica. Los instructivos documentados bajo este formato
tratan principalmente sobre la preparación de reactivo y operación de los equipos
relacionados con los POES para Helicobacter pylori y Listeria monocytogenes
Los instructivos de operación de equipos fueron diseñados para apoyar los
procedimientos operativos permitiendo conocer el funcionamiento de los equipos
y sus requerimientos. Estos a su vez están apoyados por las Hojas de Vida de cada
equipo, donde se muestra todas las características técnicas, marca, serial, código,
modelo, datos del fabricante y su historial.
Los formatos y registros, como documentos fueron creados para tener una
evidencia de las actividades efectuadas, de sus controles y de sus resultados. Estos
81
fueron diseñados bajo el modelo establecido por Guarnizo, J. El formato
pertinente a los POES e Instructivos contienen los siguientes campos:
Identificación (Organización, numeración, paginado y fecha), titulo, autoría,
revisión, aprobación y actualizaciones con fechas estipuladas por el director del
laboratorio, como también la identificación de cambios y localización. Los
formatos son los documentos en blanco que una vez diligenciados se convierten
en registros dando una evidencia objetiva para garantizar que toda actividad o
procedimiento se esta realizando, apoyando el sistema de calidad, permitiendo
llevar a cabo auditorias internas y externas, para comprobar el funcionamiento del
control de documentos dentro del laboratorio. Estos registros no deben ser
modificados y deben estar firmados y fechados al momento de ser archivados, en
forma segura.
Sintetizando todo el proceso de documentación que se realizo para el Laboratorio
de Bacteriología Especializado, cabe aclarar que todos los documentos realizados
fueron sometidos a una revisión por un miembro del comité de calidad y la
directora del laboratorio, resultando un 30% de Procedimientos Operativos
(POES), 50% de Instructivos de técnicas y operación de equipos y finalmente un
20 % de formatos y registros. Contribuyendo de esta manera a un requisito del
sistema de gestión de calidad para laboratorio ISO-NTC 17025: 2005, BPL, ISO
9000:2000, entre otras.
PORCENTAJE DE DOCUMENTOS VS TOTALIDAD DE DOCUMENTACIÓN
30%
50%
20%POES
INSTRUCTIVOS
FORMATOS YREGISTROS
82
Figura 6 Documentación implementada en el Laboratorio de Bacteriología
Especializada.
La documentación elaborada facilitara el desempeño de las labores diarias,
minimizando riesgos, contaminación cruzada y permitiendo garantizar la
reproducibilidad y consistencia de las actividades, además es una herramienta para
que los resultados de las técnicas o procedimientos sean más confiables, con
mayor trazabilidad y por consiguiente se disminuyen las perdidas económicas
porque se reducen los errores.
Este proceso de documentación permitió organizar la información que disponía el
laboratorio para que así mismo se rigiera a las normas que en cuanto a
documentación tiene el Departamento de Microbiología, lo cual permite que el
Laboratorio de Bacteriología Especializada entre a la uniformidad que se esta
obteniendo por parte de los laboratorios de la Facultad de Ciencias para llegar a
una posible acreditación.
En cuanto a bioseguridad se realizó una lista de chequeo (Ver Anexo B), donde se
identificaron los principales riesgos físicos, químicos y biológicos, para establecer
las respectivas normas que involucran los aspectos que deben considerarse en el
trabajo del laboratorio para dar cumplimiento a los requisitos de calidad que se
establecen en la Buenas Practicas de Laboratorio (BPL) relacionados con la
bioseguridad. En el Manual de Bioseguridad se establecieron y se implementaron
procedimientos generales y específicos para el Laboratorio de Bacteriología
Especializada. Adicionalmente es importante destacar que el laboratorio dispone
de equipos de bioseguridad y de instalaciones que dan suficientes garantías para
ejecutar un trabajo seguro y con la calidad requerida. Además se analizaron
aspectos fundamentales referidos a la bioseguridad que están ligados con el
83
cumplimiento de normas para la protección del personal, la conservación de las
cepas, de la comunidad y del medio ambiente.
El Manual de Bioseguridad elaborado, esta encaminado a disminuir el riesgo del
personal del laboratorio durante el desempeño de sus actividades. El manual se
diseño bajo los parámetros establecidos para los laboratorios de la Facultad de
Ciencias: Objetivo, alcance, frecuencia, responsabilidad, condiciones generales,
documentos de referencia, fundamento, definiciones y el contenido que incluye;
conceptos básicos de bioseguridad en el laboratorio, el nivel de contención de
acuerdo a los objetivos de trabajo y el tipo de microorganismos que se manipulan
(Helicobacter pylori y Listeria monocytogenes), uso de barreras que involucra
técnicas estándares, protección personal, inmunización y limpieza y desinfección
de equipos y superficies; barreras secundarias donde se analiza y evalúa el diseño
y construcción del laboratorio y por último dispone las pautas para el manejo de
residuos infecciosos y químicos y la señalización que tiene y que es necesaria para
el laboratorio. Finalmente se adjuntaron las respectivas fichas de seguridad de
cada uno de los reactivos presentes en el laboratorio siendo 46 en total.
