ANALISIS Antibiotik

ANALISIS ANTIBOTIK

Analisis Farmasi

2012

2

ANTIBIOTIK

3

ANTIBIOTIK

Contents

KLORAMFENIKOL

TETRASIKLIN

PENISILIN, SEFALOSPORIN

STREPTOMISIN4

1

2

3

ANALISIS:

Analisis Kloramfenikol

Sediaan:• Kapsul 250 mg • Sirup 125 mg (tiap 5 ml)• Salep Mata 1%• Tetes Mata 0,5% dan 1%• Tetes Telinga 1%

KLORAMFENIKOL

• Nama kimia: 2,2-Dichloro-N-[(1R,2R)-2–hydroxy–1-(hydroxymethyl)-2-(4–nitrophenyl)ethyl]acetamide

• C11H12Cl2N2O5 = 323.1 Sinonim Nama Dagang

Albucetin, , Cendofenicol, , Colme, , Fenicol, Kemicort, Ribocin, Solacort, Suprachlor,,dll dll

Chloranfenicol

Cloranfenicol

Laevomycetinum

Fisikokimia Kloramfenikol

• Fine, white to greyish–white or yellowish–white crystals.

• M.p. 149° to 153°. • Kelarutan kloramfenikol dalam air adalah

2,5 mg per ml, larut dalam etanol, aseton dan etil asetat.

• Bentuk ester dari kloramfenikol sedikit larut dalam air dan secara umum larut dalam pelarut organik

Fisikokimia Kloramfenikol

• Kloramfenikol mempunyai rasa yang sangat pahit, oleh karena itu sediaan sirup selalu menggunakan kloramfenikol bentuk ester palmitat atau suksinat agar tingkat pahitnya berkurang.

• Dalam larutan air, gugus amida dari kloramfenikol dapat terurai/ terhidrolisis. Selain itu juga peruraian dapat terjadi pada ikatan karbon dengan atom klor.

Hidrolisis kloramfenikol

• Hidrolisis pada gugus amida

• Hidrolisis pada ikatan karbon dengan atom klor

NO2

OH

NH

HOH2C O

Cl2HC

HClpH < 6pH > 6, OH- ...................

10

Fotodegradasi kloramfenikol

• Kloramfenikol dapat mengalami kerusakan oleh cahaya (fotodegradasi) karena proses oksidasi, reduksi, dan kondensasi.

• Reaksi:Kloramfenikol 4-nitro benzaldehid (…………)

Asam 4-nitroso benzoat (…….)

Asam-4,4’-asoksi benzoat

N

HO

O

N

O

O

OH

Penetapan Kadar Kloramfenikol

1. Titrasi bebas air

2. Nitrimetri

3. Bromometri

4. Argentometri

5. Spektrofotometri UV dan Vis

6. HPLC

Titrasi bebas air• Prinsipnya berdasarkan hasil degradasi dari

kloramfenikol dalam suasana asam yang menghasilkan amina primer melalui gugus amida. Sifat basa cukup kuat untuk dititrasi oleh asam, namun lebih baik titrasinya dilakukan dalam suasana bebas air.

• Prosedur:+ 150mg kloramfenikol yang ditimbang seksama,

dilarutkan dalam 2ml alkohol 90%, tambahkan 5ml asam klorida pekat, panaskan sampai kering. Keringkan pada suhu 105C selama 15’. Setelah dingin larutkan dalam 10ml asam asetat glasial. Tambahkan 5ml raksa (II) asetat 5% dalam asam asetat dan 20ml dioksan serta 5 tetes indikator kristal violet. Titrasi dengan asam perklorat 0,05N sampai warna biru.

Nitrimetri• Prinsipnya berdasarkan keberadaan atau bisa didapatkannya

gugus amin aromatik primer dari kloramfenikol. Untuk mendapatkan gugus amin aromatik primer maka gugus nitro direduksi dengan serbuk seng, atau yang lainnya.

• Prosedur:Timbang seksama 500mg, tambahkan 20ml asam klorida P, 5g debu seng sedikit demi sedikit. Tambahkan 15ml asam klorida P, biarkan 1jam. Saring melalui kapas, cuci 3kali, tiap kali dengan 5ml air. Dinginkan sampai 15. Titrasi pelan-pelan dengan natrium nitrit 0,1 M hingga 1 tetes larutan segera menghasilkan warna biru pada kertas kanji iodida P. Titrasi selesai jika titik akhir dapat ditunjukkan lagi setelah larutan dibiarkan 5’.1 ml natrium nitrit 0,1 M setara dengan 32,31 mg C11H12Cl2N2O5

Reaksi nitrimetri

NO2 CH CH

OH

CH2OH

NH C CHCl2

O

Zn/HCl

NH2 CH CH

OH

CH2OH

NH C CHCl2

O

HNO2HCl

............. H2O

Bromometri

• Gugus nitro dari kloramfenikol terlebih dahulu harus dirubah menjadi amin aromatik primer. Kemudian dua atom brom akan masuk ke inti benzen pada posisi orto. Sehingga kesetaraannya adalah satu molekul kloramfenikol memerlukan 4 atom Br-.

