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LA TÉCNICA HISTOLÓGICA.
UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA
ESCUELA LUIS RAZETTI
CÁTEDRA DE HISTOLOGÍA NORMAL Y
EMBRIOLOGÍA
Curso 2010-2011
LA TÉCNICA HISTOLÓGICA.HISTOLOGÍA
Es la rama de la Anatomía que estudia los tejidos de los animales y las plantas
ANATOMÍA MICROSCÓPICA
LA TÉCNICA HISTOLÓGICA.
¿QUÉ ES LA TÉCNICA HISTOLÓGICA?
¿QUÉ ES UN PREPARADO HISTOLÓGICO?
TODOS LOS PROCEDIMIENTOS DESTINADOS A OBTENER PREPARADOS HISTOLÓGICOS.
Una preparación histológica no es más que una rebanada muy delgada (corte histológico) de una pequeña parte de tejido corporal, colocado sobre una lámina porta-objeto, coloreada y cubierta por una lámina cubre-objeto.
LA TÉCNICA HISTOLÓGICA.
·Conocimiento de la estructura microscópica del organismo para comprender los procesos bioquímicos y fisiológicos que en él tienen lugar. ·Diagnóstico de procesos patológicos.
Finalidad del estudio microscópico
DEBEMOS TENER PRESENTE
LA TÉCNICA HISTOLÓGICA.
LA TECNICA HISTOLOGICA.1. CARACTERISTICAS DE LOS TEJIDOS
a. SON BLANDOSb. RICOS EN AGUA c. SE AUTOLISAN CUANDO SON RETIRADOS DE SU
IRRIGACIÓN
2. NECESITAMOS HACER REBANADAS MUY DELGADAS
• Fijarlo• Endurecerlo
a. Poder colorear el tejidob. Permitir el paso de la luz y ser observado
el tejido bajo el microscopio
POR LO TANTO DEBEMOS
ETAPAS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA
Obtención del material Fijación Inclusión y elaboración del bloque de parafina
Deshidratación Aclaramiento Impregnación en parafina Inclusión y elaboración del bloque de parafina
Elaboración del corte de tejido y colocarlo sobre la lámina porta-objeto.
Coloración Medio de montaje y lámina cubre-objeto
Organismo
Material de estudio
Fijación
Inclusión + bloque
Corte
Congelación
Tinción
Montaje
Observación
DESHIDRATACIÓN
ACLARAMIENTO
INCLUSIÓN
1
Obtención de la muestra
BIOPSIA AUTOPSIA
Organismo
Material de estudio
Fijación
Inclusión + bloque
Corte
Congelación
Tinción
Montaje
Observación
DESHIDRATACIÓN
ACLARAMIENTO
INCLUSIÓN
PRINCIPAL USO ENMEDICINA
2
Organismo
Material de estudio
Fijación
Inclusión + bloque
Corte
Congelación
Tinción
Montaje
Observación
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
INCLUSION
Fijación
3
FIJACIÓN. El objeto de la fijación es
interrumpir el desarrollo de los procesos orgánicos, fijando y conservando de la forma más fidedigna posible el estado y la situación en que se encontraban los tejidos.
Los fijadores actúan coagulando las sales proteicas de las células, endureciendo los geles e inactivando las enzimas.
Condiciones que debe
cumplir un fijador: Preservar el tejido.
No producir artificios.
No dificultar el tratamiento ulterior.
Poder y velocidad de penetración.
RECUERDA: Los tejidos deben ser
colocados en un fijador tan pronto hayan sido extirpados.
Los fragmentos de tejido deben ser colocados para su fijación en un volumen de fijador que sea 10 a 20 veces mayor que su volumen, por un período de 6 a 24 horas
¿Cómo se fija
Sumergiendo un pequeño trozo de tejido en el fijador
inmediatamente después de haber sido extraído. A esta
técnica se la denomina FIJACIÓN POR INMERSIÓN.