Tabla 8 Lista de Fichas de seguridad MSDS de Reactivos Químicos
REACTIVO QUIMICO NÚMERO 1 ACETONA
DM-LBE –ESP-001 2 ACIDO ACETICO GLACIAL
DM-LBE –ESP-001 3 ÁCIDO SULFÚRICO
DM-LBE –ESP-001 4 ACIDO TRICLOROACETICO
DM-LBE –ESP-004 5 ALCOHOL ISOAMILICO
DM-LBE –ESP-005 6 AZIDA SÓDICA
DM-LBE –ESP-006 7 AZUL DE LACTOFENOL
DM-LBE –ESP-007 8 BARBITAL SÓDICO
84
DM-LBE –ESP-008 9 BISACRLAMIDA
DM-LBE –ESP-009 10 BROMURO DE ETIDIO
DM-LBE –ESP-010 11 CITRATO DE SÓDIO
DM-LBE –ESP-011 12 CLORURO DE CALCIO
DM-LBE –ESP-012 13 CLORURO DE MAGNESIO
DM-LBE –ESP-013 14 CLORURO DE POTASIO
DM-LBE –ESP-014 15 DI-AMONIO OXALATO MONOHIDRATO
DM-LBE –ESP-015 16 DICLOROMETANO
DM-LBE –ESP-016 17 4-DIMETILAMINOBENZALDEHIDO
DM-LBE –ESP-017 18 ETANOL
DM-LBE –ESP-018 19 ETER ETILICO
DM-LBE –ESP-019 20 FUCSINA
DM-LBE –ESP-020 21 FORMOL
DM-LBE –ESP-021 22 GLICEROL
DM-LBE –ESP-022 23 GLUCOSA ANHIDRA
DM-LBE –ESP-023 24 L - CYSTINE
DM-LBE –ESP-024 25 LUGOL
DM-LBE –ESP-025 26 METAVANADATO DE AMONIO
DM-LBE –ESP-026 27 NITRATO DE PLATA
DM-LBE –ESP-027 28 PEROXIDO DE HIDROGENO
DM-LBE –ESP-028 29 PERHYDROL
DM-LBE –ESP-029
85
30 POLIETILENGLICOL
DM-LBE –ESP-030
31 POLIOXIETILENE SORBITAN
DM-LBE –ESP-031
32 POLISORBATO DM-LBE –ESP-032
33 POTASIO DIHIDROGENO FOSFATO
DM-LBE –ESP-033
34 ROJO DE METILO DM-LBE –ESP-034
35 SILICA GEL
DM-LBE –ESP-035
36 SAFRANINA DE GRAM
DM-LBE –ESP-036
37 SODIO HIDROGENO FOSFATO DM-LBE –ESP-037
38 CARBONATO DE SODIO
DM-LBE –ESP-038
39 SODIO TIOSULFATO PENTAHIDRATO
DM-LBE –ESP-039
40 SULFATO DE ZINC DM-LBE –ESP-040
41 TETRAMETHYL BENZIDINE DM-LBE –ESP-041
42 THREALOSE
DM-LBE –ESP-042
43 TRIBUTIRINA
DM-LBE –ESP-043
44 UREA DM-LBE –ESP-044
45 VERDE BRILLANTE DM-LBE –ESP-045
46 YODO
DM-LBE –ESP-046
Con el Manual de Bioseguridad se garantiza la disminución de costos e impactos
dando estricto cumplimiento a las normas establecidas en este; con el fin de
eliminar los riesgos para el personal, la comunidad y el medioambiente, que
pueden ser producidos por agentes infecciosos, físicos y mecánicos.
Adicionalmente la bioseguridad se debe desarrollar en conjunto con el personal,
86
que debe seguir las normas, la dirección que debe instrumentar los medios que
faciliten el cumplimiento de este; para este fin se desarrollo un folleto que le
permite al responsable de la bioseguridad capacitar didácticamente al personal que
trabaja o ingresa al laboratorio acerca de las normas establecidas en cuanto a
bioseguridad dentro del laboratorio.