Argentometri • Prinsipnya berdasarkan pada keberadaan atom klorida yang

dapat bereaksi dengan perak nitrat dalam suasana asam. – Sebelumnya atom klorida harus didapatkan dengan cara didestruksi kering.– Sejumlah serbuk kloramfenikol didestruksi bersamaan dengan natrium

karbonat dan kalium karbonat, diakhir pembakaran akan didapatkan serbuk putih yang merupakan NaCl/ KCl.

Prosedur:• + 300mg yang ditimbang seksama, pijarkan bersama 500mg

natrium karbonat dan 500mg kalium karbonat hingga tak ada warna hitam. Pindahkan secara kuantitatif dengan bantuan 25ml air. Netralkan dengan asam nitrat encer, tambahkan 15ml asam nitrat encer lagi dan 25ml perak nitrat 0,1 N. Titrasi dengan amonium tiosianat 0,1 N dengan indikator besi (III) amonium sulfat 1ml.

Spektrofotometri UV• Kloramfenikol 1% dalam pelarut air memberikan

absorbansi 298 pada panjang gelombang 278 nm. (A1

1=298).

• Bentuk ester kloramfenikol palmitat pada media alkohol memberikan (E1%, 1cm ) absorbansi 178 pada panjang gelombang 271 nm.

Spektrofotometri Vis (1)

• Gugus nitro amin aromatis primerdiazotasi + N-(1-naftil)-etilendiamin

HNH2C

H2C NH2

Spektrofotometri Vis (2)

• Metode ini didasarkan reduksi kloramfenikol dalam campuran asam asetat glacial, air dan TiCl3 pada suhu kamar selama 10 menit.

• Produk hasil degradasinya kemudian dipanaskan dengan p-dimetilaminobenzaldehid dan memberikan warna hijau kekuningan yang dideteksi pada panjang gelombang maksimal 440 nm.

• Reaksi reduksi kloramfenikol dengan Titan (III)

• Reaksi kompleks dengan p-dimetilaminobenzaldehid

HPLC

• Contoh sistem kromatografi yang dipakai adalah

ANALISIS TETRASIKLIN

TETRASIKLIN

• Nama kimia: [4S-(4α,4aα,5aα,6β,12aα)]-4-(dimethylamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydro–3,6,10,12,12a-pentahydroxy–6–methyl-1,11–dioxo–2–naphthacenecarboxamide

• C22H24N2O8=444.4

24

TETRASIKLIN• A yellow, crystalline, amphoteric powder

which darkens in moist air on exposure to strong sunlight.

• Soluble 1 in 2500 of water and 1 in 50 of ethanol; practically insoluble in chloroform and ether; freely soluble in dilute acids and, with decomposition, in solutions of alkali hydroxides.

25

• Tetrasiklin BM = 444,43• Klortetrasiklin 7-klortetrasiklin BM =

478,88• Oksitetrasiklin 5-hidroksi tetrasiklin BM =

460,43

OH O OH

OH

O

OH

CONH2

N(CH3)2HO CH3

ABCD

26

TETRASIKLIN

• Spektrofotometri UV-VIS• Fluorometri• TBA

27

TETRASIKLIN

SPEKTROFOTOMETRI UV

• Aqueous acid—270 nm (A11=417), 356

nm.

28

TETRASIKLIN

KOLORIMETRI

Oksitetrasiklin + besi (III) klorida Warna coklat jingga, = 490nm

29

TETRASIKLIN

Campuran tetrasiklin dan klortetrasiklin

Tetrasiklin HCl = -54,8 A268 + 67,70 A380 + 63,32 A440

Klortetrasiklin HCl = 65,4 A268 – 78,47 A380 + 13,85 A440

Oksitetrasiklin HCl = 61,07 A268 + 5,27 A380 – 77,5 A440

30

TETRASIKLIN

FLUOROMETRI

Klortetrasiklinisoklortetrasiklin,

Fluoresensi biru

31

TETRASIKLIN

TBA

+ 250mg tetrasiklin hidroklorid yang ditimbang seksama, larutkan dalam 30ml asam asetat glasial. Tambahkan 10ml raksa (II) asetat 5% b/v dalam asam asetat glasial dan 20ml dioksan. Titrasi dengan asam perklorat 0,1 N dengan 3 tetes kristal violet sampai warna hijau

32

HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROM.

• Contoh: menggunakan metode HPLC deteksi dengan PDA panjang gelombang 355 dan 368 nm. Sistem kromatografi yang dipakai adalah kolom C18 Bondapak dan fase gerak asam oksalat 0,0025 M-asetonitril (4:1) dengan laju alir 1 ml/menit..

Thank You!