¿Cómo se fija
OTRAS FORMAS DE FIJACIÓN
CON ALCOHOLCON
CALOR
Organismo
Material de estudio
Fijación
Inclusión + bloque
Corte
Congelación
Tinción
Montaje
Observación
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
INCLUSION
Inclusión + bloque
4
ETAPAS DE LA INCLUSIÓN EN PARAFINA
TEJIDOS (Ricos en agua)
TEJIDOS RICOS EN ALCOHOLDESHIDRATACION
TEJIDOS RICOS EN XILOLACLARAMIENTO
IMPREGNACIÓN EN PARAFINA
ALCOHOL
XILOL
PROCESADOR DE TEJIDOS. Deshidratacion
Aclaramiento
Embebido en laParafina (INCLUSION)
DISEÑO DEL BLOQUE DE PARAFINA
Realizando el bloque de parafina …
BLOQUE DE PARAFINA.
Organismo
Material de estudio
Fijación
Inclusión + bloque
Corte
Congelación
Tinción
Montaje
Observación
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
INCLUSION
4
Corte
MICROTOMO
REALIZANDO EL CORTE …
MONTANDO EL CORTE EN LA LÁMINA PORTAOBJETO
Organismo
Material de estudio
Fijación
Inclusión + bloque
Corte
Congelación
Tinción
Montaje
Observación
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
INCLUSION
5
Tinción
Para lograr contraste suficiente entre los distintos componentes de las células y poderlos diferenciar con el microscopio de luz, se emplean substancias denominadas colorantes.
COLORACION CON HEMATOXILINA y EOSINA
BASOFILO CAPTA LA HEMATOXILINA
ACIDOFILOCAPTA LA EOSINA
HEMATOXILINA EOSINA
EOSINA Colorantes ácidos:
como por ejemplo la eosina, colorante cargado en forma negativa, se une a componentes celulares cargados positivamente. Estos componentes cargados positivamente se denominan acidófilos, porque tienen afinidad por los colorantes ácidos
HEMATOXILINA Como caso particular, la
hematoxilina no tiene carga, para teñir un tejido se la une a un mordiente que junto a la hematoxilina forman una laca. La laca es básica y por lo tanto se une a cargas negativas de la célula o matriz extracelular.
Colorantes básicos: como por ejemplo el azul de metileno, colorante cargado positivamente, se une a componentes celulares cargados negativamente. Estos componentes cargados negativamente se denominan basófilos, porque tienen afinidad por los colorantes básicos. Por ejemplo, estos colorantes se unen al núcleo y ciertas regiones del citoplasma.
CUALES SON LAS CARACTERISTICAS DEL TEJIDO CORTADO Y COLOCADO EN LA LAMINA PORTAOBJETO…
TEJIDO EMBEBIDO EN PARAFINALOS COLORANTES SON A BASE DE AGUA Y ALCOHOL…..
¿¿¿QUE HACEMOS???
Es necesario desparafinar e hidratar los cortes invirtiendo el orden de la inclusión en parafina.
Coloración de H/EEtapas de la coloración de Hematoxilina y
Eosina
BATERIA DE COLORACIÓN.
DESPARAFINAR REHIDRATAR HEMATOXILINA DIFERENCIAR EOSINA DESHIDRATACIÓN ACLARAMIENTO
FINALMENTE …
La sección teñida debe colocársele un cubreobjetos para proteger el tejido y poderlo observar durante años.
Previamente a la colocación del cubreobjetos se cubre con una resina inmiscible en agua. Ejemplos: Bálsamo de Canadá, Mar-Tex etc
FÍJATE, Como la resina es inmiscible en agua, una vez coloreado el preparado, éste es deshidratado en soluciones de alcohol crecientes y luego colocado en un agente aclarante como el xilol, de manera tal la resina sea miscible en el tejido.
Colocando la lámina cubre-objetos
Preparados histológicos teñidos con H/E
COMPLETA EL SIGUIENTE CUADRO
ETAPA FINALIDAD DURACIÓNFIJACIÓNDESHIDRATACIÓNACLARAMIENTOINCLUSIÓNCORTE
GRAM TRICROMICO DE GOMORI
COLORACIONES ESPECIALESHISTOQUÍMICA
PAS
COLORACIONES ESPECIALESHISTOQUÍMICA
TÉCNICAS DE INMUNOHISTOQUÍMICA
PROBLEMAS DE INTERPRETACIÓNTÉCNICA HISTOLÓGICA
PROBLEMAS DE INTERPRETACIÓNTÉCNICA HISTOLÓGICA
Corte transversal
LUZ
PARED
Corte longitudinal
LUZ
PARED
LUZ
10x
40x
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