87
7. CONCLUSIONES
Con la documentación de los procedimientos y la elaboración del manual en el
Laboratorio de Bacteriología Especializada, se aproximo a éste al cumplimiento
de algunos requisitos de las Buenas Prácticas de Laboratorio.
El Manual de Bioseguridad contiene la información necesaria para que el
laboratorio comience a implementar un programa de seguridad biológica que
sirva como guía para el trabajo seguro con microorganismos potencialmente
peligrosos.
Con la documentación de las actividades realizadas en el laboratorio se da la
importancia de implementar el sistema de gestión de calidad para laboratorios
ISO-NTC/ 17025: 2005 para que los ensayos sean de mayor calidad y el
laboratorio sea mas competitivo.
Con la gestión documental de los procedimientos se llego a unificar la
información, dando una mayor organización al trabajo técnico que se realiza en
el laboratorio.
Los procedimientos documentados representan una herramienta para reducir los
errores relacionados con la manipulación, variaciones en la técnica permitiendo
la trazabilidad en los resultados.
88
8. RECOMENDACIONES
Se recomienda actualizar anualmente la documentación y el manual de
bioseguridad según lo estipulado con el sistema de gestión documental del
Departamento de Microbiología de la Facultad de Ciencias.
Se recomienda la implementación del programa de limpieza y desinfección y el
programa de gestión de residuos para el Laboratorio de Bacteriología
Especializada, dando así cumplimiento a las Buenas Practicas de Laboratorio
(BPL).
Se recomienda archivar y revisar periódicamente la documentación con el fin de
que el laboratorio tenga conformidad en las auditorias internas y externas a las que
se vea expuesto.
Es necesario crear un comité de bioseguridad que controle y haga cumplir todas
las normas estipuladas en el Manual de Bioseguridad.
Es recomendable capacitar continuamente al personal que trabaja en el
Laboratorio para garantizar la trazabilidad y la seguridad biológica en las pruebas
y ensayos que se realizan en el laboratorio.
Se recomienda elaborar un manual de calidad que incluya políticas de calidad,
organigrama, procesos, etc., para seguir implementando los requisitos que exigen
las Buenas Practicas de Laboratorio y así mismo acercarse cada vez más a una
acreditación.
89
9. BIBLIOGRAFÍA ANGELINI,N. 2005. Aseguramientote Calidad y Validación de Metodología
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de Residuos Hospitalarios y Similares –MPGIRH
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1
ANEXO A
LISTA DE CHEQUEO DOCUEMENTACIÓN DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA ESPECIALIZADA
DOCUMENTOS A VERIFICAR POE INSTRUCTIVO FORMATO REGISTR0
TÉCNICAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO RECOLECCIÓN Y TRANSPORTE DE BIOPSIA X NA NA NA Cadena de Frío NA X NA NA Preparación del caldo Brucella Glicerol 20% NA X NA NA PROCESAMIENTO DE BIOPSIA PARA CULTIVO X NA NA NA Sistema Microaerofilia sobres CampyPack NA X NA NA Preparación del Isovitalex NA X NA NA Preparación del Medio de cultivo Wilkins Chalgren Modificado para Helicobacter pylori NA X NA NA PRUEBA DE UREASA A PARTIR DE BIOPSIAS X NA NA NA Preparación de Caldo Urea NA X NA NA PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN PARA Helicobacter pylori X NA NA NA Coloración de Gram NA X NA NA Prueba de Ureasa NA X NA NA
2
Prueba de Oxidasa NA X NA NA Prueba de Catalasa NA X NA NA EXTRACCIÓN DE DNA A PARTIR DE CULTIVO X NA NA NA Preparación de NaOH 8 m M NA X NA NA Preparación de Etanol al 75% NA X NA NA CUANTIFICACIÓN DE DNA A PARTIR DE CULTIVO X NA NA NA ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA PARA VERIFICAR LA CALIDAD DE DNA X NA NA NA Preparación de la Solución Buffer TAE NA X NA NAPreparación del Buffer de carga 6X NA X NA NA Preparación de Geles de A garosa al 2% NA X NA NA Coloración con Bromuro de Etidio para Electroforesis NA X NA NAManejo de Desechos de Bromuro de Etidio NA X NA NA Preparación de la cama electroforética NA X NA NA AMPLIFICACIÓN POR PCR X NA NA NA Preparación de la Taq Polimerasa NA X NA NA Preparación de dNTPS NA X NA NA Amortiguador TRI - HCl y TRIS- NaCl+B3 NA X NA NA Cadena de Frio NA X NA NA Solución EDTA NA X NA NA Preparación de Cloruro de Magnesio MgCl2 NA X NA NA AMPLIFICACIÓN POR PCR DE LA Cag A y VacA X NA NA NA Prepración de los Primers NA X NA NA ELECTROFORESIS PARA PRODUCTOS DE PCR X NA NA NA Preparación del Patrón Peso Molecular NA X NA NA Preparación de controles espécificos para productos de PCR de Helicobacter pylori NA X NA NA TÉCNICA DE DIFUSIÓN KIRBY BAUER X NA NA NA
3
Preparación de medio de Cultivo Mueller Hinton NA X NA NA Patron de Mc Farland NA X NA NA TÉCNICA DE E- TEST X NA NA NA Tiras de E- TEST NA X NA NA CONGELACIÓN DE CEPAS X NA NA NA EXTRACCIÓN DE DNA CROMOSOMAL DE BACTERIAS X NA NA NA Preparación del CTAB NA X NA NA Preparación de TE NA X NA NA Preparación SDS NA X NA NA EXTRACCIÓN DE DNA DE LEVADURAS X NA NA NA EXTRACCIÓN DE DNA DE Listeria monocytogenes A PARTIR DE QUESO, LECHE Y CARNES X NA NA NA PCR PARA Listeria monnocytogenes X NA NA NA EXTRACCIÓN DE DNA PLASMIDICO X NA NA NA EQUIPOS HOJAS DE VIDA DE EQUIPO NA NA X X INT DE MANEJO DE EQUIPOS NA X NA NA BIOSEGURIDAD MANUAL DE BIOSEGURIDAD NA X NA NAFICHAS DE SEGURIDAD DE REACTIVOS QUÍMICOS NA X NA NA FORMATO REPORTE DE ACCIDENTES E INCIDENTES NA NA X NA FORMATO ACTUALIZACIÓN DE BOTIQUIN NA NA X NAFORMATO CONTROL DE VACUNACIÓN NA NA X NA FORMATO DE INSPECCIÓN DE ELEMENTOS DE SEGURIDAD NA NA X NA
4
FORMATO DE USO DE PRODUCTOS QUÍMICOS NA NA X NA FORMATO DE AUSENCIA DE PERSONAL POR ENFERMEDAD NA NA X NA FORMATO DE CAPACITACIÓN DE PERSONAL EN BIOSEGURIDAD NA NA X NA FORMATO DE CONTRL DE LECTURA DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD NA NA X NA FORMATO DE RECOLECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE RESIDUOS NA NA X NA CONTROL E INSPECCIÓN DEL EXTINTOR NA NA X NA FORMATO DE CONTROL DE DOCUMENTOS
Observación: NA (No aplica), X (Corresponde)
1
ANEXO B
ASPECTOS A VERIFICAR SI/NO OBSERVACIONES
1 ADMINISTRACIÓN EN BIOSEGURIDAD NO
1,1 Existe un plan operativo de actividades de bioseguridad NO
1,2 Existe un Comité de Bioseguridad con sus respectivas responsabilidades NO Tiene un cordinador responsable de las
actividades dentro del laboratorio
1,3 Cuenta el laboratorio con capacitación en cuanto a bioseguridad NO
1,4 Tiene Identificado el nivel de contención y riesgos físicos, químicos y biológicos. SI Tienen identificado el nivel según los
microorganismos que manipulan
1,5 Posee un programa en cuanto organizar, prevenir, actuar, controlar y vigilar. NO
1,6 Tiene el laboratorio establecidas e implementadas las normas de bioseguridad. NO
Conocen algunas normas básicas pero aún le faltan otras y no las tienen establecidas
2 NORMAS GENERALES EN BIOSEGURIDAD
2,1 Acceso limitado de personal al laboratorio SI Solo ingresa personal autorizado, profesores, estudiantes, tesistas.
2,2 Identificación de los agentes biológicos que se manejan y sus respectivas medidas SI
Se manipulan dos microorganismos Helicobacter pylori y Listeria monocytogenes y se conoce sus riesgos
2,3 Elementos de protección para evitar riesgos que atente contra la salud de las personas que laboran dentro del laboratorio
SI
Usan protección personal como bata, guantes, tapabocas y gorro, gafas de seguridad dependiendo el riesgo y la técnica
2,4 Medidas de prevención contra accidentes. NO
No conocen las acciones para prevenir un accidente por inhalación, salpicadura, ingestión, quemadura, entre otro para remitir luego a urgencias.
2,5 Identificación de riesgo biológico al personal ajeno del nivel de bioseguridad y su protección. NO
En la puerta de acceso no cuenta con el símbolo de riesgo biológico, el nivel de contención y protección personal para ingresar.
3 NORMAS ESPECIFICAS
3,1 Barreras Primarias
LISTA DE CHEQUE BIOSEGURIDAD
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA ESPECIALIZADA
2
3,1,2 Cuenta el laboratorio con un seguimiento estricto de BPL y técnicas de laboratorio NO
No tiene establecido las BPL y no tiene POEs de sus procedimientos o técnicas para evitar contaminación, mala manipulación y mayor trazabilidad de resultados. Según lo establecido por el sistema de gestión documental del Dto. De Microbiología, para que el trabajo sea más seguro.
3,1,2 Tiene una segura manipulación de muestras biológicas para evitar riesgos al personal y al medio que lo rodea
SI Las muestras biológicas se manejan con medidas de bioseguridad y se asegura la inactivación de estas para su descarte.
3,1,3 Tiene implementado técnicas de lavado de manos garantizando que esta sea efectiva. NO
Se hace lavado de manos pero no se conoce si es efectiva ni hay un instructivo que indique un buen lavado de manos.
3,1,4 Posee Cabina de seguridad especial para el nivel de contención y técnicas para su empleo. SI
3,1,5 Tiene implementado elementos de protección adecuados para cada técnica o práctica y SI Aunque no se vigila que todo el personal
las cumpla.
3,1,6 Posee un programa de inmunización NO No tienen un programa de vacunación de su personal
3,1,7 Posee un programa de Limpieza y desinfección para equipos y superficies NO
Tienen que implementar el programa de Limpieza y Desinfección del Departamento de Microbiología, Aunque se realiza limpieza, esterilización y desinfección de equipos y superficies.
3,2 Barreras Secundarias -Diseño y Construcción del Laboratorio
3,2,1 Cumple con los requisitos para instalaciones de las BPL SI Aunque tiene que mejorar algunas que
exige las BPL
3,2,2 Posee pisos y paredes lisos , con terminaciones medio caña y en materiales adecuados. SI
3,2,3 Cuenta con una iluminación adecuada SI
3,2,4 Cuenta con lavaojos, ducha, botiquín y extintor SI
3,2,5 Las instalaciones tienen un flujo continuo sin regreso para evitar contaminación NO
Lo que puede aumentar la contaminación, no cuenta con áreas separadas para procedimientos.
3,2,6 Cuenta con agua potable y lavamos de accionamiento mécanico SI/NO No tiene Lavamanos de accionamiento
mecánico
3,2,7 Las zonas de trabajo (mesones) son de altura , materiales adecuados para limpieza y desinfección.
SI
3,2,8 La puerta de entrada salida debe ser de cierre automático. SI
3,2,9 Las ventanas deben tener protección para insectos y permitir una buena ventilación SI
3
3,2,10
Dispone de un suministro de electricidad seguro y suficiente SI
3,3 Equipos
3,3,1 Programa de mantenimiento y calibración de equipos NO Es importante para cumplir con las BPL y
para una posible certificación ISO 17025
3,3,2 Hojas de vida de Equipos NO Esto facilitaría identificar proveedor o fabricantes, como el mantenimiento que se le hace al equipo.
3,3,3 Instructivos de funcionamiento de equipos NO Permite darle un mejor funcionamiento a estos para evitar que se desacalibren.
3,3,4 Registros de control de equipos, uso diario y de mantenimiento y calibración. SI Pero no bajo el formato que exige el
Departamento de Microbiología.
4 NORMAS PARA EL PERSONAL
4.1 Identificar los riesgos biológicos, físicos, químicos. NO Un grupo de Tesistas esta desarrollando la
matriz de Riesgos para el laboratorio.
4.2 Tiene establecido la acción para cada tipo de riesgo sea biológico, físico o químico NO
4.3 Cuenta con un servicio de emergencia NO
5. GESTIÓN DE RESIDUOS
5.1 Cuenta con un programa de residuos sólido NO Las biopsias son inactivadas antes de eliminarlas.
5.2 Tiene un adecuado manejo de eliminación de residuos infecciosos SI
5.3 Cuenta con envases adecuados para eliminación de residuos según su clasificación (MPGRHS) SI
5.4 Tiene manejo y almacenamiento de sustancias químicas Si Las sustancias químicas son almacenadas
dependiendo la clasificación de la ONU
5.5 Posee fichas de seguridad de reactivos químicos hojas MSDS NO Estas son importantes para saber que
medidas tomar con cada reactivo.
5.6 Tienen un adecuados manejo de residuos químicos NO
Reactivo más tóxico es Bromuro de Etidio el cual se inactiva antes de su eliminación.
